半枝莲-白花蛇舌草药配伍对乳腺癌肺转移及细胞增殖的影响研究

目的：分析半枝莲-白花蛇舌草药配伍治疗对乳腺癌肺转移及细胞增殖的影响。方法：分别进行人高转移性乳腺癌细胞株（MDA231-LM2）及人乳腺癌细胞（MDA-MB-231）的培养,观察1组注入半枝莲-白花蛇舌草溶液、观察2组注入半枝莲溶液、对照组注入生理盐水,以荧光PCR法检测各组细胞白介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶1(MMP1)和趋化因子CXC基序配体1(CXCL1)表达情况,并进行比较;以酶联免疫法检测滴药12h、24h及48h后细胞570 nm吸收值,进而分析细胞增殖抑制率。结果：观察组各组细胞中IL-6、CXCL1、MMP1水平均低于对照组,且观察1组低于观察2组（P <0.05）。观察1组、2组于12 h、24 h及48 h细胞各时段吸收值均小于对照组,且观察1组各时段吸收值明显小于观察2组（P <0.05）;随着滴药时间推移,观察1组抑制率逐渐升高。结论：半枝莲-白花蛇舌草药配伍后对乳腺癌肺转移有积极控制效果,对细胞增殖产生明显的抑制效果。     

白花蛇舌草总黄酮体外对人肝癌细胞HepG-2的作用

目的:观察白花蛇舌草总黄酮体外对HepG-2肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法:以HepG-2细胞为实验细胞株,观察白花蛇舌草中的总黄酮对HepG-2肿瘤细胞形态的影响;用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果:白花蛇舌草总黄酮对HepG-2肿瘤细胞形态有影响,抑制其生长并诱导HepG-2肿瘤细胞的调亡。结论:白花蛇舌草中的总黄酮通过诱导凋亡对人肝癌细胞HepG-2有抑制增殖作用。     

白花蛇舌草的有效成分2-羟基-3-甲基蒽醌通过Fas/FasL信号通路诱导卵巢癌细胞凋亡

目的研究中药白花蛇舌草的有效成分2-羟基-3-甲基蒽醌对人卵巢癌细胞HO-8910生长的抑制作用和凋亡的影响。方法不同浓度的2-羟基-3-甲基蒽醌与人卵巢癌细胞HO-8910分别培养0、24、48、72 h,用台盼蓝染色法测定HO-8910细胞存活率;以Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测HO-8910细胞的凋亡率;Western blot法检测Fas和Fas L蛋白的表达;采用荧光比色法测定Caspase-3和Caspase-8蛋白酶的活性。结果随着2-羟基-3-甲基蒽醌浓度的增加及作用时间的延长,药物对HO-8910细胞的生长有明显的抑制作用;HO-8910细胞的凋亡率亦随之增高,且呈药物浓度及时间依赖关系;2-羟基-3-甲基蒽醌作用HO-8910细胞后Fas和Fas L的蛋白表达水平逐渐上升;Caspase-3和Caspase-8蛋白酶的表达亦逐渐增强;Caspase-3和Caspase-8抑制剂能够抑制2-羟基-3-甲基蒽醌诱导的HO-8910细胞凋亡。结论 2-羟基-3-甲基蒽醌可以诱导HO-8910细胞凋亡,Fas/Fas L通路在2-羟基-3-甲基蒽醌诱导的HO-8910细胞凋亡过程中起重要作用。     

下调表达VEGFR-2受体对神经胶质瘤U87细胞生物学行为的影响

目的 观察沉默血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)基因后对表达VEGFR-2受体的U87细胞生物学行为的影响.方法 合成VEGFR-2小干扰RNA(siRNA),转染人U87细胞,通过适时定量PCR检测筛选出最有效VEGFR-2 siRNA后,进行Western blot验证.转染的U87细胞,通过流式细胞术检测评价细胞凋亡,Transwell实验评价侵袭能力和MTT检测细胞增殖能力.结果 成功筛选出有效VEGFR-2 siRNA,体外研究,将其稳定转染人U87细胞.与空白对照组、阴性对照组相比,U87细胞表现出增殖能力和侵袭能力均下降,但未见明显细胞凋亡改变.结论 抑制U87细胞自身表达的VEGFR-2可有效地抑制其生长,降低侵袭能力.     

白花蛇舌草对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡、活性氧水平的影响研究

目的探讨白花蛇舌草注射液( HDI)对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞( HRCECs)增殖、凋亡、氧化应激的影响及机制。方法 2019年 10月至 2020年 6月,体外培养 HRCECs。将 HRCECs分为对照组( 5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞)、高渗对照组( 19.5 mmol/L甘露醇及 5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞)、高糖对照组( 25 mmol/L葡萄糖处理细胞)、白花蛇舌草组( HDI组)(6.25 mL/L、12.5 mL/L、25 mL/L、50 mL/L HDI和 25 mmol/L的葡萄糖处理细胞)。处理细胞 48 h,通过 CCK8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;激光扫描共聚焦显微镜检测活性氧水平。蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原( PCNA)、细胞周期蛋白 A1(CyclinA1)和活化胱天蛋白酶 -3(cleaved caspase-3)蛋白表达。结果与对照组比较,高糖组细胞活性明显升高［(1.116±0.105)比( 0.684±0.072)］(P<0.05)。与高糖组比较, 12.5 mL/L、25 mL/L和 50 mL/L的白花蛇舌草组细胞活性明显降低［( 0.847±0.076)、(0.639±0.058)、(0.421±0.042)比( 1.116±0.105)］(P<0.05)。选择 50 mL/L的白花蛇舌草作为研究对象。与对照组比较,高糖组 G0/G期细胞百分比［( 60.02±5.01)%比( 54.72±4.31)%］、细胞凋亡率［( 17.11±1.01)%比( 3.32±0.47)%］、活性氧水平［( 96.18±5.22)比( 42.14±3.56)］及 PCNA、CyclinA1和 cleaved caspase-3表达均明显升高, G2/M期和 S期细胞百分比明显降低( P<0.05)。与高糖组比较, HDI组 G0/G期细胞百分比［( 32.31±3.42)%比( 60.02±5.01)%］、细胞凋亡率［( 9.72±0.73)%比     

白花蛇舌草提取物对肝癌细胞 JNK/p38MARK通路及细胞学行为的影响

目的研究白花蛇舌草提取物( HDE)对肝癌 QGY细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其抗肿瘤的可能作用机制。方法体外培养肝癌 QGY细胞,分为对照组: RPMI-1640培养基培养;阳性对照组:全反式维甲酸( AT-RA)(5 μmol/L);白花蛇舌草提取物( HDE)低、中、高剂量组:分别给予 20、40、80 g/L HDE。四甲基偶氮唑盐比色法( MTT)检测细胞增殖能力,采用 Hoechst33258荧光染色以及流式 AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;通过蛋白质印迹法( Western blotting)检测增殖相关蛋白增殖细胞核抗原( PCNA)、凋亡相关蛋白 B淋巴细胞瘤基因 -2(Bcl-2)、 Bcl-2相关 X蛋白基因( Bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶 3(caspase3)及 JNK/p38MARK通路相关蛋白水平。结果 24、48 h时 QGY细胞增殖抑制率,与对照组［( 16.56±     

白花蛇舌草总黄酮通过下调NOX4表达对前列腺癌细胞侵袭、迁移、EMT的影响

目的 研究白花蛇舌草总黄酮对前列腺癌pc-3细胞侵袭和转移的影响并探讨其分子机制.方法 本研究于2019年3—10月在枣庄矿业集团中心医院实验室进行.分别以0.1 g/L、0.25 g/L、0.5 g/L浓度的白花蛇舌草总黄酮,10μmol/L尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)的抑制剂氯化二亚苯基碘鎓(DP...     

白花蛇舌草乙醇提取物联合吉非替尼对TGF-β1诱导的肺腺癌细胞H358上皮间质化的干预作用

目的 研究白花蛇舌草乙醇提取物(ethanol extract of Hedyotis diffusa,EEHD)联合吉非替尼对TGF-β₁诱导的肺腺癌细胞H358上皮间质化的干预作用。方法 以上皮表型人肺腺癌细胞H358为研究对象,TGF-β₁诱导构建细胞上皮间质化模型,按EEHD、吉非替尼及两药3种不同顺序联合作用分为6组：A组,EEHD作用48 h;B组,吉非替尼作用48 h;A24B24组,先EEHD作用24 h,后吉非替尼作用24 h;B24A24组,先吉非替尼作用24 h,后EEHD作用24 h;AB48组,同时加入吉非替尼和EEHD作用48 h;对照组。CCK-8法测定各组细胞坏死率,Western-blot检测各组细胞中E-cadherin、Vimentin、EGFR蛋白表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,比较组间差异。结果 各组药物作用均能不同程度抑制上皮间质化肺腺癌细胞H358增殖,E-cadherin表达呈上升趋势,Vimentin表达下降。其中EEHD联合吉非替尼组的细胞生长抑制率和细胞凋亡率显著高于吉非替尼单用组,E-cadherin蛋白表达率则显著高于吉非替尼单用组,而EGFR、Vimentin蛋白表达率显著低于吉非替尼单用组(P<0.05),EEHD与吉非替尼先后顺序作用组间差异无统计学意义。结论 EEHD与吉非替尼对上皮间质化的H358细胞具有联合抑制作用,白花蛇舌草可部分逆转H358细胞上皮间质化状态。     

OCCLUDIN对非小细胞肺癌SPC-A1细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨OCCLUDIN对非小细胞肺癌细胞SPC-A1增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 培养非小细胞肺癌细胞SPC-A1,通过siRNA转染干扰OCCLUDIN表达,实验中分为空白对照组（control组）、空转组（siCtrl组）和 siRNA转染组（siOCLN组）。采用 CCK-8、流式细胞术和 Western blot检测 OCCLUDIN对 SPC-A1细胞增殖和细胞凋亡的影响。结果 siOCLN 组细胞在 24、48、72、96 和 120 h 的增殖能力较 control 组和 siCtrl 组均明显降低（P＜0.05）。siOCLN 组细胞凋亡率高于 control 组和 siCtrl 组（P＜0.05）;siOCLN 组 Bax、caspase-3、caspase-9、AIF和 Cyt C等凋亡相关蛋白水平较control组和siCtrl组表达明显升高（P＜0.05）,而抗凋亡蛋白Bcl-2水平较control组和siCtrl组表达明显下降（P＜0.05）。同时,siOCLN组 AKT和 PI3K蛋白磷酸化水平较 control组和 siCtrl组明显降低（P＜0.05）。结论 OCCLUDIN可能通过调控PI3K/AKT信号通路促进SPC-A1细胞的增殖和抑制凋亡。     

分泌磷酸蛋白1对肺腺癌A549细胞生物学特性的影响

目的　探讨分泌磷酸蛋白1（SPP1）在肺腺癌（LUAD）中的表达情况及对LUAD细胞生物学功能的影响。方法　通过UALCAN、GEPIA数据库分析SPP1 mRNA在LUAD中的表达情况,GEPIA、K-M数据库分析SPP1 mRNA表达与预后的关系;通过实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot检测SPP1在LUAD组织及细胞系中表达情况。构建SPP1干扰序列并将其转染入A549细胞中,设为Blank组（不转染）、NC组（转染NC序列）、siSPP1组（转染siSPP1序列）。Western blot检测细胞中SPP1沉默效果;CCK-8、EdU、细胞克隆形成实验检测siSPP1对LUAD细胞增殖能力的影响;TUNEL实验检测siSPP1对LUAD细胞凋亡的影响;Transwell和划痕实验检测siSPP1对LUAD细胞侵袭和迁移能力的影响。结果　生物信息数据库分析显示,SPP1 mRNA在LUAD中高表达（P＜0.05）,且SPP1 mRNA高表达者累积生存率较低（P＜0.05）;LUAD组织及A549细胞中SPP1均高表达（P＜0.05）;沉默SPP1表达能够抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力,诱导细胞凋亡（P＜0.05）。结论　SPP1可作为肺腺癌诊治的潜在靶点,其可能通过调控细胞增殖、迁移及侵袭等特性影响肺腺癌的发生、发展。     

VEGF-C、VEGFR-3和LYVE-1的表达在胃癌淋巴管生成及预后中的作用*

目的检测胃癌组织中血管内皮生长因子C（VEGF-C）、血管内皮细胞生长因子受体-3（VEGFR-3）及淋巴管透明质酸受体-1（LYVE-1）的表达,探讨这3种因子在胃癌淋巴管生成和预后中的作用。方法应用组织微阵列技术（TMA）,通过免疫组化SP法检测125例胃癌组织标本、96例癌旁正常组织及20例胃良性病变中VEGF-C、VEGFR-3和LYVE-1的表达,并对Podoplanin标记的微淋巴管密度（LVD）进行检测。结果 VEGF-C、VEGFR-3和LYVE-1在胃癌组织中的阳性表达率分别为62.4%、56.0%和58.4%,高于癌旁正常组织中的10.4%、12.5%和9.4%及胃良性病变组织中的20.0%、30.0%和25.0%;胃癌组织中LVD在癌内和癌周的水平分别为2.98±0.81、4.22±1.09,高于癌旁正常组织中的1.82±0.63和胃良性病变组织中的0.89±0.45（均P＜0.05）,且癌周LVD高于癌内LVD（P＜0.01）;VEGF-C、VEGFR-3和LYVE-1表达与LVD均呈正相关（均P＜0.01）;也是胃癌远处和淋巴结转移的危险因素,阴性表达者5年生存率明显高于阳性表达者（P＜0.05）。结论胃癌组织中存在VEGF-C、VEGFR-3和LYVE-1的高表达,是影响胃癌患者预后的危险因素,检测这3个指标可预测胃癌淋巴管生成和判断预后。     

新化合物OSU-03012对结肠癌细胞增殖、迁移以及凋亡的影响

摘要： 目的 在细胞水平上初步探讨新化合物OSU-03012抗结肠癌的机制。方法 分别用1、 3、 5和10 μmol/L OSU-03012化合物干预的人结肠癌细胞株HCT-116作为研究对象, 以等体积二甲基亚砜 （DMSO） 处理的HCT-116 细胞作为对照组。CCK-8法检测各组细胞干预24、 48、 72 h时的抑制率, 划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移能力, 流式细胞术检测各组细胞凋亡情况, 免疫荧光、 Western blot检测各组细胞Bcl-2、 Caspase-3蛋白表达情况, Real-time PCR检测各组细胞Bcl-2、 Caspase-3 mRNA表达情况。结果 对照组、 1 μmol/L组、 3 μmol/L组、 5 μmol/L 组和10 μmol/L组的细胞抑制率、 凋亡率呈逐渐升高趋势, 而细胞迁移距离、 细胞迁移数目呈逐渐减小或降低趋势, 组间多重比较差异均有统计意义 （均P＜0.05）; 3、 5、 10 μmol/L组Bcl-2 mRNA和蛋白表达量低于对照组, 而Caspase-3 mRNA和蛋白表达量高于对照组 （均P＜0.05）。结论 新化合物OSU-03012可抑制结肠癌细胞增殖与迁移, 并促进结肠癌细胞凋亡, 且呈剂量依赖效应。     

芹黄素对体外人大肠癌Lovo细胞生物学活性的影响及机制研究

目的探讨芹黄素对体外人大肠癌Lovo细胞生物学活性的影响及其可能的作用机制。方法不同浓度的芹黄素作用于体外培养的人大肠癌Lovo细胞24、48或72 h,采用光学显微镜和透射电镜分别观察芹黄素对Lovo细胞形态和超微结构的影响;采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)和平板克隆形成实验分别检测芹黄素对Lovo细胞增殖和克隆形成能力的影响;采用PI染色法、Annexin V FITC/PI双染法,流式细胞术分别检测芹黄素对Lovo细胞周期分布和凋亡的影响;采用Western blot法检测芹黄素对Bcl-2、pro-caspase-3、cleaved caspase-3表达的影响。结果芹黄素可浓度-时间依赖性的抑制人大肠癌Lovo细胞的增殖及克隆形成,作用48、72 h时的半数抑制浓度IC50分别为98.05μmol·L-1及33.91μmol·L-1;细胞周期分布发生改变,主要表现在G0/G1期细胞比例减少、G2/M期细胞比例增加,细胞周期阻滞于G2/M期;细胞凋亡率增加;Bcl-2、pro-caspase-3表达下调;cleaved caspase-3表达上调;差异具有统计学意义(P<0.05)。结论芹黄素可通过阻滞细胞周期于G2/M期抑制Lovo细胞增殖,通过下调Bcl-2、pro-caspase-3表达,上调cleaved caspase-3表达,诱导Lovo细胞凋亡,是一种有开发前景的大肠癌化疗药物。     

长链非编码RNA BCYRN1对肺腺癌细胞生物学行为的影响

摘要：目的　探究长链非编码RNA（lncRNA）脑胞质RNA1（BCYRN1）在肺腺癌细胞中的表达及对细胞周期、凋亡、侵袭和迁移能力的影响。分析BCYRN1表达与肺腺癌患者临床病理特征及预后的关系。方法　分别培养正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺腺癌细胞A549、H1299,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测BCYRN1在正常细胞和肺腺癌细胞中的表达水平;分别将BCYRN1敲低及对照质粒转染入H1299肺腺癌细胞,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡的变化;通过划痕实验、Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化。结合癌症基因组图谱（TCGA）数据库,分析BCYRN1表达与肺腺癌患者临床病理特征的相关性。利用癌症阵列的lncRNA（lnCAR）数据库中lncRNAs表达数据,采用Cox回归分析BCYRN1表达与患者预后的关系。结果　BCYRN1在肺腺癌细胞中的表达水平显著高于肺正常上皮细胞（P＜0.05）;流式细胞分析提示BCYRN1敲低组的细胞出现S期阻滞,细胞凋亡率增加;划痕实验和Transwell实验显示BCYRN1敲低组H1299细胞侵袭和迁移能力减弱。生物信息学分析显示BCYRN1的表达与患者的N分期和肿瘤分期相关（P＜0.05）,BCYRN1高表达患者总生存期显著缩短。结论　LncRNA BCYRN1在肺腺癌细胞中高表达,下调BCYRN1可抑制肺腺癌细胞的侵袭和迁移能力,并使细胞周期发生阻滞。其高表达与肺腺癌患者N分期和肿瘤分期相关,BCYRN1高表达患者预后较差。     

甘草次酸对胃癌细胞SGC7901增殖、凋亡及PI3K-Akt-mTOR通路的影响

目的 探究甘草次酸对胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡及PI3K-Akt-mTOR通路的影响。方法 体外培养胃癌SGC7901细胞,分为对照组和甘草次酸低、中、高浓度（12.5、25.0、50.0 μmol/L）组,药物处理24、48、72 h后,CCK-8法检测细胞增殖情况;药物处理48 h后,流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡情况;Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3以及PI3K-Akt-mTOR信号通路中磷酸化PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平。结果 甘草次酸低、中、高浓度组胃癌SGC7901细胞增殖受到明显抑制,并呈时间和剂量相关性（P<0.05）。与对照组比较,甘草次酸低、中、高浓度组胃癌SGC7901细胞G₀/G₁期细胞比例显著降低（P<0.05）,G₂/M期细胞比例及凋亡率显著升高（P<0.05）,Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论 甘草次酸可抑制胃癌SGC7901细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与抑制PI3K-Akt-mTOR信号通路激活有关。     

肾上腺髓质素对肾肿瘤细胞 PI3 K／Akt／eNOS／VEGF信号通路的作用

目的：研究肾上腺髓质素（ADM）对肾肿瘤细胞磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）／蛋白激酶B（Akt）／内皮型一氧化氮合酶（ eNOS）／血管内皮生长因子（ VEGF）信号通路的影响。方法将肾肿瘤细胞分为对照组、ADM组、VEGF组,ADM＋VEGF受体抑制剂组,ADM＋ADM shRNA组,每组设置24 h、48 h、72 h 3个时间梯度,western-blot检测对照组和ADM组细胞总蛋白中PI3K、Akt、eNOS、VEGF表达;检测VEGF组,ADM＋VEGF受体抑制剂组和ADM＋ADM shRNA组细胞总蛋白中PI3K、Akt、eNOS的表达。结果 PI3K、Akt、eNOS、VEGF在ADM组各时间梯度组肾肿瘤细胞中表达明显高于其在对照组细胞的表达（ P ＜0．05）。 PI3K、Akt、eNOS在VEGF组和ADM＋VEGF受体抑制剂组各时间组肾肿瘤细胞中表达明显高于其在对照组细胞中表达（ P ＜0．05）。 PI3K、Akt 、eNOS在ADM＋ADM shRNA组各时间组肾肿瘤细胞中表达与其在对照组细胞中表达差异无统计学意义（ P ＞0．05）。结论 ADM可激活PI3K／Akt／eNOS／VEGF信号通路;VEGF 受体抑制剂不能阻断 ADM 激活 PI3K／Akt／eNOS 信号通路。 ADM 一方面通过VEGF发挥肾肿瘤血管生成作用,另一方面通过其受体激活PI3K／Akt／eNOS信号通路参与肾肿瘤血管生成作用。ADM可能成为抗血管治疗肾肿瘤新的靶点。     

高盐对血管内皮生长因子受体-3+巨噬细胞表型及功能的影响

目的 观察高盐对血管内皮生长因子受体（VEGFR）-3+巨噬细胞表型、淋巴管内皮细胞特性及功能的影响。方法 利用流式分选将小鼠RAW264.7巨噬细胞中VEGFR-3+亚群分选出来,分为Control组、低盐组（LS组,20mmol/L NaCl）和高盐组（HS组,40 mmol/L NaCl）。利用CCK-8法观察不同组VEGFR-3+细胞活性;Real-time PCR检测NaCl干预后VEGFR-3+巨噬细胞表型变化及淋巴管内皮细胞标志物mRNA表达水平;Transwell实验检测各组细胞的迁移功能,流式细胞术检测不同组细胞的吞噬能力。结果 与Control组相比,高盐干预可以使VEGFR-3+巨噬细胞的白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α、CC类趋化因子配体（CCL）2、血管内皮生长因子（VEGF）-C及张力应答性增强子结合蛋白（TonEBP）mRNA表达水平上调（P＜0.05）;HS组在高盐干预24、48 h后细胞活性均显著低于LS组（P＜0.05）;同时,HS组细胞迁移能力及细胞的吞噬能力与Control组相比显著增强,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 高盐可使VEGFR-3+巨噬细胞向M1型巨噬细胞偏移并表现出促淋巴管生成的特性,其迁移及吞噬能力显著增强,为进一步研究该亚群与淋巴管生成及心血管疾病的关系提供了依据。