褪黑素对缺血再灌注损伤的人肝细胞的自噬影响及功能研究

目的：探讨褪黑素对缺血再灌注的人正常肝细胞LO2自噬的影响以及褪黑素的功能机制。方法：采用MTT法检测细胞的活性;采用Western blot检测LO2细胞中自噬相关蛋白LC-3Ⅱ、Beclin1的表达情况。结果：MTT结果显示：褪黑素对缺血再灌注损伤的肝细胞有一定的保护作用,促进细胞的存活。 Western blot结果显示：缺血再灌注能够上调LO2细胞的自噬活性,增强细胞内的自噬,缺血再灌注6 h后LC-3Ⅱ和Beclin1的表达迅速上升,并且维持在高自噬水平状态;褪黑素能够在缺血再灌注3 h后显著下调LO2细胞的自噬活性,降低细胞内的自噬水平,细胞内LC-3Ⅱ和Beclin1在3 h后逐渐下降表达,从而有效降低过度自噬的发生;褪黑素预处理后的缺血再灌注组的自噬活性在24 h较褪黑素治疗组低,预处理对缺血再灌注细胞后期能够起到更好的保护作用。结论：褪黑素能够抑制因缺血再灌注导致的肝细胞内自噬的发生,并且可以防止细胞发生过度自噬,提示褪黑素可以对各种因缺血再灌注导致损伤的肝细胞起到保护作用,以维持细胞内环境的稳态。     

肠道病毒 71型感染的星形胶质细胞中 EV71 3C活性与 NF-κB信号转导效率的关联

目的 探究肠道病毒71型感染的星形胶质细胞中肠病毒71(EV71)3C蛋白酶活性与核因子κB(NF-κB)信号转导效率的关联.方法 本研究起止时间为2018年3月至2019年3月.通过将EV71病毒感染星形胶质细胞后,经过质粒提取、转化、定点突变、基因转变等步骤,将TANK结合激酶1(TBK1)复合体切割后,分别导入肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)质粒和TANK结合激酶1(TBK1)质粒,观察其对NF-kB表达的影响.同时,EV71感染后,通过RT-PCR和Western blotting法对细胞内相关基因表达,并对EV713C活性进行检测,得到蛋白酶活性与NF-kB表达关系,判断其关联.结果 EV71感染可诱导TBK1和其复合体蛋白TAB 1\2\3的降解,并呈现时间依赖性(24h:TAB1:125.86±39.87;TAB2:352.12±42.36;TAB3:195.20±29.75),但对于肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)和TANK结合激酶1(TBK1)表达无影响.同时,细胞内白细胞介素-6(IL-6)(19.4±0.62)、白细胞介素-8(IL-8)(13.8±2.89)、白细胞介素-12(IL-12)(13.0±0.68)及IL-1β(14.6±0.96)的表达均在12h后显著提高;TAB2可诱导NF-kB激活,而与3C共同表达时可显著抑制NF-kB表达,3C亦可显著抑制由TAK1复合体作用诱导NF-kB的激活.不同浓度EV71感染后,细胞内EV713C活性出现明显差异,而随着蛋白酶活性的增加,细胞内NF-kB mRNA和蛋白的表达均成明显的下调趋势.结论 肠道病毒71型感染的星形胶质细胞中EV713C可通过调节TAK1蛋白表达,达到抑制NF-κB信号转导的作用.     

3-甲基腺嘌呤对急进高原缺氧大鼠肠上皮细胞损伤的自噬影响研究

目的探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对急进高原缺氧大鼠肠上皮细胞自噬水平及损伤程度的影响。方法将50只Wistar大鼠随机分成5组(A~E组),在低氧氧舱环境下建立急进高原缺氧大鼠肠上皮细胞损伤模型,用3-MA进行处理,肉眼观察各组大鼠的行为学改变,HE染色分析大鼠肠组织的损伤程度,免疫组织化学检测自噬相关蛋白LC-3、Beclin-1的表达情况,RT-PCR方法检测LC-3、Beclin-1 mRNA的表达情况。结果 3-MA作用于缺氧大鼠肠上皮细胞后,肠组织的病理性损伤明显加重,自噬相关蛋白LC-3、Beclin-1及其相关mRNA表达也显著降低,细胞自噬水平下降。结论 3-MA可能通过降低细胞自噬水平加重急进高原缺氧肠上皮细胞损伤,细胞自噬可能是急进高原缺氧肠上皮细胞损伤过程中的重要保护因素之一。     

胰高血糖素样肽-1对AGEs诱导H9C2心肌细胞自噬的影响

目的观察胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导H9C2心肌细胞自噬(Autophagy)的影响,初步探讨GLP-1心肌细胞保护作用与自噬活性关系。方法将传代培养H9C2心肌细胞随机分4组:(1)Control组:加入0.9%生理盐水;(2)AGEs组:加入100 mg·L~(-1)AGEs;(3)AGEs+GLP-1组:同时加入100 mg·L~(-1)AGEs和10 nmol·L~(-1)GLP-1;(4)AGEs+GLP-1+Rapamycin组:同时加入100 mg·L~(-1)AGEs、10 nmol·L~(-1)GLP-1及5μmol·L~(-1)Rapamycin(自噬诱导剂)。各组在经上述预处理24 h后,分别用CCK-8法检测细胞存活率Hoechst 33258试剂盒检测细胞的凋亡率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞术检测细胞自噬溶酶体形成,Western blot法检测自噬相关蛋白(LC3Ⅱ,Beclin-1)表达。结果 (1)与Control组相比,AGEs组细胞生存率明显减少,细胞内ROS水平明显增高,细胞自噬溶酶体水平及自噬相关蛋白(LC3Ⅱ、Beclin-1)表达均明显增加;(2)与AGEs组相比,AGEs+GLP-1组细胞生存率明显增高,细胞内ROS水平、细胞自噬溶酶体水平及自噬相关蛋白(LC3Ⅱ、Beclin-1)表达均明显下降;(3)与AGEs组相比,AGEs+GLP-1+rapamycin组中细胞内ROS水平降低,而细胞生存率、细胞自噬溶酶体水平及自噬相关蛋白(LC3Ⅱ、Beclin-1)表达未见差异。结论 (1)AGEs可导致H9C2心肌细胞内ROS升高,诱导细胞损伤并激活细胞自噬;(2)GLP-1对AGEs诱导的H9C2心肌细胞损伤具有保护作用,其保护机制可能与抑制细胞自噬活性有关。     

BH3模拟物ABT737诱导人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡与自噬

目的观察ABT737作用于人卵巢癌顺铂耐药SKOV3/DDP细胞后,细胞凋亡和自噬的发生,探讨抑制自噬后对凋亡的影响。方法体外培养SKOV3/DDP细胞,按ABT737药物终浓度0、2.5、5.0和10.0μmol/L分为4组,分别作用12和24 h。流式细胞术检测各组细胞凋亡率,分别采用免疫荧光和免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞自噬相关蛋白LC3和Beclin-1表达水平。将细胞分为对照组、ABT737组、3-Ma组和联合用药组,分别以细胞培养基、ABT737(5.0μmol/L)、3-Ma(1.0 mmol/L)和ABT737联合3-Ma作用于SKOV3/DDP细胞,Western blot法检测12和24 h后凋亡相关蛋白active Caspase-3和cyto C的表达水平。结果与对照组比较,12和24 h各剂量ABT737组细胞凋亡率均明显增高,差异有统计学意义(P0.01)。间接免疫荧光法检测LC3和Beclin-1蛋白表达,结果显示随着ABT737药物终浓度增加和作用时间的延长,两蛋白阳性表达亮度均越来越强,提示蛋白表达增强。Western blot检测LC3和Beclin-1蛋白表达水平,结果显示随着ABT737药物终浓度增加和作用时间的延长,细胞中LC3(F=10.878,F=13.256,P0.05)和Beclin-1(F=6.589,F=7.365,P0.05)蛋白表达水平均逐渐升高。3-Ma抑制自噬后,与ABT737组相比,联合用药组active Caspase-3 12和24 h表达水平明显增强,12和24 h cyto C表达水平也明显增强,差异有统计学意义(P0.05)。结论 ABT737诱导人卵巢癌顺铂耐药SKOV3/DDP细胞凋亡的同时伴随着自噬的发生,抑制自噬能够促进凋亡。     

重组人p53腺病毒注射液对肾母细胞瘤细胞增殖、凋亡及自噬的影响

目的:研究重组人p53腺病毒注射液对肾母细胞瘤细胞增殖、凋亡及自噬的影响。方法:将肾母细胞瘤细胞分别与高、中、低浓度(1×10~9、1×10~8、1×10~7VP/m L)的重组人p53腺病毒注射液共同孵育20 h,以不加注射液的细胞为空白对照。检测细胞增殖、周期、凋亡及相关基因p21、Bax蛋白表达,检测细胞中自噬相关基因LC-3、Atg7、Atg12表达和自噬体数量。结果:高、中、低浓度重组人p53腺病毒注射液对肾母细胞瘤细胞的增殖抑制率分别为(42.86±3.18)%、(33.64±7.25)%、(16.26±9.07)%,细胞凋亡率分别为(53.85±9.36)%、(37.35±9.64)%、(23.64±10.65)%。与空白对照比较,高、中、低浓度药物作用下G_0/G_1期细胞均增加,其中高、中浓度药物效果较明显(P<0.05或P<0.01);高浓度下细胞中p21、Bax蛋白和LC-3、Atg7、Atg12基因表达增强,自噬体数量增加(P<0.01);中浓度下细胞中Bax蛋白表达增强(P<0.05),其余指标无明显变化(P>0.05)。结论:重组人p53腺病毒注射液可抑制肾母细胞瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡和自噬。     

RNA干扰技术抗肠道病毒71型复制

目的肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV 71)是手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)主要的病原体之一。研究RNA干扰技术抑制肠道病毒71型复制。方法以RNA干扰技术(RNAi)为干预手段,抑制病毒EV 71在人横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RD)细胞中的复制。通过Western blot、Real-time PCR和病毒滴度3种方法验证,其抑制效果体现在感染细胞内部病毒RNA,病毒蛋白质的表达水平和培养基上清中子代病毒颗粒的数量上。结果靶向病毒基因组5'UTR和VP2的siRNAs具有明显的病毒抑制效应。结论此研究证实RNAi方法具有特异性抑制病毒复制的潜能和可行性。     

杨梅素体外抗EV71病毒作用的研究

目的初步探究杨梅素抗肠道病毒71型(EV71)的活性及其机制。方法采用EV71感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)模型,采用致细胞病变(CPE)法和空斑实验观察杨梅素的抗病毒效果。以不同浓度的杨梅素处理细胞,结合结晶紫染色的方法检测杨梅素的细胞毒性。以免疫印迹法检测杨梅素对VP1蛋白表达的影响。应用RT-PCR的方法评价杨梅素对VP1基因表达的影响。结果杨梅素在2.5~20μmol·L^-1的浓度下预处理病毒能够显著抑制EV71感染诱导的细胞死亡,且这种抑制作用具有剂量依赖性,IC50为5.6μmol·L^-1。与病毒组相比,杨梅素在2.5~20μmol·L^-1的浓度下还能够显著降低病毒滴度。免疫印迹和RT-PCR的结果显示,杨梅素还能够明显降低病毒衣壳蛋白VP1的基因和蛋白表达。结论杨梅素具有显著的体外抗EV71病毒活性。     

组织型纤溶酶原激活物重组腺病毒载体的构建及其转染ECV304细胞后对血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的 评估外源性组织型纤溶酶原激活物(t-PA)对ECV304细胞中血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响.方法 应用细菌内同源重组技术快速构建Adt-PA腺病毒重组质粒,转染不同病毒滴度Adt-PA至ECV304细胞,转染比率(MOI)分别为1∶10、1∶50、1∶100,选取合适MOI值;病毒转染后检测ECV304细胞内t-PA蛋白的表达.然后将培养的ECV304细胞分为二组,在培养液中加入Adt-PA混合培养24 h和48 h分别作为实验组1和实验组2,加入空病毒Ad混合培养48 h作为对照组,比较各组细胞中VEGF mRNA的转录和蛋白表达水平.结果 成功构建了重组腺病毒Adt-PA.当MOI为1∶50时,细胞转染效率为(69.6±21.2)%,且对ECV304细胞增殖具有一定的促进作用;Adt-PA转染ECV304细胞后在72 h内随着时间的延长其蛋白表达量逐渐升高(P<0.01);细胞内VEGFmRNA的转录水平和蛋白表达量在实验组1和2中较对照组均有明显升高(P<0.01).结论 构建的t-PA腺病毒表达载体可有效感染ECV304细胞并可显著增加其VEGF的表达水平.     

雷公藤甲素诱导自噬促进人肾小管上皮HK-2细胞凋亡

目的 研究自噬在雷公藤甲素(triptolide, TP)诱导人肾近端小管上皮HK-2细胞凋亡中的作用。方法 以HK-2细胞为研究对象,CCK-8法检测细胞存活率;倒置荧光显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位MMP变化;激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内LC3荧光强度变化;Western blot检测细胞凋亡及自噬相关蛋白cleaved caspase 9、caspase 9、Bax、Bcl-2、LC3、p62和Beclin 1的表达;采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)和自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin, Rap)研究自噬对TP诱导HK-2细胞凋亡的影响。结果 TP降低HK-2细胞存活率,诱导细胞凋亡和自噬,降低MMP水平,增加胞内LC3Ⅱ荧光强度,上调Beclin 1表达,下调p62表达,升高cleaved caspase 9/caspase 9、Bax/Bcl-2和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。此外,与TP组相比,3-MA+TP组细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和cleaved caspase 9/caspase 9比值降低,p...     

Ozone exposure in the culture medium inhibits enterovirus 71 virus replication and modulates cytokine production in rhabdomyosarcoma cells

In the present study, the effects of ozone exposure on enterovirus 71 (EV71) replication and related cytokine production were investigated. Rhabdomyosarcoma cells (RD) were exposed to 0.5, 1, 1.5 and 2 ppm ozone or filtered air under different exposure regimens before or after infection for 1 or 2 h. The results revealed that at a proper concentration of ozone, e.g., 1.5 or 2 ppm, ozone exposure restricted virus production, prolonged survival time of cells and modulated cytokine production related to EV71 infection. Upon exposure of non-infected cells to ozone at 1.5 or 2 ppm for 1h, the production of IL-1beta, IL-6 and TNF-alpha was primed and boosted by the subsequent EV71 infection, generating an inhibitory effect on EV71 replication during the post-infection period of 48 h. While infected cells were exposed to ozone for 2 h at 1.5 or 2 ppm, ozone did not affect cytokine production by RD cells in response to EV71 infection. The data showed that ozone effect on induction of cytokine was only found in uninfected cells. The ozone-induced cytokines produced prior to the onset of EV71 infection generated antiviral effects, which proved beneficial in suppressing the subsequent EV71 infection.     

Ozone exposure in the culture medium inhibits enterovirus 71 virus replication and modulates cytokine production in rhabdomyosarcoma cells

In the present study, the effects of ozone exposure on enterovirus 71 (EV71) replication and related cytokine production were investigated. Rhabdomyosarcoma cells (RD) were exposed to 0.5, 1, 1.5 and 2 ppm ozone or filtered air under different exposure regimens before or after infection for 1 or 2 h. The results revealed that at a proper concentration of ozone, e.g., 1.5 or 2 ppm, ozone exposure restricted virus production, prolonged survival time of cells and modulated cytokine production related to EV71 infection. Upon exposure of non-infected cells to ozone at 1.5 or 2 ppm for 1 h, the production of IL-1β, IL-6 and TNF-α was primed and boosted by the subsequent EV71 infection, generating an inhibitory effect on EV71 replication during the post-infection period of 48 h. While infected cells were exposed to ozone for 2 h at 1.5 or 2 ppm, ozone did not affect cytokine production by RD cells in response to EV71 infection. The data showed that ozone effect on induction of cytokine was only found in uninfected cells. The ozone-induced cytokines produced prior to the onset of EV71 infection generated antiviral effects, which proved beneficial in suppressing the subsequent EV71 infection.     

BNIP3 deletion ameliorated enterovirus 71 infection-induced hand,foot and mouth disease via inhibiting apoptosis,autophagy, and inflammation in mice

Bcl2/adenovirus E1B protein-interacting protein 3 (BNIP3) plays a key role in cellular response to stress by regulating apoptosis and selective autophagy. The present study aimed to determine the effects of BNIP3 on enterovirus (EV) 71 infection-induced hand, foot and mouth disease (HFMD), and the apoptosis, autophagy and inflammatory in mice and SH-SY5Y human neuroblastoma cell line. Neonatal BALB/c mice were injected with EV 71 strain to induce the HFMD. Western blotting and ELISA were used to measure the protein expression and cytokine levels. The BNIP3 mRNA and protein levels in the brain were increased in EV 71-infected mice. By contrast, the BNIP3-knockout (KO) mice with EV 71 infection had higher health score and survival rate. BNIP3 deletion reversed the increase of cleaved-caspase 3, cleaved-caspase 8, Bax, LC3 II and LC3 II/LC3 I levels, and the decrease of Bcl2 and Bcl2/Bax and LC3 I levels in the brain of mice with EV 71 infection. The EV 71 infection-induced increase of tumor necrosis factor (TNF)-α, monocyte chemotactic protein (MCP)-1, interleukin (IL)-1β, IL-6, interferon (IFN)-α and IFN-γ levels were inhibited in BNIP3-KO mice. BNIP3 knockdown with small interfering RNA (siRNA) inhibited the EV 71 infection-induced the increases of apoptosis, autophagy and inflammatory factors in SH-SY5Y cells. BNIP3 overexpression further facilitated the EV 71 infection-induced increase of these inflammatory factors in SH-SY5Y cells. These results demonstrated that BNIP3 deletion ameliorated EV 71 infection-induced HFMD via inhibiting apoptosis, autophagy and inflammation in mice. BNIP3 may be a therapeutic target for HFMD.     

5种不同细胞对柯萨奇病毒A组16型和肠道病毒71型的敏感性研究

 目的   评价肠道病毒研究中常用的5种细胞对柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CA16）和肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）的敏感性,为分离和培养CA16和EV71提供实验室依据。方法  用分离的各15株CA16和EV71分别感染RD、Vero、KMB17、Hep2和L20B细胞,每天观察细胞病变情况,按Karber法计算病毒感染性滴度。采用不同的统计学方法（包括方差分析和卡方检验）比较5种细胞对CA16和EV71的敏感性差异。 结果   5种细胞的CA16和EV71病毒感染性滴度间的差异具有统计学意义（CA16：F＝18.481,P＝0.000;EV71：χ²＝63.106,P＝0.000）。在5种细胞中,RD细胞对2种病毒的敏感性最高,CA16和EV71的病毒感染性滴度分别可达7.8和8.2 lgCCID₅₀/ml,且均于接种细胞后48 h达增殖高峰,第4天进入增殖平台期;2种病毒在Hep2和L20B细胞中的病毒感染性滴度均较低,CA16分别为5.2和4.2 lgCCID₅₀/ml,EV71分别为4.9和4.0 lgCCID₅₀/ml,且2种病毒在接种后第6~7天才达增殖高峰,但仅L20B细胞中的2种病毒于接种后第7天进入增殖平台期;CA16在Vero和KMB17细胞中的病毒感染性滴度分别为6.9和7.3 lgCCID₅₀/ml,EV71分别为7.1和6.8 lgCCID50/ml,2种病毒均在接种Vero和KMB17细胞后第3天达到增殖高峰,第5天进入增殖平台期。 结论   RD细胞对CA16和EV71的敏感性最好,其次是Vero和KMB17细胞,而Hep2和L20B细胞并非是分离和培养这2种病毒的理想细胞。     

复方一枝蒿颗粒对防治手足口病的体内外药效学研究

目的 通过观察复方一枝蒿颗粒在体内外对肠道病毒的抑制作用,评价复方一枝蒿颗粒防治手足口病的药效作用。方法 采用复方一枝蒿颗粒的3岁儿童临床2倍、等倍和1/2倍剂量分别对肠道病毒EV71 H株感染的Babl/c乳鼠手足口病动物模型进行预防性给药和治疗性给药,通过观察乳鼠感染的严重程度、死亡数,来计算动物死亡率、死亡保护率和生命延长率;采用细胞病变的CPE法观察复方一枝蒿颗粒对肠道病毒EV71 H株,BrCr株,柯萨奇病毒B3、B4、B5株的抑制作用;采用real time PCR法观察复方一枝蒿颗粒对肠道病毒EV71 BrCr株在RD细胞中增殖的抑制作用。结果 复方一枝蒿颗粒对肠道病毒EV71 H株感染的乳鼠模型具有明显的治疗作用,其可降低感染程度和死亡率,具有明显的死亡保护和延长生命的作用;复方一枝蒿颗粒在无明显毒性的浓度下,对肠道病毒EV71 H株、BrCr株具有明显的抑制作用,其能明显抑制EV71 BrCr株在细胞内的增殖。结论 复方一枝蒿颗粒在体内外对手足口病均具有较好的治疗作用,其作用机制可能与抑制肠道病毒在细胞内增殖有关。     

Lactoferrin inhibits enterovirus 71 infection by binding to VP1 protein and host cells

The antiviral activities of bovine lactoferrin (LF) against enterovirus 71 (EV71) were studied both in vitro and in vivo. LF protected both human rhabdomyosarcoma and neuroblastoma SK-N-SH cell lines from EV71 infection when it was added at the same time, before, or within 30min after EV71 infection. Using enzyme-linked immunosorbent assay-based binding assay and indirect fluorescent stain, we found that LF could bind to the target cells. Furthermore, it was found that LF could bind to the VP1 protein of EV71, which was blocked in the presence of anti-VP1 antibody. In addition, LF could induce IFN-alpha expression of SK-N-SH cells and inhibit EV71-induced IL-6 production. Finally, LF protected mice against lethal EV71 challenge. Taken together, these results suggest that LF can inhibit EV71 infection by interacting with both EV71 and host cells.     

鞘氨醇激酶1调控沉默信息调节因子1表达的研究

目的 探讨鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,SPK1)与沉默信息调节因子1(silent mating type informa-tion regulation 2 homolog 1,SIRT1)表达的关系.方法 用病毒感染复数(MOI)=20 pLKO.1-shSPK1-GFP干涉慢病毒(shSPK1组)及pPIG-U6-Scramble-GFP对照慢病毒(GFP-SC组)感染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothe-lial cells,HUVECs),48 h后提取细胞RNA及蛋白,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)测定SIRT1基因及蛋白表达水平.用MOI=20 pHIV7-U6-shSIRT1-RFP干涉慢病毒(shSIRT1组)及pHIV7-U6-Scramble-RFP对照慢病毒(RFP-SC组)感染HUVECs,48 h后提取细胞RNA并用RT-PCR检测细胞SPK1基因表达水平.用100 nmol 1-磷酸鞘氨醇(S1P)处理HUVECs,分别在0.5、2、24及36 h提取细胞RNA,24、48及72 h提取细胞蛋白,检测SIRT1基因及蛋白表达水平.用100 nmol S1P处理干涉过SIRT1的HUVECs检测细胞的增殖、迁移及体外管状结构形成能力.结果 shSPK1组SIRT1基因和蛋白表达水平低于GFP-SC组(P＜0.01).shSIRT1组SPK1基因表达水平与RFP-SC组比较差异无统计学意义(P＞0.05).100 nmol S1P处理HUVECs不同时间SIRT1基因及蛋白表达水平高于未处理组,HUVECs增殖能力高于shSIRT1组(P ＜0.05,P＜0.01).shSIRT1组HUVECs迁移率低于RFP-SC组,S1P处理组高于RFP-SC、shSIRT1组(P＜0.05).shSIRT1组HUVECs体外管状结构形成能力低于RFP-SC组,S1P处理组高于shSIRT1组(P＜0.05).结论 SPK1可以正向调控SIRT1表达并对HUVECs功能产生影响.     

新城疫病毒通过影响细胞微丝骨架对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用#br#

摘要：目的　探讨新城疫病毒（NDV）在感染宫颈癌HeLa细胞过程中，是否通过影响细胞微丝骨架对细胞增殖、迁移和侵袭具有抑制作用。方法　将宫颈癌HeLa细胞分为对照组、新城疫病毒感染组（NDV F3组）和细胞松弛素D组（Cytochalasin D组）。通过光学倒置显微镜观察NDV F3感染后的细胞形态变化及微丝骨架结构变化；综合利用CCK-8、TUNEL凋亡检测及Hoechst33258染色检测细胞的增殖和凋亡情况；划痕实验和Transwell实验分别观察NDV F3对细胞的迁移和侵袭能力的影响；Western blot检测NDV F3作用细胞后微丝骨架相关蛋白F-肌动蛋白（F-actin）、RhoA和Rho激酶（ROCK）2的表达情况。结果　NDV F3作用细胞后，细胞失去正常形态，部分细胞有融合现象，随着感染时间的增加，细胞变圆、脱落、细胞破裂，贴壁细胞剩余较少；CCK-8结果显示细胞增殖率下降；TUNEL检测和Hoechst33258染色显示细胞在NDV F3的作用下发生凋亡，并且在感染复数（MOI）为0.1时凋亡更为显著；划痕实验和Transwell实验显示NDV F3对细胞的迁移和侵袭能力均有阻碍作用，划痕实验在24 h与48 h时，NDV F3组、Cytochalasin D组与对照组相比迁移率均下降，在48 h时最为显著（P＜0.01），Transwell实验显示细胞侵袭数NDV F3组和Cytochalasin D组与对照组相比数量明显减少（P＜0.01）；Western blot结果显示F-actin、RhoA和ROCK2在作用36 h和48 h时表达量较对照组降低（P＜0.01）。结论　NDV F3对HeLa细胞的增殖、侵袭、迁移均有抑制作用，其机制可能与微丝骨架相关的RhoA/ROCK信号通路有关。     

多西紫杉醇诱导宫颈癌HeLa细胞自噬性凋亡的研究

目的：观察多西紫杉醇对体外培养的宫颈癌HeLa细胞自噬性凋亡的影响,并初步探讨其可能的机制。方法：不同浓度（1、5、10、20、40μg/mL）的多西紫杉醇处理体外培养的宫颈癌HeLa细胞6、12、24、48、72h后,用MTT法测定其生长抑制率,倒置显微镜及透视电镜观察细胞形态学变化,通过流式细胞术分别测定细胞凋亡率、细胞周期分布,RT-PCR法检测自噬基因Beclin1表达的变化情况。结果：多西紫杉醇呈剂量和时间依赖性抑制宫颈癌HeLa细胞增殖（P〈0.05）;多西紫杉醇10μg/mL处理的HeLa细胞,早期（24h内）可出现明显的细胞自噬性变化,细胞凋亡数明显增加,G2/M期阻滞,且自噬基因Beclin1的表达明显增高。结论：多西紫杉醇具有抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、诱导细胞自噬性凋亡等作用,其机制可能与上调自噬基因Beclin1的表达水平有关。