慢病毒载体介导的RNA干扰下调膜联蛋白A1对小细胞肺癌细胞生物学行为的影响

目的:探究AnnexinA1对小细胞肺癌细胞生物学行为的影响。方法:构建干扰AnnexinA1的慢病毒载体,转染至SBC-5细胞株;体外增殖、迁移、侵袭实验观察下调AnnexinA1表达对小细胞肺癌细胞株生物学行为的影响。结果:干扰AnnexinA1的细胞株ANXA1 RNAi-SBC-5构建成功。与转染空载体的对照细胞相比,抑制AnnexinA1的表达能够显著抑制SBC-5细胞的增殖、迁移、侵袭能力。结论:AnnexinA1表达可能与肺癌骨转移密切相关。     

慢病毒介导的Notch1基因沉默抑制软骨肉瘤SW1353细胞的增殖和侵袭

目的:探讨慢病毒介导的Notch1基因沉默对软骨肉瘤SW1353细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制。方法:将SW1353细胞分为对照组（未感染）、空载体组（LV-NC-shRNA慢病毒感染）和沉默组（LV-Notch1-shRNA慢病毒感染），RT-PCR和Western blot检测慢病毒的感染效果，MTT法和克隆形成实验检测各组细胞的增殖活力，Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力，Western blot检测PCNA、MMP-2和p-AKT蛋白的表达。结果:LV-Notch1-shRNA慢病毒感染使SW1353细胞中Notch1 mRNA和Notch1、PCNA、MMP-2、p-AKT蛋白的表达均明显降低（P<0.05），显著抑制了SW1353细胞的增殖和侵袭能力（P<0.05）。结论:Notch1基因沉默可抑制软骨肉瘤SW1353细胞增殖和侵袭，其作用机制可能与下调PCNA、MMP-2和p-AKT蛋白表达有关。     

MACC1基因siRNA对肺癌SBC-5细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨MACC1(metastasis-associated in colon cancer l)基因特异性siRNA(small interfering RNA)对肺癌细胞系SBC-5体外增殖和迁移的影响。方法:化学合成MACC1基因特异性siRNA,阳离子脂质体LipofectamineTM 2000转染肺癌细胞系SBC-5细胞,RT-PCR和Western blot方法检测转染后SBC-5细胞中MACC1基因和蛋白的表达情况;MTT法检测细胞的生长增殖状况;划痕试验观察细胞迁移能力的改变。结果:MACC1基因特异性siRNA转染细胞后,SBC-5细胞MACC1的mRNA和蛋白表达水平明显降低,MTT试验和划痕试验观察到转染MACC1-siRNA的SBC-5细胞增殖、迁移能力明显减弱。结论:MACC1基因特异性siRNA可以明显抑制肺癌SBC-5细胞增殖和迁移,MACC1可能成为肺癌治疗的新靶点。     

过表达GDF15对肺腺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探究GDF15在体外对人肺腺癌细胞株A549生物学行为的影响,为肺癌防治提供新的靶点。方法:通过质粒转染的方法,构建GDF15过表达和neo空载体的A549细胞株,运用MTT法、平板克隆和Transwell的实验方法,观察过表达GDF15对A549细胞株生物学行为的影响。结果:成功构建GDF15过表达的A549-GDF15细胞株和neo空载体的A549-neo细胞株。与空载体细胞株相比,过表达GDF15能够抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论:GDF15在体外可抑制肺癌细胞的增殖及迁移。     

MACC1基因siRNA对肺癌SBC-5细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨MACC1（metastasis-associated in colon cancer l）基因特异性siRNA（small interfering RNA）对肺癌细胞系SBC-5体外增殖和迁移的影响。方法：化学合成MACC1基因特异性siRNA,阳离子脂质体LipofectamineTM 2000转染肺癌细胞系SBC-5细胞,RT-PCR和Western blot方法检测转染后SBC-5细胞中MACC1基因和蛋白的表达情况;MTT法检测细胞的生长增殖状况;划痕试验观察细胞迁移能力的改变。结果：MACC1基因特异性siRNA转染细胞后,SBC-5细胞MACC1的mRNA和蛋白表达水平明显降低,MTT试验和划痕试验观察到转染MACC1-siRNA的SBC-5细胞增殖、迁移能力明显减弱。结论：MACC1基因特异性siRNA可以明显抑制肺癌SBC-5细胞增殖和迁移,MACC1可能成为肺癌治疗的新靶点。     

钙调神经磷酸酶Aα对不同骨转移潜能小细胞肺癌细胞株黏附作用的影响

目的:探讨CnAα在小细胞肺癌骨转移中对骨基质黏附作用的影响。方法:构建CnAα稳定高表达和低表达的小细胞肺癌细胞SBC-3和SBC-5细胞株;利用骨条技术对构建好的稳定表达细胞株的骨黏附能力强弱进行对比。结果:高骨转移潜能SBC-5细胞对骨组织的黏附能力强于非骨转移SBC-3细胞;上调CnAα的SBC-3细胞的黏附能力强于其亲本细胞SBC-3,而下调CnAα的SBC-5细胞的黏附能力低于其亲本SBC-5细胞。结论:CnAα可能是通过提高小细胞肺癌细胞对骨组织的黏附能力来促进肺癌骨转移。     

αvβ 3整合素在小细胞肺癌骨转移细胞株SBC-5中的表达及意义

目的:分析αvβ3整合素在特异性小细胞肺癌骨转移细胞株中的表达,探讨肺癌骨转移的机制.方法:RT-PCR、Western-blot和免疫荧光染色检测小细胞肺癌特异性骨转移细胞株SBC-5和非骨转移细胞株SBC-3中αvβ3整合素的表达差异.结果:αvβ3整合素在SBC-5细胞株中的表达显著高于SBC-3细胞株.结论:αvβ3整合素可能与小细胞肺癌骨转移的发生相关,可能促进了小细胞肺癌骨转移的发生.     

慢病毒沉默PRDX4抑制肺癌细胞A549迁移和侵袭及其机制的探讨北大核心

目的:研究慢病毒沉默过氧化物还原酶4(peroxiredoxin 4,PRDX4)对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法:采用shRNA干扰技术敲低肺癌细胞系A549中PRDX4的表达,Western blot和qRT-PCR验证转染效果;划痕愈合实验检测细胞迁移能力;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;Western blot分析p-ERK1/2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达。结果:成功构建沉默PRDX4的肺癌细胞系;慢病毒感染后A549细胞PRDX4蛋白和mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05);与BC组和NC组相比,Sh组细胞迁移、侵袭能力显著降低(P<0.05);与BC组和NC组相比,Sh组细胞p-ERK1/2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著降低。结论:沉默PRDX4可能通过ERK信号通路抑制肺癌细胞的迁移和侵袭。     

αvβ_3整合素在小细胞肺癌骨转移细胞株SBC-5中的表达及意义

目的：分析αvβ3整合素在特异性小细胞肺癌骨转移细胞株中的表达,探讨肺癌骨转移的机制。方法：RT-PCR、Western-blot和免疫荧光染色检测小细胞肺癌特异性骨转移细胞株SBC-5和非骨转移细胞株SBC-3中αvβ3整合素的表达差异。结果：αvβ3整合素在SBC-5细胞株中的表达显著高于SBC-3细胞株。结论：αvβ3整合素可能与小细胞肺癌骨转移的发生相关,可能促进了小细胞肺癌骨转移的发生。     

凋亡抑制基因survivin在多种肺癌细胞株中的表达及其意义

目的:探讨凋亡抑制基因survivin在多种肺癌细胞株中的表达及其意义.方法:分别采用Real-time PCR与Western blot的方法,检测人肺腺癌细胞株A549、肺鳞癌细胞株SK-MES-1、大细胞肺癌细胞株NCI-H460、小细胞肺癌细胞株NCI-H446中survivin mRNA与蛋白的表达水平.结果:Real-time PCR检测发现四种肺癌细胞株中survivin mRNA均呈强阳性表达,且Western blot检测结果亦与 RT-PCR基本一致.结论:Survivin基因与肺癌发生、发展紧密相关,值得进一步深入研究.     

LRRC3B在非小细胞肺癌中下调并与肺癌细胞增殖和侵袭能力相关

背景与目的已有的研究表明：在许多恶性肿瘤细胞中,LRRC3B表达显著下调,被视为肿瘤抑制蛋白。然而,在非小细胞肺癌中它的表达模式和生物学作用缺乏研究。人类癌症微阵列的研究显示LR-RC3B在乳腺癌和结肠直肠癌表达下调,提示LRRC3B参与致癌作用。本研究的目的是研究LRRC3B在非小细胞肺癌中的必到状态及其与肺癌增殖、侵袭和细胞周期间的相关性,探讨LRRC3B在调控肺癌细胞增殖、侵袭及细胞周期中的作用。方法应用Western blot和Realtime RT-PCR检测LRRC3B在几株肺癌细胞系中的mRNA和蛋白表达水平。应用MTT法检测对转染LRRC3B的A549和H460细胞系细胞增殖能力变化,应用集落形成实验以及细胞侵袭实验研究LRRC3B对细胞增殖和侵袭以及细胞周期进程的作用。肺癌细胞系H3255中转染LR-RC3B siRAN验证LRRC3B对细胞的增殖以及侵袭能力和对细胞周期进程的影响。结果与正常NHBE细胞系相比,NSCLC细胞系中LRRC3B蛋白表达量显著下调,特别是H460、H358、HCC827以及A549。A549和H460细胞系转染LRRC3B后,细胞增殖和侵袭能力受到抑制。LRRC3B抑制细胞周期进程,并下调cyclin D1和MMP9的表达。H3255细胞中敲除LRRC3B,细胞增殖和侵袭能力显著增强,同时与细胞周期及侵袭能力相关的蛋白cyclin D1和MMP9表达略微上调。结论 LRRC3B在肺癌细胞系中表达下调,而上调LRRC3B则能够抑制肺癌细胞增殖和侵袭能力,并抑制细胞周期进程,可能是未来肺癌治疗的一个新靶点。     

钙周期素结合蛋白促进非小细胞肺癌增殖和侵袭

目的探讨钙周期素结合蛋白(CacyBP)对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其分子机制。方法选取2016年于济南市中心医院行手术治疗的非小细胞肺癌患的肺癌组织和正常癌旁组织标本各6例, 采用Western blot法检测肺癌和正常癌旁组织中CacyBP蛋白的表达水平, Western blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测正常支气管上皮细胞16HBE和不同非小细胞肺癌细胞系(A549、H1299、H460和H1975)中CacyBP蛋白和mRNA的表达水平。将siRNA、siCacyBP-1、siCacyBP-2、慢病毒包装质粒shNC和shCacyBP转染至A549细胞(分别记为siNC组、siCacyBP-1组、siCacyBP-2组、shNC组和shCacyBP组), 将对照质粒和Flag-CacyBP质粒转染至A549细胞(分别记为NC组和Flag-CacyBP组)。采用细胞计数试剂盒8法、平板克隆实验以及流式细胞术检测细胞增殖能力以及细胞周期情况, 细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力, Western blot法检测敲低或过表达CacyBP ...     

外源性S100A9通过TLR4诱导非小细胞肺癌细胞侵袭的实验研究

目的:探讨外源性钙结合蛋白S100A9通过Toll样受体4（TLR4）诱导对非小细胞肺癌细胞H1650侵袭及迁移的影响。方法:收集非小细胞肺癌组织及癌旁组织,实验组:培养基添加1 μg/ml S100A9培养的H1650细胞,对照组:不添加任何血清蛋白培养的H1650细胞。RT-PCR和Western blot分别检测S100A9 mRNA和蛋白水平。RT-PCR检测转染后细胞中S100A9 mRNA的表达。采用划痕、黏附和平板克隆实验分别检测S100A9对H1650细胞生物学行为的影响,同时运用Western blot检测H1650细胞中TLR4蛋白,以观测其表达情况。结果:非小细胞肺癌组织中S100A9 mRNA和蛋白表达水平都高于癌旁组织,S100A9在非小细胞肺癌组织中过度表达(P<0.01)。S100A9小干扰RNA能够成功抑制非小细胞肺癌细胞中S100A9 mRNA水平(P<0.01)。与对照组相比,实验组加入S100A9蛋白后1 h,H1650细胞中TLR4的累积明显上调,S100A9起促进H1650细胞迁移(P<0.05或P<0.01)、基质黏附(P<0.01)和平板克隆(P<0.01)的作用。结论:TLR4在经过添加S100A9蛋白后NSCLC细胞株H1650细胞中的表达明显高于未添加S100A9蛋白的H1650细胞,有关实验中TLR4在肺癌中呈现为高表达,因此S100A9对肿瘤侵袭及迁移有着不可分割的联系,将成为肿瘤诊治的新靶点。     

TOP2A在非小细胞肺癌中的高表达促进肿瘤细胞的增殖和侵袭能力

目的:探讨编码拓扑异构酶Ⅱα的基因TOP2A在非小细胞肺癌组织中的表达情况及其生物学功能。方法:采用荧光定量PCR方法检测102例非小细胞肺癌及其癌旁组织中TOP2A的mRNA表达水平,Western blot检测其中5对组织中TOP2A蛋白表达水平,分析TOP2A 表达与非小细胞肺癌主要临床病理特征的相关性。干扰非小细胞肺癌细胞株A549和HCC827中TOP2A的表达,MTT法检测其表达对肿瘤细胞增殖的影响,Transwell法检测TOP2A表达下调对肿瘤细胞侵袭能力的影响。应用流式细胞术检测TOP2A敲降后细胞的凋亡率和细胞周期。结果:TOP2A在非小细胞肺癌组织中的表达水平相较癌旁组织明显上升（P<0.05）,干扰TOP2A的表达会抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭。流式细胞凋亡率实验结果显示转染siTOP2A后的非小细胞肺癌细胞早期凋亡率增加;流式周期分析显示siTOP2A转染后的细胞S期发生阻滞抑制细胞增殖。同时,TOP2A表达水平与非小细胞肺癌的肿瘤分期、淋巴结转移密切相关（P<0.05）。结论:TOP2A在非小细胞肺癌中表达上调,与肿瘤增殖和侵袭等生物学行为密切相关。     

siRNA沉默YAP1对宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭的影响

目的:用小干扰RNA(siRNA)沉默宫颈癌Hela细胞中YAP1基因的表达,观察YAP1表达降低对细胞增殖和侵袭能力的影响,初步探讨YAP1在宫颈癌中的作用。方法:qRT-PCR和Western blot方法检测宫颈癌Hela细胞及正常宫颈上皮细胞H8中YAP1的表达,siRNA YAP1转染Hela细胞沉默YAP1表达,并以转染control siRNA的细胞作为对照,转染48h后,分别用qRT-PCR和Western blot方法检测沉默效果。用MTT法检测沉默后细胞增殖情况。Transwell 检测细胞侵袭能力。结果:YAP1在宫颈癌细胞中高表达。siRNA能够有效沉默Hela细胞中YAP1的mRNA 及蛋白的表达。沉默YAP1表达能够明显抑制Hela细胞的增殖及侵袭能力。结论:YAP1蛋白在宫颈癌细胞中高表达并具有促进细胞增殖及侵袭的能力。     

IQGAP1在非小细胞肺癌脑转移中的作用

目的:探讨IQGAP1的表达对非小细胞肺癌脑转移的影响.方法:应用Western blotting技术检测肺癌低潜力脑转移细胞与高潜力脑转移细胞中IQGAPI表达的差异；构建质粒载体pcDNA3.1-IQGAP1,将其转染至非小细胞型肺癌低潜力脑转移细胞系,并用RT-PCR方法鉴定转染效果；进而应用Transwell的方法和免疫荧光检测上调IQGAP1表达后对细胞侵袭和迁移的影响.结果:通过Western blot检测,PC14/B细胞内IQGAP1表达明显高于PC14细胞；外源性高表达IQGAP1的质粒载体pcDNA3.1-IQGAP1成功转染至PC14细胞,同时细胞形态经过转染后也发生显著变化；外源性上调的IQGAP1表达显著增强了非小细胞肺癌细胞株PC14的细胞侵袭和迁移能力.结论:IQGAP1在肺癌脑转移的过程中可能发挥了作用,为进一步研究肺癌脑转移的具体机制提供了新的思路.     

miR-30c表达调控对大肠癌细胞生物学行为的影响及其机制探讨

目的:探讨上调miR-30c的表达对大肠癌（CRC）细胞生物学行为的影响及可能的机制。方法:将miR-30c模拟物转染CRC细胞株SW620,qRT-PCR方法检测转染后miR-30c的表达,CCK-8法检测细胞增殖情况,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变,qRT-PCR和Western blot检测转染后SNAI2 mRNA和蛋白的表达。结果:转染miR-30c模拟物后,SW620细胞的miR-30c表达明显增高,细胞增殖减少（P＜0.05）,凋亡增加（P＜0.05）,侵袭能力显著降低（P＜0.05）。SNAI2 mRNA及蛋白表达水平明显下调,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:SW620细胞miR-30c表达上调,可抑制细胞增殖和侵袭、诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制SNAI2表达相关。     

miR-145通过靶向AP4对非小细胞肺癌A549细胞迁移侵袭的影响

 目的 探讨miR-145对非小细胞肺癌迁移与侵袭能力的影响及其可能的作用机制。方法 qRTPCR法检测非小细胞肺癌组织中miR-145和激活增强子结合蛋白4（activating enhancer binding protein4, AP4）mRNA的表达。A549细胞转染miR-145 mimic或者AP4 siRNA后，划痕实验与Transwell小室法分别检测A549细胞的迁移与侵袭能力，qRT-PCR法与免疫印迹法（Western blot）检测A549细胞中AP4 mRNA与蛋白表达水平；双荧光素酶报告基因法检测AP4 mRNA与miR-145的关系。结果 与癌旁正常组织相比，非小细胞肺癌组织中miR-145表达明显降低（P<0.05），而AP4 mRNA和蛋白表达均明显升高（均P<0.05）；与对照组相比，转染miR-145 mimic后，A549细胞中miR-145表达明显升高（P<0.05），AP4 mRNA和蛋白水平明显降低（P<0.05）；A549细胞的迁移数与侵袭能力均显著下降（均P<0.05）；双荧光素酶报告基因法验证AP4 mRNA是miR-145的靶基因。A549细胞转染AP4siRNA后，A549细胞的迁移数与侵袭数显著下降（均P<0.05）。结论 上调miR-145能抑制A549细胞的迁移与侵袭能力，可能与其抑制靶基因AP4表达有关。     

上调miRNA-506抑制直肠癌Colo320细胞的增殖和侵袭

目的:探讨微小核糖核酸(miRNA)-506对人直肠癌Colo320细胞增殖和侵袭的影响.方法:构建miRNA-506 模拟物,应用脂质体法转染直肠癌细胞株Colo320.采用逆转录酶链聚合反应(qRT-PCR)法检测各组细胞中miRNA-506的表达水平,CCK-8法检测细胞的增殖情况.Transwell小室检测细胞的侵袭能力.Western blot检测MMP-9的表达.结果:qRT-PCR结果显示,miRNA-506转染组miRNA-506的表达量明显高于空白细胞对照组和阴性对照组(P均<0.05).CCK-8结果显示,上调miRNA-506 抑制Colo320细胞增殖.Transwell结果显示,转染miRNA-506后Colo320细胞的侵袭数目明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05).miRNA-506可以抑制Colo320细胞MMP-9蛋白的表达.结论:上调miRNA-506能抑制人直肠癌Colo320细胞的增殖和侵袭能力.     

上调 Notch－1基因对 U215细胞 AKT －mTOR 通路的影响

目的：观察上调 Notch －1基因对人胶质瘤 U251细胞生学物行为及 AKT －mTOR 信号通路的影响。方法：采用 pNL －NICD 慢病毒感染 U251细胞,以 RT －PCR 和 Western －Blot 检测 Notch －1基因 mRNA 和蛋白的表达,以 MTT 检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Transwell 实验检测细胞侵袭能力,同时检测 Notch －1上调对 AKT、mTOR、P70S6K、4Ebp －1蛋白的影响。结果：与对照组比较,NICD 慢病毒转染72h后,Notch －1基因 mRNA 和蛋白表达明显增高（P ＜0．01）;Notch －1上调明显促进 U251细胞增殖、侵袭、促进细胞进入 S 期,增加周期蛋白 Cyclin D1、CDK －4的表达,促进 AKT、mTOR 蛋白磷酸化。结论：上调 Notch －1基因促进 U251细胞增殖、侵袭,其机制和活化 AKT －mTOR 通路有关。