凋亡相关基因表达在乳腺癌细胞生长中的作用

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（Ｃｋｉ′ｓ）ｐ２７ｋｉｐ１是ＣＤＫ２／ＣｙｃｌｉｎＥ的抑制蛋白,不仅使细胞周期停滞于Ｇ１期,还可诱导乳腺癌细胞凋亡。我们通过体外实验,分析凋亡相关基因ｂｃｌ２基因族、ｐ２７ｋｉｐ１的表达水平与乳腺癌细胞株生物特性的关系,探讨在阿霉素作用后其基因或蛋白产物表达水平的变化。材料与方法　应用体外细胞培养、细胞爬片技术,采用免疫组化、Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ方法检测不同ＥＲ状态人乳腺癌细胞株ＭＣＦ７、ＭＤＡＭＢ２３１中ｂｃｌ２、ｂａｘ、ｐ２７ｋｉｐ１、ＰＣＮＡ蛋白表达…     

维生素D对乳腺癌细胞及乳腺癌干细胞凋亡的影响

目的:探究维生素D对人乳腺癌细胞及乳腺癌干细胞凋亡的影响。方法:MTT法检测维生素D对乳腺癌SUM159细胞活力的影响;Hoechst33258染色检测维生素D对乳腺癌SUM159细胞凋亡的影响;实时定量PCR法检测维生素D对乳腺癌SUM159细胞凋亡相关分子Bax和Bcl-2 mRNA表达水平的影响;无血清悬浮培养法（serum-free medium,SFM）富集乳腺癌干细胞,显微镜下观察维生素D对乳腺癌干细胞球大小和数量的影响;实时定量PCR法检测维生素D对乳腺癌干细胞凋亡相关分子Bax、Bcl-2 mRNA表达水平的影响。结果:MTT法检测结果显示,维生素D可显著抑制乳腺癌细胞活力,且随着维生素D浓度升高,乳腺癌SUM159细胞活力的下降具有一定的剂量依赖效应,单因素方差分析显示,差异具有统计学意义(P＜0.01);Hoechst33258染色结果显示,维生素D可诱导乳腺癌SUM159细胞发生细胞凋亡形态改变;进一步PCR法检测结果显示,维生素D可显著上调乳腺癌SUM159细胞促凋亡蛋白Bax mRNA的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA的表达,单因素方差分析显示,差异具有统计学意义(P＜0.01)。SFM培养可有效富集乳腺癌干细胞,维生素D干预可明显抑制SFM富集的乳腺癌干细胞球的大小和数量,且与对照组相比,维生素D可显著上调乳腺癌干细胞球Bax mRNA的表达水平,下调Bcl-2 mRNA的表达水平,单因素方差分析显示,差异具有统计学意义(P＜0.01)。结论:维生素D可抑制乳腺癌细胞及乳腺癌干细胞活力,诱导乳腺癌细胞凋亡。     

川楝素对乳腺癌细胞的生长抑制作用

[目的]探讨川楝素对人乳腺癌MDA—MB-453细胞作用及其机制。[方法]取对数生长期的MDA—MB-453细胞,0、6．25、12．50、25．00、50．00、100．00nmol／L川楝素处理,绘制生长曲线。川楝素0、12．5、50nmol／L处理72h后,MTS法检测川楝素对乳腺癌细胞增殖的影响,流式细胞仪检测川楝素对乳腺癌细胞凋亡和细胞周期的影响。[结果]川楝素对乳腺癌细胞有增殖抑制作用．并呈时间剂量依赖性（P〈0．01）。MDA—MB453细胞48h、72h、96h的IC50分别为17．25、22．20和135．69nmol／L。流式细胞分析表明,川楝素诱导乳腺癌细胞的凋亡呈浓度依赖性（P〈0．01）,且阻滞细胞在S期（P〈0．01）,以0、12．50、50．00nmol／L川楝素处理乳腺癌细胞72h后,MDA—MB-453细胞早期凋亡率分别为3．21％、9．64％和20．19％,MDA—MB-453细胞处于细胞周期S期细胞占20．98％、35．92％和45．02％。[结论]川楝素对乳腺癌MDA—MB-453细胞增殖具有抑制作用,其作用机制可能与诱导细胞凋亡和引起S期阻滞有关。     

珠香丸对乳腺癌细胞抑制作用的研究

[目的]研究珠香丸对乳腺癌细胞的抑制作用。[方法]用WST—1法检验珠香丸对细胞增殖的抑制作用，并与表阿霉素、氟尿嘧啶和环磷酰胺作比较。以Ki-67和碘丙啶作染色剂，用流式细胞仪测定增殖率和细胞周期。用TUNEL法（原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法）检测珠香丸对乳腺癌细胞的诱导凋亡作用。[结果]珠香丸有明显的抑制乳腺癌细胞的增殖作用，并有诱导乳腺癌细胞凋亡的作用，其作用具有剂量依赖性。[结论]珠香丸具有抗乳腺癌的作用。     

新辅助化疗对乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响

目的：观察乳腺癌新辅助化疗后癌细胞凋亡及增殖程度的变化,判断化疗疗效.方法：新辅助化疗手术标本44例和术前未接受化疗的对照组37例,进行Ki67及PCNA免疫组织化学染色和TUNEL原位细胞凋亡检测,并进行统计学处理.结果：化疗组Ki67、PCNA和AI的阳性细胞数比率分别为11.8%、31.3%和69.8%,对照组分别为21.6%、62.8%和52.8%,化疗组和对照组相比均有显著性差异.结论：新辅助化疗能抑制乳腺癌细胞的增殖,诱导凋亡.     

肿瘤相关巨噬细胞对乳腺癌MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响

目的观察肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages, TAMs)对乳腺癌MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响,并初步探索其机制。方法选取人单核细胞系THP-1,体外经佛波酯(PMA)、人白细胞介素-4(IL-4)诱导获得TAMs细胞模型;通过流式细胞术(FCM)检测TAMs表面标记分子CD206表达水平;MCF-7细胞与TAMs共培养后,光学倒置显微镜观察细胞形态;利用Transwell小室分别检测MCF-7细胞的侵袭和迁移能力;蛋白印记法(Western blotting)检测E-钙黏蛋白(Ecadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、闭合蛋白(Occludin)及波形纤维蛋白(Vimentin)的表达;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养上清中转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和血管内皮生长因子(VEGF)的浓度。结果与TAMs共培养后的MCF-7细胞伪足增多,细胞排列更松散。通过FCM检测到TAMs表面标记物CD206显著表达。Transwell实验结果显示,与TAMs共培养后的MCF-7细胞迁移能力增...     

辛伐他汀对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用及机制研究

目的 探讨辛伐他汀（SVA）体外对乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用及其可能的机制。 方法 选用人乳腺癌MCF-7细胞进行体外培养,采用四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度SVA（0、3.25、6.25、12.5、25、50和100 μmol／L）处理MCF-7细胞24、48、72 h后的增殖抑制作用,荧光染色法观察SVA（0、2和4 μmol／L）处理MCF-7细胞48 h后的凋亡形态学变化,流式细胞仪测定SVA（0和4 μmol／L）处理MCF-7细胞48 h后的细胞周期变化,免疫印迹法分析SVA（0、2、4和8 μmol／L）处理MCF-7细胞72 h后细胞内Bcl-2和Bax蛋白水平的表达。结果 不同浓度SVA处理不同时间后,MCF-7细胞的增殖明显受到抑制,且增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性;荧光显微镜观察发现SVA能够诱导MCF-7细胞出现核固缩、染色质凝集等凋亡形态学改变。流式细胞仪检测细胞周期显示,SVA阻滞MCF-7细胞于G0／G1期。免疫印迹 结果 显示,SVA处理组的Bcl-2蛋白表达水平低于对照组,Bax蛋白表达水平明显高于对照组,且随SVA浓度的增高,Bcl-2蛋白水平逐渐降低,Bax蛋白水平逐渐升高。结论 SVA对人乳腺癌MCF-7细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖性,其抗肿瘤机制可能与诱导细胞周期阻滞、下调Bcl-2蛋白及上调Bax蛋白表达有关。     

硅和玻璃片基上的三维微结构对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响

目的〖HT5"SS〗： 研究硅和玻璃片基上的三维微结构对乳腺癌MCF7细胞生长的影响。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 采用SU8光刻胶光刻微加工技术在硅和玻璃片基表面制造沟槽、五角星、齿轮状3种三维微结构,与乳腺癌MCF7细胞共培养,用倒置显微镜与扫描电镜观察三维微结构对肿瘤细胞的形态、分布、生长的影响,采用MTT法分析三维微结构对肿瘤细胞增殖的影响, 用流式细胞仪分析凋亡细胞。〖HT5W〗结果〖HT5"SS〗： 成功制作微米尺度带有不同深宽比的沟槽、五角星、齿轮。显微镜观察显示,MCF     

丹参酮ⅡA对乳腺癌细胞的影响及其分子机制

目的 观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制.方法 选取处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞,设对照组(0μg/ml TanⅡA)和处理组(0.25、0.50、0.75μg/ml TanⅡA),处理MCF-7细胞48 h.MTT法检测各组MCF-7细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测各组MCF-7细胞的凋亡率,Western Blot和RT-PCR分别检测各组MCF-7细胞中p53、Bcl2的蛋白和mRNA表达水平.结果 与对照组比较,不同剂量TanⅡA处理组的MCF-7细胞增殖抑制率升高(P﹤0.05),且呈剂量-时间依赖性;随着TanⅡA作用剂量的增加,MCF-7细胞的凋亡率逐渐增大,均高于对照组(P﹤0.05).与对照组比较,0.75μg/ml TanⅡA处理组的p53蛋白表达升高,Bcl2蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P﹤0.05);与对照组比较,0.75μg/ml TanⅡA处理组的p53 mRNA表达水平增加,Bcl2 mRNA表达水平降低,分别为对照组的4.88倍和0.42倍(P﹤0.05);0.75μg/ml TanⅡA处理组的p-AKT蛋白表达水平(0.866±0.015)低于对照组的p-AKT蛋白表达水平(1.000±0.020),差异有统计学意义(P﹤0.05).结论 TanⅡA对乳腺癌MCF-7细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用,其凋亡作用与p53和Bcl2蛋白的表达有关,其抗凋亡机制与p-AKT信号通路有关.     

不同药物麻醉的乳腺癌患者血清对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的:探究不同药物麻醉的乳腺癌患者血清对体外乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响。方法:收集我院2016年2月至2017年12月期间采用丙泊酚麻醉的乳腺癌患者血液样本28例，七氟醚麻醉的乳腺癌患者血液标本32例，乳腺癌术后镇痛使用曲马多的患者血液样本25例，未使用任何麻醉药的普通乳腺癌患者血液样本20例。将血清作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞24 h后，采用流式细胞法检测细胞的凋亡率，ELISA法检测各组细胞中半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）和半胱氨酸蛋白酶8（caspase-8）的表达情况。结果:流式细胞法检测结果显示，使用丙泊酚、七氟醚麻醉和曲马多术后镇痛的患者血清均能够显著提高乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡率；ELISA结果显示，使用丙泊酚、七氟醚麻醉和曲马多术后镇痛的患者血清均能够显著提高乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-3的表达（P＜0.05），且各组之间无统计学差异（P＞0.05）；而使用丙泊酚和七氟醚麻醉的患者血清均能够显著提高乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-8的表达（P＜0.05），曲马多却未能影响乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-8的表达（P＞0.05），丙泊酚和七氟醚组与曲马多组对比，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:使用丙泊酚、七氟醚麻醉和曲马多术后镇痛的患者血清均能够显著提高乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡率及caspase-3的表达；而使用丙泊酚和七氟醚麻醉的患者血清能够显著提高乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-8的表达，曲马多对乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-8的表达没有明显影响。     

Effects of adiponectin on breast cancer cell growth and signaling

Obesity is a risk factor for postmenopausal breast cancer. Adiponectin/Acrp30 is lower in obese individuals and may be negatively regulating breast cancer growth. Here we determined that five breast cancer cell lines, MDA-MB-231, MDA-MB-361, MCF-7, T47D, and SK-BR-3, expressed one or both of the Acrp30 receptors. In addition, we found that the addition of Acrp30 to MCF-7, T47D, and SK-BR-3 cell lines inhibited growth. Oestrogen receptor (ER) positive MCF-7 and T47D cells were inhibited at lower Acrp30 concentrations than ER-negative SK-BR-3 cells. Growth inhibition may be related to apoptosis since PARP cleavage was increased by Acrp30 in the ER-positive cell lines. To investigate the role of ER in the response of breast cancer cells to Acrp30, we established the MDA-ERalpha7 cell line by insertion of ER-alpha into ER-alpha-negative MDA-MB-231 cells. This line readily formed tumours in athymic mice and was responsive to oestradiol in vivo. In vitro, MDA-ERalpha7 cells were growth inhibited by globular Acrp30 while the parental cells were not. This inhibition appeared to be due to blockage of JNK2 signalling. These results provide information on how obesity may influence breast cancer cell proliferation and establish a new model to examine interactions between ER and Acrp30.     

Bisphosphonates induce apoptosis in human breast cancer cell lines

Breast cancer has a prodigious capacity to metastasize to bone. In women with advanced breast cancer and bone metastases, bisphosphonates reduce the incidence of hypercalcaemia and skeletal morbidity. Recent clinical findings suggest that some bisphosphonates reduce the tumour burden in bone with a consequent increase in survival, raising the possibility that bisphosphonates may have a direct effect on breast cancer cells. We have investigated the in vitro effects of bisphosphonates zoledronate, pamidronate, clodronate and EB 1053 on growth, viability and induction of apoptosis in three human breast cancer cell lines (MDA-MB-231, Hs 578T and MCF-7). Cell growth was monitored by crystal violet dye assay, and cell viability was quantitated by MTS dye reduction. Induction of apoptosis was determined by identification of morphological features of apoptosis using time-lapse videomicroscopy, identifying morphological changes in nucleis using Hoechst staining, quantitation of DNA fragmentation, level of expression of bcl-2 and bax proteins and identification of the proteolytic cleavage of Poly (ADP)-ribose polymerase (PARP). All four bisphosphonates significantly reduced cell viability in all three cell lines. Zoledronate was the most potent bisphosphonate with IC50 values of 15, 20 and 3 microM respectively in MDA-MB-231, MCF-7 and Hs 578T cells. Corresponding values for pamidronate were 40, 35 and 25 microM, whereas clodronate and EB 1053 were more than two orders of magnitude less potent. An increase in the proportion of cells having morphological features characteristic of apoptosis, characteristic apoptotic changes in the nucleus, time-dependent increase in the percentage of fragmented chromosomal DNA, down-regulation in bcl-2 protein and proteolytic cleavage of PARP, all indicate that bisphosphonates have direct anti-tumour effects on human breast cancer cells.     

Synergistic inhibition of the growth of MDA-MB-231 cells in triple-negative breast cancer by salinomycin combined with 17-AAG and its mechanism

Salinomycin (SAL), a typical ion carrier antibiotic, inhibits tumor growth and metastasis by inducing apoptosis or autophagy in cancer or cancer stem cells and thus overcomes drug resistance. 17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin (17-AAG), a heat shock protein Hsp90 competitive inhibitor, also has a role in inhibiting tumor development. However, their combination on the growth of breast cancer cells and its specific mechanism remains to be elucidated. The present study tested the influence of SAL and 17-AAG on cell growth, apoptosis and autophagy by MTT assays, Annexin V-FITC and propidium iodide double staining assay and immunoelectron microscopy. The influence of SAL and 17-AAG on proteomics was investigated by isobaric tag for relative and absolute quantitation. It was found that SAL combined with 17-AAG synergistically inhibited the cell growth and induced the apoptosis in a concentration-dependent manner, with the expression of caspase 3 and Bcl-2 were decreased while the expression of Bax was increased. In addition, SAL combined with 17-AAG inhibited autophagy, with the expression of microtubule-associated protein 1 light chain 3, Beclin1, p62 being decreased. Mechanistically, SAL combined with 17-AAG synergistically inhibited the reactive oxygen species/JNK signaling pathway. In conclusion, SAL combined with 17-AAG had a synergistic inhibitory effect on cell growth of breast cancer via inducing apoptosis and inhibiting autophagy. The present study might provide a new strategy for potential clinical application of SAL as a new anti-tumor drug especially as a drug combination with other molecular targeting therapeutics.     

下调FAM111B对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨下调FAM111B对乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF7细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:构建siR-FAM111B慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231和MCF7细胞,qRT-PCR检查转染组与对照组FAM111B mRNA表达,Western blotting法检测各组细胞FAM111B蛋白表达。用CCK-8法检测细胞的增殖能力。流式细胞术检测Annexin-V/PI双染各组细胞的凋亡情况。Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果:siR-FAM111B成功转染MDA-MB-231和MCF7细胞,转染后应用qRT-PCR和Western blotting检测,结果显示,FAM111B mRNA与蛋白水平均下调。siR-FAM111B能抑制两种细胞的增殖。Annexin-V/PI双染结果显示,下调FAM111B诱导两种细胞凋亡。Western blotting结果显示,下调FAM111B可以促进两种细胞Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。结论:下调FAM111B能够抑制乳腺癌细胞的增殖,通过调节线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。     

重组腺病毒载体CRT联合紫杉醇对乳腺癌细胞周期、增殖及凋亡的影响

目的：研究Ad-CRT联合紫杉醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞周期、细胞增殖及凋亡的影响。方法：MTT法检测细胞增殖,相差显微镜观察细胞形态学变化;PI单染流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果：Ad-CRT联合紫杉醇对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的抑制率明显高于单纯Ad-CRT组和单纯紫杉醇组,且抑制作用呈时间依赖关系（P〈0.05）,且细胞形态发生明显的改变。Ad-CRT联合紫杉醇将乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞周期明显的阻滞在G2/M期,并且促进细胞的凋亡。结论：Ad-CRT联合紫杉醇能增强乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制、阻滞细胞周期并且诱导细胞凋亡。     

重组腺病毒载体CRT联合紫杉醇对乳腺癌细胞周期、增殖及凋亡的影响

目的:研究Ad-CRT联合紫杉醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞周期、细胞增殖及凋亡的影响.方法:MTT法检测细胞增殖,相差显微镜观察细胞形态学变化;PI单染流式细胞术检测细胞周期和凋亡.结果:Ad-CRT联合紫杉醇对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的抑制率明显高于单纯Ad-CRT组和单纯紫杉醇组,且抑制作用呈时间依赖关系(P<0.05),且细胞形态发生明显的改变.Ad-CRT联合紫杉醇将乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞周期明显的阻滞在G2/M期,并且促进细胞的凋亡.结论:Ad-CRT联合紫杉醇能增强乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制、阻滞细胞周期并且诱导细胞凋亡.     

亚砷酸钠联合粉防己碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用及机制研究

目的:探讨亚砷酸钠联合粉防己碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用。方法:MTT法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Hoechst33258染色观察细胞染色质固缩情况,碘化丙啶PI单染法检测细胞周期,Western blot检测p-GSK3β、GSK3β及凋亡相关蛋白 PARP、bcl-2的表达。结果:不同浓度的亚砷酸钠或粉防己碱单用均可抑制MDA-MB-231细胞增殖（P＜0.01）;与单独用药相比,两药联合使用可显著增强细胞增殖抑制效果（P＜0.000 1）。两药联用可显著诱导MDA-MB-231细胞凋亡（P＜0.01）,细胞凋亡率呈现浓度依赖性递增,并出现细胞核染色质固缩。联合用药浓度为亚砷酸钠10 μmol/L+粉防己碱4 μg/ml时,S期细胞所占百分比显著增高（P＜0.05）;联合用药浓度为亚砷酸钠15 μmol/L+粉防己碱4.5 μg/ml时,G2/M期细胞所占百分比显著增高（P＜0.001）。联合用药后,凋亡相关蛋白PARP的表达显著上调（P＜0.000 1）;bcl-2的表达显著下调（P＜0.05）;p-GSK3β、GSK3β蛋白表达均显著上调（P＜0.000 1）。 结论:亚砷酸钠联合粉防己碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有增殖抑制作用,其机制与诱导细胞周期 S期、G2/M期阻滞、GSK3β蛋白水平上调及促进细胞凋亡有关,促凋亡作用与bcl-2蛋白水平下调、PARP蛋白水平上调有关。     

桔梗皂苷D诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

目的:研究来自桔梗的天然单体化合物桔梗皂苷D(platycodin D,PD)对高转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的影响,初步探索其可能的作用机制.方法:以不同浓度(0、2.5、5、10 μmol/L)PD处理乳腺癌MDA-MB-231细胞后,采用MTT法检测细胞增殖率并计算IC50值,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达水平.结果:PD呈剂量依赖性显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P＜0.01),作用72 h的IC50值为(7.30±2.67) μmol/L.与对照组相比,10 μmol/L的PD可显著促进MDA-MB-231细胞的凋亡(P＜0.05).PD激活了caspase家族蛋白,上调有活性的cleaved caspase-3、cleaved caspase-8和cleaved caspase-9的表达,下调无活性的caspase-8和caspase-9的表达;PD同时减少Bcl-2的表达,增加Bax的表达,使Bcl-2/Bax的比值降低.研究还发现PD使突变型P53蛋白的表达减少、E2F1的表达增加.结论:PD抑制乳腺癌细胞增殖具有明显的抗肿瘤效应,而诱导凋亡的发生可能是其发挥抗肿瘤效应的机制之一.