SOX家族在脑胶质瘤中的表达及作用

脑胶质瘤是神经系统常见的恶性肿瘤.SOX家族的许多基因与脑胶质瘤的发生发展密切相关,其中SOX2、SOX4、SOX7、SOX9基因在脑胶质瘤中均有异常表达.SOX2基因在脑胶质瘤组织中高表达,与脑胶质瘤的恶性分级呈正相关,并且与众多因子协调促进脑胶质瘤的发生、发展;SOX4基因在脑胶质瘤中既是致癌基因又是抑癌基因,且能对多种因子进行调控;SOX7作为一种肿瘤抑制基因,在脑胶质瘤组织中低表达,通过调节相关因子及信号通路抑制脑胶质瘤的发生;SOX9基因在脑胶质瘤组织中高表达,与多种因子协调促进脑胶质瘤的发生及转移,是判断脑胶质瘤患者预后的重要因素.     

miR-10b对脑胶质瘤恶性生物学行为的调控及其机制

脑胶质瘤（胶质瘤）具有高发病率、高病死率、高复发率及低治愈率的特点,胶质瘤细胞的无限增殖能力和高侵袭迁移 能力是胶质瘤治疗的难点,近年来微小核糖核酸（microRNA,miRNA）的出现为研究胶质瘤的发生及侵袭迁移机制提供了新的思 路。miRNA是一类内生的、长约20~24个核苷酸的非编码小RNA,可通过与其靶基因mRNA的3’UTR区域互补结合,从而在转 录后水平调控基因的表达。多项研究证实,miR-10b在胶质瘤组织和胶质瘤患者血清中高表达,并影响患者预后情况。miR-10b 可能通过影响其靶基因如PTEN、CDKN、P53、HOXD10等的表达,参与胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移等过程。深入研究miR- 10b对胶质瘤的调控作用及其机制,对该病的诊断、治疗和预后评估等均具有重要意义。     

SOX9基因沉默对膀胱癌EJ细胞株生物学特性的影响及其机制研究

目的 探讨SOX9基因沉默对膀胱癌EJ细胞株增殖、凋亡及迁移的影响及其潜在的作用机制.方法 采用SOX9 siRNA转染EJ细胞,抑制SOX9基因的表达,并以非特异性siRNA转染EJ细胞为对照.采用Edu细胞荧光染色法检测SOX9基因沉默对EJ细胞增殖的影响,Hoechst 33342细胞染色法检测SOX9基因沉默对EJ细胞凋亡的影响,划痕愈合实验检测SOX9基因沉默对EJ细胞迁移的影响,蛋白质免疫印迹(Western Blot)实验检测PTEN/AKT信号通路相关蛋白的表达水平.结果 对照组的SOX9 mRNA表达水平为(100.0±0.5)%,明显高于SOX9沉默组的(14.2±1.3)%,差异有统计学意义(P﹤0.01).转染72 h后,对照组细胞在450 nm激发光下的OD值为(4.0±0.3),明显高于SOX9沉默组的(2.3±0.2),差异有统计学意义(P﹤0.01).Edu细胞荧光染色结果显示,转染48 h后,对照组的细胞相对增殖率为(100.0±2.3)%,明显高于SOX9沉默组的(42.2±3.2)%,差异有统计学意义(P﹤0.01).Hoechst 33342免疫荧光染色结果表明,对照组的细胞凋亡率为(7.2±1.2)%,明显低于SOX9沉默组的(33.2±2.4)%,差异有统计学意义(P﹤0.01).划痕愈合实验表明,对照组的相对划痕愈合比例为(100.0± 1.9)%,明显高于SOX9沉默组的(56.6±4.3)%,差异有统计学意义(P﹤0.01).SOX9 siRNA转染EJ细胞1 h后,采用Western Blot检测PTEN、AKT及p-AKT蛋白的表达水平.结果显示,SOX9沉默组的PTEN蛋白表达水平高于对照组,p-AKT蛋白表达水平低于对照组.结论 沉默SOX9基因能够明显抑制膀胱癌EJ细胞株的增殖和迁移,并促进细胞凋亡,PTEN/AKT信号通路的激活可能与之有关.     

非小细胞肺癌血浆miR-223、miR-93和miR-218的表达及其临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者血浆miR-223、miR-93和miR-218水平,分析三者与NSCLC患者临床病理学特征的关系。方法 收集本院收治85例NSCLC患者未经治疗前的血浆标本（NSCLC组）,采用实时定量RT-PCR（qRT-PCR）法检测血浆中miR-223、miR-93和miR-218水平,收集NSCLC患者的临床病理学参数,比较三者不同水平的临床病理参数并分析三者间的关系,采用受试者工作特征曲线（ROC）评价血浆miR 223、miR 93和miR 218水平检测在NSCLC诊断中的临床价值。同时选取同期的90例健康体检者的血浆标本作对照（对照组）。结果 NSCLC组的血浆miR-223和miR-93水平高于对照组,miR-218水平低于对照组,差异均有统计学意义（P均＜0.05）;miR-223水平与TNM分期、肿瘤大小有关,miR-93水平与组织学类型、淋巴结转移有关,miR-218水平与肿瘤大小、分化程度有关,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）;NSCLC患者血浆中miR-223水平与miR-93呈正相关（r=0.411）,miR-223、miR-93分别与miR-218呈负相关（r=-0.361,r=-0.451）,差异均有统计学意义（P＜0.05）;血浆miR-223、miR-93和miR-218诊断NSCLC的AUC、灵敏度和特异度分别为0.926、95.2％和87.1％,0.912、88.4％和92.5％,0.941、92.7％和84.4％,均高于CEA的0.774、75.1％和66.2％,且miR-223、miR-93和miR-218联合诊断的效能高于单独检测。结论 NSCLC患者血浆中miR-223和miR-93呈高表达,miR-218呈低表达,与临床病理学参数有关,且在NSCLC诊断中有一定的价值,可用于辅助NSCLC的诊断和病情评估。     

miR-124通过靶向调控AURKA抑制胶质瘤细胞的增殖

目的:探索miR-124及AURKA对胶质瘤细胞增殖能力的影响并探索其机制.方法:通过PCR测定胶质瘤组织及非肿瘤组织中miR-124、AURKA的表达水平;将携带miR-124的脂质体miR-124 mimic、空载体miR-124转染入胶质瘤细胞系LN-229和T98G中,吸光度观察miR-124对胶质瘤细胞系LN...     

miR-369靶向调节SOX4表达对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:观察微小RNA（miRNA,miR）-369通过调节SOX4对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡的影响。方法:miR-369体外模拟物（mimics）转染,构建miR-369上调表达模型,以转染阴性对照链为对照组,CCK-8法和流式细胞技术分别检测细胞增殖率和凋亡率变化;Real-time PCR法检测SOX4 mRNA表达水平;双荧光素酶活检检测证实miR-369与SOX4相互作用关系;Western-blot法检测不同组间SOX4及Bcl-2家族相关蛋白表达水平变化。结果:miR-369 mimics转染后,MG-63细胞中miR-369表达水平较对照组明显提高(P=0.009);miR-369 mimic转染后24 h及48 h后细胞相对存活率均明显低于对照组;流式细胞仪结果显示mimic组细胞凋亡率较对照组明显提高（P=0.031）;Real-time PCR和Western blot实验分别证实miR-369 mimic转染后,SOX4在mRNA和蛋白水平表达均明显抑制;而Bcl-2家族相关蛋白表达水平发生明显变化。结论:miR-369表达上调可以抑制骨肉瘤细胞增殖并诱导凋亡,这些作用与靶向下调SOX4表达有关。     

CircMATR3调节miR-129-5p/SOX2轴对鼻咽癌细胞CNE1恶性生物学行为的影响

目的:探讨CircMATR3调节miR-129-5p/SOX2轴对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:以鼻咽癌细胞系CNE1为研究对象,将CNE1细胞分NC组、si-NC组、si-CircMATR3组、miR-NC组、miR-129-5p mimic组、si-CircMATR3+inhibitor NC组、si-CircMATR3+miR-129-5p inhibitor组、si-SOX2组。RT-qPCR检测细胞中CircMATR3、miR-129-5p、SOX2 mRNA的表达;Western blot检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证CircMATR3与miR-129-5p、miR-129-5p与SOX2之间的靶向关系;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Hoechst33342实验观察细胞形态学变化;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡。结果:CircMATR3与miR-129-5p、miR-129-5p与SOX2之间存在靶向关系;沉默CircMATR3或过表达miR-129-5p或沉默SOX2可以抑制鼻咽癌细胞CNE1的克隆形成、侵袭...     

miR-135a 通过下调SOX2 抑制喉癌Hep-2 细胞的恶性生物学行为和增强对奥沙利铂的敏感性

[摘要] 目的：探讨敲降miR-135a 对人喉癌上皮Hep-2 细胞的恶性生物学行为和奥沙利铂敏感性的影响。方法：收集2018年1 月至2018 年6 月郑州大学附属南阳医院南阳市中心医院行喉癌切除术10 例患者的喉癌组织和癌旁组织标本。采用qPCR检测喉癌组织和Hep-2 细胞中miR-135a 的表达水平。miR-135 inhibitor 转染喉癌Hep-2 细胞后,采用CCK-8 检测Hep-2 细胞活性,集落形成实验检测Hep-2 细胞集落形成能力,Transwell 实验检测Hep-2 细胞的侵袭及迁移能力,WB实验检测Hep-2 细胞中SOX2蛋白的表达水平。0.5、1.0、1.5、2.0 μmol/L的奥沙利铂处理已转染miR-135 inhibitor 的Hep-2 细胞,CCK-8 实验检测Hep-2 细胞的增殖活性,Annexin-V-FITC/PI 染色流式细胞术检测Hep-2 细胞的凋亡率。采用miR-135a inhibitor 质粒、对照pcDNA 空载体（SOX2-Con）质粒、pcDNA-SOX2（SOX2-OE）质粒共转染Hep-2 细胞,构建miR-135a inhibitor+SOX2-Con 组和miR-135a inhibitor+SOX2-OE组,检测此2 组细胞的增殖活性、集落形成能力、侵袭及迁移能力。结果：与癌旁组织比较,喉癌组织中miR-135a表达水平显著升高（P<0.01）;与正常NHP细胞比较,miR-135a 在Hep-2 细胞中表达水平明显上调（P<0.01）;转染miR-135a inhibitor导致Hep-2 细胞中miR-135a 表达水平明显降低（P<0.01）。敲降miR-135a 明显降低Hep-2 细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移、侵袭和SOX2 表达（均P<0.01）;明显增强细胞对奥沙利铂敏感性（P<0.01）;与miR-135a inhibitor+SOX2-Con 组比较,miR-135a inhibitor+SOX2-OE 组的Hep-2 细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移与侵袭能力均明显增加（均P<0.01）;同时,用不同浓度的奥沙利铂处理此2 组细胞,相对于miR-135a inhibitor+SOX2-Con组,miR-135a inhibitor+SOX2-OE组的Hep-2 细胞存活率显著升高（P<0.01）。结论：敲降miR-135a 可能通过下调转录因子SOX2 的表达抑制Hep-2 细胞的恶性生物学行为,并增强其对奥沙利铂的敏感性。     

CRNDE affects the malignant biological characteristics of human glioma stem cells by negatively regulating miR-186

The long non-coding RNA Colorectal neoplasia differentially expressed (CRNDE) is a novel gene that activated early in colorectal neoplasia, but it is also up-regulated in many other solid tumors. Herein, the function and underlying mechanism of CRNDE in regulating glioma stem cells (GSCs) were investigated. We found that CRNDE expression was up-regulated while miR-186 expression was down-regulated in GSCs. Overexpression of CRNDE could promote the cellular proliferation, migration, invasion and inhibit the apoptosis in GSCs. Overexpression of miR-186 exerted functions of inhibiting the proliferation, migration and invasion of GSCs and promoting apoptosis. And CRNDE decreased the expression levels of XIAP and PAK7 by binding to miR-186 and negatively regulating it. In addition, miR-186 binded to XIAP and PAK7 3′UTR region, and decrease the expression of them, thus regulating the expression levels of downstream target proteins such as caspase 3, BAD, cyclin D1 and MARK2. The in vivo effect of CRNDE and miR-186 showed that the tumor formation rate was minimum in tumor-bearing nude mice with the knockdown of CRNDE and the overexpression of miR-186. In conclusion, CRNDE played an oncogenic role of GSCs through the negative regulation of miR-186. Both CRNDE and miR-186 could be regarded as potential targets in the glioma therapy.     

miR-30c Impedes Glioblastoma Cell Proliferation and Migration by Targeting SOX9

miR-30c has been acknowledged as a tumor suppressor in various human cancers, such as ovarian cancer, gastric cancer, and prostate cancer. However, the role of miR-30c in glioblastoma (GBM) needs to be investigated. In our study, we found that the expression of miR-30c was significantly downregulated in GBM tissues and cell lines. We found that overexpression of miR-30c inhibited cellular proliferation of GBM cells in vitro and in vivo. More GBM cells were arrested in the G₀ phase after miR-30c overexpression. Moreover, we showed that miR-30c overexpression suppressed the migration and invasion of GBM cells. Mechanistically, we found that SOX9 was a direct target of miR-30c in GBM cells. Overexpression of miR-30c inhibited the mRNA and protein levels of SOX9 in GBM cells. Moreover, there was a negative correlation between the expression of miR-30c and SOX9 in GBM tissues. Finally, we showed that restoration of SOX9 in GBM cells reversed the proliferation, migration, and invasion of GBM cells transfected with miR-30c mimic. Collectively, our results demonstrated that miR-30c suppressed the proliferation, migration, and invasion of GBM cells via targeting SOX9.     

替莫唑胺通过调控miR-216a/PRKCA抑制胶质瘤细胞U251增殖和侵袭作用的研究

目的:探讨替莫唑胺抑制胶质瘤细胞U251增殖和侵袭的作用,推测其作用机制是通过微小RNA-216a（microRNA-216a,miR-216a）/蛋白激酶Cα(protein kinase C-alpha,PRKCA)进行调控。方法:体外培养胶质瘤细胞U251,用不同剂量替莫唑胺染毒48 h后,构建野生型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体及检测荧光素酶活性,检测替莫唑胺对胶质瘤细胞U251增殖和侵袭的影响及miR-216a和PRKCA表达的影响。结果:miR-216a mimics使野生型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体的活性下降了47.52%,差异具有统计学意义（P＜0.05）;miR-216a mimics使突变型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体的活性下降不显著,差异无统计学意义（P＞0.05）。与空白对照组比较,低、中、高剂量组胶质瘤细胞U251增殖率、侵袭细胞数、PRKCA mRNA相对表达量和PRKCA蛋白表达量均降低,miR-216a mRNA相对表达量均增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;随着替莫唑胺剂量的增加,胶质瘤细胞U251增殖率、侵袭细胞数、PRKCA mRNA相对表达量和PRKCA蛋白表达量随之降低,miR-216a mRNA相对表达量随之增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:替莫唑胺可以通过促进miR-216a的表达而抑制PRKCA的表达,降低胶质瘤细胞U251增殖和侵袭。     

miR-147对胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:比较胶质瘤患者胶质瘤组织和瘤旁组织中miR-147表达水平的差异性,进一步分析miR-147与胶质瘤细胞生物学活性的相关性。方法:通过实时荧光定量PCR检测65例胶质瘤患者瘤组织和瘤旁组织中miR-147的表达水平;采用Lipofectamine 2000转染法转染胶质瘤细胞,分为miR-147 mimics组和NC组,检测两组转染效率;进一步通过CCK-8实验、流式细胞实验和Transwell实验比较两组细胞生物活性。结果:胶质瘤组织中miR-147表达水平显著低于瘤旁组织;与NC组比较,miR-147 mimics组细胞不论是增殖能力还是侵袭能力都明显降低,但是,miR-147 mimics组的细胞凋亡率升高。结论:胶质瘤组织中存在miR-147低表达的现象。miR-147在胶质瘤细胞中表达升高能够抑制细胞的增殖能力、降低其侵袭能力,并促使更多的细胞发生晚期凋亡。miR-147可能在胶质瘤中扮演着抑癌基因的重要角色。     

Mir-1247 Affects the Proliferation,Invasion and Apoptosis of Osteosarcoma Cells through SOX9

Objective: This study aimed to explore the miR-1247-mediated promotion of osteosarcoma (OS) cell proliferation by SOX9. Methods: We recruited 97 OS patients admitted to our hospital (the observation group, OG) and 82 healthy people undergoing physical examinations (the control group, CG) over the same period into this study. The expression of miR-1247 and SOX9 in human OS cells in vitro was tested to determine the effect of miR-1247 and SOX9 on OS and to analyze the relationship between miR-1247 and SOX9. Results: We detected lowly expressed miR-1247 and highly expressed SOX9 in the peripheral blood of OS patients (P < 0.05). Both miR-1247 and SOX9 showed good performances in diagnosing OS. OS cells (143B cells) in the miR-1247-mimics group showed markedly lower cell proliferation and invasion rates and higher apoptosis rates than cells in the miR-1247-inhibitor group and the miR-NC group (P < 0.05). 143B cells in the sh-SOX9 group showed higher proliferation and invasion rates and lower apoptosis rates than cells in the si-SOX9 group and the NC group (P < 0.05). SOX9 protein concentrations were lower in cells in the miR-1247-mimics group than in cells in the miR-1247-inhibitor group and the miR-NC group (P < 0.05), with higher SOX9 protein concentrations in the miR-1247-inhibitor group than in the miR-NC group (P < 0.05). Conclusion: MiR-1247 is lowly expressed in OS. It can promote the proliferation and invasion of OS cells and accelerate the progression of OS by mediating SOX9.     

miR-223及Hsp 70在人乳腺浸润性导管癌及癌旁组织中的表达研究

目的:探讨miR-223及Hsp 70在乳腺浸润性导管癌患者肿瘤组织和癌旁组织中的表达差异。方法:使用Real-time PCR 检测肿瘤组织和癌旁组织miR-223的表达水平,并对乳腺浸润性导管癌患者的肿瘤组织及癌旁组织切片,并且对组织中Hsp 70进行免疫组化染色后,进行观察和分析。结果:肿瘤组织中的miR-223表达水平显著高于对照癌旁组织(P＜0.01)。而Hsp 70在大部分的浸润性导管癌的癌细胞及组织中表达显著高于癌旁的增生性导管及正常导管上皮。结论:miR-223与Hsp 70表达存在一定的正相关性,并为设计乳腺癌新的靶向治疗策略提供了新的可能。     

miR-9-5p靶向FGF9抑制胃癌细胞迁移侵袭的作用机制

目的:探讨miR-9-5p在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞株SGC7901、AGS细胞迁移和侵袭影响的作用机制。方法:real-time PCR和Western blot检测癌旁组织、胃癌组织及其细胞系中miR-9-5p和FGF9的表达；Transwell小室检测过表达miR-9-5p或敲除FGF9对SGC7901和AGS细胞迁移和侵袭能力的影响；TargetScan在线分析、双荧光素酶报告基因和Western blot实验验证miR-9-5p和FGF9的靶向关系；将转染后的SGC7901细胞分为对照（NC）组和实验（miR-9-5p）组接种于裸鼠右侧腋窝皮下，观察记录裸鼠成瘤情况并绘制生长曲线。结果:与癌旁组织相比，胃癌组织及其细胞系中miR-9-5p表达下调、FGF9表达上调（P＜0.05）；过表达miR-9-5p或敲除FGF9能抑制SGC7901、AGS细胞迁移和侵袭；TargetScan在线分析、双荧光素酶报告基因和Western blot实验表明miR-9-5p能调控FGF9表达；miR-9-5p组细胞成瘤速度较NC组慢（P＜0.05），肿瘤体积及重量小（P＜0.05）。结论:miR-9-5p在胃癌组织中表达下调，过表达miR-9-5p可抑制FGF9表达，从而抑制胃癌细胞的迁移和侵袭，减缓肿瘤生长。     

miR-34调控c-Jun蛋白对甲状腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨miR-34调控c-Jun蛋白对甲状腺癌细胞生物学行为的影响及其机制。方法:qPCR检测不同甲状腺癌细胞株中miR-34和c-Jun的表达水平;双荧光素酶实验检测miR-34和c-Jun的相互关系;Hoechst染色实验检测miR-34对甲状腺癌细胞凋亡的影响;MTT增殖实验检测miR-34对甲状腺癌细胞增殖的影响;Transwell侵袭实验检测miR-34和c-Jun对甲状腺癌侵袭能力的影响。结果:与其他甲状腺癌细胞株相比,FTC-133甲状腺癌细胞中miR-34表达明显较高,c-Jun表达明显较低;双荧光素酶实验显示miR-34可以调控c-Jun蛋白表达水平,Hoechst染色实验显示miR-34可以抑制甲状腺癌的凋亡,c-Jun可以逆转其作用;MTT增殖实验和Transwell侵袭实验显示miR-34可以促进甲状腺癌细胞的增殖和侵袭能力,c-Jun可以逆转其作用。结论:miR-34可以靶向c-Jun蛋白影响甲状腺癌的生物学行为。     

miR-21通过靶向SOX2增强胃癌细胞的迁移能力

目的:探讨miR-21在胃癌细胞系中对SOX2的调控作用及其对胃癌细胞迁移的影响。方法:在胃癌细胞系AZ-521、AGS中通过转染miR-21 mimic或者miR-21 antagomir构建miR-21过表达和低表达模型,RT-qPCR检测转染效果,并通过蛋白免疫印迹法检测SOX2在转染细胞中表达的变化。构建miR-21双荧光素酶报告基因,在工具细胞HEK293T中检验miR-21是否通过直接结合SOX2的3′-UTR区域来对其实现调控。应用Transwell迁移实验检测miR-21及SOX2对胃癌细胞迁移能力的影响。结果:miR-21直接结合于SOX2的3′-UTR区域来抑制SOX2在胃癌细胞系中的表达。迁移实验发现上调miR-21或者下调SOX2都能促进胃癌细胞的迁移。结论:miR-21可促进胃癌细胞的迁移能力,其机制可能通过抑制SOX2的表达而实现。