温阳散结汤含药血清通过NF-κB通路调控肿瘤相关巨噬细胞极化对Lewis肺癌的影响

目的:观察温阳散结汤对 Lewis 肺癌小鼠肿瘤生长及瘤组织中巨噬细胞M2型极化的影响,并探索其调控NF-κB信号通路抑制肿瘤相关巨噬细胞M2型极化,对Lewis肺癌细胞侵袭、迁移能力的影响。方法:建立C57BL/6小鼠 Lewis 肺癌移植瘤模型,温阳散结汤干预14 d 后观察小鼠瘤重和肺转移灶,计算肺转移抑瘤率,免疫组化染色检测小鼠瘤组织中巨噬细胞M2型表面标志物 CD206 的表达;温阳散结汤灌胃SD大鼠制备含药血清,采用IL-13干预RAW264.7小鼠巨噬细胞建立巨噬细胞M2型极化模型,CCK-8法检测温阳散结汤含药血清对巨噬细胞增殖的影响,流式细胞术和Western-blot检测 CD206的表达,RT-PCR检测巨噬细胞M2型标志基因的mRNA表达,ELISA法检测细胞上清中IL-1β、IL-10、TGF-β 和TNF-α 的水平变化,Western-blot检测氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、核因子-κB p65(NF-κB p65)和磷酸化核因子-κB p65（pNF-κB p65）的蛋白表达;收集温阳散结汤含药血清处理的M2型巨噬细胞条件培养基,将其作用于Lewis肺癌细胞,通过Transwell侵袭迁移实验检测Lewis 肺癌细胞的侵袭和运动迁移能力。结果:温阳散结汤干预后,明显减少了小鼠瘤重和肺转移灶数,并抑制了瘤组织CD206的阳性表达（P<0.05）;温阳散结汤含药血清干预后,IL-13诱导的M2型巨噬细胞中F4/80+CD206+的细胞比例和CD206蛋白表达明显减少,MRC1、Arg1、Ym1的mRNA表达水平显著降低,细胞中TNF-α、IL-1β的含量明显升高,IL-10、TGF-β的含量明显降低,同时明显下调了细胞PPARγ、NF-κB p65、pNF-κB p65的蛋白表达及pNF-κB p65/NF-κB p65比值（均P<0.05）;温阳散结汤含药血清处理的M2型巨噬细胞条件培养基干预后,Lewis肺癌细胞迁移和侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。结论:温阳散结汤具有抑制肺癌肿瘤生长和转移的作用,其作用机制可能与调节NF-κB通路,抑制IL-13诱导的RAW264.7细胞M2型极化,从而抑制Lewis肺癌细胞侵袭和迁移能力相关。     

唑来膦酸通过NF-κB信号通路调控肺癌细胞的增殖和耐药

目的:探究唑来膦酸对肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）表型转化和HGF表达的作用及对肺癌细胞增殖和耐药的影响。方法:通过Transwell系统将M2巨噬细胞与小鼠肺癌细胞Lewis共培养,得到M2型TAM(M2-TAMs)。采用不同浓度唑来膦酸作用于M2-TAMs,采用ELISA和RT-PCR检测M1型标记（IL-1β、TNFα、IL-6和iNOS）、M2型标记（HGF、EGF、IL-10和Arg1）的表达改变,采用Western blot检测NF-κB的表达。建立Transwell M2-TAMs-Lewis共培养模型,采用MTT方法检测肿瘤细胞的增殖和对吉非替尼耐药的影响;采用NF-κB特异性抑制剂PDCT作用唑来膦酸处理的TAMs,进一步检测TAMs M1/M2表型改变。结果:随着唑来膦酸浓度的增加,TAMs M1表型显著增强,M2表型逐渐减弱;与对照组相比,唑来膦酸处理的TAMs显著抑制了肺癌细胞的增殖,增强了其对吉非替尼的敏感性。在NF-κB特异性抑制剂（PDTC）的作用下,唑来膦酸处理的TAMs M1表型减弱,而M2表型增强。结论:唑来膦酸通过活化NF-κB信号通路促进肿瘤相关巨噬细胞M1表型转化并抑制肺癌细胞的增殖和耐药。     

抑制热休克蛋白90活性对HepG2细胞迁移的影响和相关机制

目的:通过抑制热休克蛋白90（heat shock protein 90 beta,Hsp90β）的活性,检测其对HepG2细胞迁移的影响。方法:使用已知的Hsp90抑制剂Ganetespib靶向抑制Hsp90β蛋白活性,检测Hsp90β抑制后细胞内Akt介导的细胞迁移相关信号通路的影响;RT-PCR实验检测Ganetespib对MMP-9及COX-2基因的调节作用;划痕实验检测抑制Hsp90β活性对细胞浸润侵袭作用的影响。结果:Ganetespib对Hsp90的表达量影响较小(P>0.05),但能有效降低Akt的磷酸化程度,且该程度与Ganetespib用量呈正相关(P<0.01);对Akt/NF-κB信号通路检测发现Ganetespib能显著降低IκB的磷酸化水平,进而阻止NF-κB入核发挥转录作用;此外,RT-PCR检测显示受Ganetespib的影响,NF-κB的下游转录基因MMP-9及COX-2均出现不同程度的下调［MMP-9下降(42.7±3.7)%,P<0.01;COX-2下降(45.3±5.2)%,P<0.01］;划痕实验表明,HepG2细胞的迁移率受Ganetespib的影响,与其剂量呈正相关。结论:Hsp90β对HepG2细胞迁移活性有重要的影响,其机制可能是通过阻断Akt/IKK介导的NF-κB转录活性实现的。     

热休克蛋白70抑制剂PES对人胃癌BGC细胞NF-κB通路的影响

目的:探讨热休克蛋70(heat shock protein 70,Hsp70)抑制剂PES(2-phenylethynesulfonamide)对人胃癌BGC细胞活性、细胞迁移以及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的影响。方法 :采用Hsp70抑制剂PES处理人胃癌BGC细胞后,应用CCK-8(cell counting kit-8)法检测BGC细胞的活性,细胞划痕实验检测BGC细胞的迁移能力,蛋白质印迹法检测NF-κB信号通路成员及其下游血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,免疫荧光法观察BGC细胞质中p65的表达。结果 :与未经PES处理的BGC细胞(对照组)比较,5、10和20μmol/L的PES处理BGC细胞72 h后,BGC细胞活性和细胞迁移率被明显抑制(P值均<0.05)。20μmol/L的PES处理后,BGC细胞NF-κB信号通路中磷酸化p65(phospho-p65,p-p65)、p65、NF-κB抑制蛋白激酶α(inhibitory protein of NF-κB kinaseα,IKKα)、p-IKKα、p-IKKβ、IKKβ、p-Akt和Akt以及下游VEGF蛋白的表达水平均明显低于对照组(P值均<0.05),且细胞质中p65蛋白的荧光明显减弱。结论 :Hsp70抑制剂PES可抑制胃癌BGC细胞的活性和迁移,下调BGC细胞NF-κB信号通路活性以及下游VEGF蛋白的表达水平,降低BGC细胞质中p65的表达。     

布洛芬调控IKKβ/IκBα/NF-κB信号通路对肝癌细胞株增殖及凋亡的影响

目的 探讨布洛芬调控IKKβ/IκBo/NF-κB信号通路对肝癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 选择人肝癌QGY-7703细胞为研究对象,采用随机数字表法将QGY-7703细胞随机分为对照组(Qc组)和不同浓度布洛芬组,每组6例:Q1组(布洛芬作用浓度为250 μmol/L)、Q2组(布洛芬作用浓度为500 μmol/L)、Q3组(布洛芬作用浓度为1 000 μmol/L)、Qc组加入等容量的RPMI-1640培养基.各组分别孵育24 h、48 h和72 h时,采用CCK-8法测定不同浓度及不同孵育时间细胞的增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况;孵育48 h时,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞中IKKβ和Bcl-2基因mRNA和蛋白的变化以及磷酸化IKKβ (p-IKKβ)、磷酸化IκBoα(p-IκBα)、NF-κBp65蛋白的表达情况.结果 与Qc组比较,Q1组、Q2组、Q3组细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均增加,差异有统计学意义(P＜0.05);Q1组、Q2组、Q3组细胞增殖抑制率及细胞凋亡率依照布洛芬作用浓度和时间的增加而依次增加,具有浓度和时间依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05);与Qc组比较,Q1组、Q2组、Q3组细胞IKKβ mRNA和Bcl-2 mRNA表达明显下调,差异有统计学意义(P＜0.05);Q1组、Q2组、Q3组比较,细胞IKKβ mRNA和Bcl-2 mRNA表达依照布洛芬作用浓度的增加而依次下调,具有浓度依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05);与Qc组比较,Q1组、Q2组、Q3组细胞IKKβ、Bcl-2、p-IKKβ、p-IκBα和NF-κBp65蛋白表达明显下调,差异有统计学意义(P＜0.05);Q1组、Q2组、Q3组比较,细胞中IKKβ、Bcl-2、p-IKKβ、p-IκBα和NF-κBp65蛋白的表达依照布洛芬作用浓度的增加而依次降低,具有浓度依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 布洛芬可以抑制人肝癌QGY-7703细胞的增殖,促进细胞凋亡,可能与布洛芬调控细胞IKKβ/IκBα/NF-κB信号通路有关.     

手霉素对人卵巢癌3AO细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨手霉素对人卵巢癌3AO细胞体外增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制.方法:MTT法检测手霉素对3AO细胞的增殖抑制作用;Giemsa染色、透射电子显微镜下观察及FCM分析手霉素对3AO细胞的凋亡诱导作用;FCM检测手霉素对3AO细胞 ras、survivin和核因子-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB)(p65)蛋白表达的影响.结果:手霉素能显著抑制3AO细胞的增殖(P<0.05),并且这种抑制作用随着手霉素浓度的增加和作用时间的延长而增强.Giemsa染色和透射电子显微镜下观察发现,手霉素可诱导3AO细胞出现典型的凋亡形态学变化及超微结构改变.FCM分析结果显示,与对照组相比,手霉素诱导3AO细胞凋亡率明显增加(P<0.05),细胞周期中的G2/M期细胞也明显增加(P<0.05);3AO细胞的ras、NF-κB(p65)和survivin蛋白的表达水平明显下降(P<0.05).结论:手霉素可明显抑制人卵巢癌3AO细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调细胞ras、NF-κB(p65)和survivin蛋白的表达有关.     

胃癌细胞中COX-2通过NF-κB/Snail调控E-cadherin表达的机制

目的 探讨COX-2调控E-cadherin表达的相关信号通路及分子机制,揭示COX-2与胃癌侵袭转移的关系及作用机制.方法 采用不同浓度的选择性COX-2抑制剂塞来昔布干预人胃癌细胞株SGC-7901不同时间后,应用实时荧光定量RT-PCR法和Western blot法检测SGC-7901细胞中COX-2、NF-κB、Snail及E-cadherin mRNA和蛋白的表达情况.结果 随着塞来昔布作用剂量的增大和干预时间的延长,COX-2、NF-κB和Snail mRNA及蛋白的表达量均显著下降(P＜0.05),呈剂量和时间依赖性降低;E-cadherin mRNA及蛋白的表达量上升(P＜0.05),呈剂量和时间依赖性升高.采用Spearman相关分析,显示COX-2与NF-κB及COX-2与Snail蛋白表达呈正相关性(r =0.881,P＜0.01;r =0.839,P＜0.01);COX-2与E-cadherin蛋白表达呈负相关性(r=-0.814,P＜0.01).结论 COX-2可能通过NF-κB/Snail信号通路调控E-cadherin的表达,进而参与胃癌的浸润转移过程.     

抑制NF-κB通路增强蟾蜍灵诱导的HL-60细胞凋亡

目的:观察蟾蜍灵对HL-60细胞活力和凋亡的影响,对NF-κB通路的作用,探讨NF-κB通路在蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用.方法:锥虫蓝染色检测细胞活力;流式细胞仪技术检测细胞凋亡和周期分布;采用Western Blot技术检测IKK的磷酸化.结果:蟾蜍灵以时间和剂量依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡.24,48和72h抑制细胞活力的IC50浓度分别为26.3,7.8和2.0nmol/L.对照组HL-60细胞有pIKK表达,蟾蜍灵可诱导IKK的快速活化.NF-κB通路的特异性抑制剂Bay 11-7082增强蟾蜍灵的凋亡诱导作用.结论:蟾蜍灵可诱导HL-60细胞凋亡,促进IKK活化与NF-κB通路调节相关,而且与NF-κB通路抑制剂有协同作用.     

下调microRNA-214表达对人卵巢癌SKOV-3细胞迁移及侵袭的影响

目的:探讨下调microRNA-214 (miR-214)表达对人卵巢癌SKOV-3细胞迁移和侵袭的作用及其可能机制.方法:采用脂质体介导法将miR-214抑制剂转染人卵巢癌SKOV-3细胞,Real-time PCR法检测miR-214、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uridylyl phosphate adenosine,uPA)基因mRNA的表达,Western blotting法检测细胞NF-κB和uPA蛋白表达.划痕试验检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力.结果:经转染miR-214抑制剂后,人卵巢癌SKOV-3细胞miR-214表达降低,细胞迁移和侵袭能力降低.同时NF-κB和uPA mRNA和蛋白表达也降低.结论:下调人卵巢癌SKOV-3细胞miR-214表达可抑制细胞迁移和侵袭能力,下凋NF-κB和uPA基因表达可能是其作用机制.     

血小板通过上调NF-κB信号通路增强乳腺癌循环肿瘤细胞的侵袭和迁移能力

目的:探讨血小板接触对乳腺癌循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）侵袭和迁移能力的影响。方法:利用CytoQuestTM CR抓取乳腺癌患者血液中的循环肿瘤细胞,通过RT-PCR检测Wnt2基因表达水平。通过Western blot检测肿瘤细胞上皮细胞-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）以及NF-κB信号通路相关蛋白的表达情况。通过细胞划痕、Transwell实验检测血小板的直接接触对肿瘤细胞侵袭和迁移能力的影响。通过封闭乳腺癌细胞中NF-κB的表达,观察NF-κB信号通路在肿瘤细胞侵袭和迁移能力中的重要作用。结果:RT-PCR结果显示,乳腺癌患者血液中的CTCs内Wnt2基因高表达。Western blot结果显示,血小板与乳腺癌细胞的直接接触增加了肿瘤细胞的上皮间质化进程,并诱导激活了肿瘤细胞的NF-κB通路。细胞划痕和Transwell实验结果显示,与血小板共培养可促进乳腺癌细胞的侵袭和迁移。此外,通过封闭乳腺癌细胞中NF-κB基因,可以降低Wnt2的表达,抑制肿瘤细胞的上皮间质化进程,减弱乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力。结论:血小板与肿瘤细胞的直接接触促进了乳腺癌循环肿瘤细胞的侵袭和迁移能力,封闭NF-κB信号通路可能是抑制乳腺癌循环肿瘤细胞侵袭和迁移能力的有效策略。     

HCV C 蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-κB活性的研究

目的探讨HCV C蛋白在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子κB(NF-κB)调控作用.方法利用稳定表达HCV C蛋白的QBC939细胞株(QBC939 HCV C ),通过NF-κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析(EMSA)检测HCV C蛋白增强肝门部胆管癌细胞NF-κB的DNA结合活性和反式激活活性.RT-PCR、Western blot检测HCV C蛋白对核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA及p50、p65、IκBα蛋白表达及IκBα蛋白磷酸化的影响.结果①EMSA结果显示QBC939HCV C 细胞系中NF-κB相对信号密度明显比QBC939细胞高.②将pNF-κB-lun表达质粒转染稳定表达HCV C蛋白胆管癌细胞系中,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性,结果显示QBC939HCV C 细胞中活化NF-κB为12.8倍,而QBC939细胞中NF-κB为2.6倍.③RT-PCR显示IκBα mRNA在QBC939 HCV C 细胞和QBC939细胞中的表达无明显差异;Western blot结果显示稳定表达HCV C蛋白的QBC939 HCV C 细胞株的胞核中的p50、p65蛋白高水平表达,而未转染HCV C蛋白的QBC939细胞仅检测出极低水平的p50、p65蛋白.在QBC939HCV C 细胞胞浆中IκBα蛋白低水平表达,QBC939细胞高水平表达,但IκBα蛋白磷酸化水平则相反.结论HCV C蛋白通过增加IκBα降解激活的NF-κB在肝门部胆管癌的发生中起重要作用.     

核转录因子-κ B在胰腺癌中的表达及其与上皮细胞间质转化的关系

目的 研究核转录因子-κ B(NF-κ B)在人类胰腺癌组织中的表达及与上皮细胞间质转化(EMT)标志物上皮性钙黏附蛋白(E-cad)和波形蛋白(Vimentin)的关系,探讨其与胰腺癌恶性生物学行为的关系.方法 应用免疫组织化学法检测62例人类胰腺癌组织中NF-κ B、上皮源性标志物E-cad蛋白、间质源性标志物Vimentin蛋白的表达,并分析它们相互间及其与临床病理因素间的关系.结果 胰腺癌组织中NF-κ B和Vimentin蛋白阳性表达率分别为81%(50/62)和61%(38/62),E-cad蛋白的表达缺失率为55%(34/62).在胰腺癌组织中NF-κ B的表达和Vimentin蛋白的阳性表达、E-cad蛋白的缺失表达均呈正相关(r值分别为0.343、0.352,均P＜0.05),并且NF-κ B的阳性表达与胰腺癌的淋巴结转移(x2=11.761,P＜0.05)、远处转移(x2=9.225,P＜0.05)相关,而与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤类型及分化程度无关(P＞0.05).E-cad蛋白的表达缺失、Vimentin蛋白的阳性表达与胰腺癌的淋巴结转移、远处转移均有相关性(x2值分别为6.914、4.984;7.753、5.144,均P＜0.05).结论 NF-κ B在胰腺癌中表达增高,同时可能通过诱导胰腺癌组织的EMT而促进胰腺癌的浸润和转移.

Abstract：

Objective To investigate the expression of NF-κB and epithelial-mesenchymal transition (EMT) related markers E-cadherin and Vimentin proteins in human pancreatic cancer tissues and its relation with the malignant features. Methods The expression of NF-κB、E-cadherin and Vimentin proteins in 62 cases of pancreatic cancer tissues were detected by using immunohistochemistry and compared with the clinicopathological data of pancreatic cancer. Results The positive expression rate of NF-κB was 81% (50/62), Vimentin protein increased of expression was 61% (38/62), and E-cadherin protein loss of expression was 55 % (34/62) in pancreatic cancer. The positive expression rate of NF-κB was significantly related with the lymph node metastasis (x2=11.761, P＜0.05), distant metastasis (x2=9.225, P＜0.05), the absent expression of epithelial marker E-cadherin protein (r =0.352, P ＜0.05) and the positive expression of mesenchymal marker Vimentin protein (r=0.343, P ＜0.05), but there was no relation with the patients gender,age, tumor location, tumor type and tumor differentiation (P ＞0.05). In addition, the significant correlation of E-cadherin expression loss and Vimentin expression with tumor lymph node metastasis and distant metastasis was found (x 2= 6.914, 4.984, 7.753, 5.144, P ＜0.05). Conclusion The overexpression of NF-κB in pancreatic cancer may accelerate invasion and metastasis of pancreatic cancer through inducing EMT.     

紫铆因抑制膀胱癌细胞增殖的体内外研究

目的 观察紫铆因对膀胱移行细胞癌细胞BLS增殖的影响以及对膀胱癌裸鼠移植瘤生长的 影响。方法 不同浓度紫铆因处理细胞,四甲基偶氮唑蓝比色实验（MTT）及平板克隆形成实验观 察细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,蛋白印迹检测核转录因子κB (NF-κB)p65核内表达及 细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）的磷酸化程度,并检测NF-κB下游靶基因细胞周期素D1（Cyclin D1）及环氧合酶-2（COX2）的表达。建立膀胱癌裸鼠皮下移植瘤,采用腹腔注射的给药途径,测 量移植瘤的体积和重量。结果 紫铆因抑制了膀胱癌细胞增殖并诱导G2/M期细胞周期阻滞。紫铆因 处理后NF-κB p65的核内表达及ERK1/2的磷酸化程度下降（P<0.05）,Cyclin D1及COX2基因表达下 调（P<0.05）,体内实验发现紫铆因治疗组较对照组皮下移植瘤的生长明显受抑制（P<0.05）。结 论 紫铆因具有抗膀胱癌细胞增殖作用,可能与其抑制ERK及NF-κB信号激活有关。     

青蒿不同溶剂萃取粗提物对结肠癌HT-29、LoVo细胞NF-κB活性的影响

目的:通过比较不同溶剂萃取青蒿的粗提物对结肠癌HT-29和LoVo细胞的核因子κB(NF-κB)活性的影响,寻找青蒿中对结肠癌细胞NF-κB活性有作用的萃取相.方法:分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇对青蒿水煎液进行萃取,并将萃取得到的粗提物分别处理结肠癌HT-29细胞和LoVo细胞,提取核蛋白后采用凝胶阻滞分析(EMSA)方法对NF-κB活性进行测定.结果:青蒿水煎液氯仿萃取相对HT-29细胞和LoVo细胞的NF-κB活性表达均有明显的抑制作用(P＜0.05),其它各萃取相对两种细胞NF-κB活性的影响与对照组比较无明显差异.结论:在不同溶剂萃取青蒿水煎液中,氯仿萃取相粗提物对结肠癌HT-29细胞和LoVo细胞的NF-κB活性具有抑制作用.     

Toll样受体4信号通路在脂多糖促进肺癌细胞增殖中的机制探讨

目的:本研究探讨Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)介导的信号转导通路在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)促进肺腺癌细胞A549增殖过程中的可能机制.方法:LPS刺激肺腺癌A549细胞后,采用MTT方法和FCM法检测A549细胞增殖情况;免疫细胞化学法检测经不同浓度LPS处理的A549细胞中,TLR4、c-Jun、c-Fos及核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)蛋白的表达水平.结果:LPS刺激A549细胞24 h后增殖效应最明显,且100 ng/mL LPS组的G2/M期细胞所占比例较对照组和10 ng/mL LPS组显著增加,差异有统计学意义(P<0.05).TLR4、c-Jun、c-Fos及NF-κB蛋白在A549细胞中均有表达,且随着LPS处理浓度的增加而表达增强,100 ng/mL LPS处理组中蛋白表达增强最明显,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:LPS能促进A549细胞增殖,其机制可能是通过与TLR4受体结合而激活TLR4信号转导通路,进而分别活化c-Jun和c-Fos的异源二聚体--转录因子激活蛋白-1(activating protein-1,AP-1)和核因子NF-κB,从而使肺癌细胞持续增殖.     

NF-κB及Rb蛋白在进展期胃癌中的表达及E-cadherin/catenin复合物在转移淋巴结中再表达的临床意义

目的探讨NF-κB、Rb蛋白与E-cadherin/catenin复合物对胃癌转移机制和对患者预后的影响。方法采用免疫组化(SP)法分别检测了NF-κB、Rb蛋白在肿瘤原发灶及E-cadherin/catenin复合物在胃癌原发灶及其相应淋巴结内的表达情况。结果 NF-κB蛋白在胃癌组织中表达阳性率为81.40%,Rb蛋白在胃癌组织中表达阳性率为65.12%,E-cadherin/catenin复合物在胃癌原发灶中异常表达率为98.84%,在转移淋巴结中再表达阳性率为63.95%。NF-κB表达与胃癌病理类型和分化程度密切相关(P<0.05)。Rb蛋白表达与肿瘤分化程度密切相关(P<0.05)。E-cadherin/catenin复合物在转移淋巴结中的表达与肿瘤细胞的分化程度密切相关(P<0.05)。Kaplan-Meier曲线显示NF-κB、Rb蛋白的表达与患者的预后无关(P>0.05);E-cadherin/catenin复合物在转移淋巴结内表达情况与患者的预后密切相关(P<0.05)。Wilcoxon’s log-rank test进行组间差别检验显示各组间差别无显著性(P>0.05)。Cox’s proportional-hazard多变量分析显示E-cadherin/catenin复合物在转移淋巴结内的表达可以作为一个独立的预后因素(P<0.05)。Sperman秩相关分析显示NF-κB、Rb蛋白表达与E-cadherin/catenin复合物在转移淋巴结内表达均无显著相关性。结论胃癌中存在NF-κB、Rb蛋白的高表达,转移淋巴结中存在E-cadherin/catenin复合物的高表达;E-cadherin/catenin复合物在转移淋巴结内的表达情况与患者的预后密切相关,可以作为一个独立的预后因素。     

NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷提高卵巢癌细胞顺铂化疗的敏感性

目的:探讨核因子κB(nuclear factor kappa B, NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)提高人卵巢癌SKOV-3细胞对顺铂(cisplatin)化疗敏感性的作用及其可能的机制.方法:用不同浓度PDTC联合顺铂在不同时间作用于卵巢癌SKOV-3细胞,MTT法观察药物作用对细胞生长的抑制,Western Blotting分析胞质内NF-κB 抑制蛋白α(inhibitor of NF-κB ,I-κBα)、胞核P65蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡.结果:PDTC(10～40 μmol/L)或顺铂(0.1～100 μg/ml )均明显抑制SKOV-3细胞的生长(P<0.05或P<0.01),并引起细胞的凋亡;小剂量PDTC(2.5、5 μmol/L)和顺铂(0.01 μg/ml)联合应用与单用顺铂比较,可明显增加细胞生长抑制率和细胞凋亡率(均P<0.05).单用顺铂组与对照组比较,胞质I-κBα蛋白减少而胞核P65蛋白增多,联合使用PDTC可逆转此现象.结论:小剂量PDTC可增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,这一作用可能与PDTC增加I-κBα蛋白的表达而抑制P65蛋白进入核内有关.     

骨桥蛋白shRNA表达载体介导的RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞生长和侵袭的影响

背景与目的:骨桥蛋白(osteopontin,OPN)诱导多种恶性肿瘤细胞的浸润和转移与基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和MMP-9的活化密切相关。本研究旨在探讨OPN在人前列腺癌PC-3细胞的增殖和侵袭过程中的作用以及IκB激酶(Ikappa B kinase,IKK)在NF-κB介导的信号通道中可能的功能。方法:将OPN短发夹RNA(short-hairpin RNA,shRNA)重组质粒转染PC-3细胞并应用不同浓度的IKK抑制剂分别抑制IKKα和IKKβ的活性,然后采用实时PCR和Western blot分别检测OPN、MMP-2和MMP-9三种mRNA和蛋白的表达水平,流式细胞术、MTT法和Transwell实验分别检测细胞生长周期变化、细胞增殖和和侵袭能力。结果:与对照组相比,转染重组质粒的细胞中OPN、MMP-2和MMP-9三种蛋白的表达量分别下降了55.22%、51.71%和28.35%(P<0.05),凋亡二倍体数目显著增加,细胞的迁移能力和侵袭能力分别下降了45.48%和51.96%(P<0.05)。此外,特异性地抑制IKKβ酶的活性能显著降低...     

染料木素对人多发骨髓瘤细胞NF-κB激活的抑制机制

目的:研究染料木素(Genistein)对人骨髓瘤细胞株XG-1的核因子-κB(NF-κB)表达的影响及Genistein处理前后XG-1细胞内蛋白激酶B(Akt)和磷酸化Akt的表达.方法:凝胶电泳迁移率试验检测Genistein处理前后NF-κB在XG-1细胞核内的表达水平;蛋白质印迹法检测Genistein处理前后XG-1细胞内Akt和磷酸化Akt的表达.结果:凝胶电泳迁移率实验(EMSA)发现,NF-κB在XG-1细胞株中持续激活,而Genistein能下调这一激活.随着浓度逐渐提高,细胞核内NF-κB的活力逐渐下降,呈剂量依赖,其中溶刺对照组与10 mg/L的Genistein组相比,x2=4.614,P<0.05;溶剂对照组与15 mg/L的Genistein组相比,x2=4.324,P<0.05.Genistein能拮抗这一作用.XG-1细胞用不同浓度Genistein处理24 h,可见Akt无明显变化,而磷酸化Akt随着浓度逐渐提高,表达逐渐下降,呈剂量依赖,其中溶剂对照组与10 mg/L的Genistein组相比,x2=4.751,P<0.05;溶剂对照组与15 mg/L的Genistein组相比,x2=5.114,P<0.05.结论:NF-κB在XG-1人类骨髓瘤细胞株中持续激活,Genistein下调NF-κB的激活形式而且抑制了Akt磷酸化,Genistein抑制细胞的NF-κB的激活部分经由Akt通路完成.     

核因子κB在胰腺癌中的表达及与VEGF和p53表达的相关性

目的探讨核因子κB(NF-κB,p65)在胰腺癌组织中的表达及其与VEGF、p53蛋白表达的相互关系。方法电泳迁移率变动分析(EMSA)测定45例胰腺癌及癌旁组织、8例慢性胰腺炎和9例正常胰腺组织中NF-κB的活性,Western印迹法检测NF-κB、IκB-a蛋白表达;免疫组织化学法检测胰腺癌中VEGF、p53、p65蛋白表达。结果NF-κB在肿瘤组织中被激活;NF-κB在胰腺癌、旁组织、慢性胰腺炎、正常胰腺组织中阳性表达率分别为71.0%、20.0%、12.5%、0(P<0.05);NF-κB基因表达与胰腺癌的分化程度、临床分期、肿瘤大小无关(P>0.05),与淋巴结转移和周围浸润有相关性(P<0.05);转移癌中NF-κB蛋白表达与VEGF、p53蛋白表达显著相关。结论核因子κB基因在胰腺癌中过度表达并与VEGF、p53一起参与胰腺癌的浸润、转移过程。