miR-204通过下调Bcl-2表达抑制人视网膜母细胞瘤细胞生长

目的:探讨miR-204在人视网膜母细胞瘤中的表达、临床意义及其分子机制。方法:实时定量PCR检测miR-204在视网膜母细胞瘤及瘤旁组织中的表达并分析其与临床病理特征的关系。检测miR-204在视网膜母细胞瘤细胞系中的表达,并用miR-204模拟物转染Y79细胞,MTT及流式细胞仪检测Y79细胞的增殖、凋亡情况,RT-PCR、Western blot法检测Bcl-2 mRNA、蛋白的表达。结果:miR-204在视网膜母细胞瘤组织中的表达水平显著低于对应瘤旁组织。miR-204低表达与神经浸润、分化程度密切相关。miR-204可显著抑制Y79细胞的增殖并促进其凋亡,下调Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平。结论:miR-204在人视网膜母细胞瘤组织中表达下调,并与临床病理相关,miR-204抑制Y79细胞增殖、促进凋亡的作用可能与下调Bcl-2有关。     

抑制人高迁移率族蛋白1基因表达对胰腺癌细胞凋亡影响的研究

目的:探讨反义人高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因转染对人胰腺癌细胞的凋亡诱导作用及对Bcl-2/bax mRNA表达水平的影响.方法:应用分子克隆技术构建反义HMGB1基因真核表达栽体pcDNA3.1/anti-HMGB1,脂质体介导转染人胰腺癌细胞pane1,G418筛选获得阳性克隆.RT-PCR方法检测HMGB1、Bcl-2和Bax表达水平,MTT法测定细胞增殖,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡及细胞周期情况.结果:成功构建pcDNA3.1/anti-HMGB1真核表达裁体,转染pcDNA3.1/anti-HMGB1可使pancl细胞HMGB1和Bcl-2 mRNA表达水平显著降低,P<0.01;Bax mRNA的相对表达量明显升高,P>0.05;与对照组相比,Bax/Bcl-2 mRNA的比值显著升高,P<0.05.肿瘤细胞增殖能力明显受到抑制,P<0.01;并出现G1期阻滞和凋亡细胞百分率增加.结论:反义HMGB1基因转染能抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,是胰腺癌基因治疗的策略之一.     

RNA干扰UHRF1基因表达对脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响#br#

目的探讨RNA干扰UHRF1基因表达对脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。 方法采用脂质Attractene reagent将靶向沉默UHRF1的质粒LV UHRF1 shRNA和阴性对照质粒LV scramble shRNA分别转染至U251细胞（LV UHRF1 shRNA组和LV scramble shRNA组）,以仅转染脂质体的细胞为对照组;采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测各组转染48 h后的UHRF1 mRNA水平,采用MTT法检测各组转染24、48、72 h的增殖情况,BrdU染色法检测转染12、24、48、72 h后的BrdU阳性率,Annexin V FITC／PI双染流式细胞术检测转染48、72 h后的凋亡率,Western blotting检测转染72 h后的凋亡相关蛋白（Bax、caspase 3和Bcl 2）水平。 结果QPCR检测结果显示对照组、LV scramble shRNA组和LV UHRF1 shRNA组的UHRF1水平分别为1098±0136、1127±0193和0309±0073,LV UHRF1 shRNA组的UHRF1水平低于对照组和LV scramble shRNA组（P＜005）。与对照组和LV scramble shRNA组相比,LV UHRF1 shRNA组在以上时间点细胞增殖率和BrdU阳性率均降低,差异有统计学意义（P＜005）;LV UHRF1 shRNA组的凋亡率为（2571±187）％,均高于对照组的（773±066）％和（786±059）％,差异有统计学意义（P＜005）;Western blotting检测结果显示与对照组和LV scramble shRNA组相比,LV scramble shRNA组的Bax、caspase 3水平升高,而Bcl 2水平降低,差异有统计学意义（P＜005）;对照组和LV scramble shRNA组以上指标的差异均无统计学意义（P＞005）。 结论在U251细胞中的下调UHRF1可抑制增殖并诱导凋亡,UHRF1发挥类似癌基因的作用,可作为脑胶质瘤的治疗的候选基因。     

RNA干扰抑制BMP-2基因表达对人肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响

目的：设计并化学合成针对骨形态发生蛋白2（BMP-2）的siRNA分子片段,转染人肝癌SMMC7721细胞,观察其对SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响。方法：阳离子脂质体法瞬间转染SMMC7721细胞,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western印迹法检测转染BMP-2-siRNA后细胞BMP-2 mRNA水平和蛋白水平的变化,MTT法和流式细胞术检测转染BMP-2-siRNA后SMMC7721细胞增殖、细胞周期和凋亡的变化。结果：3对特异性BMP-2-siRNA均有效地抑制了BMP-2基因的表达,以siRNA-B抑制效果最好。转染BMP-2-siRNA后SMMC7721细胞的增殖能力明显受到抑制( P <0.05)且明显促进了SMMC7721细胞的凋亡。结论：靶向BMP-2基因的siRNA分子片段可以有效地抑制人肝癌SMMC7721细胞的增殖并促进其凋亡     

高迁移率族蛋白B1与胰腺癌的关系

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是细胞内的非组蛋白染色体结合蛋白,在维持核小体稳定和DNA重组、复制、修复及基因转录中发挥着重要作用.而细胞外HMGB1可作为一种"晚期炎症介质",在炎症的晚期阶段启动着炎症反应.最近研究发现,HMGB1作为一种非组蛋白染色体蛋白质,与胰腺癌的生长、浸润、转移密切相关,能促使细胞外基质降解,促进胰腺癌浸润、转移.     

高迁移率族蛋白B1与肿瘤的相关性

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一种核内非组蛋白染色质结合蛋白,通过与其受体相互作用产生广泛生物效应,可参与转录调节,诱导炎症反应等,并与风湿免疫性疾病密切相关.近年研究发现,HMGB1在多种恶性肿瘤中呈高表达,其表达水平与肿瘤分化、侵袭、转移呈正相关.HMGB1有望成为一种新的抗肿瘤治疗靶分子.     

干扰PIM3的表达对人胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响及作用机制研究

目的 探讨干扰PIM3的表达对人胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 将阴性对照[scramble小干扰RNA(siRNA)]和干扰PIM3(PIM3 siRNA)分别转染至人胰腺癌AsPC-1细胞,分别作为scramble-siRNA组和PIM3-siRNA组,以1×磷酸盐缓冲液(PBS)作为溶剂对照.采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测人胰腺癌AsPC-1细胞PIM3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)、Ki-67、cas-pase 3 mRNA的相对表达量,蛋白质印迹法(Western blot)检测PIM3、Bcl-2、BAX、caspase 3蛋白的相对表达量;四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测干扰PIM3的表达对人胰腺癌AsPC-1细胞增殖能力的影响,流式细胞仪检测干扰PIM3的表达对细胞凋亡能力的影响.探讨干扰PIM3的表达对荷瘤小鼠人胰腺癌AsPC-1细胞的影响.结果 转染后,PIM3-siRNA组细胞PIM3 mRNA和PIM3蛋白的相对表达量均明显低于溶剂对照组和scramble-siRNA组(P﹤0.01).干扰PIM3的表达可明显抑制人胰腺癌AsPC-1细胞增殖,促进其凋亡.干扰PIM3的表达可下调人胰腺癌AsPC-1细胞中Ki-67、Bcl-2基因的表达,上调BAX、caspase 3基因的表达;且干扰PIM3的表达可下调Bcl-2蛋白的表达,上调BAX、caspase 3蛋白的表达.荷瘤小鼠经PIM3 siRNA治疗后,小鼠肿瘤质量和体积均明显下降.结论 PIM3 siRNA可通过干扰PIM3的表达,诱导人胰腺癌AsPC-1细胞的凋亡,在体内体外均可抑制胰腺癌AsPC-1细胞的生长.     

苦参碱对视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响

目的 探讨苦参碱（Mat）对视网膜母细胞瘤细胞Y79细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响。方法 Y79细胞经0.5、1.0、1.5 g/L Mat处理24 h后,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,磷酯酰丝氨酸结合蛋白-异硫氢酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting免疫印迹检测各浓度Mat处理后凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax、PI3K/Akt信号通路重要蛋白PI3K p85亚基、Akt及其磷酸化形式p-Akt的蛋白水平。结果 不同浓度Mat作用Y79细胞24 h后,可呈浓度依赖性方式抑制细胞增殖,增加细胞凋亡率（P＜0.05）。Western blotting检测发现,Mat可明显增加促凋亡蛋白Bax表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2水平并可降低PI3K p85α亚基及磷酸化Akt的蛋白水平（P＜0.05）,对总Akt水平无明显影响。结论 Mat可抑制人视网膜母细胞瘤增殖并诱导其凋亡,可能与抑制PI3K/Akt 信号通路有关。     

表达对胰腺癌CFPAC-1细胞增殖和凋亡的影响

目的:应用慢病毒介导的RNA干扰技术,靶向沉默人胰腺癌CFPAC-1细胞中的EphB2基因的表达,观察EphB2对CFPAC-1细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建靶向EphB2基因的siRNA干扰质粒,通过Lipofectamine^TM2000将干扰质粒转染进293T细胞,筛选出能有效抑制EphB2蛋白表达的干扰序列。构建含有效序列的慢病毒载体pLentiGFP-EphB2,感染CFPAC-1细胞,筛选出稳定干扰EphB2蛋白表达的CFPAC-1细胞系。定量PCR、Western blotting检测CFPAC-1细胞中EphB2mRNA和蛋白的表达,CCK8法和流式细胞术检测EphB2下调对CFPAC-1细胞增殖和凋亡的影响。结果:成功构建了EphB2慢病毒干扰载体pLentiGFP-EphB2,获得稳定转染pLentiGFP-EphB2的CFPAC-1细胞（CFPAC-1 EphB2 RNAi）。CFPAC-1EphB2 RNAi细胞中EphB2 mRNA和蛋白表达较空载体组显著降低,EphB2 mRNA的沉默效率为63%。与空载体组和未转染组相比,pLentiGFP-EphB2感染显著促进CFPAC-1细胞的增殖（1.89±0.17vs1.63±0.13、1.71±0.22,P<0.05）,抑制细胞的凋亡[（7.02±1.27）%vs（13.37±1.89）%、（15.71±2.35）%,P<0.05]。结论:pLentiGFP-EphB2可有效下调胰腺癌CFPAC-1细胞中EphB2的表达,促进CFPAC-1细胞增殖和抑制其凋亡。     

Vacquinol-1对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨Vacquinol-1对非小细胞肺癌细胞系A549、NCI-H1299细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法:以不同浓度的Vacquinol-1作用于A549和NCI-H1299细胞,应用CCK-8法检测其对细胞增殖能力的影响;以半数致死浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）作用于细胞,流式细胞术Annexin V/PI双染色法检测细胞的凋亡情况;Western blotting法检查凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax表达的变化情况。结果:CCK-8结果显示Vacquinol-1能显著抑制A549、NCI-H1299细胞的增殖能力;并且流式细胞术检测结果显示Vacquinol-1能诱导A549、NCI-H1299细胞的凋亡;Western blotting结果显示Vacquinol-1促进A549、NCI-H1299细胞Caspase-3、Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。结论:Vacquinol-1能够抑制非小细胞肺癌细胞的增殖,并且通过激活线粒体通路诱导细胞凋亡。     

Knockdown of HMGB1 improves apoptosis and suppresses proliferation and invasion of glioma cells

Background

The purposes of this study were to explore the effects of high mobility group protein box 1 (HMGB1) gene on the growth, proliferation, apoptosis, invasion, and metastasis of glioma cells, with an attempt to provide potential therapeutic targets for the treatment of glioma.

Methods

The expressions of HMGB1 in glioma cells (U251, U-87MG and LN-18) and one control cell line (SVG p12) were detected by real time PCR and Western blotting, respectively. Then, the effects of HMGB1 on the biological behaviors of glioma cells were detected: the expression of HMGB1 in human glioma cell lines U251 and U-87MG were suppressed using RNAi technique, then the influences of HMGB1 on the viability, cycle, apoptosis, and invasion abilities of U251 and U-87MG cells were analyzed using in a Transwell invasion chamber. Also, the effects of HMGB1 on the expressions of cyclin D1, Bax, Bcl-2, and MMP 9 were detected.

Results

As shown by real-time PCR and Western blotting, the expression of HMGB1 significantly increased in glioma cells (U251, U-87MG, and LN-18) in comparison with the control cell line (SVG p12); the vitality, proliferation and invasive capabilities of U251 and U-87MG cells in the HMGB1 siRNA-transfected group were significantly lower than those in the blank control group and negative control (NC) siRNA group (P<0.05) but showed no significant difference between the blank control group and NC siRNA group. The percentage of apoptotic U251 and U-87MG cells was significantly higher in the HMGB1 siRNA-transfected group than in the blank control group and NC siRNA group (P<0.05) but was similar between the latter two groups. The HMGB1 siRNA-transfected group had significantly lower expression levels of Cyclin D1, Bcl-2, and MMP-9 protein in U251 and U-87MG cells and significantly higher expression of Bax protein than in the blank control group and NC siRNA group (P<0.05); the expression profiles of cyclin D1, Bax, Bcl-2, and MMP 9 showed no significant change in both blank control group and NC siRNA group.

Conclusions

HMGB1 gene may promote the proliferation and migration of glioma cells and suppress its effects of apoptosis. Inhibition of the expression of HMGB1 gene can suppress the proliferation and migration of glioma cells and promote their apoptosis. Our observations provided a new target for intervention and treatment of glioma.     

siRNA沉默PIM1基因表达对人胃癌MKN-45细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨PIM1 基因沉默对人胃癌 MKN-45 细胞增殖和凋亡的影响。方法:设计2条针对PIM1 mRNA靶序列的干扰RNA正义链和反义链及阴性对照序列,构建重组pSIREN-retroQ质粒载体,并转染胃癌 MKN-45 细胞。应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测 PIM1在 mRNA水平及蛋白水平的表达。CCK-8 法检测胃癌 MKN-45 细胞的增殖,流式细胞分析胃癌细胞的凋亡,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase 3和Caspase 9的表达。结果:重组克隆通过 PCR 扩增及测序,证明干扰序列插入正确。与正常对照组和阴性对照组相比,两个RNA干扰组胃癌 MKN-45 细胞PIM1在 mRNA及蛋白水平的表达量都显著降低（P<0.05）,细胞增殖能力下降（P<0.05）。此外,干扰组细胞凋亡明显增多（P<0.01）,Caspase 3和Caspase 9蛋白表达上调（P<0.01）。 结论: PIM1 siRNA能有效下调靶基因表达,产生特异性基因沉默效应;PIM1基因沉默显著抑制胃癌MKN-45 细胞的增殖并促进其凋亡。     

沉默GCB型弥漫大B细胞淋巴瘤细胞中AFAP1-AS1的表达对细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨沉默GCB弥漫型大B细胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma,DLBCL）中AFAP1-AS1的表达对细胞增殖和凋亡的影响。方法:培养GCB-DLBCL细胞至对数生长期后转染OCI-Ly1细胞系,建立的GCB-DLBCL细胞系对AFAP1-AS1表达进行沉默;实验设立3组,实验组为腺病毒感染细胞,sh-NC无关序列腺病毒感染细胞组为无关序列对照组,未感染腺病毒细胞组为空白组,应用PCR法检测AFAP1-AS1表达水平、CCK-8法测定细胞增殖情况、流式细胞术检测细胞凋亡情况,对比检测结果。结果:AFAP1-AS1表达水平检测结果显示:三种shRNA序列干扰效率均较无关序列对照组（sh-NC）强,差异有统计学意义（P＜0.05）;采用CCK-8法检测各组细胞凋亡情况,结果显示:经腺病毒sh3-AFAP1-AS1感染后,OCI-Ly1细胞系中实验组细胞吸光度较无关序列对照组和空白组显著降低,下调AFAP1-AS1可抑制GCB-DLBCL细胞的增殖（P＜0.05）;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,结果显示:经sh3-AFAP1-AS1和sh-NC转染后,OCI-Ly1细胞实验组凋亡率明显高于无关序列对照组和空白组,下调AFAP1-AS1可诱导GCB-DLBCL细胞凋亡（P＜0.05）。结论:沉默GCB-DLBCL细胞中的AFAP1-AS1表达能有效抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,或可作为GCB-DLBCL治疗的靶目标。     

Survivin-shRNA对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞自噬及凋亡的影响

目的:研究Survivin-shRNA对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞自噬及凋亡的影响。方法:培养视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞,构建Survivin-shRNA载体。按照处理不同分为Survivin-shRNA组、GFP组和CON组。分别采用流式细胞术检测Survivin-shRNA对HXO-RB44细胞凋亡和细胞周期的影响,应用MTT法检测Survivin-shRNA对HXO-RB44细胞活性的影响,Western blot法检测Survivin-shRNA对HXO-RB44 细胞自噬相关蛋白LC3、p62 与mTOR 表达的影响。结果:流式细胞术结果表明,与Control组和GFP组相比,Survivin-shRNA组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P＜0.05）;随着作用时间的延长,S期出现阻滞,48 h阻滞最强,显著高于对照组（P＜0.05）。MTT结果发现Survivin-shRNA可抑制HXO-RB44细胞增殖活性,与Control组和GFP组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）;Western blot结果发现,与对照组相比,LC3表达量显著增加（P＜0.01）;而mTOR表达量降低（P＜0.01）。结论:Survivin-shRNA可促进视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞的凋亡和自噬水平,进而特异性杀伤肿瘤细胞。     

RNA干扰HMGB1基因对食管鳞癌细胞X线照射后增殖与迁移能力影响

目的 RNAi技术干扰人食管鳞癌细胞中HMGB1基因表达,观察X线照射后细胞增殖活性、迁移和存活能力及细胞周期分布。方法 RT-PCR和Western blot法检测HMGB1 mRNA和蛋白表达;分别采用MTS和Transwell方法检测食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30细胞增殖活性和迁移能力;克隆形成实验检测各组细胞的存活能力;流式细胞术检测照射后各组的细胞周期分布。结果 照射组ECA109、KYSE30细胞中HMGB1 mRNA和蛋白表达水平较未照射组明显增加(P<0.05),且存在剂量-效应和时间-效应关系;MTS结果显示食管鳞癌细胞的增殖水平在照射后不同时间点均明显降低(P<0.01);HMGB1沉默组细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的表达均明显低于对照组和NC组(P<0.01);克隆形成实验结果显示HMGB1表达降低后,肿瘤细胞的放射敏感性明显增加(P<0.01);Tanswell侵袭小室模型检测显示照射后4 h沉默组穿膜细胞数明显降低(P<0.01),且沉默组G0/G1期比例明显高于对照组和NC组,S期比例显著低于其他组,照射后这种趋势更明显(P<0.01)。结论 RNAi干扰技术降低食管鳞癌细胞中HMGB1的表达,降低了细胞增殖和迁移能力,通过诱导照射后G0/G1期阻滞增加了放射敏感性。     

RNA干扰HMGB1基因对食管鳞癌细胞X线照射后增殖与迁移能力影响

目的 RNAi技术干扰人食管鳞癌细胞中HMGB1基因表达,观察X线照射后细胞增殖活性、迁移和存活能力及细胞周期分布。方法 RT-PCR和Western blot法检测HMGB1 mRNA和蛋白表达;分别采用MTS和Transwell方法检测食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30细胞增殖活性和迁移能力;克隆形成实验检测各组细胞的存活能力;流式细胞术检测照射后各组的细胞周期分布。结果 照射组ECA109、KYSE30细胞中HMGB1 mRNA和蛋白表达水平较未照射组明显增加(P<0.05),且存在剂量-效应和时间-效应关系;MTS结果显示食管鳞癌细胞的增殖水平在照射后不同时间点均明显降低(P<0.01);HMGB1沉默组细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的表达均明显低于对照组和NC组(P<0.01);克隆形成实验结果显示HMGB1表达降低后,肿瘤细胞的放射敏感性明显增加(P<0.01);Tanswell侵袭小室模型检测显示照射后4 h沉默组穿膜细胞数明显降低(P<0.01),且沉默组G0/G1期比例明显高于对照组和NC组,S期比例显著低于其他组,照射后这种趋势更明显(P<0.01)。结论 RNAi干扰技术降低食管鳞癌细胞中HMGB1的表达,降低了细胞增殖和迁移能力,通过诱导照射后G0/G1期阻滞增加了放射敏感性。     

RNA干扰RhoBTB1表达促进结肠癌HT29细胞增殖、抑制其凋亡的相关研究

目的:探究RNA干扰RhoBTB1基因表达对结肠癌HT29细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用Lipofectamine 2000将siRNA RhoBTB1或siRNA NC转入HT29细胞中，实验分为Control组、转染对照组和siRNA Rho组，噻唑蓝（MTT）和流式细胞术分别检测细胞的的活力和凋亡率，蛋白质印迹法（Western Blot）检测细胞中RhoBTB1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达量。结果:与对照组相比，HT29细胞转染siRNA RhoBTB1后，细胞中RhoBTB1蛋白的表达量显著低于对照组（P<0.05），细胞活力显著升高（P<0.05），凋亡率显著降低（P<0.05），Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平明显降低(P<0.05)，Bcl-2蛋白水平显著增加（P<0.05）。结论:RNA干扰RhoBTB1表达促进结肠癌HT29细胞增殖，抑制其凋亡，可能通过调节线粒体凋亡通路相关蛋白的表达量发挥作用。     

TIRAP对上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡能力的影响

目的:研究TIRAP在上皮性卵巢癌细胞中的表达情况,及其对上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡能力的影响。方法:通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot检测各组细胞中TIRAP的表达。利用CCK-8法、流式细胞技术探究TIRAP的表达对人上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。利用Western blot、ELISA法探究TIRAP的表达对p-NF-κB p65及下游免疫分子IL-6、TNF-α水平的影响。结果:与正常卵上皮细胞（IOSE-80）相比,上皮性卵巢癌细胞（SKOV-3,OVCAR3,A2780）中TIRAP的mRNA和蛋白表达显著升高。转染TIRAP siRNA 后,SKOV-3细胞中TIRAP的表达显著降低;CCK-8实验显示:转染培养第96 h时,si-TIRAP组OD值（1.85±0.06）较Blank组（2.42±0.16）及Scramble control组（2.50±0.10）明显降低;细胞凋亡检测显示:si-TIRAP组凋亡率明显高于对照组;Western blot实验显示:LPS+si-TIRAP组p-NF-κB p65的表达与对照组相比显著降低;ELISA实验显示:LPS+si-TIRAP组IL-6、TNF-α的含量与对照组相比显著下降。结论:TIRAP在上皮性卵巢癌细胞中的表达升高,可能是上皮性卵巢癌细胞增殖的机制之一;下调TIRAP的表达可以抑制上皮性卵巢癌细胞增殖,促进细胞凋亡,并且通过抑制NF-κB通路的活化降低其下游免疫分子的表达。     

沉默lncRNA TUG1对肾透明细胞癌细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探究沉默lncRNA TUG1对肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法:选用37例ccRCC组织及癌旁组织样本,通过提取样本总RNA并行逆转录及转染,利用qRT-PCR检测lncRNA TUG1在ccRCC组织、细胞系及癌旁组织中的表达,并通过CCK-8法、流式细胞检测法及划痕实验检测沉默lncRNA TUG1对ccRCC细胞A704、A498增殖、凋亡及迁移的影响,采用统计软件进行数据处理,探究lncRNA TUG1在ccRCC中的表达及临床意义。结果:qRT-PCR检测lncRNA TUG1表达情况,结果显示:lncRNA TUG1在ccRCC组织中的表达显著高于癌旁组织,在肾细胞癌细胞系A704和A498中的表达明显高于正常细胞系HK2,差异有统计学意义（P＜0.05）;CCK-8检测细胞增殖情况,结果显示:A704和A498细胞经转染干扰后细胞增殖活性较对照组显著降低（P＜0.05）,沉默lncRNA TUG1可抑制细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡情况,结果显示:A704和A498细胞凋亡比例较空白对照组明显增多（P＜0.05）,沉默lncRNA TUG1可促进细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移能力,结果显示:A704和A498细胞迁移能力较空白对照组降低（P＜0.05）,沉默lncRNA TUG1可抑制细胞迁移。结论:沉默lncRNA TUG1可诱导ccRCC细胞凋亡,抑制其增殖、迁移,可作为临床研究的新靶点。