双氢青蒿素诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡及其机制

目的:探讨双氢青蒿素(DHA)对鼻咽癌CNE-2细胞的生长抑制作用及其机制。方法:以体外培养的CNE-2细胞为研究对象,分别采用CCK-8法观察不同浓度和时间DHA对CNE-2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V-FITC法检测CNE-2细胞的凋亡率,caspase-3活性检测法检测不同浓度DHA处理后CNE-2细胞中caspase-3的活性变化。结果:CCK-8法显示,与对照组相比,随DHA浓度的增加,CNE-2细胞的增殖显著抑制(P<0.05);流式细胞仪Annexin V-FITC法,结果显示DHA诱导CNE-2细胞凋亡具有浓度依赖性;caspase-3活性检测法显示,与对照组相比,随DHA浓度的增加,caspase-3的活性显著提高(P<0.05)。结论:DHA能有效抑制CNE-2细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能是能上调CNE-2细胞中caspase-3的活性。     

自噬与细胞稳态调控及肿瘤的研究进展

自噬是一种细胞反应,用来自身获得营养物质及消化细胞器,细胞能够调控自噬以应对需求,对维持蛋白质代谢平衡及细胞内环境稳定具有重要作用,它促进细胞生长、发育、分化和维持生物体自我平衡。细胞在营养缺乏的情况下将诱导自噬,通过自噬降解胞质和细胞器以提供细胞生存所需要的能量,但过度的刺激,自噬持续存在将导致自噬样细胞死亡。自噬调控的异常与肿瘤的发生有着直接关系。细胞自噬是当前肿瘤研究的新热点,其在肿瘤发生、发展中扮演着重要角色。自噬的诱发对肿瘤的发生具有双刃剑作用,一方面是阻碍肿瘤发生的屏障,抑制肿瘤生长,另一方面是肿瘤相对恶劣环境的适应性应答,促进肿瘤进展。     

草氨酸钠抑制细胞自噬对鼻咽癌放射敏感性的影响

目的　草氨酸钠对鼻咽癌CNE2细胞放射后自噬的影响,以及对放射的增敏作用。方法　鼻咽癌CNE2细胞培养于RMPI-1640 培养液,MTT 法检测 CNE2细胞生长抑制。Western blot检测自噬蛋白LC3Ⅱ表达。结果  0、10、20、40 mmol/L草氨酸钠处理CNE2细胞48小时后,细胞生长抑制率分别为（0.37±0.04）%、（7.28±2.24）%、（6.54±4.161）%、（27.09±5.35）%,各组间具有显著性差异（P 均<0.01）。60 Gy X线照射联合0、10、20、40 mmol/L草氨酸钠处理CNE2细胞48小时后,细胞生长抑制率分别为（31.62±7.24）%、（38.32±10.43）%、（50.28±11.35）%、（62.12±13.16）%,各组间具有显著性差异（P 均<0.05）,细胞克隆抑制率分别为（52.16±11.34）%、（60.27±11.83）%、（77.25±13.16）%、（86.42±13.74）%,各组间具有显著性差异（P 均<0.05）。LC3Ⅱ蛋白灰度扫描分析显示对照细胞、射线处理细胞、射线+10 mmol/L草氨酸钠处理细胞、射线+20 mmol/L草氨酸钠处理细胞、射线+40 mmol/L草氨酸钠处理细胞LC3Ⅱ表达的相对灰度值分别0.104±0.013、0.714±0.183、0.562±0.126、0.414±0.095和0.253±0.052,各组间具有显著性差异（P 均<0.05）。结论　草氨酸钠抑制了放射引起的CNE2细胞自噬,增强了CNE2细胞对放射的敏感性。     

3-溴丙酮酸对鼻咽癌细胞CNE-1增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的 观察3-溴丙酮酸(3-B r PA)对鼻咽癌细胞CNE-1增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 用不同浓度的3-BrPA处理CNE-1细胞,24 h后CCK-8法检测细胞增殖活性,PI染色法流式检测细胞凋亡情况,Western blot检测mTOR和S6及其相应磷酸化蛋白的表达水平.结果 50、100、1...     

自噬在肿瘤放化疗增敏中的作用和机制

肿瘤对放化疗的抵抗和耐受一直是备受关注的难题。自噬又称Ⅱ型程序性细胞死亡,在如饥饿、缺氧和药物治疗等应激条件下产生,它可以通过清除受损伤的蛋白质和细胞器,进而维持细胞稳态。已发现自噬在肿瘤发生、发展的过程中起重要作用,又能参与调节放化疗敏感性。本文将对自噬调节肿瘤发生及放化疗敏感性的相关研究进展做一综述。     

姜黄素诱导鼻咽癌NCE细胞凋亡机制的研究

目的探讨姜黄素诱导人鼻咽癌NCE细胞凋亡的分子机制。方法通过吖啶橙-嗅化乙锭复合染色、原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶分析法检测、电镜和DNA片段化分析法分析姜黄素对NCE细胞凋亡的影响，并应用流式细胞术、Western Blot、RT—PCR方法探讨姜黄素对细胞线粒体膜电位、半胱氨酸蛋白酶-3（cysteine proteases-3，caspase-3）酶活性、胞质CytC、Fas mRNA及蛋白表达的影响。结果终浓度100μmol／L的姜黄素可诱导NCE细胞凋亡；与姜黄素共孵育12、24、48h，凋亡细胞的阳性率分别为25．6％、40．3％、54．5％。姜黄素处理后NCE细胞线粒体膜电位下降，12、24、48h的线粒体膜电位下降的阳性率分别是26．8％、42．3％、68．2％。caspase-3酶活性增强，12、24、48h表达caspase-3酶活性细胞的阳性率分别是80．5％、100％、100％。胞质CytC含量显著增强，Fas mRNA及蛋白表达水平上升，Fas蛋白阳性率由33．6％上升到89．9％。结论姜黄素可能通过线粒体途径与死亡受体途径诱导鼻咽癌NCE细胞凋亡。     

自噬及其在青光眼中的研究进展

自噬是细胞通过降解更新细胞内异常的蛋白质、糖原、受损细胞器等累积物,并释放出对细胞有利的小分子物质进行二次利用,以维持细胞内稳态的一种细胞代谢过程。自噬调控异常与人体多种疾病相关,包括肿瘤、免疫性疾病、神经退行性疾病等。近年来发现,自噬参与青光眼疾病的生理病理过程,在其促进神经节细胞的生存和死亡方面仍存在一定的争议。故深入研究自噬的发生及机制,对全面了解自噬对青光眼疾病发生发展有着重要意义。     

GLP-1诱导的自噬对糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用

目的 研究GLP-1通过调控mTOR信号通路诱导的自噬对糖尿病大鼠视网膜病变是否存在保护作用。方法 建立符合要求的糖尿病视网膜病变大鼠模型,分为模型组、胰岛素组和GLP-1组,每组6只,于造模后即刻、4周、8周、12周测定大鼠空腹血糖水平,12周后处死,取视网膜组织行HE染色,免疫组化法测LC3、P53的表达,超氧化物歧化酶法测定血清氧化应激产物ROS、MDA的含量,Western blotting法测定mTOR蛋白表达。结果 与模型组相比,胰岛素组和GLP-1组可以明显降低空腹血糖,差异有统计学意义,而两组内比较差异无统计学意义。HE染色显示模型组视网膜神经节细胞排列紊乱,细胞减少或缺失,而胰岛素组和GLP-1组视网膜神经节细胞排列较规整,数量无明显减少,接近正常。免疫组化显示GLP-1组LC3、P53蛋白表达较其他组升高分别为(2.34±0.13,0.46±0.03),与各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。GLP-1组氧化应激产物ROS、MDA含量分别为(74.68±4.08,55.60±1.50),较其他组减少,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。W...     

miR-18a促进自噬增强人鼻咽癌细胞株放疗敏感性的研究

目的:探索miR-18a过表达和抑制表达对人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2放疗敏感性的影响及可能的机制。方法:采用miR-18a过表达质粒miR-18a模拟物和抑制表达质粒miR-18a遏制物及空白对照质粒转染人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2细胞,实时荧光定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹法（WB）...     

自噬在变应性鼻炎发病的作用机制研究

自噬是一种进化上高度保守的分解代谢过程,在细胞的生长发育、机体的先天性和适应性免疫方面以及程序性细胞死亡中均发挥关键作用。近年来,自噬成为在免疫、肿瘤等各方面的研究热点,且越来越多研究证据表明自噬相关基因表达量的改变可以通过对炎症因子的调节参与过敏性炎症的发病,并可针对自噬进行相关治疗。已有新的研究表明自噬通过调节T细胞的活化与功能、影响呼吸道上皮纤维化等途径参与变异性鼻炎(allergic rhinitis, AR)的发病。AR作为一种全球性的变应性疾病,暂无有效针对性治疗方法。通过学习总结,将针对自噬对过敏性炎症的发病机制及治疗以及在AR作用进行综述,以期为自噬作为AR的诊疗靶点提供新的策略。     

自噬相关蛋白EPG5调节的鼻咽癌细胞经电离辐射后自噬机制的研究

目的　研究电离辐射后鼻咽癌细胞CNE1及CNE2中自噬相关蛋白EPG5的表达情况以及EPG5的表达与鼻咽癌细胞凋亡之间的关系。方法　鼻咽癌CNE1及CNE2细胞株接受不同剂量电离辐射后，用Western Blot法检测自噬相关蛋白EPG5的表达。si RNA转染法特异性敲除epg 5基因后，Annexin V-FITC/PI法检测两株细胞凋亡情况。结果　经不同剂量电离辐射后，CNE1细胞株中EPG5的表达量与放射剂量呈正相关，CNE2细胞株中呈负相关。敲除epg 5基因后，EPG 5表达减少的同时，CNE1细胞株凋亡率明显增加，而CNE2细胞株的凋亡率明显降低。结论  鼻咽癌细胞经过电离辐射后，EPG5的表达可能与肿瘤细胞的分化程度有关，分化程度较低的细胞表达下调，分化程度较高的细胞表达上调。同时分化程度低的细胞EPG5低表达可以减少细胞凋亡，这可能是低分化鼻咽癌产生放疗抵抗的分子机制。     

转导bax基因治疗实验性鼻咽癌的研究

目的探讨转导bax基因对鼻咽癌细胞株HNE-1和种植瘤的影响.方法采用Dosper脂质体介导bax基因转导鼻咽癌细胞株后,免疫荧光检测转导效果,并分别用四甲基偶氮唑盐(thiazilyl blue,MTT)比色法和流式细胞仪检测转导组和对照组细胞株的凋亡情况,并用局部注射的方法观察bax基因对鼻咽癌裸鼠种植瘤的作用.结果鼻咽癌细胞株HNE-1转导bax基因后48 h内,免疫荧光法证实肿瘤细胞内有瞬时表达;转导前、后HNE1细胞株凋亡指数分别为10.7%、69.4%,MTT检测显示转导后36和48 h细胞吸光度为2.004和1.902.注射bax基因后实验组4只裸鼠和注射生理盐水的对照组3只裸鼠种植瘤的直径(     

X射线对人鼻咽癌CNE2及CNE2/DDP细胞自噬相关基因的影响

目的:研究放疗抵抗与自噬的关系,为使用药物调节自噬水平来提高鼻咽癌放疗敏感性提供理论基础。方法:采用流式细胞术分析CNE2及CNE2/DDP细胞照射前后的细胞周期分布;实时荧光定量PCR和免疫荧光染色检测CNE2及CNE2/DDP细胞中自噬特异性基因Beclin 1及微管相关蛋白轻链3β(MAPLC3β)的表达水平。结果:射线照射后CNE2及CNE2/DDP细胞的G2-M期增多,与放射剂量呈正相关(P<0.05),CNE2/DDP细胞的G2-M期阻滞比CNE2明显(P<0.05)。射线照射后CNE2及CNE2/DDP细胞的Beclin1及MAPLC3β的表达水平增高,与放射剂量呈正相关(P<0.05)。CNE2/DDP细胞的Beclin1及MAPLC3β表达水平均低于CNE2细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:自噬性死亡可能是放射治疗后人鼻咽癌CNE2及CNE2/DDP细胞的死亡方式之一,而CNE2/DDP细胞的放射抵抗可能与低水平的自噬有关。     

雷帕霉素雾化治疗小鼠气道变应性炎症的探索研究

目的　探讨雷帕霉素雾化吸入在治疗小鼠气道变应性炎症中的作用。方法　30只SPF级雌性Balb/c小鼠随机分成5组,每组6只,分别为对照组、气道变应性炎症模型组、气道变应性炎症模型+雷帕霉素10 mg/kg组、气道变应性炎症模型+雷帕霉素15 mg/kg组和气道变应性炎症模型+雷帕霉素20 mg/kg组。建模完成后记录小鼠挠鼻和打喷 嚏次数,分别用HE染色和PAS染色评估肺部炎症,ELISA法检测肺泡灌洗液、鼻腔灌洗液炎症因子以及血清卵清蛋白（ovalbumin,OVA）特异性IgE浓度。结果　与对照组相比较,模型组小鼠挠鼻和打喷嚏次数显著增加,肺组织炎症程度显著增加,肺泡灌洗液和鼻腔灌洗液Th2炎症因子IL-4、IL-5及IL-13浓度显著增加,血清OVA特异性IgE浓度增加。和模型组相比较,雷帕霉素处理组小鼠挠鼻和打喷嚏次数显著下降,肺组织炎症程度降低,肺泡灌洗液和鼻腔灌洗液Th2炎症因子IL-4、IL-5及IL-13显著下降,血清OVA特异性IgE浓度增加。结论　雷帕霉素雾化治疗可以缓解小鼠气道变应性炎症,雷帕霉素雾化治疗有望成为控制和治疗气道变应性炎症的新方法。     

自噬基因Beclin1与头颈肿瘤

自噬是细胞一种自我保护机制,它通过降解破碎及衰老细胞器和大分子物质来维持代谢平衡和细胞内环境的稳定,最近研究发现自噬与肿瘤有密切关系.Beclin1是第一个被发现的哺乳动物自噬基因,该基因与多种人类肿瘤发生、发展、耐药存在着密切联系.本文对近年来Beclin1与肿瘤尤其是头颈肿瘤的关系进行综述.     

Zebularine对人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖的抑制作用

某些抑癌基因转录起始区域的启动子发生异常超甲基化,会导致抑癌基因表达失活引发肿瘤,因此有关去甲基化药物的研究正在成为肿瘤治疗领域的热点。在国外研究中已证实抗肿瘤药——Zebularine（Zeb）可以抑制多种肿瘤细胞生长,并上调因甲基化失活的相应抑癌基因表达。但Zeb对鼻咽癌细胞的影响在国内、外还未见报道,鉴于鼻咽癌在我国华南地区的高发率,我们对此进行初步探讨,以期为鼻咽癌的综合治疗提供新的思路。     

塞来昔布对人高转移性鼻咽癌CNE-2Z细胞侵袭力的影响

目的 研究塞来昔布(Cox-2选择性抑制剂)对人鼻咽癌CNE-2Z细胞侵袭力的影响及其相关机制.方法 用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度塞来昔布对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的影响.不同浓度塞来昔布作用鼻咽癌CNE-2Z细胞24 h后,Transwell小室检测细胞侵袭力的改变;免疫细胞化学检测肿瘤细胞中E钙黏素蛋白表达变化,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中Cox-2和E钙黏素mRNA表达变化.结果 塞来昔布明显抑制CNE-2Z细胞存活率,呈明显的浓度依赖性,24 h后25、50、100 μmol/L塞来昔布组细胞存活率(-x±s,下同)分别为(94.75±1.34)%、(91.77±2.70)%、(64.54±1.20)%,48 h后细胞存活率分别为(88.41±1.28)%、(78.84±1.56)%、(52.46±2.25)%,50%抑制浓度(IC50)为100 μmol/L,同一时间点细胞存活率差异有统计学意义(F值分别为462.204和1328.306,P值均＜0.01).0、25、50 μmol/L塞来昔布作用鼻咽癌CNE-2Z细胞24 h,侵袭实验显示穿膜细胞数(-x±s,下同)分别为(263.7±13.5)个、(185.3±8.7)个、(144.0±8.2)个,用药组穿膜细胞数明显减少,组间差异有统计学意义(F=102.089,P＜0.01).免疫细胞化学结果显示,0、25、50μmol/L塞来昔布组E钙黏素阳性表达的CNE-2Z细胞数分别为(21.7±2.6)个、(28.7±2.4)个、(40.3±1.3)个,50 μmol/L组阳性细胞数明显增多(F=78.637,P＜0.01).RT-PCR结果显示:25、50 μmol/L组Cox-2 mRNA的表达比对照组明显下降(t值分别为23.950和36.651,P值均＜0.01);25、50 μmol/L塞来昔布组E钙黏素mRNA的表达明显高于对照组(t值分别为35.829和81. 497,P值均＜0.01).结论 塞来昔布抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的侵袭能力,其机制可能与E钙黏素表达升高有关.     

miR-30c对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 观察miR-30c对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法 过表达miR-30c质粒载体转染CNE-1细胞,同时设立空质粒载体转染阴性对照组和无处理的空白对照组。荧光定量PCR检测miR-30c表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果 鼻咽癌组织中miR-30c的表达量为0.23±0.05,显著低于癌旁非肿瘤鼻咽组织的0.37±0.08（P <0.01）。过表达miR-30c组表达量（0.46±0.12）显著高于空白对照组（0.17±0.03）和阴性对照组（0.18±0.04）（P 均<0.01）。在24、48、72小时过表达miR-30c组OD值显著低于空白对照组和阴性对照组（P 均<0.01）。过表达miR-30c组G1期细胞比例（90.36±10.23）% 显著高于空白对照组（74.46±9.14）%和阴性对照组（75.25±9.23）%（P <0.01）。过表达miR-30c组凋亡细胞比例（31.06±5.12）%显著高于空白对照组（3.18±0.72）%和阴性对照组（3.56±0.78）%（P <0.01）。结论 过表达miR-30可以现在抑制鼻咽癌细胞增殖、细胞周期以及诱导细胞凋亡。