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1.
目的:研究YAP蛋白在结肠癌中的表达及临床意义, 并初步探讨其对结肠癌细胞增殖、侵袭的影响。方法:免疫组化检测YAP蛋白在25例结肠癌组织及配对正常组织中的表达,并分析其与结肠癌临床病理特征之间的关系;用Real-Time PCR和 Western blot验证YAP-shRNA慢病毒载体转染效率;生长曲线实验和MTT法检测下调YAP表达对结肠癌细胞SW480增殖的影响;Transwell实验检测下调YAP表达对结肠癌细胞SW480侵袭的影响;Western blot检测下调YAP表达对CyclinD1、E-cadherin及Vimentin蛋白的影响。结果:YAP在结肠癌组织中的表达显著高于正常结肠组织(P<0.05),并且与淋巴结转移密切相关(P<0.05);转染YAP-shRNA慢病毒载体的SW480细胞YAP的表达在mRNA 和蛋白水平明显降低(均P<0.05);下调YAP表达后结肠癌细胞增殖及侵袭明显减弱(均P<0.05);下调YAP 表达可抑制结肠癌细胞CyclinD1、E-cadherin及Vimentin蛋白的表达(均P<0.05)。结论:YAP在结肠癌组织中高表达,且与淋巴结转移相关,下调YAP表达可抑制结肠癌细胞增殖及侵袭能力,预示YAP在结肠癌恶性进展中具有重要的作用。 相似文献
2.
目的 探讨miR-34a对结肠癌细胞株SW480增殖、侵袭和迁移能力的影响及可能的作用机制。方法将miR-34a过表达慢病毒、空病毒载体转染SW480细胞,未做处理细胞作为空白对照组。Real-time PCR检测各组细胞内miR-34a的表达;CCK8法检测细胞增殖能力;划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot实验检测细胞内E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果 与空病毒载体组及空白对照组相比,转染组细胞中miR-34a的表达增高,且细胞增殖效率、侵袭和迁移能力降低(P<0.05),miR-34a使E-cadherin蛋白表达增加、Vimentin蛋白表达降低。结论 miR-34a可抑制结肠癌细胞SW480增殖、侵袭和迁移能力,并能影响E-cadherin和Vimentin的表达,miR-34a有望成为干预结肠癌转移和复发的分子靶点。 相似文献
3.
目的:探讨慢病毒介导的Notch1基因沉默对软骨肉瘤SW1353细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制。方法:将SW1353细胞分为对照组(未感染)、空载体组(LV-NC-shRNA慢病毒感染)和沉默组(LV-Notch1-shRNA慢病毒感染),RT-PCR和Western blot检测慢病毒的感染效果,MTT法和克隆形成实验检测各组细胞的增殖活力,Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力,Western blot检测PCNA、MMP-2和p-AKT蛋白的表达。结果:LV-Notch1-shRNA慢病毒感染使SW1353细胞中Notch1 mRNA和Notch1、PCNA、MMP-2、p-AKT蛋白的表达均明显降低(P<0.05),显著抑制了SW1353细胞的增殖和侵袭能力(P<0.05)。结论:Notch1基因沉默可抑制软骨肉瘤SW1353细胞增殖和侵袭,其作用机制可能与下调PCNA、MMP-2和p-AKT蛋白表达有关。 相似文献
4.
[摘要] 目的: 探讨shRNA 干扰骨形成蛋白和激活素的穿膜抑制剂(bone orphogenetic protein and activin membrane bound inhibitor, BAMBI)基因对人结肠癌SW480 细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法: 转染SW480 细胞sh-BAMBI成功后,实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting 检测BAMBI mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测SW480 细胞增殖能力,Hoechst33258 染色检测细胞凋亡情况,Transwell 实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测SW480 细胞迁移能力,Western blotting检测TGF-β/Smad2 通路相关蛋白的表达水平。结果: 转染成功后sh-BAMBI组中BAMBI的mRNA和蛋白水平均低于对照组(P<0.05);与对照组相比,sh-BAMBI 组细胞增殖率明显降低(P<0.05)、细胞凋亡率显著升高(P<0.01),同时其侵袭和迁移能力明显减弱(均P<0.05)。sh-BAMBI组TGF-β 蛋白水平和p-Smad2/Smad2 比值明显高于对照组(P<0.05)。结论: shRNA干扰BAMBI可诱导人结肠癌SW480 细胞凋亡并抑制细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与激活TGFβ/Smad2 通路有关。 相似文献
5.
目的研究利用RNA干扰技术抑制人结肠癌SW480细胞表皮生长因子受体(EGFR)基因的表达,并观察受抑制后SW480细胞体外生长情况的改变。方法利用脂质体将siRNA转染进入SW480细胞(野生型K-ras基因表达阳性),在细胞内形成双链siRNA,识别并降解EGFR mRNA。通过荧光定量RT-PCR检测EGFR mRNA的表达水平,Western blot检测EGFR蛋白的表达,MTT法检测SW480细胞的增殖抑制情况,流式细胞学检测细胞凋亡情况。结果转染EGFR395-siRNA和EGFR1499-siRNA的SW480细胞其EGFRmRNA及蛋白表达均较对照组明显降低(P<0.05);转染EGFR395-siRNA和EGFR1499-siRNA的SW480细胞增殖率较对照组降低(P<0.05),凋亡率增高(P<0.05)。结论 siRNA能有效抑制SW480细胞EGFR基因的表达,具有抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用。 相似文献
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CD44v3短发夹RNA对透明质酸诱导人结肠癌SW480细胞体外粘附和侵袭的抑制作用 总被引:1,自引:1,他引:1
目的:研究CD44v3的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对体外培养的人结肠癌SW480细胞CD44v3表达及透明质酸诱导的粘附侵袭行为的抑制作用。方法:设计和构建带有U6启动子的CD44v3基因特异性的shRNA干扰表达质粒,转染至SW480细胞,以RT-PCR和Western blot检测SW480细胞转染前后CD44v3表达,以平板粘附模型和Boyden小室模型检测SW480细胞转染前后粘附和侵袭能力。结果:和转染前相比,转染了RNA干扰表达质粒的SW480细胞CD44v3mRNA和蛋白表达、以及受透明质酸诱导而粘附于平板和穿过Boyden小室隔膜的细胞数皆显著减少(P<0.01)。结论:针对CD44v3的短发夹RNA能显著抑制透明质酸诱导人结肠癌SW480细胞体外粘附和侵袭行为。 相似文献
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目的:研究KIF20A对胶质瘤U87细胞系增殖、侵袭、迁移、凋亡及细胞周期分布的影响。方法:利用 RNA干扰技术下调胶质瘤细胞系 U87中 KIF20A 的表达。RT-qPCR 和 Western blot 分别检测 KIF20A 在mRNA 和蛋白水平上的表达。CCK-8 实验检测 U87细胞增殖能力的变化,Transwell 实验检测U87细胞迁移及侵袭能力的变化,流式细胞术检测 U87细胞凋亡及细胞周期的变化。结果:RT-qPCR和Western blot 结果显示 siRNA-KIF20A显著下调 KIF20A 的表达,CCK-8和Transwell 实验显示下调 KIF20A 的表达显著抑制了U87细胞的增殖、迁移及侵袭能力,流式细胞术结果显示下调 KIF20A 的表达显著促进了U87细胞的凋亡,诱导细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:下调KIF20A的表达抑制胶质母细胞瘤细胞的增殖、迁移及侵袭,促进胶质母细胞瘤细胞的凋亡并诱导细胞周期G0/G1期阻滞。 相似文献
8.
《中华肿瘤杂志》2020,(5)
目的探讨叉头转录因子O亚族6(FoxO6)对结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其分子机制。方法将FoxO6 siRNA转染结直肠癌细胞HCT116和SW480, 干扰FoxO6表达。构建过表达载体pcDNA.3.1-c-Myc, 转染FoxO6沉默的HCT116和SW480细胞, 过表达c-Myc。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot法检测HCT116和SW480细胞中FoxO6、c-Myc、p21的mRNA和蛋白表达量, 溴脱氧尿苷(BrdU)法检测细胞增殖能力, Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。将FoxO6 shRNA慢病毒(LV-FoxO6)转染的SW480细胞注射至BAL b/c裸鼠右侧腋窝皮下构建荷瘤模型, 注射后第10、13、16、19、22、25天测量瘤体体积。结果正常结肠细胞FHC、结肠癌细胞系HCT116和SW480中FoxO6的mRNA表达水平分别为0.91±0.04、1.72±0.07和2.03±0.06, 蛋白表达水平分别为0.7±0.04、1.35±0.08和1.56±0.07, 结肠癌细胞系HCT116和SW480中... 相似文献
9.
目的:研究联合转染PTEN与PINCH siRNA对结直肠癌SW620细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法:在结直肠癌SW620细胞中转染pcDNA-PTEN或/和si-PINCH,qRT-PCR检测PINCH和PTEN mRNA的表达,Western blot检测PINCH、PTEN、CDK1、MMP-2、Bcl-2和 Bax蛋白表达, MTT法、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞增殖、侵袭能力和凋亡率。结果:在结直肠癌SW620细胞中联合转染pcDNA-PTEN和si-PINCH后,PTEN的mRNA和蛋白表达量显著升高(P<0.05),PINCH的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05);转染pcDNA-PTEN或/和si-PINCH均可抑制SW620细胞增殖和侵袭并促进细胞凋亡,抑制SW620细胞内增殖蛋白CDK1、侵袭蛋白MMP-2和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进凋亡蛋白Bax的表达;联合转染pcDNA-PTEN和si-PINCH比单独转染pcDNA-PTEN或si-PINCH效果更显著。结论:联合转染pcDNA-PTEN和si-PINCH可抑制结直肠癌SW620细胞增殖和侵袭并促进细胞凋亡,且比单独转染效果更显著。 相似文献
10.
生存素siRNA对结肠癌细胞凋亡增殖和侵袭性的影响 总被引:2,自引:1,他引:1
目的:研究siRNA表达质粒沉默Survivin基因的效率及其对大肠癌细胞株SW480凋亡、增殖和侵袭性的影响。方法:构建Survivin基因的siRNA表达质粒(pRNAT/sur-siRNA),用Westeron-blot和半定量RT-PCR研究该表达质粒转染SW480后Survivin蛋白和mRNA表达的变化,流式细胞仪检测Survivin基因沉默后SW480细胞凋亡的变化,MTT法检测SW480细胞体外增值的变化;细胞侵袭性实验研究SW480细胞的侵袭性变化。结果:针对Survivin的siRNA的表达质粒下调大肠癌SW480细胞株Survivin蛋白和mRNA的表达水平,分别为85.0%,80.0%;pRNAT/sur-siRNA转染SW480后,SW480细胞凋亡率为16.9%;细胞增殖抑制率为37.4%,与对照组相比有显著差异(P<0.01);细胞侵袭实验示pRNAT/sur-siRNA/SW480细胞、pRNAT/SW480、SW480细胞的细胞穿透数分别为153±66、505±65、578±98个,(P<0.01)。结论:针对Survivin的siRNA可以显著降低Survivin的表达,从而抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭,促进肿瘤细胞的凋亡。 相似文献
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目的:研究和探讨川芎嗪对人外阴鳞癌细胞SW962细胞功能(增殖、凋亡、转移、侵袭)的影响以及机制。方法:将不同浓度川芎嗪配置而成的培养基干预处理外阴鳞癌SW962细胞。MTT法检测川芎嗪梯度浓度变化和处理时间变化对SW962细胞增殖和生存率的影响;流式细胞术检测川芎嗪梯度浓度变化对SW962细胞凋亡的影响;Transwell小室实验检测川芎嗪梯度浓度变化对SW962细胞转移和侵袭的影响;划痕实验检测川芎嗪梯度浓度变化对SW962细胞转移的影响;Western blot电泳法检测川芎嗪对PTEN、AKT、p-AKT、cyclinD1蛋白表达的影响。结果:川芎嗪显著抑制SW962细胞增殖(P<0.05),诱导SW962细胞凋亡增加细胞凋亡率(P<0.05),抑制SW962细胞转移和侵袭(P<0.05)。Western blot结果显示,川芎嗪处理细胞可以增加抑癌基因PTEN的表达,降低p-AKT和cyclinD1蛋白的表达(P<0.05)。结论:川芎嗪可以通过影响PTEN/AKT/cyclinD1信号通路抑制外阴鳞癌细胞SW962的增殖,诱导凋亡,抑制SW962细胞转移和侵袭。 相似文献
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目的:探讨miR-520a对结肠癌生物学行为的影响及其对RAB22A表达的调控。方法:应用分子生物学技术构建miR-520a的表达质粒(miR-520a)及抑制剂(anti-miR-520a),应用MTT和Transwell探讨miR-520a对结肠癌细胞株增殖和侵袭的影响。实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测转染miR-520a对RAB22A的mRNA和蛋白表达水平的影响,构建RAB22A的野生型及突变型3'-UTR报告基因,报告基因分析miR-520a对RAB22A的调控。结果:miR-520a可以显著抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭。蛋白印迹显示miR-520a可以显著抑制RAB22A的蛋白表达水平,而对mRNA表达无显著影响。报告基因分析显示miR-520a能够下调RAB22A的野生型3'-UTR报告基因的荧光表达,而对突变型报告基因的荧光表达影响不大。结论:miR-520a可能通过转录后调控癌基因RAB22A的表达抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭,在结肠癌中发挥抑癌基因功能。 相似文献
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目的:观察脂质体介导的c—myc反义寡核苷酸对表达FHIT基因的结肠癌细胞增殖及凋亡作用的影响。方法:用脂质体法将重组FHIT基因的PRC/CMV质粒和空载体质转染到人结肠细胞株SW480,随后分别转染c—myc反义寡核苷酸。Western blot法检测细胞FHIT和c—myc的表达;MTF法检测细胞的增殖;AO/EB染色法和流式细胞分析技术检测细胞的凋亡。结果:转染FHIT基因后,SW480细胞有明显的FHIT蛋白表达而转染空载体的细胞未检测到FHIT蛋白表达。C—myc反义寡核苷酸转染后,对SW480细胞c—myc的表达有明显的抑制作用(P〈0.01);对FHIT+/-SW480细胞的增殖均有明显的抑制作用(P〈0.01),且对FHIT+SW480细胞的抑制作用明显强于FHIT—SW480细胞(P〈0.05)。同时,c-myc反义寡核苷酸对FHIT+/-SW480细胞的凋亡均有明显的促进作用,对FHIT+SW480细胞凋亡的促进作用明显强于FHIT—SW480细胞(P〈0.05)。结论:FHIT基因的表达和癌基因c—myc的表达抑制共同作用可以发挥较强的抗肿瘤细胞的效果,为多基因联合干预治疗肿瘤奠定了理论基础。 相似文献
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目的:探讨双肾上腺皮质激素样激酶1(DCLK1)对结直肠癌耐药细胞化疗敏感性的影响及机制。方法:采用实时定量PCR和Western blot方法检测人结直肠癌细胞系HT29、SW480及其奥沙利铂(OXA)耐药株HT29/OXA和SW480/OXA中DCLK1的表达。采用siRNA干扰HT29/OXA和SW480/OXA细胞中DCLK1的表达,并用不同浓度OXA干预细胞,CCK-8法检测细胞增殖及其对OXA的敏感性,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞的Caspase-3活性,Western blot检测细胞中DCLK1、Bax、Bcl-2、多药耐药蛋白1(MDR1)、P-糖蛋白(P-gp)等蛋白的表达。结果:与亲本细胞系比较,DCLK1在HT29/OXA和SW480/OXA细胞中的mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P<0.05)。转染DCLK1 siRNA(si-DCLK1)后,HT29/OXA和SW480/OXA细胞的增殖活性均显著降低(P<0.05),且它们对OXA的敏感性显著增加(P<0.05);转染si-DCLK1后,HT29/OXA和SW480/OXA细胞的凋亡显著增加(P<0.05),伴随Caspase-3活性上调(P<0.05),Bax蛋白表达上调(P<0.05),Bcl-2蛋白表达下调(P<0.05);转染si-DCLK1后,HT29/OXA和SW480/OXA细胞中MDR1和P-gp的蛋白表达均显著下调(P<0.05)。结论:DCLK1可能通过调控Bax/Bcl-2以及MDR1和P-gp的表达影响结直肠癌细胞的化疗敏感性。 相似文献
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目的 探讨Tspan8基因敲除联合安罗替尼对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 采用CRISPR/Cas9技术构建质粒并敲除SW480细胞的Tspan8基因,Western blot法检测敲除效果。采用MTT法计算安罗替尼的半数抑制浓度(IC50)。实验分为对照组、安罗替尼组、Tspan8敲除组和联合组。采用细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室法和流式细胞术检测各组细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡情况;Western blot法检测安罗替尼对SW480细胞中Tspan8表达水平的影响。结果 在Tspan8敲除组中,SW480-KO-Ⅲ细胞的敲除效率最高,用于后续实验。不同浓度的安罗替尼在不同作用时间均能抑制SW480细胞的增殖(P<0.01),且呈浓度依赖性和时间依赖性(P<0.01),根据IC50选择14 μmol/L为后续实验浓度。与对照组相比,安罗替尼组、Tspan8敲除组和联合组的细胞增殖、迁移及侵袭能力显著降低,细胞凋亡水平明显提高(P<0.05),且联合组的上述变化较安罗替尼组或Tspan8敲除组更为显著(P<0.05)。与对照组相比,安罗替尼组SW480细胞的Tspan8表达水平明显下降(P<0.01)。结论 Tspan8基因敲除联合安罗替尼能协同抑制SW480细胞增殖、迁移、侵袭,并促进其凋亡。 相似文献
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目的 探讨AP-2α基因对人类结肠癌SW480细胞体外增生及侵袭能力的影响.方法 构建PODNA3.1(+)-AP-2α真核表达载体,利用脂质体介导pcDNA3.1(+)-AP-2α和pcDNA3.1(+)转染5W480细胞,并以正常SW480细胞作为空白对照;采用RT-PCR与Western blotting分别检测转染48 h后各组细胞中AP-2αmRNA与蛋白的表达情况;采用平板克隆、软琼脂克隆形成试验以及Transweil侵袭试验,分别检测各组细胞体外增生及侵袭能力.结果 SW480细胞内源性AP-2α蛋白表达缺失;转染AP-2α基因后,在SW480细胞中可检测到高水平的AP-2αmRNA及蛋白,细胞克隆形成率降低(P<0.05),软琼脂克隆体积小且数量少,细胞侵袭能力下降(P<0.05).结论 转染AP-2α基因可以抑制人类结肠癌SW480细胞的体外恶性增生以及侵袭能力. 相似文献
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目的:以携带shRNA 片段的腺病毒为载体,对结肠癌细胞SW480 中Survivin基因的表达进行干扰,研究其对肿瘤细胞中Survivin基因沉默效果及对细胞周期、凋亡和增殖的影响。方法:将构建好的携带Survivin-shRNA 片段腺病毒,体外转染结肠癌细胞株SW480。以EGFP为报告基因,采用流式细胞计数测定不同感染复数(MOI)下的转染效率,选取适当病毒浓度进行下一步实验。通过RT-PCR 和Western blot检测基因沉默后结肠癌细胞内Survivin mRNA和蛋白的表达水平;在Annexin V-FITC 和PI染色后通过流式细胞术检测并分析Survivin基因沉默后细胞周期和凋亡的变化;同时采用噻唑蓝(MTT)法、克隆增殖实验对细胞不同时期增殖活性进行观察,明确对细胞增殖的抑制时效性。结果:腺病毒转染后MOI 值在0~50时,剂量与转染效率成正比,确定最佳MOI 值为50并进行后续实验;shRNA 干扰后细胞内Survivin mRNA和蛋白表达水平降低,较对照细胞组差异有统计学意义(P<0.01)。 流式细胞仪检测结果显示基因沉默后细胞凋亡率升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。 同时基因沉默后,细胞周期也有明显变化,表现为G1/S 期细胞增多和G2/M期细胞减少,与对照细胞组相比差异有统计学意义(P<0.05)。 MTT 和单克隆平板实验均显示Survivin基因的沉默,对细胞的增殖和生长均具有明显抑制作用(P<0.05)。 结论:采用腺病毒对结肠癌进行靶向Survivin基因的shRNA 干扰,能有效降低目的基因的表达。其介导的Survivin基因的沉默,可以有效的诱导结肠癌细胞凋亡,同时Survivin基因可以通过抑制细胞G1/S 期转化来阻止细胞分裂,抑制细胞生长。 相似文献