p27kip1、cyclinE在胃癌中的表达及其意义

目的探讨p27~(kip1)、cyclinE在胃癌发生发展中的作用。方法应用免疫组化SP法分别检测p27~(kip1)、cyclinE在59例胃癌中的表达。结果p27~(kip1)在正常胃粘膜组织阳性率显著高于胃癌组织中阳性率(P<0·05),胃癌组织中高中分化腺癌pp27~(kip1)阳性率显著高于低分化腺癌与胃粘液癌(P<0·05),后两者间无显著性差异(P>0·05)。cyclinE在胃癌组织中阳性率明显高于正常胃粘膜组织(P<0·05),胃癌组织中粘液癌和低分化腺癌阳性率显著高于高中分化腺癌阳性率(P<0·05),前两者间无显著性差异(P>0·05),p27~(kip1)与cyclinE二者呈负相关(r=-0·82)。结论胃癌组织中p27~(kip1)表达下降、cyclinE表达升高可能与胃癌发生相关。随着病理分化程度降低,p27~(kip1)表达降低,cyclinE表达升高,提示p27~(kip1)、cyclinE可能与胃癌的生物学行为有关。p27~(kip1)、cyclinE平衡失调可能促进胃癌的发生。     

p27kip1:细胞周期的正/负双向调控因子?

细胞周期是细胞生命活动的基本过程,机体中存在着精密的机制参与这一过程的调控,目前最令人瞩目的是cyclin-CDK-CKI组成的复杂分子网络.p27kip1是CIP/KIP家族的主要成员,传统的观点认为p27kip1仅作为CDK的抑制因子参与细胞周期的负向调控,但有证据表明在特定的条件下p27kip1对于细胞周期也存在着正向调控作用.p27kip1在细胞周期中究竟扮演着怎样的"角色"?它是否具有"双重身份"?这种矛盾是如何得到统一的?     

人p27kip1重组腺病毒载体的构建及其介导的p27kip1表达

目的　研究外源性p2 7kip1基因对细胞周期及细胞增殖的影响。方法　构建CMV启动子转录调控的含人p2 7kip1cDNA的E1区替代的腺病毒载体pAxlcw .CIhp2 7kip1,与经EcoT2 2 1酶切的Ad5腺病毒DNA -末端肽复合物共转染 2 93细胞 ,制备p2 7kip1重组腺病毒 ,在体外转染HeLa细胞 ,Westernblot、FACS及MTT检测分析外源性p2 7kip1蛋白在细胞内的表达 ,以及对细胞周期及细胞增殖的影响。结果　获得含人p2 7kip1cDNA的重组腺病毒 ,滴度为 1.7× 10 9pfu/ml。体外转染HeLa细胞2 4h后 ,p2 7kip1蛋白在p2 7kip1转染后的HeLa细胞中高表达 ;FACS检测表明 ,p2 7kip1和LacZ重组腺病毒转染后的HeLa细胞 ,经 10 %血清刺激后处于G1期的细胞分别为 89.93%和 5 9.84% ;MTT法检测表明 ,人p2 7kip1重组腺病毒转染后的HeLa细胞经 2 0 %血清刺激后 ,48及 72h的A值均低于LacZ重组腺病毒转染后的HeLa细胞 (P <0 .0 1)。结论　本研究中所制备的p2 7kip1重组腺病毒能有效介导外源性p2 7kip1基因在体外转染HeLa细胞并高表达p2 7kip1,抑制细胞由G1期向S期过渡 ,从而抑制细胞增殖 ,为进一步研究p2 7kip1基因治疗奠定了基础。     

miR-590-5p介导lncRNA SNHG1信号影响卵巢癌细胞增殖的实验研究

目的:探讨miR-590-5p在卵巢癌组织中的表达情况以及其对卵巢癌细胞增殖的影响及作用机制。方法:Real-time PCR和双荧光素酶实验确定miR-590-5p与lncRNA SNHG1之间的调控作用。Real-time PCR检测卵巢癌、癌旁组织以及卵巢癌细胞中miR-590-5p的表达。分别采用NC mimic或者miR-590-5p mimic转染两株卵巢癌细胞，CCK-8检测各组细胞的增殖情况。此外，Real-time PCR检测两株细胞中SOX2、RECK和YAP1的表达。结果:Real-time PCR结果显示下调SNHG1后miR-590-5p的表达显著升高。双荧光素酶结果显示转染miR-590-5p mimic和野生型SNHG1片段的细胞中荧光素酶的活性显著降低。此外，Real-time PCR结果显示miR-590-5p在卵巢癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织。CaOV3、OV-90细胞中miR-590-5p的表达水平明显低于其他卵巢癌细胞。转染miR-590-5p mimic显著上调了CaOV3、OV-90细胞中miR-590-5p的表达并且抑制了这两株细胞的增殖，同时抑制了两株细胞中SOX2、RECK和YAP1的表达。结论:miR-590-5p的低表达与卵巢癌的进展密切相关，miR-590-5p能够介导SNHG1信号并且通过对其下游靶基因的调控抑制卵巢癌细胞的增殖。     

p27kip1和cdk2在胃癌中的表达及其意义

目的研究p27kip1及cdk2在胃癌组织中的表达及其与胃癌生物学行为的关系.方法应用免疫组化SABC法检测63例胃癌组织中p27kip1及cdk2的表达.结果本组63例胃癌中,p27kip1蛋白阳性表达30例(47.6%).p27kip1与胃癌的浸润深度、淋巴结转移、组织学分级均呈负相关(P＜0.05).cdk2蛋白阳性表达33例(50.8%),cdk2与胃癌的组织学分级呈正相关(P＜0.05).结论提示p27kip1表达减少及cdk2表达增加可能促进了胃癌的发生发展.     

p27kip1与细胞周期素D1在子宫内膜癌中的表达

[目的]研究p27kip1和细胞周期素D1蛋白在子宫内膜癌中的表达及其意义。[方法]采用免疫组化LSAB法检测42例子宫内膜癌中p27kip1、细胞周期素D1的表达。[结果]42例子宫内膜癌中20例p27kip1表达阳性,占47.6%,p27kip1与子宫内膜癌的细胞分级、临床分期、肌层浸润深度有关(P<0.05);17例子宫内膜癌细胞周期素D1表达阳性,占40.4%,细胞周期素D1与子宫内膜癌的细胞分级、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);p27kip1、细胞周期素D1协同表达15例,均为晚期或低分化癌。[结论]p27kip1、细胞周期素D1作为细胞周期调节因子参与子宫内膜癌的发生、发展,其协同作用促进子宫内膜癌的发展,且预后不良。     

槲皮素通过调控p21/cip1和p27/kip1蛋白的稳定性抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖

目的:探究槲皮素通过调控p21/cip1和p27/kip1蛋白的稳定性对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的影响.方法:CCK-8试剂盒检测口腔鳞状细胞癌细胞(SCC-15)增殖情况;流式细胞术检测SCC-15细胞周期分布;Western blot检测CyclinD1/CDK复合体、p21/cip1、p27/kip1、p-GSK3...     

p27/kip1与泌尿系肿瘤的关系

不同生命体细胞及同一系统中不同细胞的细胞周期时间不同 ,一般Ｓ1 +Ｇ2 +Ｍ的时间变化较小 ,而Ｇ1 期时间变化较大 ,Ｇ1 期后期存在一限制点 ,Ｇ1 期的调节蛋白合成积累到能使细胞越过限制点时 ,细胞就不依赖于胞外生长刺激因子的存在而顺延 ,完成整个周期。因此Ｇ1 期是控制细胞生长 ,决定细胞命运的阶段 ,也即是细胞周期的关键和限速阶段。细胞周期由正负调节蛋白控制 ,目前认为细胞周期的正负调节蛋白包括 :周期素 (ｃｙｃｌｉｎｓ)、周期素依赖性激酶 (ｃｙｃｌｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ ,ＣＤＫｓ)、成视网膜细胞瘤蛋白 (ｒ…     

A BAP31 intrabody induces gastric cancer cell death by inhibiting p27kip1 proteasome degradation

B-cell receptor-associated protein 31 (BAP31) is a ubiquitously expressed endoplasmic reticulum (ER) membrane protein that has been found to be overexpressed in gastric intestinal-type adenocarcinoma. We first studied the relationship of BAP31 with 84 kinds of tumor-associated antigens and found that BAP31 can specifically interact with and regulate the proteasome degradation of the cyclin kinase inhibitor p27^kip1, which is one of the most frequently dysregulated tumor suppressor proteins in human cancers. Therefore, we screened antibodies against BAP31 from a human VH single-domain antibody library and expressed the antibodies intracellularly. It was found that one of the intrabodies (VH-D1) specifically inhibited p27^kip1 proteasome degradation, possibly by blocking the combination of BAP31 with p27^kip1. VH-D1 displayed therapeutic effects, as it was able to reduce the growth of human gastric cancer (GC) cell xenografts in nude mice. This effect was due to inhibition of the proliferation and subsequent activation of caspase-dependent apoptosis. Thus, BAP31 is a potential target for the suppression of GC via an intrabody-based approach.     

miR-196a调控p27kip1促进非小细胞肺癌细胞增殖的机制研究

目的 探讨miR-196a在非小细胞肺癌（NSCLC）组织及细胞系中的表达,以及抑制或过表达miR-196a对NSCLC细胞增殖能力的影响及其作用的靶基因。方法 实时定量PCR（QPCR）技术检测NSCLC组织及细胞系中miR-196a的表达水平,通过转染miR-196a inhibitors及miR-196a mimics抑制或上调miR-196a的表达水平,并通过QPCR检测转染效率。用MTT和克隆形成实验检测上调或下调miR-196a对SPC-A1或A549细胞增殖能力的影响;生物信息学及Western blotting方法分析验证miR-196a对靶基因p27kip1的调控作用。结果 与正常肺组织及细胞相比,在NSCLC组织和细胞中miR-196a的表达出现显著上调,SPC-A1细胞和A549细胞中转染miR-196a inhibitors或miR-196a mimics能显著抑制或上调miR-196a的表达;抑制miR-196a的表达能降低SPC-A1细胞增殖能力,而上调miR-196a的表达则能促进A549细胞增殖。miR-196a能够负性调控p27kip1的表达。结论NSCLC组织及细胞中miR-196a的表达上调能够抑制p27kip1的表达,并显著促进NSCLC细胞增殖,影响NSCLC的发生与发展。     

Jurkat细胞增殖过程中S期激酶相关蛋白2与p27kip1的表达变化及意义

目的 探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)与p27kip1在淋巴瘤细胞株Jurkat细胞增殖过程中的表达变化及意义.方法 采用免疫沉淀法检测Jurkat细胞中p27kip1与Skp2的结合情况;采用血清饥饿合并释放法同步化处理Jurkat细胞,再分别用Western blot技术、免疫荧光双标技术及核浆分离法检测p27kip1和Skp2在Jurkat细胞中的表达变化及亚细胞定位.结果 p27kip1与Skp2能够相互结合.在Jurkat细胞增殖过程中,p27kip1蛋白表达减少,其中在细胞核内的减少更明显;Skp2蛋白表达增加,其中在细胞浆中的增加更明显.结论 在Jurkat细胞增殖过程中,Skp2在细胞浆中的合成增加,并可能通过加快p27kip1的泛素化降解使细胞核内p27kip1显著减少,从而推动细胞周期的进程.     

子宫内膜癌组织中基因p16和p27kip1的表达及其临床意义

 目的 研究p16、p27kip1在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化技术对65例子宫内膜癌组织进行表达检测，结合临床病理学指标进行分析。结果 p16、p27kip1在65例子宫内膜癌组织的阳性表达率分别是47.7 ％和41.5 ％。p16、p27kip1在65例子宫内膜癌组织的阳性表达率均与组织学分级密切相关，在组织分化好的阳性表达率显著高于组织分化差的阳性表达率（P＜0.05，P＜0.05）。结论 p16、p27kip1在子宫内膜癌的发生发展中起着重要的调控作用。p16和p27kip1的缺失表达与子宫内膜癌的生物学行为密切相关，对分析子宫内膜癌的预后和指导临床治疗均有重要意义。     

Jab1与p27kip1蛋白在食管鳞癌中的表达及相互关系

背景与目的:p27kip1作为细胞周期负性调节因子,主要抑制CyclinE-CDK2和CyclinD-CDK4等激酶复合物的活性,从而实现对细胞调控功能.Jab1和p27kip1的表达呈负相关,与细胞的增殖呈正相关,从而促进肿瘤发展.本研究旨在分析食管鳞癌中Jab1和p27kip1蛋白的表达水平及其与临床病理的关系,以探讨其在食管鳞癌发生、发展和预后中的作用.方法:采用免疫组化二步法及Western blot法测定60例食管鳞型细胞癌(ESCC)、20例癌旁正常食管组织(NET)(距癌旁安全切缘5.0 cm以上)中Jab1和p27kip1蛋白的表达.结果:Jab1蛋白阳性表达率在NET中为20%,与ESCC组织中的78.3%相比,差异有统计学意义(P<0.01).p27kip1蛋白阳性表达率在NET中为90%,与ESCC组织中的38%相比,差异有统计学意义(P<0.01).ESCC中Jab1的过表达与肿瘤分化程度及淋巴结转移显著相关(P<0.05),p27kip1的表达与肿瘤分化程度显著相关(P<0.05),Jab1的表达与p27kip1的表达呈负相关(r=-0.334,P<0.05).结论:Jab1作为p27kip1的负性调控分子,可能参与ESCC的发生、发展过程,联合检测Jab1及p27kip1的表达有助于综合评估ESCC的生物学行为.     

反义miR-221/222上调p27kip1对MCF-7乳腺癌细胞系的放射增敏作用

目的探讨敲低miR-221／222表达上调p27^kip1对MCF-7人乳腺癌细胞系放射敏感性的影响。方法经生物信息学分析查询miR-221／222成熟体序列和它们与p27^kip1的关系。脂质体共转染反义寡聚核苷酸（反义miR-221／222）后,用Northern blot法检测转染后MCF-7细胞miR-221、miR-222表达水平;将实验细胞分为6组：对照组、对照照射组、无义序列组、无义序列照射组、反义miR-221／222共转染组和反义miR-221／222共转染照射组。用MTT法检测细胞增殖及放射协同作用,流式细胞仪分析细胞周期,克隆形成实验检测细胞增殖,Western blot分析p27^kip1蛋白的表达变化。数据间的方差分析采用F检验;两两比较采用LSD-t检验。结果经生物信息学分析显示miR-221／222成熟体序列的种子序列几乎一致,p27^kip1是miR-221／222的靶基因。Northern blot显示反义miR-221／222共转染组miR-221、miR-222的表达水平明显下降（miR-221：P=0．000;miR-222：P=0．000）。对照组及无义序列组之间miR-221、miR-222表达水平的差异无统计学意义（miR-221：P=0．371;miR-222：P=0．284）。MTT结果显示转染后第4天共转染组肿瘤细胞生长抑制效果最好,细胞增殖率明显低于对照组和无义序列组（P=0．000）,但与放射治疗无协同作用（P=0．091）。流式细胞术检测可见共转染组细胞周期存在G0／G1期阻滞（P=0．000）。经放射治疗后,可明显降低S期比例（P=0．002）。克隆形成实验表明反义miR-221／222可增加MCF-7细胞的放射敏感性。Western blot显示反义miR-221／222共转染组的p27^kip1蛋白表达明显上调（P=0．000）。结论反义miR-221／222通过上调p27^kip1蛋白表达可以增加MCF-7人乳腺癌细胞系放射敏感性。