两种新型冠状病毒核酸试剂检测结果的对比研究

目的 比较两种新型冠状病毒核酸试剂检测结果 的一致性.方法 回顾性分析深圳市第三人民医院确诊新型冠状病毒患者痰标本、鼻拭子标本和肛拭子标本共计539份核酸检测结果 ,采用一致性检验进行统计分析.并从两种试剂检测的核酸Ct值均>36的样本中随机抽取4份进行测序验证.结果 两种试剂对痰标本、鼻拭子标本和肛拭子标本一致性检验...     

114例疑似COVID-19患者呼吸道病毒感染分析

目的 分析114例COVID-19疑似患者呼吸道病毒感染情况, 探讨多种病毒同时检测在疫情防控中的价值。方法 利用Real Time RT-PCR技术检测发热门诊COVID-19疑似患者SARS-CoV-2核酸,利用基因芯片恒温扩增技术检测SARS-CoV-2核酸阴性患者其他常见的18种呼吸道病毒。结果 114例COVID-19疑似患者SARS-CoV-2核酸均为阴性,有21例感染了非其它呼吸道病毒,感染率达18.42%,21例患者中共检测出10种呼吸道病毒,包括冠状病毒NL63/229型、呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒A16型、乙型流感病毒、人副流感病毒1型、人副流感病毒3型、人偏肺病毒、甲型流感病毒、甲型流感病毒季节性H3亚型、肠道病毒/鼻病毒。其中乙型流感病毒感染患者最多,有6例,呼吸道合胞病毒有5例。有3例患者同时感染2种病毒:呼吸道合胞病毒与柯萨奇病毒A16型混合感染、冠状病毒NL63/229型与人副流感病毒1型混合感染、甲型流感病毒与甲型流感病毒季节性H3亚型混合感染。结论 在应对本次SARS-CoV-2疫情中,针对COVID-19疑似患者中,要注意鉴别SARS-CoV-2与其它呼吸道病毒,及时有效地排除疑似病例。     

冠状病毒疫苗研究进展

进入21世纪以来,严重急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus, SARS-CoV)、中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndromecoronavirus, MERS-CoV)及最新出现的严重急性呼吸综合征冠状病毒-2(severe acute respiratory syndrome coronavirus-2, SARS-CoV-2)等高致病性冠状病毒先后在人群中暴发流行,成为影响地区、国家乃至全球的重大公共卫生事件,研发特异性疫苗成为防控病毒流行的当务之急。本文综述了SARS-CoV和MERS-CoV疫苗的研究进展,望对SARS-CoV-2疫苗研制提供参考。     

新型冠状病毒疫苗的研究进展

COVID-19已经被世界卫生组织列为引起国际关注的突发公共卫生事件。目前尚没有该病的特效治疗药物。随着新型冠状病毒的不断传播以及变异,亟需寻求新型治疗措施来对抗这种病毒,积极研发新型冠状病毒疫苗十分必要。本文就目前新型冠状病毒疫苗的研究现状进行阐述、分类、分析及前景展望。     

新型冠状病毒与神经退行性疾病的研究进展

<正>自从2019新型冠状病毒(COVID-19)成为全球大流行以来,威胁着全世界人民的生命和健康。在严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)-2感染的急性期,已报道了一系列神经症状,从头痛[1]、谵妄[2]、认知障碍[3]到癫痫[4]、脑膜炎[5]和脑卒中[6]等,并且已有成像技术证明,COVID-19会对脑组织结构产生不可逆的影响[7]。除病毒感染急性期的神经系统症状外,SARS-CoV-2也对神经退行性疾病(NDs)产生了重要影响。     

43例新型冠状病毒肺炎患者血清抗体动态检测结果分析北大核心CSCD

目的观察新型冠状病毒肺炎患者血清中特异性抗体在COVID-19病程发展中的动态变化,比较SARS-CoV-2 IgM等5种抗体的阳性率,分析主要抗体水平在病程不同阶段的消长规律。方法采用磁微粒化学发光免疫分析法对COVID-19患者血清中SARS-CoV-2 IgM、SARS-CoV-2 IgG、SARS-CoV-2 IgA和SARS-CoV-2-RBD Ab以及SARS-CoV-2 NAb中和抗体水平进行动态检测和分析。结果在急性期新冠病人筛查中,SARS-CoV-2 IgG、IgM和IgA抗体检测阴性符合率均达100%,阳性率SARS-CoV-2 IgA为32.56%,与SARS-CoV-2 IgG阳性率13.95%比较差异有统计学意义(P<0.05)。COVID-19重症患者的特异性IgG水平在整个病程中均高于普通型和轻型,SARS-CoV-2 NAb中和抗体水平在发病后1个月和3个月时重症患者均高于轻症和普通型患者(均P<0.05);NAb水平轻症与普通型比较差异无统计学意义(P>0.05);RBD抗体水平在不同患者差异无统计学意义(P>0.05)。SARS-CoV-2 NAb在病程不同阶段均与SARS-CoV-2 IgG和SARS-CoV-2 RBD Ab水平呈正相关。结论新冠患者血清5种抗体的消长规律不同,抗体水平与患者病情严重程度有关。采用磁微粒化学发光法检测SARS-CoV-2抗体可作为人群筛查和辅助诊断指标。     

SARS-CoV-2核酸复阳患者临床特点及不同标本核酸检测结果分析

目的了解SARS-CoV-2核酸复阳的2019新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)患者临床特征,为实行针对性管理提供参考依据。方法分析SARS-CoV-2核酸复阳COVID-19患者的临床表现和实验室检查结果,对该类患者住院期间和出院后呼吸道及粪便标本病毒核酸持续时间进行分析评估。结果43例患者中有15例在住院期间SARS-CoV-2核酸检测短暂转阴后又出现“复阳”(复阳组),复阳比例为34.9%,均为普通型患者。与病毒核酸未出现复阳患者(未复阳组)相比,复阳组在入院时多表现为轻度发热,咳痰持续时间更短,ESR、CRP、血清淀粉样蛋白A水平更低(P均<0.05);2组患者鼻咽拭子标本病毒核酸初始转阴时间差异无统计学意义,但与未复阳组相比,复阳组鼻咽拭子病毒最长脱落时间显著延长,痰液中病毒脱落时间显著延长,粪便核酸阳性率更高(P均<0.05)。呼吸道标本病毒核酸复阳和粪便标本中病毒核酸持续阳性患者均未发现胸部CT较前改变。结论SARS-CoV-2核酸复阳COVID-19患者多表现为轻症感染和病毒持续阳性的特征,同时该类患者存在痰液标本病毒脱落时间延长和粪便标本病毒核酸持续阳性的特点,因而对病毒核酸复阳患者应给予特别关注和更长时间的医学观察,以预防和控制疫情的再次传播。     

中药治疗对新型冠状病毒肺炎新型冠状病毒核酸长期未转阴患者核酸转阴率的影响

目的?探索中药治疗与新型冠状病毒肺炎新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2）核酸长期未转阴患者核酸转阴率的关系。方法?回顾性分析163例病程＞30 d的新型冠状病毒肺炎轻型及普通型患者,采集患者治疗策略（中药、胸腺肽、干扰素等）,以及人口学资料、伴随疾病、SARS-CoV-2核酸转阴时间等信息,以40 d转阴为因变量,其它变量为调整变量,采用Logistic回归模型,探索多因素下中药治疗对SARS-CoV-2核酸转阴率的影响。结果?未用中药治疗组患者平均转阴时间为49 d,长于用中药组患者平均转阴时间（40 d）（P＜0.05）。单因素分析结果显示,与40 d转阴相关的因素有总蛋白（total protein, TP）、白蛋白（albumin, ALB）、ALB/球蛋白（globulin, GLO）比值（ALB/GLO, A/G）、使用胸腺肽、使用干扰素、使用中药（P均＜0.05）;Logistic回归分析结果显示,在调整其它因素后,中药治疗能够显著增加患者的SARS-CoV-2核酸转阴率（OR=1.725,P=0.000）。结论?中药治疗能显著改善新型冠状病毒感染长期未转阴患者的SARS-CoV-2核酸转阴率。     

三种核酸扩增方法检测临床乙脑标本的比较

目的探索三种核酸扩增方法应用于临床乙脑标本检测的敏感性,建立能够适合于临床标本的检测方法,同时比较病毒核酸检测与血清学检测的相关性。方法分别采用普通逆转录PCR、逆转录套式PCR和SyBr Green I实时荧光PCR方法对48份疑似乙脑病例的血清或脑脊液标本进行检测,并比较了三种方法的检出限。结果血清学检测表明,48份标本中有18份标本IgM抗体阳性;3种病毒核酸检测,普通逆转录PCR和SyBr Green I实时荧光PCR方法未能检出阳性标本,而逆转录套式PCR检出15份阳性标本。结论三种核酸检测方法中,逆转录套式PCR最为敏感;单独依赖血清学检测会产生相当一部分假阴性,证明了临床实验室加强乙脑病毒核酸检测对临床诊断具有重要意义。     

利用新型冠状病毒核酸采样站应对突发公共卫生事件的思考

[摘要]?新型冠状病毒肺炎（新冠肺炎）疫情自2019年12月暴发以来,已形成全球大流行,严重危害人类生命安全。新型冠状病毒核酸检测阳性是确诊感染的首要诊断标准,核酸检测是有效排查、精准防控的重要手段。医疗机构作为保障人民生命安全的重要场所、疫情防控的前线,建设相对固定的核酸采样站是开展正常诊疗的重要保障。随着我国新冠肺炎疫情防控从应急状态转为常态化“后疫情时代”,大规模核酸采集已不再常规开展,但类似传染病仍有暴发可能,诸如批量检测抗原等类似的生物样本采集应对模式,亦有相应的应用空间。本文结合解放军总医院第五医学中心在新型冠状病毒流行期间建设核酸采样站的实践经验,分析核酸采样站的建设要点与注意事项,从核酸采样站的功能分区、器材配备、配套设施、运行保障等方面提出建设性意见,并在流程、布局等方面与其他集中采样站点建设模式进行比较,分析优劣,以期在应对类似突发公共卫生事件时为建设科学合理的采样站提供有益参考。     

Influenza and Other Respiratory Viruses: Vaccine against SARS-CoV-2: Challenges and considerations

It is essential to consider challenges previously faced and addressed while developing a vaccine against severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). Considering the severity of the health crisis that SARS-CoV-2 has caused worldwide, and with so little known about the virus, our focus should be drawn towards approaches that can bring better development outcomes in a relatively short period of time. This commentary discusses the use of nucleic acid (deoxyribonucleic acid and ribonucleic acid) vaccines against viral infections and pandemic-like settings. The potential advantages of the nucleic acid vaccines over conventional vaccines are presented, and the nucleic acid vaccines currently in development against viral infections and the challenges these vaccines face entering clinical trial are discussed.     

汉坦病毒核酸检测试剂参考品的研制

[摘要]　目的　研制汉坦病毒核酸检测试剂参考品并制定其质量评价标准。方法　收集汉坦病毒阳性和阴性临床分离株样本,制备汉坦病毒RNA噬菌体模拟样本,使用宏基因组测序方法和实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法进行核酸序列鉴定。选择合适样本组成参考品并使用不同试剂对参考品进行协作标定。根据标定结果确定汉坦病毒核酸检测试剂参考品的质量标准,并评估其稳定性。结果　汉坦病毒核酸检测试剂参考品由20份样本组成,包括阳性参考品5份（PC01～PC05）、阴性参考品11份（NC01～NC11）、精密性参考品2份（R01、R02）以及检出限参考品2份（S01、S05）。其中,检出限参考品1:10梯度稀释后,要求S02、S03为汉坦病毒汉滩型阳性,S06、S07为汉坦病毒汉城型阳性,其余样本不做要求。稳定性评价结果表明,汉坦病毒核酸检测试剂参考品经25 ℃室温放置24 h或反复冻融3次均不影响参考品性能。结论　本研究研制了汉坦病毒核酸检测试剂参考品,并制定了其质量标准,可应用于相关定性检测试剂的质量评价。     

咽拭子、鼻拭子、痰液中SARS-CoV-2核酸检测结果一致性及检出率分析

目的　通过对不同类型标本严重急性呼吸综合征冠状病毒2（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2）核酸检测结果的一致性及检出率分析,明确检测结果较优的标本类型。方法　回顾分析郑州市疾病预防控制中心自开展SARS-CoV-2核酸检测以来所有同时采集自同一被检者的不同种类的标本核酸检测结果,利用McNemar χ2检验分析不同标本病毒核酸阳性检出率的统计学差异;用kappa检验分析不同标本核酸检测结果的一致性。结果　本研究共有 61例被检者同时进行2种及以上标本的核酸检测,其中检测咽拭子标本158人次,痰液标本144人次,鼻拭子标本35人次;ORF1a/b基因和N基因同时检出率最高的为痰液标本（71.5%）,其次是鼻拭子标本（34.3%）,咽拭子标本检出率最低（29.1%）。同时进行痰液标本和咽拭子标本检测的有144人次,2者ORF1a/b基因检出率分别为75.0%、33.3%, N基因检出率分别为89.6%、42.4%,差异均有统计学意义（P均＜0.05）,ORF1a/b基因检出结果中2者间一致性差（k＜0.4）,N基因检出结果中2者间不存在一致性（k＜0）,痰液标本病毒核酸阳性检出率明显高于咽拭子标本;同时进行痰液标本和鼻拭子标本检测的有22人次,2者ORF1a/b基因检出率分别为63.6%、27.3%,N基因检出率分别为81.8%、40.9%,差异均有统计学差异（P均＜0.05）,ORF1a/b基因检出结果中2者间一致性差（k＜0.4）,N基因检出结果中2者间不存在一致性（k＜0）,痰液标本病毒核酸阳性检出率亦高于鼻拭子标本;同时进行鼻拭子标本和咽拭子标本检测的有35人次,鼻拭子标本病毒核酸阳性检出率高于咽拭子标本,2者ORF1a/b基因检出率分别为40.0%、25.7%,N基因检出率分别为51.4%、34.3%,但差异均无统计学意义（P均＞0.05）,一致性检验结果则表明2者一致性差（k均＜0.4）,因此2者在病毒核酸阳性检出率方面差异无统计学意义,但在核酸检出与未检出的结果方面存在差异,即检测结果可相互补充以提高检出率。结论　痰液标本病毒核酸阳性检出率高于咽拭子标本和鼻拭子标本,在人群筛查中3种标本检测结果可互相补充验证以减少漏诊。     

4例新型冠状病毒感染病例咽拭子与痰标本病毒核酸检测的比较

目的比较分析新型冠状病毒病例咽拭子与痰标本的病毒核酸检测效果。方法对4例新型冠状病毒确诊病例的咽拭子与痰标本分别进行人体细胞GAPDH管家基因、病毒ORF 1ab基因、N基因及S基因Real time RT-PCR核酸检测与比较。结果4例病例的咽拭子和痰标本中,人体细胞管家基因GAPDH均呈现明显典型的扩增信号曲线;病毒ORF 1ab基因、N基因及S基因核酸检测中,痰标本的扩增曲线信号均比咽拭子强,扩增曲线的CT值均低于咽拭子,在病例1和4表现更加明显,而病例4的咽拭子标本检测中,商品化试剂呈现阴性结果,而痰标本则呈现明显的阳性结果。结论在开展新型冠状病毒实验室核酸检测中,痰标本的病毒含量高于咽拭子标本,其检测效果优于咽拭子标本。     

Establishment and evaluation of a 30-minute detection method for SARS-CoV-2 nucleic acid using a novel ultra-fast real-time PCR instrument

BackgroundThe coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic is still raging worldwide. Efficient, fast and low-cost severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) nucleic acid detection methods are urgently needed.MethodsA rapid PCR temperature change mode was explored by moving the reaction tube between the independent temperature modules with large temperature differences and a portable ultra-fast real-time PCR instrument were developed. We established a rapid SARS-CoV-2 test method using the ultra-fast real-time PCR instrument, a China Food and Drug Administration-certified SARS-CoV-2 reagent and optimized reaction condition. The analytical and clinical performances of the rapid tests were evaluated by comparing with the standard SARS-CoV-2 tests.ResultsThe new temperature change mode can effectively shorten the amplification reaction time and be successfully used in the development of the ultra-fast real-time PCR instrument. The rapid SARS-CoV-2 test method was established and the time to yield results were greatly shortened from 81 min of the standard test to 31 min. Specificity of the rapid test was assessed and no non-specific amplification (0/63) was observed. The limits of detection of the rapid and standard tests were similar. Clinical performance was evaluated using 184 respiratory specimens from patients with suspected SARS-CoV-2 infection. The positive agreement between the rapid and standard tests was 100% (67/67), the negative agreement was 97.4% (114/117), and the kappa statistic was 0.965 (P<0.001). No significant differences in the Ct values for each target gene were observed between the rapid test and the standard test (P>0.05).ConclusionsWe had developed a 30-minute detection method for SARS-CoV-2 nucleic acid using a novel ultra-fast real-time PCR instrument. The rapid test method may impact on patient management.