沉默CXCR4的表达逆转肺癌细胞顺铂耐药

目的:探讨沉默CXCR4对肺癌细胞顺铂耐药的影响,并研究其分子作用机制。方法:利用RT-qPCR测定肺癌耐药（A549/DDP）及药物敏感细胞株（A549）中CXCR4 mRNA的表达水平;利用LipofectamineTM 2000将siRNA-CXCR4转染至肺癌耐药细胞株中,RT-qPCR及蛋白质印迹法（Western blot）验证siRNA对CXCR4基因的靶向沉默效率;利用CCK-8法检测沉默CXCR4后肺癌耐药细胞的增殖活性;利用流式细胞仪测定沉默CXCR4后肺癌耐药细胞的凋亡率;利用MTT法测定沉默CXCR4后肺癌耐药细胞对顺铂的敏感性;利用Western blot实验测定沉默CXCR4后CYP1B1蛋白的表达水平。结果:RT-qPCR实验结果显示,肺癌耐药细胞株A549/DDP中CXCR4 mRNA的表达量显著高于药物敏感细胞株（P＜0.01）;体外转染siRNA-CXCR4可明显下调A549/DDP细胞株中CXCR4的表达（P＜0.001）;CCK-8实验结果显示,沉默CXCR4的表达抑制了A549/DDP细胞的增殖活性（P＜0.01）;流式细胞仪实验结果显示,沉默CXCR4的表达促进了A549/DDP细胞凋亡（P＜0.01）;MTT实验结果显示,沉默CXCR4的表达增加了A549/DDP细胞对顺铂的敏感性（P＜0.01）;Western blot实验结果显示,沉默CXCR4后CYP1B1蛋白的表达水平显著降低（P＜0.05）。结论:沉默CXCR4的表达抑制肺癌耐药细胞增殖、促进凋亡,逆转肺癌细胞顺铂耐药,CXCR4正向调控CYP1B1的表达,可能是CXCR4逆转肺癌细胞顺铂耐药的作用机制。     

PAFR对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及机制研究

背景与目的：目前卵巢癌的治疗方式仍是手术及术后辅助铂类药物为主的化疗，但复发率高，容易耐药。前期研究已证实血小板活化因子受体（platelet-activating factor receptor，PAFR）在上皮性卵巢癌中高表达，且能促进卵巢癌细胞增殖、侵袭及转移。探索顺铂（cisplatin，CDDP）作用后卵巢癌细胞中PAFR的表达变化及其对卵巢癌细胞CDDP敏感性的影响，并对其机制进行初步探讨，旨在为卵巢癌靶向治疗及克服CDDP耐药提供新方法。方法：采用蛋白质印迹法（Western blot）及实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）检测不同浓度的CDDP作用于卵巢癌细胞株（SKOV-3和CAOV-3）不同时间后各组细胞PAFR的表达情况。采用Western blot及免疫荧光法验证CDDP作用于卵巢癌细胞后核因子κB（nuclear factor Kappa-B，NF-κB）/p65及缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）的表达。采用Western blot及RTFQ-PCR检测小RNA干扰沉默NF-κB及HIF-1α后PAFR的表达情况。采用细胞增殖和凋亡实验检测抑制PAFR表达后对卵巢癌细胞CDDP敏感性的影响。采用Western blot验证CDDP和（或）PAFR抑制剂作用细胞后下游信号通路关键分子P70S6K/AKT/ERK的变化情况。结果：CDDP能够引起卵巢癌细胞中PAFR表达升高，并呈现剂量及时间依赖性（P＜0.01）。CDDP能够引起转录因子NF-κB及HIF-1α的核聚集，沉默NF-κB及HIF-1α后，CDDP诱导的PAFR表达下降。PAFR特异性小分子拮抗剂WEB2086或RNA干扰抑制PAFR表达均能显著提高卵巢癌细胞对于CDDP的敏感性，即细胞增殖能力明显降低（P＜0.01），而凋亡率明显升高（P＜0.01）。CDDP作用于卵巢癌细胞后，表达升高的PAFR能够激活下游的AKT及ERK信号通路分子。结论：CDDP作用于卵巢癌细胞后能够引起转录因子NF-κB及HIF-1α的核聚集从而上调PAFR的表达。抑制PAFR表达能够增加卵巢癌细胞对CDDP的敏感性，可能成为卵巢癌靶向治疗的新方法。     

siRNA沉默NOB1的表达对胃癌细胞凋亡及顺铂化疗敏感性的影响

摘 要：［目的］ 探讨siRNA沉默酵母基因Noblp人类同源基因（NOB1）对胃癌细胞凋亡及顺铂化疗敏感性的影响。［方法］ 胃癌细胞MGC-803转染NOB1 siRNA和siRNA control为干扰组、对照组,同时以顺铂处理的两组细胞为顺铂＋干扰组、顺铂组,qRT-PCR和Western blot法检测NOB1表达,噻唑蓝法（MTT）检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化STAT3（p-STAT3）,比色法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase-3）活性。［结果］ 干扰组、顺铂组、顺铂＋干扰组细胞中NOB1 mRNA和蛋白水平下降,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中Caspase-3活性升高,p-STAT3/STAT3水平降低,与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。顺铂＋干扰组细胞凋亡率和Caspase-3活性明显高于干扰组、顺铂组,细胞存活率和p-STAT3/STAT3水平明显低于干扰组、顺铂组,差异均具有统计学意义（P<0.05）。［结论］ siRNA沉默NOB1基因促进胃癌细胞凋亡,增加顺铂敏感性,作用机制与p-STAT3/STAT3有关。     

下调Beclin1 抑制卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的：探究敲减Beclin1 表达对卵巢癌细胞A2780 对顺铂耐药的影响及其相关机制。方法：以Western blotting 及qPCR 检测卵巢癌细胞株A2780 及耐药细胞株A2780/DDP 中Beclin1 的表达情况；A2780/DDP 细胞转染Beclin1 siRNA 后，用MTT法检测细胞对顺铂敏感性的变化，克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成情况，流式细胞术检测各组细胞的凋亡，MDC荧光染色检测细胞的自噬情况，Western blotting 检测自噬相关蛋白、溶酶体相关膜蛋白Lamp-2 以及组织蛋白酶Cathepsin B的表达情况。结果：顺铂耐药细胞株A2780/DDP 中Beclin1 mRNA及蛋白的表达水平均明显高于A2780 细胞株（均P<0.05），在A2780细胞中加入顺铂刺激后Beclin1 蛋白的表达水平显著升高（P<0.05）。敲减Beclin1 表达可促进顺铂诱导的A2780/DDP 细胞的凋亡（P<0.05）、抑制细胞自噬的发生（P<0.05）、减少细胞克隆形成（P<0.05）和增加细胞对顺铂的敏感性（P<0.05）；Western blotting结果显示，敲减Beclin1 可上调A2780/DDP 细胞中cleaved-caspase 3 和Cathepsin B的蛋白水平，下调Atg3、Atg7、LC3Ⅱ/Ⅰ、Lamp-2的表达水平（均P<0.05）。结论：敲减Beclin1 表达可提高A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性，其机制可能与调节自噬相关蛋白表达抑制细胞保护性自噬和影响溶酶体功能，从而促进顺铂诱导耐药细胞凋亡有关。     

EphA7在骨肉瘤中的表达及对骨肉瘤MG-63细胞增殖、迁移和凋亡的影响

背景与目的：EphA7蛋白是对人体正常生理过程具有重要作用的一种膜蛋白，常在细胞膜中发挥多种调控作用，但该蛋白在骨肉瘤中的作用尚不清楚。该研究拟观察骨肉瘤组织中EphA7的表达，并了解EphA7对人骨肉瘤MG-63细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法：收集45例患者的骨肉瘤组织和瘤旁正常组织。培养人骨肉瘤MG-63细胞，用siRNA转染MG-63细胞，并分成siRNA-EphA7组（EphA7-siRNA转染）、siRNA-Control组（阴性对照siRNA转染）和空白组（未转染）。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）评估组织和细胞中EphA7的mRNA表达和蛋白水平。通过细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）测定细胞增殖活力，通过细胞划痕实验检测细胞迁移能力，利用流式细胞术检测细胞凋亡。结果：RTFQ-PCR和Western blot检测结果显示，EphA7的mRNA表达和蛋白水平在骨肉瘤组织中明显高于瘤旁正常组织（P＜0.05）；与空白组和siRNA-Control组相比，siRNA-EphA7组中EphA7的mRNA表达和蛋白水平显著降低（P＜0.05）。CCK-8测定结果显示，siRNA-EphA7组的吸光度（D）值显著低于空白组和siRNA-Control组（P＜0.05）。细胞划痕实验显示，与空白组和siRNAControl组相比，siRNA-EphA7组在划痕后愈合率显著降低（P＜0.05）。流式细胞术显示，与空白组和siRNA-Control组相比，siRNA-EphA7组凋亡率显著增加（P＜0.05）。结论：EphA7在骨肉瘤组织中表达上调。下调MG-63细胞中EphA7的表达可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移，促进其凋亡。     

马钱子碱抑制非小细胞肺癌A549细胞生长并增强顺铂敏感性

摘 要：［目的］ 评估马钱子碱对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、侵袭和迁移的影响,并探讨其增强化疗敏感性。［方法］ 采用NSCLC细胞系A549为研究对象,分别采用CCK-8法、集落形成实验和细胞侵袭、迁移实验检测马钱子碱对A549细胞活力、侵袭和迁移的影响;应用Western blot检测马钱子碱对PTEN、Akt和p-Akt蛋白表达影响。［结果］ 马钱子碱或顺铂单独有效抑制细胞生长、细胞集落的发育以及细胞的侵袭和迁移（P<0.05）,并且马钱子碱和DDP联合处理对细胞的抑制作用强于单独的化合物（P<0.05）。Western blot分析结果显示,在A549细胞中,马钱子碱（20μg/ml）处理增加PTEN蛋白的表达（P<0.05）减少了p-Akt蛋白表达（P<0.05）,并且hsa-miR-21 minic可部分抑制马钱子碱对PTEN蛋白表达的促进作用。［结论］ 马钱子碱可抑制肺癌的进展,增强抗癌药物顺铂对肺癌细胞的作用。     

自噬蛋白LC3B参与伏立诺他联合顺铂对骨肉瘤细胞增殖抑制及凋亡的研究

摘 要：［目的］ 探讨伏立诺他( suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)联合顺铂(cisplatin,CDDP)对骨肉瘤细胞的增殖抑制及其可能机制。［方法］ 以骨肉瘤细胞系HOS为研究对象,通过MTS测定伏立诺他联合顺铂对骨肉瘤细胞增殖抑制的效果,运用流式细胞术（flow cytometry,FCM）,透射电子显微技术（transmission electron microscope,TEM）,蛋白质印迹技术（Western Blot）检测对细胞周期阻滞,自噬小体产生及凋亡与自噬相关蛋白的表达情况。［结果］ 伏立诺他联合顺铂能够明显抑制骨肉瘤细胞HOS的增殖（P<0.05）。经伏立诺他联合顺铂（SAHA 1μmol/L+CDDP 4μmol/L）处理HOS细胞后,细胞周期阻滞于S期（P<0.01）。TEM结果表明联合处理组诱导了自噬小体的产生。Western Blot结果显示联合处理组使得HOS细胞LC3B蛋白的表达增加,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。在加入自噬抑制剂3-MA后,不仅降低LC3B的表达,而且Caspase3、PARP表达也降低,与对照组相比差异有统计学意义（均P<0.05）。 ［结论］ 伏立诺他联合顺铂通过细胞周期阻滞及诱导自噬的发生,从而发挥对骨肉瘤细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。     

SOX4抑制凋亡介导食管癌顺铂耐药的实验研究

目的：探讨SOX4与食管癌顺铂耐药的关系及其耐药机制。方法：采用递增药物浓度、间歇冲击作用的方法构建顺铂食管癌耐药细胞株KYSE30/DDP;流式细胞仪检测KYSE30及KYSE30/DDP细胞凋亡情况;Western blot检测SOX4及凋亡相关指标在KYSE30及KYSE30/DDP细胞中的变化;CCK8检测干扰SOX4对KYSE30和KYSE30/DDP细胞顺铂敏感度的影响;流式细胞仪及Western blot检测干扰SOX4对KYSE30/DDP细胞凋亡及相关指标的影响。结果：成功构建了生长状态良好的KYSE30/DDP细胞株,其耐药指数为4.1;KYSE30/DDP细胞凋亡较其亲本细胞KYSE30明显降低（t=-8.414,P<0.05）;Western blot结果显示,SOX4在顺铂耐药细胞KYSE30/DDP中的表达高于其亲本细胞KYSE30,KYSE30/DDP细胞中凋亡相关指标Cleaved caspase 3及Cleaved PARP表达低于KYSE30;在KYSE30/DDP细胞中干扰SOX4,其对顺铂的敏感性及凋亡细胞增加（F=625.423,P<0.05）,凋亡相关指标Cleaved caspase 3及Cleaved PARP表达增加。结论：SOX4在食管癌顺铂耐药细胞KYSE30/DDP中高表达,并可通过抑制凋亡介导食管癌顺铂耐药。     

siRNA抑制骨肉瘤U2OS细胞系中SIRT6的表达及其生物学作用研究

背景与目的：sirtuin6(SIRT6)蛋白是对人体细胞生长、代谢调控及应激反应等具有重要作用的一种核蛋白,常在细胞核中发挥多种调控作用。但该蛋白在骨肉瘤中的作用还不清楚,本研究通过下调人骨肉瘤U2OS细胞系中SIRT6的表达,观察其对U2OS细胞的作用。方法：设计合成SIRT6的siRNA序列,通过Lipofectamine^TM2000转染U2OS细胞系,通过蛋白质印迹法（Western blot）检测SIRT6蛋白的表达情况,利用流式细胞术检测细胞凋亡,细胞计数试剂盒（cellcounting kit-8,CCK-8）法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力,CCK-8法分析对紫杉醇的敏感性。结果：成功构建SIRT6 siRNA序列,Western blot检测转染后24、48和72 h的蛋白水平,实验组较对照组明显降低。流式细胞术检测细胞凋亡也显示实验组凋亡增加（P＜0.05）。Transwell法检测结果显示,实验组侵袭与迁移能力较对照组下降（P＜0.05）。CCK-8法检测细胞生长情况,可见经紫杉醇处理后实验组生长较对照组下降明显,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：下调骨肉瘤U2OS细胞中SIRT6的表达可以抑制骨肉瘤细胞侵袭,促进凋亡,并增强骨肉瘤细胞对紫杉醇的化疗敏感性。     

Stim1在骨肉瘤组织和细胞中的表达水平及与顺铂耐药性的关系

目的:探讨Stim1在骨肉瘤组织和细胞中的表达水平及与顺铂耐药性的关系。方法:采用免疫组织化学染色检测了50例骨肉瘤患者的肿瘤组织中Stim1的表达。通过用高浓度的顺铂处理人骨肉瘤细胞系U-2 OS来建立耐药性骨肉瘤细胞（U-2 OS/DDP细胞）。通过RT-PCR和蛋白质印迹检测细胞中Stim1、ATF4、CHOP和GRP78的表达。通过转染人Stim1-siRNA或过表达Stim1的pCDNA3-HA质粒来下调或上调骨肉瘤细胞中Stim1的表达,并检测了细胞的钙离子内流情况。通过CCK-8法检测细胞增殖,通过Annexin V-FITC/PI双重染色法检测细胞凋亡。结果:Stim1的阳性表达与骨肉瘤患者的TNM分期和远处转移有关,Stim1阳性患者中,74.19%（23例）为TNMⅢ期,87.10%（27例）发生远处转移。而Stim1阴性患者中,26.31%（5例）为TNMⅢ期,26.31%（5例）发生远处转移。顺铂耐药的骨肉瘤U-2 OS/DDP细胞中的Stim1 mRNA和蛋白表达水平显著高于非耐药U-2 OS细胞（P＜0.05）。下调Stim1表达明显减少了U-2 OS/DDP细胞中的钙离子内流（P＜0.05）;下调Stim1表达抑制了细胞的增殖并促进了细胞凋亡（P＜0.05）。此外,下调Stim1进一步提高了内质网应激分子标志物ATF4、CHOP和GRP78的表达（P＜0.05）。相反,上调Stim1的表达则发挥了相反的作用。结论:Stim1在骨肉瘤患者中高表达并与不良预后有关。Stim1的高表达可增加骨肉瘤细胞的顺铂耐药性。下调Stim1通过抑制钙离子内流并促进内质网应激诱导的细胞凋亡来降低骨肉瘤细胞的顺铂耐药性。     

PFKFB3在胃癌中的表达及对胃癌细胞生长和凋亡的影响研究

背景与目的:6-磷酸果糖激酶-2同工酶3(6-phosphofructo-2-kinase 3,PFKFB3)与肿瘤的发生、发展密切相关,且对肿瘤细胞的生物学行为具有重要的调节作用。分析PFKFB3在胃癌组织及癌旁组织中的表达,并观察其对胃癌细胞生长和凋亡的作用及机制。方法:采用TCGA数据库分析72例在南昌大学第二附属医院及第三附属医院经外科手术切除的新鲜胃癌标本及其相应的癌旁组织中PFKFB3的表达,并分析PFKFB3的表达与胃癌预后的关系。进一步通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)及免疫组织化学法分析胃癌组织标本及癌旁组织标本中PFKFB3的表达。shNC及shPFKFB3质粒转染至胃癌细胞中,采用RTFQ-PCR和Western blot验证转染效率。分别通过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验、EdU实验、流式细胞术和Western blot分析PFKFB3下调后对胃癌细胞的增殖能力、细胞周期变化和细胞凋亡的影响。最后采用Western blot分析PFKFB3影响胃癌细胞生长的机制。结果:TCGA数据库分析显示,胃癌组织中PFKFB3的表达明显高于癌旁组织(P<0.05),且PFKFB3高表达与胃癌患者较差的预后密切相关。另外,RTFQ-PCR、Western blot及免疫组织化学检测也同样证实PFKFB3在胃癌组织中高表达(P<0.01),且PFKFB3的表达升高与淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.05)。沉默胃癌细胞中PFKFB3的表达后,其生长能力明显减弱(P<0.01),胃癌细胞凋亡比例增加(P<0.01),细胞周期G1期阻滞(P<0.01)。PFKFB3通过激活磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路而调控胃癌细胞的生长。结论:PFKFB3在胃癌组织中高表达,且与患者预后密切相关,沉默PFKFB3的表达后抑制胃癌细胞的生长并促进其凋亡,PFKFB3可能是胃癌靶向治疗的潜在生物标志物。     

长链非编码RNA ARAP1-AS1在肾透明细胞癌中的表达及作用研究

背景与目的：长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）ARAP1-AS1在多种肿瘤中异常表达,但其在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）中的作用尚不清楚。探讨ARAP1-AS1在ccRCC中的生物学作用。方法：通过GEPIA数据库分析ARAP1-AS1在ccRCC组织中的表达及其与临床病理学特征及患者生存率的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测ccRCC组织及邻近的非肿瘤组织中ARAP1-AS1的表达水平。将患者分为ARAP1-AS1高表达组和低表达组,分析ARAP1-AS1的表达水平与患者临床病理学特征之间的关系,并进行生存分析。通过细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）实验、transwell迁移实验及侵袭实验检测ARAP1-AS1对ccRCC细胞体外增殖、迁移及侵袭能力的影响。采用蛋白质印迹法（Western blot）检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达变化。采用BALB/c裸小鼠移植瘤模型分析ARAP1-AS1对ccRCC细胞体内成瘤能力的影响。结果：GEPIA数据库分析结果显示,ARAP1-AS1在ccRCC中高表达,且与患者肿瘤高分期及较差的生存率相关（P均<0.05）。RTFQ-PCR显示,ARAP1-AS1在ccRCC组织及细胞系中高表达,ARAP1-AS1的高表达与肿瘤大小和分期相关（P均<0.05）。ARAP1-AS1高表达患者的总生存率较差（P<0.05）。沉默ARAP1-AS1的表达可以抑制ccRCC细胞增殖、迁移和侵袭（P均<0.05）。沉默ARAP1-AS1可以降低Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平（P均<0.05）。沉默ARAP1-AS1可使ccRCC细胞体内成瘤能力减弱,并使Ki-67增殖指数降低。结论：ARAP1-AS1可通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进ccRCC的进展。     

ARHGAP4通过调控HK2表达促进肝癌细胞生长的研究

背景与目的：Rho GTP酶活化蛋白4（Rho GTPase activating protein 4，ARHGAP4）与肿瘤的进展密切相关，且对肿瘤细胞恶性增殖具有重要的调节作用。探讨ARHGAP4在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞生长的影响。方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）、蛋白质印迹法（Western blot）及免疫组织化学法分析肝癌组织中ARHGAP4的表达水平，并分析其表达与肝癌临床病理学特征及预后之间的关系。沉默ARHGAP4的表达，采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）及EdU实验观测肝癌细胞的增殖情况，并检测肝癌细胞中己糖激酶2（hexokinase 2，HK2）的表达水平，进一步分析肝癌组织中HK2的表达及与ARHGAP4的相关性。在稳定低表达ARHGAP4的肝癌细胞中上调HK2的表达，在稳定高表达ARHGAP4的肝癌细胞中沉默HK2的表达，采用Western blot分析HK2的表达情况，采用EdU分析肝癌细胞的增殖能力。结果：肝癌组织中ARHGAP4的表达水平显著高于癌旁组织（P＜0.01），且高表达的ARHGAP4与患者肿瘤体积大小及TNM分期密切相关。沉默肝癌细胞中ARHGAP4的表达，肝癌细胞的增殖能力及HK2的表达水平明显减弱（P＜0.05）；反之过表达ARHGAP4可显著增强HK2的表达及肝癌细胞的增殖能力（P＜0.05），且肝癌细胞中ARHGAP4与HK2的表达呈正相关。结论：ARHGAP4通过正向调控HK2的表达进而促进肝癌细胞的生长。     

光甘草定对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制

目的：探讨光甘草定对肺腺癌细胞A549 恶性生物学行的影响及其分子机制。方法：常规方法培养A549 细胞和人正常肺上皮细胞BEAS-2B,用不同浓度的光甘草定和或顺铂对其进行处理,通过结晶紫染色、CCK-8 法检测光甘草定、顺铂对A549、BEAS-2B细胞增殖活力的影响,Transwell 小室实验、细胞划痕实验检测光甘草定对A549 细胞侵袭、迁移能力的影响,流式细胞术检测光甘草定对A549 细胞凋亡的影响,3D超低黏附板培养法培养A549 细胞后采用CCK-8法检测光甘草定对A549 细胞增殖的影响,WB法检测光甘草定对A549 细胞中上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达的影响;构建A549 细胞移植瘤模型后检测光甘草定、顺铂对移植瘤的生长以及移植瘤组织中EMT相关蛋白表达的影响。结果：光甘草定、顺铂呈剂量依赖性地显著抑制A549 细胞的增殖（P<0.05 或P<0.01）、细胞迁移（P<0.05 或P<0.01）和侵袭能力（P<0.05 或P<0.01）,光甘草定能诱导A549 细胞凋亡（P<0.01）,抑制A549 细胞中N-cadherin、snail 和vimentin 蛋白的表达,促进E-cadherin 蛋白表达;光甘草定、顺铂均能抑制A549移植瘤的生长,抑制移植瘤组织中Ki67、N-cadherin、snail 和vimentin 蛋白的表达、促进E-cadherin 蛋白的表达。结论：光甘草定可通过抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与其抑制细胞的EMT进程而产生抑癌作用有关。     

lncRNA HULC在膀胱癌组织中的表达及其对5637细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HULC在膀胱癌组织中的表达及其与患者临床病理特征的关系,以及沉默HULC对膀胱癌5637细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响.方法:选取2014年6月至2017年12月郑州人民医院手术切除的102例膀胱癌患者的癌及癌旁组织标本,以及人膀胱癌细胞株5637和人正常膀胱上皮细胞株SV...     

PFKFB3通过调控PI3K/AKT信号通路促进骨肉瘤细胞的增殖及转移

目的:探讨6-磷酸果糖2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,PFKFB3)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响,及可能的作用机制.方法:采用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法及免疫组织化学法检测骨肉瘤组织及其相...     

miR-6775-3p在乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的：微小RNA（microRNA,miRNA）与肿瘤的发生、发展过程密切相关。探讨miR-6775-3p在乳腺癌细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法：通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测4种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453、MDA-MB-468和BT-549中miR-6775-3p的表达水平,选取miR-6775-3p表达水平最低的乳腺癌细胞系过表达miR-6775-3p后,采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）法检测细胞的增殖情况,同时采用transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的变化。通过RTFQ-PCR和蛋白［质］印迹法（Western blot）检测miR-6775-3p过表达的乳腺癌细胞系中细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4（cyclin-dependent protein kinase 4,CDK4）和CDK6,以及侵袭转移标志物基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）17和MMP24 mRNA以及蛋白的表达变化。结果：RTFQ-PCR结果显示,乳腺癌细胞系MDA-MB-453中miR-6775-3p的表达最低,在MDA-MB-453细胞中转染miR-6775-3p mimics后,miR-6775-3p的表达水平明显升高（P<0.001）。CCK-8实验结果显示,MDA-MB-453细胞过表达miR-6775-3p后,细胞的增殖能力明显降低（P<0.01）。Transwell迁移和侵袭实验结果显示,MDA-MB-453细胞过表达miR-6775-3p后,细胞的迁移（P<0.001）和侵袭能力（P<0.01）明显降低。RTFQ-PCR和Western blot实验结果显示,CDK4、CDK6及MMP17、MMP24的mRNA表达和蛋白水平均显著降低（P<0.01）。结论：miR-6775-3p可能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。