选择性COX-2抑制剂尼美舒利诱导胆管癌细胞凋亡的研究

[目的]探讨选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂尼美舒利诱导人胆管癌QBC939细胞凋亡的机制。[方法]通过体外细胞培养，用流式细胞术观察尼美舒利作用后QBC939细胞周期及凋亡率变化；荧光显微镜、透射电镜观察细胞的凋亡形态变化；并用免疫组化法检测细胞bcl-2、bax蛋白的表达。[结果]通过荧光显微镜和电镜技术观察到凋亡的QBC939细胞，流式细胞仪也检测到尼美舒利诱导QBC939细胞凋亡，并随着尼美舒利浓度的增加，细胞凋亡率显著增加，蛋白水平检测表明尼美舒利促进QBC939细胞bax表达升高，bcl-2表达下调。[结论]尼美舒利可能通过调节bcl-2和bax蛋白表达诱导QBC939细胞凋亡。     

大荨麻提取物对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能的机制

目的：探讨大荨麻提取物对乳腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法：用不同质量浓度的大荨麻提取物（0、1、2、4、8、16、32、64 mg/ml）处理乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231 24 h,MTT法检测细胞增殖活力,选择中位抑制浓度附近的浓度（5和10 mg/ml）作为给药浓度分别处理MCF-7和MDA-MB-231细胞24 h后,平板克隆形成实验和流式细胞术分别检测大荨麻提取物对乳腺癌细胞增殖、周期和凋亡的影响,WB法检测对细胞周期和凋亡相关蛋白以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达的影响。在MCF-7细胞用5 mg/ml大荨麻提取物处理的同时转染过表达AKT质粒（大荨麻+AKT组）,转染空载质粒为对照组（大荨麻+vec组）,WB法检测过表达效率,比较过表达AKT对细胞增殖、周期和凋亡的影响。结果：各大荨麻提取物处理组 MCF-7 和 MDA-MB-231细胞增殖活力均显著低于对照组（P<0.05或P<0.01）;与对照组比较,5或10 mg/ml大荨麻处理组乳腺癌细胞的克隆形成数显著减少,G0/G1期细胞占比和凋亡率显著增加（P<0.05或P<0.01）,P21、BAX蛋白表达显著升高而Cyclin D1、CDK4、Bcl2蛋白以及p-PI3K、p-AKT蛋白表达显著降低（P<0.05或P<0.01）。大荨麻+AKT 组 p-AKT 和 AKT 蛋白表达显著高于大荨麻+vec 组,克隆数、S 期和 G2/M 期细胞占比均高于大荨麻+vec 组（P<0.05 或 P<0.01）,G0/G1期细胞占比和凋亡率低于大荨麻+vec组（P<0.05或P<0.01）。结论：大荨麻提取物可以抑制乳腺癌细胞增殖、促进凋亡且阻滞细胞在G0/G1期,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路相关。     

尼美舒利对胆管癌细胞增殖及PCNA、Survivin蛋白表达的影响

目的:观察选择性环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂尼美舒利对人胆管癌细胞系QBC939生长的抑制作用及Survivin基因表达的变化.方法:应用MTT比色法、细胞群体倍增时间观察尼美舒利对人胆管癌细胞QBC939增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组织化学法观察尼美舒利对QBC939细胞PCNA,Survivin蛋白表达的影响.结果:尼美舒利呈时间、剂量依赖性抑制胆管癌增殖,高浓度(200μmol/L)尼美舒利不仅抑制胆管癌细胞增殖,而且诱导其凋亡.流式细胞仪研究显示,随药物浓度增加,细胞凋亡率显著增加.免疫组化结果显示尼美舒利处理后的QBC939细胞PCNA,Survivin蛋白的表达明显减弱.结论:尼美舒利能抑制QBC939细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与PCNA,Survivin蛋白的表达下调有关.     

紫杉醇诱导胆管癌QBC939细胞凋亡的初步研究

目的:探讨紫杉醇对胆管癌QBC939细胞作用的敏感性并研究紫杉醇对胆管癌细胞周期及细胞凋亡率的影响,并初步探讨紫杉醇诱导胆管癌细胞发生凋亡的机制,为胆管癌的临床治疗寻找新的治疗药物.方法:体外培养胆管癌细胞QBC939,采用不同浓度紫杉醇予以干预,通过细胞形态观察和MTT实验,初步研究紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939的敏感性;应用流式细胞仪检测紫杉醇诱导胆管癌细胞凋亡,同时对细胞周期的变化和动力学予以检测.结果:各浓度紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939生长均有明显抑制作用;胆管癌细胞被紫杉醇明显阻滞在S期及G2/M期,且抑制作用呈剂量和时间依赖效应.结论:紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖效应;紫杉醇能诱导人胆管癌QBC939细胞发生凋亡.     

索拉非尼及PI3K、mTOR抑制剂对肝胆肿瘤细胞增殖及Ghrelin基因表达的影响

目的 探讨索拉非尼及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制剂对肝胆肿瘤细胞增殖及Ghrelin（GHRL）基因表达的影响。方法 收集体外常规培养的肝癌SMMC7721细胞和胆管癌QBC939细胞,经不同浓度（0、50、100、200 μmol/L）索拉非尼、LY294002（PI3K抑制剂）及Rapamycin（mTOR抑制剂）处理48 h后,采用MTS细胞活性检测试剂盒检测SMMC7721、QBC939细胞的增殖率,实时定量PCR（qPCR）检测SMMC7721、QBC939细胞中GHRL 基因的mRNA水平。结果与对照组相比,LY294002、索拉非尼和Rapamycin处理后的SMMC7721、QBC939细胞的增殖率均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,且随着药物浓度的增加,两种细胞的增殖率均降低（P＜0.05）。qPCR结果显示,经LY294002和索拉非尼处理48 h后的SMMC7721细胞中GHRL mRNA水平与对照组的差异无统计学意义（P＞0.05）;与对照组相比,随着Rapamycin作用浓度的升高,实验组SMMC7721细胞的GHRL mRNA水平升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;经LY294002、索拉非尼和Rapamycin处理的QBC939细胞中GHRL mRNA水平高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 三种药物均可以抑制肝癌和胆管癌细胞的增殖并促进QBC939细胞的GHRL表达,但仅Rapamycin能上调SMMC7721肝癌细胞的GHRL基因表达。GHRL基因表达与肝癌和胆管癌的发生可能有密切关系。     

MDM2抑制剂RG-7388诱导弥漫性大B淋巴瘤细胞凋亡和周期阻滞

目的 探讨MDM2抑制剂RG-7388对弥漫性大B淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法 用2、4和8μmol/L RG7388处理DLBCL细胞株SUDHL2和HBL1,CCK8法和EdU法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染和Caspase 3/7-Glo^TM酶活法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,蛋白质印迹法检测细胞周期和凋亡相关蛋白表达变化。结果 RG7388抑制SUDHL2和HBL1细胞的IC₅₀分别为3.36和3.76μmol/L,且RG7388的抑制作用呈剂量依赖性。不同浓度RG7388处理SUDHL2和HBL1细胞,G₁期细胞和凋亡细胞比例均显著高于对照组(均P<0.05)。随着RG7388浓度增高,Caspase 3/7酶活性逐渐增加,p53、p27、p21、PARP表达增加,Mcl-1和Bcl-x_L表达下调(均P<0.05)。结论 MDM2抑制剂RG7388抑制DLBCL细胞增殖,通过p53通路引起G₁期细胞...     

雷帕霉素对胰腺癌细胞株SW1990生长和凋亡的影响

目的:探讨雷帕霉素(rapamycin,RAPA)在体外对胰腺癌细胞株SW1990生长和凋亡的影响及其可能的机制。方法:用5、10、20、30、40和50nmol/L RAPA作用SW1990细胞24、48和72h,MTT法检测细胞的生长抑制率,FCM法检测细胞凋亡和细胞周期,Western印迹法检测SW1990细胞中bcl-2、bcl-xL、bax和survivin蛋白的表达。结果:MTT和FCM检测结果显示,随着RAPA浓度的增加和作用时间的延长,SW1990细胞的生长抑制率和细胞凋亡率逐渐增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);各浓度RAPA作用细胞24h后,随着浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,S期和G2/M期细胞逐渐减少,细胞阻滞于G1期,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);Western印迹法检测结果显示,50nmol/L RAPA作用SW1990细胞后,bax表达明显增加,bcl-2、bcl-xL、survivin、bcl-xL/bax和bcl-2/bax表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RAPA可显著抑制SW1990细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与凋亡调控基因bcl-2、bcl-xL、bax和survivin表达水平变化有关。     

吉非替尼与紫杉醇联合对卵巢癌细胞凋亡影响的观察

目的:探讨吉非替尼联合紫杉醇诱导人卵巢癌细胞凋亡的影响。方法:吉非替尼单独或联合紫杉醇作用卵巢癌HO8910细胞,以蛋白质印迹法检测EGFR下游信号磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)和细胞核增殖抗原(PCNA),以MTT法检测细胞增殖率,FCM法检测细胞周期分布和凋亡。结果:吉非替尼单用在0.25～4.00μmol/L浓度范围内呈浓度依赖性抑制卵巢癌HO8910细胞增殖,1.0μmol/L浓度单独作用24h则细胞周期主要分布于G1期,p-Akt、p-ERK和PCNA蛋白水平下降,72h时细胞凋亡增加,与对照组比较,差异均有统计学意义,P<0.05。吉非替尼与紫杉醇合用不仅能更显著的抑制细胞增殖,而且凋亡细胞显著增加(P<0.05),与对应浓度单用紫杉醇比较,差异均有统计学意义,P<0.05。结论:吉非替尼与紫杉醇合用能显著抑制卵巢癌HO8910细胞增殖、诱导凋亡,两种药物合用具有协同作用。     

靶向survivin的shRNA对人胆管癌QBC939细胞体外增殖及凋亡的影响

目的:探讨靶向survivin的shRNA对人胆管癌QBC939细胞体外增殖及凋亡的影响。方法:合成具有互补序列的能够编码短发卡RNA(shRNA)的双链寡核苷酸并构建pSilence2.1真核表达质粒,经稳定转染QBC939细胞后对转基因后胆管癌细胞的生物学行为进行观察。结果:neo基因稳定表达于转染阳性质粒及阴性对照质粒的QBC939细胞中。RT-PCR及Western blot检测证实shRNA在mRNA及蛋白质水平抑制survivin表达,抑制率分别为66.2%和61.8%。细胞计数及平板克隆形成实验显示转染细胞生长速度及细胞克隆形成率明显减低(P<0.01)。流式细胞术测定细胞周期显示转染细胞G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少。DNA ladder、透射电镜观察及流式细胞术定量研究显示转染细胞凋亡比明显增多。结论:靶向sur-vivin的shRNA能有效抑制目的基因的表达,通过增加细胞凋亡在体外抑制人胆管癌细胞的生长。     

HBx基因转染胆管癌QBC939细胞对其凋亡的影响及作用机制的研究

目的:探讨乙型肝炎病毒x基因(hepatitis B virus x, HBx)转染胆管癌QBC939细胞引起凋亡及其发生的可能机制.方法:将构建有HBx基因的真核表达载体pcDNA3-x采用脂质体转染法瞬时转染QBC939细胞, RT-PCR及Western 印迹法鉴定HBx在QBC939细胞中的表达;DAPI染色后荧光显微镜镜下观察细胞核的改变,结合FCM法检测细胞的凋亡;以未转染和转染空质粒pcDNA3的QBC939细胞为对照,Western印迹法检测Bax、Bak、Bid、Bcl-XL、CytC、p65的表达;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm)的变化;RT-PCR法检测Fas和c-myc在mRNA水平的表达;双荧光素酶报告系统分析细胞核因子-κB(nuclear factor kappa B, NF-κB)的转录活性.结果:RT-PCR及Western印迹法检测均证实转染后的QBC939细胞中有HBx的表达;DAPI显示转染细胞核呈现固缩且边缘化等细胞凋亡特征性的改变;FCM检测结果显示,转染HBx组与对照组相比,凋亡细胞数量明显增多;Western 印迹法检测结果显示,Bcl-2家族中Bax表达升高,Bcl-XL下降,p65在核内的表达水平升高,细胞质中细胞色素C( cytochrome C)表达升高;RT-PCR结果显示,Fas和c-myc的mRNA水平均高于对照组;JC-1染色法结果显示ΔΨm下降;双荧光素酶报告系统分析提示NF-κB的转录活性升高.结论:成功将HBx基因转入QBC939细胞中,HBx可能是通过调节Fas/FasL死亡受体途径,Bcl-2家族引起的线粒体路径及NF-κB的激活、c-myc等凋亡相关基因的表达而引起QBC939细胞的凋亡.     

去甲斑蝥素对人类胆管癌细胞系QBC939增殖和凋亡作用的实验研究

 【摘要】　目的　研究去甲斑蝥素（NCTD）对人类胆管癌细胞系QBC939的生长抑制作用,初步探讨其作用机制。方法　将NCTD作用于经体外培养的QBC939细胞系,分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）,流式细胞术及免疫组织化学SP法进行检测。结果　0.125、0.75、2.5、10、120 μg／ml NCTD作用48 h,对QBC939细胞系均有抑制作用（P＜0.05）,且具有浓度依赖性,绘制浓度效应曲线,得出半数抑制浓度（IC50）为（3.66±1.14）μg／ml;在分别作用12、24、36、48、72 h后,生存率有随时间增加而下降的趋势（P＜0.05）。流式细胞术结果表明,随着NCTD浓度的增加,凋亡率逐渐增高,各浓度组分别为（8.6±0.4）%、（17.6±0.3）%、（22.9±0.4）%、（25.5±0.9）%、（31.1±1.5）%（P＜0.001）;质量浓度为2.5 μg／ml的NCTD作用QBC939细胞48 h后,出现G2／M期阻滞现象,NCTD与对照组分别为（14.1±1.0）%和（5.7±0.3）%（P＜0.05）。不同浓度的NCTD作用于QBC939细胞后,与对照组相比Caspase-3蛋白表达均增加。结论　NCTD具有抑制人类胆管癌细胞系QBC939增殖的作用,这种作用可能与诱导细胞凋亡,干扰细胞生长周期有关。     

阻断NF-κB信号通路对人肝门部胆管癌细胞QBC939增殖的影响

  目的  研究阻断NF-κB信号通路对人肝门部胆管癌细胞QBC939生长增殖的影响。  方法  常规培养QBC939细胞, 采用PDTC(100μmol/L)阻断NF-κB信号通路, Western blot检测核内P65蛋白水平的表达, CCK-8检测细胞生长增殖抑制率, 流式细胞仪观察细胞周期与凋亡的变化情况。  结果  经PDTC阻断NF-κB信号通路后, 与对照组相比, 细胞核内P65蛋白水平明显下降(P < 0.05)。CCK-8检测显示细胞增殖活性明显受到抑制, 并随时间的延长而愈渐明显, 12、24、36h后细胞增殖抑制率分别为(22.53±0.03)%、(46.54±0.03)%、(58.02±0.03)%, 与对照组相比差异有统计学意义(P < 0.05)。流式细胞仪检测发现实验组G₀/G₁期细胞比例高于对照组, 分别为(68.53±1.72)%、(38.3±1.35)%, 差异有统计学意义(P < 0.05);细胞凋亡率在实验组为(27.68±2.77)%, 对照组仅为(9.27±2.36)%, 差异有统计学意义(P < 0.05)。  结论  阻断NF-κB信号通路诱导人肝门部胆管癌细胞G₀/G₁期阻滞及细胞凋亡, 从而抑制细胞生长与增殖, 提示NF-κB信号通路组成性激活参与人肝门部胆管癌的发生发展, 以NF-κB信号通路作为治疗的靶点可能给人肝门部胆管癌带来新的治疗选择。      

lncRNA BCAR4在肝癌细胞系中的表达及对增殖、凋亡和迁移的影响

目的:观察肝癌细胞系中长链非编码RNA BCAR4（lncRNA BCAR4）的表达,及对肝癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响,并探讨其机制。方法:采用荧光定量PCR技术（qRT-PCR）检测肝癌细胞系Huh7、HepG2、SMMC-7721和正常肝细胞系L02中lncRNA BCAR4的表达。将Huh7细胞系分为BCAR4-siRNA组、NC-siRNA组和Blank组,BCAR4-siRNA组和NC-siRNA组经LipofectamineTM 2000分别转染BCAR4-siRNA序列和NC-siRNA序列,Blank组以PBST为阴性对照。CCK-8法和流式细胞数测定细胞增殖和凋亡,细胞划痕实验测定迁移能力。Western blot测定细胞周期相关蛋白（Cyclin D1）和凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:肝癌细胞系Huh7、HepG2、SMMC-7721中lncRNA BCAR4的表达显著高于正常肝细胞系L02(P<0.05)。转染BCAR4-siRNA后,Huh7的lncRNA BCAR4表达下调（P<0.01）。CCK-8示:转染72 h及96 h后,BCAR4-siRNA组 vs NC-siRNA组的OD450 nm值分别为0.71±0.07 vs 0.92±0.10（P<0.05）及0.93±0.08 vs 1.37±0.11（P<0.01）。BCAR4-siRNA组和NC-siRNA组细胞凋亡率分别为（17.52±3.21）%和（4.69±1.56）%（P<0.01）。BCAR4-siRNA组细胞划痕愈合率为（19.65±2.41）%,显著低于NC-siRNA组的（47.50±5.88)%(P<0.05)。与NC-siRNA组比较,BCAR4-siRNA组Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达下调,分别为0.27±0.03 vs 1.0±0.05(P<0.01)、0.48±0.04 vs 1.0±0.04(P<0.05),Bax蛋白表达上调,为2.83±0.19 vs 1.0±0.03(P<0.01)。结论:lncRNA BCAR4高表达于肝癌细胞系,敲低lncRNA BCAR4的表达可抑制肝癌细胞增殖、迁移,并促进凋亡,其机制可能与Cyclin D1和Bcl-2蛋白下调表达,Bax蛋白表达上调表达有关。     

CXCR4 抑制剂LPS 对胆管癌细胞株QBC939生物学行为的影响

目的:探讨人胆管癌细胞株QBC 939 中CXCR4 基因的表达,及LPS 对CXCR4 表达及生物学行为的影响。方法:RT-PCR 和Western blot法检测胆管癌细胞株QBC 939 中CXCR4 mRNA 及蛋白的表达,与不同浓度LPS 干预后CXCR4 mRNA 及蛋白表达的变化;MTT 法和平板克隆形成试验检测LPS 对QBC 939 细胞生长及克隆形成的抑制作用;趋化试验检测LPS 对QBC 939细胞趋化侵袭能力的影响。结果:QBC 939 细胞中有CXCR4 mRNA 及CXCR4 蛋白的表达明显,LPS 能有效的抑制QBC 939 细胞中CXCR4 mRNA 及CXCR4 蛋白的表达,且具有浓度相关性。不同浓度的LPS 对胆管癌细胞株QBC 939 的增殖影响不同,24h 内各浓度LPS 对细胞增殖均无明显抑制,LPS 浓度为0.1 μ g/mL 时,48h 内无明显影响,为1.0 μ g/mL、5.0 μ g/mL 时,QBC 939 细胞生长受到明显抑制,72h 各浓度LPS 对细胞增殖均有明显抑制作用;平板克隆形成试验显示对照组细胞培养第10天即可见明显克隆体形成,至第14天时克隆体数目多、体积大。而试验组细胞于培养第13天时才出现克隆体,且克隆体数目少、体积小。CXCL12（SDF-1）对QBC 939 细胞有明显的趋化作用,对照组细胞趋化率为53.5% ,LPS 各浓度组细胞趋化率明显低于对照组。结论:胆管癌细胞株QBC 939 中CXCR4 mRNA 及CXCR4 蛋白呈阳性表达;CXCR4 抑制剂LPS 能有效抑制胆管癌细胞株QBC 939 的生长与转移能力,CXCR4 可能成为胆管癌基因治疗的靶点之一。      

紫杉醇抗胆管癌细胞差异表达蛋白的分离、质谱鉴定及生物信息学分析

目的：筛选紫杉醇诱导胆管癌细胞凋亡的相关蛋白并鉴定差异表达的蛋白点以寻找抗胆管癌药物作用的新靶点,筛选胆管癌新的肿瘤标志物,为胆管癌的早期诊断、疗效观察提供基础理论依据。方法：应用比较蛋白质组学技术对紫杉醇诱导凋亡的胆管癌QBC939细胞进行蛋白分离和蛋白表达谱差异分析,筛选并鉴定其相关蛋白并测定其胶内酶解后的肽指纹图谱。结果：本研究发现对照组和实验组蛋白点匹配率分别为（90．1±0．14）％和（87．1±0．22）％（P〈0．05）,匹配后在干预组中共发现68个差异表达蛋白点,其中47个表达下调和21个上调;共获得28张PMF,初步质谱鉴定发现11个与凋亡相关的差异表达蛋白,其中6种蛋白表达上调,5种蛋白表达下调。结论：应用蛋白质组学技术分析所获得的68个差异蛋白质点可能在QBC939细胞发生凋亡过程中发挥重要作用;被鉴定出的11个与细胞凋亡相关的差异蛋白点提示紫杉醇是通过多个重要蛋白,发挥其诱导细胞凋亡的抗癌作用机制的。     

紫杉醇诱导胆管癌QBC939细胞凋亡的初步研究

目的：探讨紫杉醇对胆管癌QBC939细胞作用的敏感性并研究紫杉醇对胆管癌细胞周期及细胞凋亡率的影响,并初步探讨紫杉醇诱导胆管癌细胞发生凋亡的机制,为胆管癌的临床治疗寻找新的治疗药物。方法：体外培养胆管癌细胞QBC939,采用不同浓度紫杉醇予以干预,通过细胞形态观察和Mrrr实验,初步研究紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939的敏感性;应用流式细胞仪检测紫杉醇诱导胆管癌细胞凋亡,同时对细胞周期的变化和动力学予以检测。结果：各浓度紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939生长均有明显抑制作用;胆管癌细胞被紫杉醇明显阻滞在S期及G2／M期,且抑制作用呈剂量和时间依赖效应。结论：紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖效应;紫杉醇能诱导人胆管癌QBC939细胞发生凋亡。     

尼美舒利对胆管癌细胞增殖及PCNA、Survivin蛋白表达的影响

目的：观察选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂尼美舒利对人胆管癌细胞系QBC939生长的抑制作用及Survivin基因表达的变化。方法：应用MTT比色法、细胞群体倍增时间观察尼美舒利对人胆管癌细胞QBC939增殖的影响，流式细胞仪检测细胞凋亡，免疫组织化学法观察尼美舒利对QBC939细胞PCNA，Survivin蛋白表达的影响。结果：尼美舒利呈时间、剂量依赖性抑制胆管癌增殖，高浓度（200μmol／L）尼美舒利不仅抑制胆管癌细胞增殖，而且诱导其凋亡。流式细胞仪研究显示，随药物浓度增加，细胞凋亡率显著增加。免疫组化结果显示尼美舒利处理后的QBC939细胞PCNA，Survivin蛋白的表达明显减弱。结论：尼美舒利能抑制QBC939细胞增殖，诱导其凋亡，其机制可能与PCNA，Survivin蛋白的表达下调有关。     

血卟啉光动力对人胆管癌细胞转移潜能影响实验研究

目的：探讨血卟啉衍生物介导的光动力疗法（hematoporphyrinderivative,HPD-PDT）对人胆管癌细胞增殖和侵袭的影响。方法：体外培养人胆管癌细胞系QBC939,经系列浓度的HPD处理,并应用半导体激光治疗仪给予不同强度的光照,CCK-8试剂盒检测HPI〉PDT对人胆管癌细胞增殖的影响;Transwell小室（Matrigel侵袭实验）检测HPD-PDT对人胆管癌细胞体外侵袭能力的影响;酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）检测细胞培养上清液中分泌的VEGF-C浓度变化;RT-PCR检测细胞中VEGF_CmRNA的表达变化;SP免疫组化染色观察细胞中VEGF-C蛋白的表达变化。结果：CCK-8检测结果显示,HPD-PDT在体外能够抑制QBC939细胞生长,当HPD质量浓度4μg／mL和光照剂量5J／cm2时,实验组A450值为1．54l7±0．0983,明显低于空白对照组的2．0278±0．1986,P〈0．01;细胞生长抑制率达到23．97％,且随着激光能量密度及光敏剂浓度的增加,其抑制作用也越明显。体外侵袭实验结果显示,实验组穿过Matrigel胶的细胞数为13．33±1．155,明显少于空白对照组的31．67±2．517,P〈O,01;ELlSA结果显示,实验组上清液中分泌的VEGF-c浓度为（1558．24l7±97．）143）ng／L,低于空白对照组的（1716．3750±45．0472）ng／L,P〈0．05;RT—PCR结果显示,实验组VEGF_CmRNA／hGAPDH的比值为0．7009±0．1872,明显低于空白对照组的1．5425±0．1078,P〈0．01;SP免疫组化染色结果显示,实验组VEGF—C蛋白表达阳性的细胞百分率为24．52％±2．22％,明显低于空白对照组的56．94％±3．38％,P〈0．01。结论：HPD-PDT能够抑制人胆管癌细胞QBC939的增殖活性及体外侵袭能力,并有可能通过下调VEGF-C因子的表达进一步抑制胆管癌的生长和转移。