SCHIP1促进Hippo通路的激活抑制结肠癌的发生发展

目的:检测SCHIP1在结肠癌的组织和细胞中的表达水平以及其在结肠癌中对Hippo通路的影响。方法:利用TCGA数据库分析SCHIP1在结肠癌中的表达情况;免疫组化的方法检测SCHIP1在结肠癌组织标本中的表达情况;采用Transwell试验、集落实验及MTS检测对细胞迁移和增殖能力进行检测;采用Western blot检测YAP、P-YAP、CTGF在结肠癌中的表达情况。结果:TCGA数据库显示结肠腺癌中SCHIP1的表达低于正常组织;SCHIP1在结肠癌组织及细胞系中表达较低;SCHIP1过表达抑制了RKO细胞迁移和增殖能力;SCHIP1低表达促进了RKO细胞的迁移和增殖;过表达SCHIP1的RKO细胞明显抑制了YAP、CTGF的表达,促进了P-YAP的表达。低表达SCHIP1的RKO细胞促进了YAP、CTGF的表达,抑制了P-YAP的表达。结论:SCHIP1增强了结肠癌中Hippo通路活性,抑制结肠癌的发生进展;SCHIP1可能作为结肠癌治疗的一个潜在靶向分子。     

miR-424对非小细胞肺癌A549细胞生长和侵袭的影响及分子机制

背景与目的已有的研究表明miR-424可抑制肾癌细胞增殖,抑制宫颈鳞癌细胞的迁移和侵袭能力,而其对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）细胞的影响目前尚无系统研究。本研究探讨miR-424对NSCLC A549细胞生长和侵袭迁移能力的影响并进一步研讨其分子机制。方法应用CCK8检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞增殖的影响。应用Transwell检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞侵袭能力的影响。应用Western blot检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞中MMP9和MMP2蛋白水平的影响。构建E2F63’UTR区的荧光素酶报告载体,验证miR-424对E2F6的靶向作用。采用Western blot检测过表达及抑制miR-424的表达后,A549细胞中E2F6的表达。结果过表达miR-424后,A549的生长和侵袭能力显著降低。过表达miR-424后,A549细胞的MMP-2和MMP-9表达下降。荧光素酶活性检测表明miR-424能够抑制E2F6的荧光素酶活性。过表达miR-424后,细胞内E2F6的表达降低。结论 miR-424能够通过调控E2F6而抑制A549的生长和侵袭能力。     

葛根素抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的机制探讨

目的:探讨葛根素对非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的作用及其机制.方法:不同浓度葛根素处理非小细胞肺癌A549细胞后,采用CCK-8法检测葛根素对非小细胞肺癌A549细胞增殖抑制作用及半数抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50);显微镜下观察葛根素对非小细胞肺癌A549细...     

HMGB1/TLR4通路参与Fibulin-5对肺癌细胞增殖和转移的抑制作用

背景与目的：Fibulin-5在肺癌组织中低表达,具有抑癌作用。高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)在肺癌中高表达,能够促进肿瘤的侵袭转移。该研究旨在探讨Fibulin-5抑制肺癌细胞增殖和转移的分子机制。方法：该研究首先检测了肺上皮细胞和肺癌细胞中Fibulin-5和HMGB1的表达,然后利用转染试剂将Fibulin-5过表达质粒和HMGB1的siRNA转染人A549细胞。实现Fibulin-5过表达和HMGB1低表达后,采用MTT实验检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力。本研究采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测A549细胞中HMGB1 mRNA表达变化,采用酶联免疫吸附剂测定实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELisa)检测HMGB1蛋白的分泌;采用蛋白［质］印迹法(Western blot)检测HMGB1、cyclin D1、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)和TLR4/NF-κB通路相关蛋白的表达变化。结果：在肺癌细胞A549中,Fibulin-5低表达,HMGB1高表达。过表达Fibulin-5和低表达HMGB1后,HMGB1、cyclin D1、MMP2、MMP7和MMP9的表达均明显降低,A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显减弱(P<0.05);此外,过表达Fibulin-5下调了TLR4、MyD88、p-p65的表达,上调了IκBα的表达(P<0.05)。结论：Fibulin-5可能是通过抑制HMGB1的表达以及其下游的TLR4/NF-κB通路,抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移的过程。     

mTOR信号通路与非小细胞肺癌放疗敏感性的关系

目的:研究mTOR信号通路与非小细胞肺癌放疗敏感性的关系。方法:采用不同剂量的雷帕霉素抑制非小细胞肺癌细胞系A549中的mTOR信号通路;Western blot检测雷帕霉素作用后下游信号分子的表达;将A549细胞分为空白对照组及雷帕霉素作用的实验组,将对照组和实验组经不同剂量射线作用;用MTT实验（噻唑蓝）及克隆形成能力检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果:雷帕霉素药物作用抑制了mTOR信号通路及下游分子的表达,经不同剂量射线照射后细胞的增殖能力和克隆形成能力显著低于对照组,凋亡显著高于对照组。结论:抑制mTOR信号通路可以增加非小细胞肺癌对放疗的敏感性。     

IL-17A通过PI3K/Akt通路促进肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究IL-17A对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法:使用不同浓度的IL-17A（0、1、10、100 ng/mL）分别作用于A549细胞。CCK-8检测IL-17A对A549细胞增殖的影响;划痕修复实验和Transwell细胞侵袭实验检测IL-17A对A549细胞迁移和侵袭的影响;Western blot检测IL-17A对PI3K/Akt信号通路和凋亡通路蛋白表达的影响;流式细胞术检测IL-17A对A549细胞凋亡的影响;IL-17A和PI3K抑制剂LY294002共同作用于A549细胞,划痕修复实验观察对A549细胞迁移的影响。结果:IL-17A可以促进A549细胞的增殖,其对A549细胞增殖的促进作用随着IL-17A浓度的增加而增加。IL-17A能够促进PI3K和Akt磷酸化蛋白表达、抑制凋亡蛋白caspase3的表达,并抑制A549细胞的凋亡。LY294002可以明显减弱IL-17A对A549细胞迁移的促进作用。结论:IL-17A通过PI3K/Akt通路抑制A549细胞的凋亡,从而促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-200a抑制YAP1基因表达对肺癌细胞增殖的影响

  目的   研究微小RNA-200a（miR-200a）对肺癌细胞增殖的影响,并探讨其分子机制。   方法   采用Real-time PCR检测15例非小细胞肺癌组织和对应癌旁组织、人肺癌细胞株（A549、NCI-H520、SK-MES-1）及人正常肺支气管上皮细胞株16HBE中miR-200a的表达水平。用CCK-8法检测miR-200a对A549肺癌细胞增殖活性的影响。通过生物信息学方法预测miR-200a可能的靶基因,双荧光素酶报告基因实验结合Real-time PCR和Western blot验证miR-200a对靶基因YAP1的调控作用。CCK-8法检测下调靶基因YAP1对A549肺癌细胞株增殖活性的影响。   结果   miR-200a在非小细胞肺癌组织和肺癌细胞系中表达明显降低（P < 0.01）。上调miR-200a表达后明显抑制A549肺癌细胞的增殖活力（P < 0.01）。双荧光素酶报告基因显示miR-200a可以直接作用于靶基因YAP1的3'-UTR区域抑制荧光素酶活性（P < 0.01）,Real-time PCR和Western blot检测显示上调miR-200a的表达能够明显下调A549肺癌细胞YAP1 mRNA和蛋白的表达水平（P < 0.01）。CCK-8法显示下调YAP1的表达能够明显抑制A549肺癌细胞的增殖活性（P < 0.01）。   结论   miR-200a通过靶向作用于YAP1基因来抑制肺癌细胞的增殖,从而在肺癌中发挥抑癌基因的功能。      

shRNA干扰半胱氨酸蛋白酶抑制剂C抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭和迁移

目的 研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（cystatin C, Cys C）表达对NSCLC A549细胞的生长、侵袭和转移的作用及其潜在的分子机制。方法 采用短发夹RNA（sh-RNA）干扰沉默Cys C表达,构建sh-Cys C载体,并转染人肺腺癌A549细胞中,筛选sh-Cys C稳转子。用CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭。此外,还采用Western blot检测侵袭和迁移关键蛋白表达的变化。结果 shRNA干扰Cys C,明显下调Cys C的表达;与对照组相比,发现shRNA介导的Cys C沉默显著抑制A549细胞体外增殖、迁移和侵袭。此外,还发现Cys C的下调可以显著抑制基质金属蛋白酶（MMP9、MMP14）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结论 shRNA干扰半胱氨酸蛋白酶抑制剂C,明显下调Cys C的表达,Cys C的下调可抑制非小细胞肺癌A549细胞的侵袭和迁移。     

miR-374 a对肺腺癌细胞增殖与侵袭迁移的影响

目的 探究分析miR-374a对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭、迁移等生物学行为能力的影响.方法 采用RT-PCR检测miR-374a在正常肺上皮细胞CCD-8L及非小细胞肺癌细胞A549、H1975中的表达情况.采用miR-374a mimic和miR-374a inhibitor转染非小细胞肺癌细胞A549、H1975...     

DDX17基因表达下调对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨 DDX17基因在非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的中的作用。方法：采用慢病毒介导的 shRNA,下调非小细胞肺癌 A549细胞中 DDX17的表达,实时荧光定量 PCR 和 Western blot 验证下调效果。CCK －8和平板克隆实验检测细胞增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell 实验检测细胞侵袭能力变化。结果：DDX17－shRNA 可有效下调非小细胞肺癌 A549细胞中 DDX17蛋白和 mRNA 的表达。DDX17表达下调后,A549细胞的增殖受到抑制,24、48、72小时细胞增殖能力较对照组分别降低23％、42％和59％。细胞克隆形成数目较对照组明显减少,两组细胞克隆数目分别为75±9和30±6。细胞迁移速率较对照组降低,两组迁移率分别为（49．4±7．4）％和（17．8±3．7）％。细胞侵袭数目较对照组明显减少,两组细胞24小时侵袭数目分别为89．7±13．2和30．0±5．7。结论：DDX17表达下调可显著抑制非小细胞肺癌 A549的增殖、迁移和侵袭。     

LSD1抑制剂抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化

目的:探究赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1（lysine-specific demethylase 1,LSD1）抑制剂对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将体外培养的人非小细胞肺癌A549细胞分为对照组和LSD1抑制剂组,在细胞进入对数生长期时,向实验组细胞中分别加入不同浓度的LSD1抑制剂,培养24 h。CCK-8法用于细胞增殖检测,划痕实验用于细胞迁移检测,Transwell小室法用于细胞侵袭检测,裂解细胞提取总蛋白后通过蛋白质免疫印迹技术（Western blot,WB）检测A549细胞中上皮细胞标志物E型钙黏蛋白（E-cadherin）、间充质细胞标志物N型钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的表达水平。结果:与对照组相比,LSD1抑制剂组细胞增殖率、穿膜细胞数和划痕愈合率显著降低（P＜0.05）;LSD1抑制剂组相较于对照组,E-cadherin表达量升高,N-cadherin和Vimentin的表达量均降低（P＜0.05）。结论:LSD1抑制剂可抑制非小细胞肺癌A549细胞的侵袭、迁移及上皮间质转化。     

CCDC25在非小细胞肺癌细胞中高表达及其促细胞增殖的分子机制

目的:探讨CCDC25蛋白在非小细胞肺癌细胞中的表达及其对非小细胞肺癌增殖的影响。方法:应用GEPIA数据库分析CCDC25在肺癌组织中表达明显高于癌旁组织，结合Western blot检测和免疫荧光，检测其在非小细胞肺癌细胞系中的表达和定位。Western blot 检测YAP、p-YAP、LATS1、p-LATS1蛋白表达量。克隆形成实验和MTS实验检测CCDC25过表达对肿瘤细胞增殖能力的影响。结果:CCDC25在非小细胞肺癌细胞系中明显高表达，CCDC25过表达促进肿瘤细胞增殖能力(P<0.05)。CCDC25过表达抑制YAP蛋白的磷酸化促进YAP蛋白水平的升高(P<0.05)。结论:CCDC25可能通过调控YAP蛋白表达，进而促进非小细胞肺癌的演进。     

miR-940在非小细胞肺癌中的表达及对肺腺癌A549细胞生物学功能的影响北大核心

目的:探讨miR-940在非小细胞肺癌中的表达及对肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法:选取标本库中2015年10月至2016年12月在我院胸外二科行手术治疗的非小细胞肺癌患者85例,检测癌组织和癌旁组织中miR-940的表达水平。将miR-940 mimics和miR-940 inhibitors转染至A549细胞中,检测转染后各组A549细胞中miR-940的表达水平。根据细胞增殖实验、划痕实验和Transwell实验检测各组细胞的增殖、迁移及侵袭能力变化。双荧光素酶实验证实miR-940的靶基因。结果:miR-940在癌组织中的表达量显著低于癌旁组织中的表达量,差异有统计学意义(P=0.004)。细胞增殖实验结果显示,miR-940 mimics组的细胞增殖率显著低于miR-940 inhibitors组(P<0.05);细胞划痕实验结果显示,miR-940 mimics组的划痕愈合率明显低于miR-940 inhibitors组(P<0.05);Transwell细胞侵袭实验结果显示,miR-940 mimics组的侵袭细胞数显著低于miR-940 inhibitors组的侵袭细胞数,差异有统计学意义(P<0.01)。Cbl-b是miR-940的直接靶基因。结论:miR-940在非小细胞肺癌中呈低表达,miR-940可能通过靶向抑制Cbl-b基因,进而抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

延龄草总皂苷调控hsa_circ_0025033/miR-149对非小细胞肺癌细胞生物学行为的影响

目的:研究延龄草总皂苷对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:将不同浓度的延龄草总皂苷作用于A549细胞,应用实时定量PCR检测hsa_circ_0025033和miR-149的表达,应用双荧光素酶基因系统验证hsa_circ_0025033与miR-149的靶向关系。分析干扰hsa_circ_0025033表达对A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结果:延龄草总皂苷可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,下调hsa_circ_0025033表达,上调miR-149表达(P＜0.05)。干扰hsa_circ_0025033可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡(P＜0.05)。hsa_circ_0025033可靶向结合miR-149,干扰hsa_circ_0025033表达可上调miR-149表达(P＜0.05)。过表达hsa_circ_0025033逆转延龄草总皂苷对A549细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响(P＜0.05)。结论:延龄草总皂苷能够抑制NSCLC细胞A549增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,可能与调节hsa_circ_0025033/miR-149通路有关。