P2X7R 拮抗剂对小鼠慢性胰腺炎的作用及机制研究

目的 探讨嘌呤能 P2X7 受体（P2X7R）拮抗剂——氧化三磷酸腺苷（OxATP）和亮蓝 G（BBG）在抑制下游靶蛋白——核苷酸结合寡聚化结构域样受体 3（NLRP3）炎性体活化和慢性胰腺炎（CP）胰腺纤维化进程中的作用及可能机制。 方法 40 只 C57BL/6 小鼠随机均分为正常对照组、CP 模型组、OxATP 组和 BBG 组。 除正常对照组腹腔注射与处理组等体积的生理盐水外, 其余组均通过腹腔注射雨蛙素法制作 CP 小鼠模型（6 周）。 造模结束后, CP 模型组、 OxATP 组和 BBG 组分别予以腹腔注射生理盐水、OxATP（20 μL, 300 μmol/L）和 BBG（20 μL, 10 μmol/L）处理, 连续注射 2 周。 然后处死各组小鼠并取胰腺组织, 行病理学检查, 以 HE 染色对胰腺病理组织学（炎性细胞浸润、腺泡萎缩及纤维化程度）进行评分, 天狼星红染色和 α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化染色分别对胰腺纤维化程度进行评估;免疫组化法检测胰腺 P2X7R、NLRP3 和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 1（Caspase-1）中的累积光密度（IOD）值。 结果 与正常对照组比, CP 模型组炎症损伤组织学评分增加, 胰腺纤维化程度显著增加, P2X7R、NLRP3 和 Caspase-1 免疫组化 IOD 值显著升高（P < 0.05）; 与 CP 模型组相比, OxATP 和 BBG 组炎症损伤组织学评分降低, HE 染色纤维化评分、天狼星红染色和 α-SMA 免疫组化染色均显著减轻（P < 0.05）, 胰腺 P2X7R、NLRP3 和 Caspase-1 IOD 值均明显降低（P < 0.05）。 结论 P2X7R 拮抗剂 OxATP 和 BBG 能够显著减轻 CP 小鼠模型的慢性炎症和纤维化程度, 阻断 P2X7R-NLRP3 炎性体信号通路, 这有望成为治疗 CP 及其纤维化进程的一种潜在新策略。     

五味子提取物对百草枯中毒模型小鼠肺纤维化的保护作用

摘要： 目的 探讨五味子提取物对百草枯（PQ）中毒模型小鼠肺纤维化的保护作用, 并探讨其机制。方法 108 只小鼠按随机数字表法分为正常对照组, 模型组, 五味子提取物低剂量组 （200 mg/kg）、 中剂量组 （400 mg/kg）、 高剂量组 （800 mg/kg） 及维生素 C 组 （100 mg/kg）, 每组 18 只。除正常对照组以外的小鼠行一次性 PQ 溶液 （100 mg/kg） 灌胃造模, 造模成功后每 24 h 给予相应剂量药物 1 次, 分别在建模后第 7、 14、 21 天处死小鼠, 每个时间点 6 只。解剖肺脏, HE 染色观察小鼠肺组织炎症程度并进行炎症评分; Masson 染色观察肺组织纤维化程度;RT-PCR 和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测各组肺组织中转化生长因子（TGF） -β1、 白细胞介素（IL） -6、 IL-17 mRNA 及蛋白表达水平。结果 （1）造模后第 7 天和第 14 天, 模型组小鼠肺组织出现大量炎性细胞浸润、 肺泡间隔充血, 炎症评分较正常对照组升高（P < 0.05）, 而五味子提取物中、 高剂量组小鼠肺组织炎症评分较模型组和维生素 C 组降低（P < 0.05）。（2）造模后第 14 天和第 21 天, 五味子中、 高剂量组小鼠肺组织纤维化程度较模型组降低（P < 0.05）。（3）随着造模时间的延长, 模型组 TGF-β1 mRNA 及蛋白表达水平升高, IL-6 表达降低, IL-17 则先升高后降低。五味子提取物中、 高剂量组与模型组比较, 造模后第 7 天和第 14 天, IL-6 表达降低, 造模后第 14 天和第 21 天, TGF-β1 表达降低, 而 3 个时间点 IL-17 表达均降低 （P < 0.05）。结论 五味子提取物可通过抑制 TGF-β1、 IL-6 和 IL-17 的表达来减轻 PQ 中毒造成的炎症反应和肺纤维化。     

小肠结肠炎综合征小鼠肠黏膜中NLRP3表达与炎症分子关系的研究

目的 探讨食物蛋白诱导的小肠结肠炎综合征（FPIES）小鼠肠黏膜细胞中炎症小体NOD样受体热蛋白结 构域相关蛋白3（NLRP3）表达水平,明确NLRP3异常与炎症分子及细胞焦亡的关联性。方法 利用卵清蛋白灌胃建 立食物蛋白诱导FPIES小鼠模型;实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）和Western blot方法检测肠黏膜细胞NLRP3、 炎症分子及细胞焦亡通路分子的表达水平;采用药物干预黏膜细胞,分别抑制和激活NLRP3,Western blot方法检测 肠黏膜细胞炎症分子及细胞焦亡通路分子表达的改变情况。结果 FPIES小鼠肠黏膜细胞中NLRP3、炎症分子及细 胞焦亡通路分子表达水平显著上调（P＜0.05）;激活NLRP3表达,可以诱导炎症分子及细胞焦亡通路分子表达显著 上调,抑制NLRP3表达,可以显著上调炎症分子转化生长因子（TGF）-β和肿瘤坏死因子（TNF）-α表达（P＜0.05）。结论 FPIES小鼠肠黏膜细胞NLRP3表达与炎症反应及细胞焦亡密切相关,是调控FPIES肠道病理表型的上游靶标分子。     

达格列净对1型糖尿病小鼠心肌损伤的影响及机制研究

目的：探讨达格列净对1型糖尿病小鼠心肌损伤的影响及机制研究。方法：正常C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常对照组（Control）、糖尿病心肌病组（DCM）和达格列净组（DAPA）。应用链脲佐菌素（STZ）诱导并给予维持饲料联合构建糖尿病模型。DAPA组给予10 mg·kg-1·d-1的达格列净灌胃，Control组与DCM组给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃。干预8周后，应用超声机来检测各组心功能；乳酸脱氢酶（LDH）检测心肌损伤；HE染色观察心脏形态；Masson、天狼星红染色观察心脏纤维化程度；TUNEL检测心肌凋亡；免疫组化检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA、Fibronectin胶原表达情况；qPCR法检测Caspase-1、GSDMD、α-SMA、Fibronectin的mRNA基因表达含量；Western blot法检测心肌焦亡及纤维化相关蛋白NLRP3、Caspase-1、GSDMD、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA、Fibronectin、IL-18蛋白表达水平。结果：与Contr...     

C/EBPβ通过pim-1介导足细胞损伤的作用机制

目的　探讨CCAAT增强子结合蛋白β（C/EBPβ）/丝氨酸/苏氨酸激酶1（pim-1）/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）轴介导小鼠肾脏足细胞损伤的作用机制。方法　体外培养及转染足细胞后分为Control组、siRNA-NC组（用siRNA-NC转染足细胞）、siC/EBPβ组（用siC/EBPβ慢病毒转染足细胞）、Vector-NC组（空载体转染足细胞）和pim-1-OE组（pim-1过表达慢病毒转染足细胞）。脂多糖（LPS）与腺苷三磷酸（ATP）刺激足细胞后分为LPS+ATP组、LPS+ATP+siRNA-NC组、LPS+ATP+siC/EBPβ组、LPS+ATP+siC/EBPβ+Vector-NC组和LPS+ATP+siC/EBPβ+pim-1-OE组。实时荧光定量PCR（qPCR）检测C/EBPβ和pim-1 mRNA水平。Western blot检测C/EBPβ、pim-1、NLRP3、p20半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-1、Gasdermin D（GSDMD）、p17白细胞介素（IL）-1β蛋白水平。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎性因子IL-1β和IL-6水平。染色质免疫共沉淀（chip）实验及双荧光素酶报告基因实验检测C/EBPβ与pim-1基因启动子结合。结果　与Control组和siRNA-NC组相比,siC/EBPβ组的C/EBPβ及pim-1 mRNA水平明显下降（P＜0.01）。与Control组相比,LPS＋ATP组NLRP3、p20Caspase-1、p17IL-1β蛋白水平及IL-1β、IL-6水平明显升高（P＜0.01）。与LPS+ATP+siRNA-NC组相比,LPS+ATP+siC/EBPβ组NLRP3、p20Caspase-1、p17IL-1β蛋白水平及IL-1β、IL-6水平降低（P＜0.01）。chip实验及双荧光素酶报告基因实验显示C/EBPβ可与pim-1基因启动子结合。与Control组和Vector-NC组比较,pim-1-OE组pim-1 mRNA水平明显升高（P＜0.05）。与LPS+ATP+siC/EBPβ+Vector-NC组相比,LPS+ATP+siC/EBPβ+pim-1-OE组NLRP3、p20Caspase-1、p17IL-1β、GSDMD蛋白水平及IL-1β、IL-6水平升高（P＜0.05）。结论　C/EBPβ/pim-1/NLRP3轴可能参与足细胞损伤,并作为LN治疗的潜在靶点。     

紫杉醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠细胞焦亡的影响及其机制的研究

目的 探讨紫杉醇（PTX）通过抑制NLRP3/caspase-1通路减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠细胞焦亡的影响机制。方法 将50只雌性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为正常对照组、EAE模型组及PTX低、中、高剂量组，每组10只。除正常对照组外，其余组建立EAE模型。PTX低、中、高剂量组每日分别腹腔注射PTX1、2、4 mg/（kg·d），正常对照组和EAE模型组腹腔注射等量生理盐水，连续14 d。从免疫当日开始，每日定时观察并记录小鼠体质量变化、精神、活动情况及进行神经功能障碍评分；对各组脊髓组织进行尼氏染色和LFB染色观察病理改变；荧光定量PCR(qPCR)检测脊髓组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)及胱天蛋白酶（caspase）-1 mRNA表达水平。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测外周血白细胞介素（IL）-18和IL-1β含量。结果 正常对照组小鼠无明显症状，EAE模型组和PTX低、中、高剂量组体质量下降、活动减少、反应迟钝。与EAE模型组相比，PTX各剂量组发病潜伏期延长，高峰期延迟，神经功能障碍评分降低（P<0.05），脊髓组织尼...     

基于细胞焦亡探讨补阳还五汤配方颗粒对病毒性心肌炎小鼠心肌纤维化的抑制作用

目的:探讨补阳还五汤对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌纤维化抑制作用与细胞焦亡的关系。方法:将雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组,以及补阳还五汤低、高剂量组(6,36 g·kg^-1·d^-1),每组9只。除对照组外,其余各组小鼠均单次腹腔注射柯萨奇B3病毒复制VMC模型。造模成功后,对照组和模型组小鼠均灌胃等容生理盐水,各给药组小鼠均灌胃相应药液,每日1次,连续28 d,于实验过程中观察各组小鼠的一般情况。以病毒接种当日为第0天,分别于第7、14、28天检测其心脏质量与体质量比值(HW/BW);采用苦味酸天狼猩红染色法观察其心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分布情况,并计算Ⅰ型/Ⅲ型胶原蛋白比值;Tunel染色检测心肌细胞凋亡率,并计算凋亡指数;于第30天时,采用Western blot法检测其心肌组织中NLRP3、Caspase-1蛋白的相对表达量。结果:与对照组比较,模型组小鼠出现烦躁、拱背、对刺激反应减轻、体质量减轻甚至精神萎靡等现象;HW/BW、Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比值(第7~28天各时间点)、心肌细胞凋亡指数,以及心肌组织中NLRP3、Caspase-1的相对表达量均显著升高(P＜0.05);与模型组比较,各给药组小鼠上述症状具有不同程度改善,其HW/BW(第7天除外)、Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比值(第7天除外)、心肌细胞凋亡指数(补阳还五汤低剂量组第7天除外),以及NLRP3、Caspase-1的相对表达量的相对表达量均显著降低(P＜0.05)。结论:补阳还五汤通过抑制心肌胶原蛋白增生,调节Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比值,抑制NLRP3、Caspase-1的表达,发挥对VMC心肌纤维化的抑制作用。     

丹皮酚对湿疹模型小鼠SP、NK1R表达及肥大细胞活化的影响#br#

摘要：目的　探究丹皮酚对湿疹模型小鼠P物质（SP）、神经激肽1受体（NK1R）表达及肥大细胞活化的影响。方法　选取健康清洁级C57BL小鼠100只,用2,4-二硝基氯苯（DNCB）涂于小鼠双耳内侧致敏,建立湿疹模型,造模成功后采用随机数字表法分为湿疹模型组,丹皮酚低（25 mg/kg）、中（50 mg/kg）、高（100 mg/kg）剂量组及阳性药物（地塞米松0.65 mg/kg）组,每组20只。另取20只小鼠于双耳内侧涂抹等量生理盐水作为空白对照（Control）组。各组均于造模成功后开始给药,丹皮酚低、中、高剂量组和阳性药物组均经腹腔注射相应剂量药物,1次/d,共14 d,Control组和湿疹模型组经腹腔注射等量生理盐水。肉眼观察小鼠耳部湿疹皮损程度并进行评分;苏木精-伊红（HE）染色检测各组小鼠耳部组织病理变化;酶联免疫吸附测定法检测SP含量;免疫组化法检测耳部皮损组织NK1R及肥大细胞活性标志物类胰蛋白酶（Tryptase）表达。结果　与Control组相比,湿疹模型组小鼠耳部皮肤可见红肿、角化结痂、渗出等损伤及表皮角化过度、真皮层炎症细胞浸润等病理损伤,皮损程度评分、SP含量、NK1R及Tryptase表达水平均升高（P＜0.05）;与湿疹模型组相比,丹皮酚低、中、高剂量组及阳性药物组小鼠耳部皮肤红肿、角化及炎性浸润等病理损伤程度减缓,皮损程度评分、SP含量、NK1R及Tryptase表达水平均降低（P＜0.05）,且丹皮酚各剂量组呈剂量依赖性;丹皮酚高剂量组上述指标与阳性药物组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论　丹皮酚可能通过抑制湿疹模型小鼠耳部皮损组织中SP、NK1R表达,抑制肥大细胞活化,缓解湿疹炎性损伤症状。     

微RNA-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域3/胱天氨酸蛋白酶-1/白细胞介素-1β信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及机制

目的 探讨微RNA-223-3p(miR-223-3p)调控NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/胱天氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及其机制。方法 将32只ICR小鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、miR-223-3p模拟物（miR-223-3p agomir）组和阴性对照miRNA模拟物（agomir-NC）组,建立四氯化碳小鼠肝纤维化模型。miR-223-3p agomir组和agomir-NC组于第4周末尾静脉注射miR-223-3p agomir及agomir-NC（给药剂量为每只200 nmol/L）,每周给药3次,连续给药2周。分别比较4组小鼠血清总胆红素（TBIL）、白蛋白（Alb）、血清透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）表达水平,采用苏木精-伊红（HE）染色及马松（Masson）染色检测肝组织病理改变。采用基因本体分析（GO）、KEGG分析对miR-223-3p进行功能分析,采用Targetscan数据库对miR-223-3p的靶基因进行预测,实时荧光定量PCR(qPCR)...     

氯马斯汀促进实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的再髓鞘化

摘要：目的 探讨氯马斯汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠髓鞘碱性蛋白（MBP）表达的影响。方法 将50只C57BL/6雌性小鼠适应性喂养后按随机数字表法分成5组,即正常对照组、EAE模型组和氯马斯汀高、中、低剂量组［40、20、10 mg/（kg·d）］,每组10只。EAE模型组及氯马斯汀各剂量组采用抗原髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）诱导EAE模型。氯马斯汀各剂量组每天腹腔注射氯马斯汀预防性给药,正常对照组和EAE模型组腹腔注射生理盐水,连续21 d。建模后每天评判小鼠临床表现,进行神经功能障碍评分。21 d后统一处死小鼠,观察各 组小鼠脊髓组织病理切片的Luxol Fast Blue染色情况并进行脱髓鞘评分。观察各组小鼠脑组织匀浆中MBP及其mRNA表达的变化。结果正常对照组未发病。EAE模型组和氯马斯汀各剂量组从7~8 d开始不同程度发病,在12~16 d逐渐达到发病高峰,且随着干预剂量增大,小鼠发病高峰评分降低（P＜0.01）。正常对照组小鼠脊髓组织未发生脱髓鞘改变;EAE模型组小鼠脊髓组织发生明显脱髓鞘改变;氯马斯汀各剂量组小鼠脱髓鞘程度明显改善,且改善程度呈剂量依赖性（P＜0.01）。与正常对照组比较,EAE模型组与氯马斯汀各剂量组MBP蛋白及mRNA表达明显减少（P＜0.05）;与EAE模型组对比,氯马斯汀各剂量组MBP及其mRNA表达显著升高（P＜0.05）,呈剂量依赖性。结论氯马斯汀对MOG35-55诱导小鼠EAE模型具有防治作用,呈现剂量依赖性,其机制可能与促进MBP表达、改善再髓鞘化有关。     

橙皮苷对缺血再灌注损伤模型大鼠心肌组织保护作用的研究

目的:研究橙皮苷对缺血再灌注损伤模型大鼠心肌组织的保护作用。方法:结扎大鼠左冠状动脉前降支复制心肌缺血再灌注损伤模型,60只Wistar大鼠均分为对照、模型和橙皮苷高、中、低剂量组。光镜下观察心肌组织病理变化,通过免疫组化法检测Fas、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达情况。结果:光镜下对照组心肌组织无病理损伤;模型组心肌组织呈严重炎性细胞浸润,并见多处坏死;橙皮苷高、中、低剂量组心肌细胞变性坏死程度显著减轻。与对照组比较,模型组心肌组织Fas和Caspase-3蛋白表达显著增强(P<0.05);与模型组比较,橙皮苷高、中、低剂量组心肌组织Fas、Caspase-3蛋白表达均显著下降(P<0.05)。结论:橙皮苷预处理对大鼠冠状动脉结扎后再灌注心肌损伤具有一定的保护作用。     

氨磺必利通过TLR/NLR通路对慢性应激抑郁大鼠的改善作用研究

目的 观察氨磺必利对抑郁症大鼠行为的影响,并探究其对大鼠海马组织Toll样受体(TLR)/NOD样受体(NLR)通路相关蛋白表达的影响.方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组及低、中、高剂量(0.3、1.2、4.8 g/kg)氨磺必利组,每组10只,除对照组外,其他各组大鼠给予8周慢性温和不可预知应激(CUMS)刺激制...     

米诺环素对脊髓损伤大鼠凋亡机制探索和神经红蛋白表达的影响

目的 探讨米诺环素对脊髓横断损伤大鼠凋亡蛋白 Bcl-2、Bax和 Caspase-3的表达及神经红蛋白 Ngb表 达的影响。方法 36只健康成年雄性 Wistar大鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组、米诺环素干预组,每组 12只。假 手术组只暴露脊髓,脊髓损伤组和米诺环素干预组制备胸3~4脊髓节段全横断损伤模型。米诺环素干预组于术前腹 腔注射米诺环素（90 mg/kg）,1次/d,连续5 d,脊髓损伤组和假手术组腹腔注射等体积生理盐水。术后22 d处死所有 大鼠,采用免疫组化染色和 Western blot法检测脊髓组织 Bcl-2、Bax和 Caspase-3蛋白的表达;Hoechst 染色检测凋亡 细胞;免疫荧光染色检测神经红蛋白（Ngb）的表达。结果 与假手术组相比,脊髓损伤组脊髓组织中 Bcl-2表达增 多,Bax和 Caspase-3蛋白的表达增多,凋亡细胞数明显增多,Ngb荧光强度明显增强（均P＜0.05）。与脊髓损伤组相 比,米诺环素干预组Bcl-2表达进一步增高（P＜0.05）,Bax和Caspase-3表达显著降低（P＜0.05）,而凋亡细胞数有所 减少,Ngb的平均荧光强度较其明显增强。结论 米诺环素干预可通过降低 Bax和 Caspase-3的表达,升高 Bcl-2的 表达来抑制细胞凋亡,提高神经红蛋白表达。     

扶肾方对尿毒症腹膜透析大鼠腹膜超滤功能及VEGF-Notch信号通路的影响

目的　探讨扶肾方对尿毒症腹膜透析大鼠的腹膜超滤功能及腹膜组织Notch1、delta-样配体4（Dll4）、Notch胞内域（NICD）、Hes1、血管内皮生长因子（VEGF）及血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）的影响。方法　采用随机数字表法将50只雄性SD大鼠分为正常组、模型组、扶肾方低剂量组（模型+扶肾方324 g/L灌胃）、扶肾方高剂量组（模型+扶肾方648 g/L灌胃）和塞来昔布组（模型+塞来昔布1.8 g/L灌胃）,每组10只。规律腹腔注射腹膜透析液4周,行腹膜平衡实验计算超滤量后处死大鼠,取腹膜组织,HE染色观察腹膜形态学变化,采用实时荧光定量PCR（qPCR）和蛋白印迹法检测Notch1、Dll4、NICD、Hes1、VEGF、VEGFR-2的mRNA和蛋白表达,蛋白印迹法检测p-VEGFR-2的蛋白水平。结果　模型组、扶肾方低剂量组、扶肾方高剂量组及塞来昔布组大鼠腹膜超滤量明显低于正常组,扶肾方高剂量组与塞来昔布组超滤量高于模型组和扶肾方低剂量组,塞来昔布组超滤量低于扶肾方高剂量组（P＜0.05）。腹膜HE染色显示,扶肾方低剂量组与高剂量组大鼠腹膜新生血管较模型组明显减少。与正常组比较,模型组大鼠腹膜组织Notch1、Dll4、NICD、Hes1 mRNA及蛋白表达均下调,VEGFR-2、VEGF mRNA及VEGFR-2、p-VEGFR-2、VEGF蛋白表达上调（P＜0.05）。与模型组比较,扶肾方低剂量组NICD、Hes1 mRNA及Notch1、Dll4、NICD、Hes1蛋白表达上调,VEGFR-2、VEGF mRNA及VEGFR-2、p-VEGFR-2、VEGF蛋白表达下调（P＜0.05）;扶肾方高剂量组Notch1、Dll4、NICD、Hes1 mRNA及Dll4、Hes1蛋白表达上调,VEGFR-2、VEGF mRNA及VEGFR-2、p-VEGFR-2、VEGF蛋白表达下调（P＜0.05）;塞来昔布组Notch1 mRNA及Notch1、Dll4蛋白表达上调,VEGFR-2、VEGF mRNA及p-VEGFR-2、VEGFR-2、VEGF蛋白表达下调（P＜0.05）。结论　扶肾方可改善腹膜超滤功能,该作用可能与上调腹膜组织Notch1、Dll4、NICD、Hes1 mRNA及蛋白表达,下调VEGFR-2、VEGF mRNA及VEGFR-2、p-VEGFR-2、VEGF蛋白表达有关。     

热打击通过活化NLRP3炎性小体增加肺毛细血管的通透性

目的 验证热打击通过活化 NLRP3炎性小体增加肺毛细血管通透性的机制。方法 C57BL/6小鼠和肺微血管内皮细胞,用 42 ℃热打击。体内实验分组包括：对照组和热打击组,每组 12只小鼠;体外实验分组包括：对照组、热打击组、热打击+2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物（TEMPO）组、热打击+半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（caspase）抑制剂（Z-VAD-FMK）组、热打击+白细胞介素-1受体拮抗剂（IL-1Ra）组,每组 4例。检测肺组织和肺微血管内皮细胞活性氧（ROS）表达;Western blot 和（或）免疫荧光检测 caspase-1、白细胞介素-1β（IL-1β）、紧密连接蛋白 ZO-1、occludin、claudin-5的表达;用伊文氏蓝检测小鼠肺毛细血管的通透性。结果 体内实验结果显示,与对照组比较,热打击组小鼠肺组织伊文氏蓝浓度明显升高、ROS表达上调、NLRP3炎性小体活化、IL-1β表达上调和紧密连接蛋白的表达下调（P＜0.01）。体外实验结果显示,用 TEMPO 清除 ROS 后,NLRP3炎性小体活化被抑制（P＜0.01）;用 ZVAD-FMK抑制 caspase-1作用后,IL-1β表达显著下调（P＜0.01）;用 IL-1Ra阻断 IL-1β作用后,紧密连接蛋白表达显著上调（P＜0.01）。结论 热打击可通过活化 NLRP3炎性小体促进 IL-1β的表达,进而下调紧密连接蛋白的表达,导致肺微血管通透性增加。     

穿心莲内酯对盲肠结扎穿孔诱导的脓毒症大鼠心肺功能和炎症损伤的保护作用

摘要：目的　探究穿心莲内酯对盲肠结扎穿孔（CLP）诱导的脓毒症大鼠心肺功能和炎症损伤的保护作用。方法　75只SD大鼠随机分为假手术组（A组）、脂多糖模型组（B组）、CLP组（C组）、CLP+低剂量穿心莲内酯组（D组）和CLP+高剂量穿心莲内酯组（E组）,每组15只。A组仅进行开腹、分离盲肠及关腹手术;B组采用脂多糖腹腔注射建立脓毒症模型,C、D、E组行CLP手术诱导脓毒症,D、E组建模后分别腹腔注射10 mg/kg和20 mg/kg穿心莲内酯。比较各组大鼠心率（HR）、左心室射血分数（LVEF）;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测心肌肌钙蛋白I（cTnI）、肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）;比较各组大鼠肺损伤评分;采用血气分析仪检测氧分压［p（O2）］,计算动脉血氧分压/吸入气氧浓度［PaO2/FiO2］;取左肺组织计算湿/干质量（W/D）比值;HE染色观察心肺损伤情况;Western blot检测心肺组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase）-3、Caspase-9、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和P65蛋白的表达;ELISA检测外周血中白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子（TNF-α）、IL-1β、中性粒细胞趋化因子1（CINC-1）水平;使用全自动血细胞分析仪检测中性粒细胞（NEU）水平。结果　与A组相比,B、C组大鼠HR、LVEF、p（O2）和PaO2/FiO2均显著降低,cTnl、CK-MB、肺损伤评分、肺W/D比值、心肺组织中Caspase-3和Caspase-9蛋白表达、Bax/Bcl-2比值、CINC-1、NEU、IL-6、IL-1β、TNF-α和p-P65/P65水平均显著升高（P＜0.05）。与C组相比,D、E组以上指标变化均相反（P＜0.05）;HE染色示,D、E组大鼠心肌肌纤维断裂溶解减少,肌细胞核溶解、固缩显著减少,肺间质中性粒细胞浸润减轻、肺泡间隔增厚、细胞水肿显著改善。结论　穿心莲内酯可以缓解CLP诱导的脓毒症大鼠体内炎症反应并改善大鼠心肺功能,同时抑制凋亡蛋白的表达,保护大鼠心肺组织。     

不同途径移植骨髓间充质干细胞对慢性肾病大鼠 肾脏纤维化的影响

目的 观察不同途径移植骨髓间充质干细胞（BMSCs）对慢性肾病（CKD）大鼠的治疗效果及寡聚化结构域 样受体蛋白（NLRP）3 炎症小体对肾间质纤维化的影响。方法 雄性 SD 大鼠 50 只,其中 2 只用于体外分离培养 BMSCs;36只大鼠CKD造模（左肾切除+多次尾静脉注射阿霉素）成功后随机分为模型（CKD）组、肾动脉移植BMSCs （A-M）组、尾静脉移植BMSCs（V-M）组;另设假手术（SHAM）组,每组12只,尾静脉输注等量生理盐水。移植BMSCs 后第7、14天检测血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白水平;HE染色、Masson三色染色观察肾脏病理结构改变及纤维化情况, 免疫组化染色观察核苷酸结合NLRP3、凋亡相关微粒蛋白（ASC）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-1表达情况。 结果 与 SHAM 组相比,CKD 组、A-M 组、V-M 组 7 d、14 d 血肌酐、尿素氮、24 h 尿蛋白均显著升高（P＜0.05）。 BMSCs移植7 d、14 d后,A-M组、V-M组与CKD组比较血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白降低,且A-M组低于V-M组（P＜ 0.05）。HE染色、Masson染色结果示,A-M组、V-M组较CKD组炎性浸润减轻,萎缩肾小球数量减少,肾小管扩张情 况有所改善,纤维化程度减轻,A-M组改善程度优于V-M组。免疫组化结果示,A-M组、V-M组较CKD组大鼠肾间 质NLRP3、ASC、Caspase-1阳性表达减少,A-M组减少程度大于V-M组。结论 BMSCs可改善CKD大鼠肾脏纤维 化,动脉途径移植优于静脉途径,其机制可能与抑制NLRP3炎症小体活化有关。