基于磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路小干扰RNA沉默微小RNA-373对喉癌细胞的影响#br#

目的　探讨磷脂酰肌醇3激酶（Phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）/蛋白激酶B（Protein kinase B,Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号通路小干扰RNA（Small interfering RNA,siRNA）沉默微小RNA-373（Microrna-373,miR-373）对喉癌细胞生物学行为的影响。方法　喉癌TU212细胞株经常规培养后分为空白组、空白转染组、过表达组和沉默组,四组细胞分别培养。检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力及PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达。结果　与过表达组相比,沉默组miR-373、P13K、AKT、mTOR表达量较低（P＜0.05）;沉默组24、48、72 h细胞增殖率较低,72 h细胞凋亡率较高（P＜0.05）;沉默组细胞迁移率较少、侵袭数较少（P＜0.05）。结论　沉默miR-373可能通过作用于PI3K/AKT/mTOR信号通路,下调P13K、AKT、mTOR表达,抑制喉癌细胞增殖、迁移、侵袭,促进凋亡。     

TrkB通过调控PI3K/AKT途径诱导喉癌Hep-2细胞上皮间质化发生的作用机制研究

目的　观察TrkB如何通过PI3K/AKT通路诱导喉癌Hep-2细胞上皮间质化发生的作用机制并探讨其意义。方法　分别用含0、100、500、1000 nmol/L抑制剂K252a作用于Hep-2细胞,CCK-8法检测细胞的增殖活性,划痕法检测细胞的迁移能力,Transwell小室法检测细胞的侵袭能力,同时用Western-blot检测Hep-2细胞中p-Akt、p-c-Src、E-cadherin蛋白的表达情况。结果 100 nmol/L组在各时间点对Hep-2细胞增殖的抑制率分别为17.8%、20.5%、19.7%;500 nmol/L组在各时间点对Hep-2细胞增殖的抑制率分别为48.2%、46.8%、45.9%;1000 nmol/L组在各时间点对Hep-2细胞增殖的抑制率分别为51.3%、83.0%、81.5%;K252a（1000 nmol/L）组迁移率及穿膜细胞数分别为21%及46,对照组迁移率及穿膜细胞数分别为69%和221,差异均具有统计学意义（t =1.235、t =3.416,P 均<0.01）;与对照组比较,K252a（1000 nmol/L）组Hep-2细胞中p-Akt及p-c-Src蛋白表达量显著降低,分别为0.93±0.12、0.21±0.05、0.72±0.09、0.14±0.02,差异均有统计学意义（t =3.578、2.634,P 均<0.01）;且对照组中E-cadherin蛋白表达量为0.14±0.02,K252a（1000 nmol/L）组Hep-2细胞中E-cadherin蛋白表达量为0.75±0.08,差异有统计学意义（t =2.852,P <0.01）。结论 TrkB可能通过激活PI3K/Akt信号通路来诱导喉癌细胞EMT的发生。     

环状RNA BCRC-3对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响研究

目的　观察鼻咽癌组织和细胞株中环状RNA（circular RNA,circRNA）BCRC-3的表达,探讨环状RNA BCRC-3对细胞周期依赖性激酶抑制蛋白B（cyclin dependent kinase inhibitors B,DKNIB）基因表达的调控及对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响。方法 荧光实时定量聚合酶链式反应（qPCR）分别检测circRNA BCRC-3在83例鼻咽癌组织及62例慢性鼻咽炎组织、鼻咽癌细胞株及人永生化鼻咽上皮细胞中的表达。以circRNA BCRC-3表达最低的细胞株为转染对象,分别转染阴性对照质粒（对照组） 或载有circRNA BCRC-3序列的质粒（实验组）。MTS法和细胞划痕实验分别检测上调circRNA BCRC-3对细胞增殖和迁移能力的影响。qPCR检测上调环状RNA BCRC-3对DKNIB基因mRNA表达的影响,Western blot检测DKNIB蛋白和PI3K/AKT信号通路蛋白的表达。结果 与慢性鼻咽炎组织相比,circRNA BCRC-3在鼻咽癌组织中表达显著降低（P <0.01）。与人永生化鼻咽上皮细胞相比,环状RNABCRC-3在鼻咽癌细胞株中表达显著降低（P <0.01）,在HONE-1细胞中的表达最少（P <0.01）。与对照组比较,实验组HONE-1细胞增殖能力从第2天开始明显下降（P <0.05）,HONE-1细胞迁移能力明显降低（P <0.01）,HONE-1细胞中DKNIB在mRNA和蛋白水平的表达明显上升（P <0.01）,PI3K/AKT信号通路蛋白PIP3、PDK1、p-AKT和AS160表达明显下降。结论 circRNA BCRC-3在鼻咽癌组织和细胞株中呈低表达,上调circRNA BCRC-3可抑制鼻咽癌HONE-1细胞的增殖和迁移能力,其机制可能是circRNA BCRC-3通过上调DKNIB基因表达,抑制PI3K/AKT信号通路转导。     

Klotho基因在喉癌TU686细胞增殖和转移中的作用及调控机制

目的　探讨Klotho对喉癌TU686细胞增殖和转移的影响及其机制。方法　将TU686细胞分为对照组、空载体组和Klotho过表达组,采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,平板克隆实验检测细胞克隆数,Transwell小室检测细胞迁移与侵袭,免疫印迹法检测Klotho和钙黏蛋白E（E-cadherin）、神经钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白 （Vimentin）、β-连环蛋白（β-catenin）、c-myc、细胞周期素D1（CyclinD1）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达。结果　与对照组相比,Klotho过表达组细胞存 活率[（65.36±4.55）% vs（100.00±6.52）%]、克隆数（38.50±2.63 vs 67.36±4.50）、迁移细胞数（72.35±6.48 vs 126.85±11.56）、侵袭细胞数（47.93±3.23 vs 90.76±6.35）和N-cadher in（0.14±0.01 vs 0.62±0.03）、Vimentin（0.29±0.03 vs 0.76±0.05）、β-catenin（0.15±0.02 vs 0.82±0.06）、c-myc（0.22±0.03 vs 0.72±0.05）、CyclinD1（0.34±0.03 vs 1.18±0.09）、MMP-9（0.19±0.02 vs 1.09±0.08）蛋白表达水平明显降低,而细胞中Klotho（1.17±0.10 vs 0.33±0.02）和E-cadherin（0.85±0.06 vs 0.21±0.03）表达水平明显升高（P <0.05）;但空载体组与对照组间差异无统计学意义（P >0.05）。结论　Klotho可抑制喉癌TU686细胞增殖和转移,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

肺腺癌转移相关转录本-1沉默对喉癌细胞增殖、凋亡及丝氨酸苏氨酸蛋白激酶通路的影响

目的　探讨RNA干扰技术（RNAi）沉默肺腺癌转移相关转录本-1（MALAT-1）基因对喉癌细胞增殖、凋亡及丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（Akt）信号通路影响。方法  体外培养人喉癌细胞Hep-2、正常永生化表皮细胞Hacat,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测细胞中MALAT-1mRNA表达水平。采用RNAi技术将MALAT-1阴性对照质粒、si-MALAT1分别转染至Hep-2细胞,命名为si-NC组、si-MALAT1组,未处理组作为空白对照组,分别检测三组Hep-2细胞中MALAT-1及B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bax、caspase-3 mRNA表达水平、Bcl-2、Bax、caspase-3、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）及其磷酸化蛋白（p-PI3K）、Akt及其磷酸化蛋白（p-Akt）蛋白表达情况以及细胞增殖及凋亡情况。结果　与正常细胞相比,喉癌Hep-2细胞中MALAT-1 mRNA表达水平（3.24±1.02）升高（P＜0.05）;与空白对照组、si-NC组相比,si-MALAT-1组Hep-2细胞中MALAT-1 mRNA表达水平（0.47±0.08）及Bcl-2 mRNA（0.56±0.09）及蛋白（0.31±0.05）表达降低,细胞增殖抑制率及凋亡率[（20.48±3.41）%]均升高,Bax、caspase-3mRNA（3.02±0.50、2.58±0.43）及蛋白表达（0.86±0.14、0.94±0.16）均升高,p-PI3K、p-Akt蛋白表达（0.57±0.10、0.51±0.08）均降低（P 均＜0.05）。结论　MALAT-1沉默可抑制人喉癌细胞系Hep-2细胞增殖并提高其凋亡率,推测可能通过影响Akt信号通路诱导癌细胞凋亡。     

上皮膜蛋白1调控人鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的　探讨上皮膜蛋白1（epithelial membrane protein 1,EMP1）对人鼻咽癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法　通过脂质体介导,对人鼻咽癌细胞CNE-1（简称CNE-1）分别进行pcDNA3.1（+）空载体质粒和pcDNA3.1（+）-EMP1过表达重组质粒转染。采用实时荧光定量PCR、免疫印记技术检测转染CNE-1与人鼻黏膜上皮细胞HNEpC（简称HNEpC）中EMP1的表达水平。后续实验分 3组,分别为CNE-1组（对照组）、pcDNA3.1（+）空载体质粒转染CNE-1（空载体组）和pcDNA3.1（+）-EMP1过表达重组质粒转染CNE-1（过表达组）,进行CCK8、集落形成实验、Transwell迁移与侵袭实验,比较3组中EMP1的表达对肿瘤细胞活力、细胞增殖、细胞迁移与侵袭的影响。结果  EMP1 mRNA和EMP1在对照组中的相对表达量均显著低于过表达组和HNEpC组,差异均有统计学意义（P 均<0.05）,与空载体组比较差异无统计学意义（P >0.05）。细胞活力、集落形成率、细胞迁移及侵袭数,对照组均显著 高于过表达组,差异均有统计学意义（P 均<0.05）,与空载体组比较差异无统计学意义（P >0.05）。结论　EMP1在CNE-1和HNEpC中表达有差异,体外实验证实了上调EMP1表达可抑制肿瘤细胞增殖、迁移与侵袭的生物学行为。     

miR-30c对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 观察miR-30c对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法 过表达miR-30c质粒载体转染CNE-1细胞,同时设立空质粒载体转染阴性对照组和无处理的空白对照组。荧光定量PCR检测miR-30c表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果 鼻咽癌组织中miR-30c的表达量为0.23±0.05,显著低于癌旁非肿瘤鼻咽组织的0.37±0.08（P <0.01）。过表达miR-30c组表达量（0.46±0.12）显著高于空白对照组（0.17±0.03）和阴性对照组（0.18±0.04）（P 均<0.01）。在24、48、72小时过表达miR-30c组OD值显著低于空白对照组和阴性对照组（P 均<0.01）。过表达miR-30c组G1期细胞比例（90.36±10.23）% 显著高于空白对照组（74.46±9.14）%和阴性对照组（75.25±9.23）%（P <0.01）。过表达miR-30c组凋亡细胞比例（31.06±5.12）%显著高于空白对照组（3.18±0.72）%和阴性对照组（3.56±0.78）%（P <0.01）。结论 过表达miR-30可以现在抑制鼻咽癌细胞增殖、细胞周期以及诱导细胞凋亡。     

淋巴管内皮透明质酸受体-1标记的喉鳞状细胞癌组织淋巴管密度测定及其临床意义

目的：探讨喉鳞状细胞癌组织中微淋巴管密度、位置及增殖情况与喉癌生物学行为和临床病理因素的关系。方法：利用LSAB免疫组化三步法研究淋巴管内皮特异性标记物淋巴管内皮透明质酸受体-1（LYVE-1）在喉鳞状细胞癌组织中的表达，光镜和图像分析观察微淋巴管密度并对淋巴管进行定位；EnVision免疫组化二步法研究Ki67在LYVE-1（＋）管腔的表达，评价淋巴管增殖情况。结果：①颈淋巴结转移组瘤巢内LYVE-1（＋）管腔密度高于非转移组，差异有统计学意义（P〈0．01）；T1组瘤巢内LYVE-1（＋）管腔密度低于T2、T3、T4组，差异具有统计学意义（均P〈0．01），T2组瘤巢内LYVE-1（＋）管腔密度低于T3、T4组，差异有统计学意义（均P〈0．05），T3组与T4组瘤巢内LYVE-1（＋）管腔密度相比差异无统计学意义（P=0．582）；瘤巢内LYVE-1（＋）管腔密度在声门型组与声门上型组、鳞癌Ⅰ级组与鳞癌Ⅱ级组之间差异无统计学意义（均P〉0．05）。②颈淋巴结转移组瘤巢周LYVE-1（＋）管腔密度高于非转移组，差异无统计学意义（P〉0．05）。⑧瘤巢内LYVE-1（＋）管腔存在Ki67核棕黄色着色，瘤巢周LYVE-1（＋）管腔未见这一现象。结论：喉鳞状细胞癌组织LYVE-1标记的瘤巢内淋巴管密度与肿瘤浸润、淋巴结转移正相关；喉鳞状细胞癌肿瘤淋巴管生成主要在瘤巢内，瘤巢内淋巴管在肿瘤的浸润、转移过程中发挥更为重要的作用。     

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨虎杖苷诱导鼻咽癌细胞凋亡的初步研究

目的　基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨虎杖苷（polydatin, PYD）诱导鼻咽癌细胞凋亡的机制。方法 用不同梯度浓度的PYD处理CNE-1细胞后,采用CCK-8法检测虎杖苷对CNE-1细胞增殖的抑制作用,吖啶橙/溴化乙锭（acridine orange/ethidium bromide,AO/EB）双荧光染色法显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪分细胞周期分布;qRT-PCR和Wester n blot法检测细胞中PI3K、AKT、mTOR、p70S6K的mRNA和蛋白表达。结果 CNE-1细胞经不同PYD（40、80、160 μg/ml）干预48小时 后,CNE-1细胞增殖抑制率,凋亡率呈浓度依赖性增加;G0/G1、S期细胞的百分比呈浓度依赖性降低,而G2/M期细胞的百分比呈浓度依赖性增加;CNE-1细胞中PI3K、AKT、mTOR、p70S6K的mRNA和蛋白表达明显下调,均呈浓度依赖性。结论　PYD具有抑制鼻咽癌CNE-1细胞增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能是PI3K/AKT/mTOR信号通路受到PYD抑制,致使其下游基因蛋白表达下降。     

侵袭性分化型甲状腺癌外周血中性粒细胞/淋巴细胞比值的临床意义

目的　检测侵袭性分化型甲状腺癌患者术前中性粒细胞与淋巴细胞比值（neutrophil-lymphocyte ratio，NLR），探讨用NLR指标评估局部晚期甲状腺癌的临床意 义。方法　采用1：1配对病例对照研究设计法，共收集侵袭性分化型甲状腺癌（侵袭组）和微小乳头状癌（非侵袭组）各40例患者，记录并计算术前NLR及C反应蛋白数值，比较侵袭组和非侵袭组之间的NLR和C反应蛋白的差异，以ROC曲线评价各指标对侵袭性分化型甲状腺癌的临床意义。结果　侵袭组NLR为2.61±1.15，显著高于非侵袭组1.76±0.84，两组之间比较差异有统计学意义（F =5.016，P =0.034），而两组之间C反应蛋白差异无统计学意义（F =2.136，P =0.158）。NLR对侵袭性分化型甲状腺癌患者诊断的曲线下面积为0.766，NLR诊断侵袭性分化型甲状腺癌的最佳临界值为1.95，敏感度为77.3%，特异度为69.1%。结论　NLR可以作为评价甲状腺癌患者局部侵袭的指标之一，NLR值越高，局部侵袭风险越大。     

缺氧诱导因子1在下咽癌中的表达及对细胞生物学功能的影响[论著]

目的　检测缺氧诱导因子1（hypoxia inducible factor-1,HIF-1）在下咽癌中的表达及对下咽癌细胞生物学功能的影响。方法　应用real-time PCR技术检测30例下咽癌组织和对应的癌旁组织中HIF-1的表达水平;将HIF-1过表达载体转染至下咽癌细胞FaDu细胞中,并通过观察绿色荧光蛋白、Western blot和real-time PCR技术检测转染效 率;Transwell小室实验检测细胞迁移能力;CCK8法检测细胞增殖。结果　HIF-1在下咽癌组织中高表达,表达量为1.436±0.2575,在癌旁组织中的表达量为0.7337±0.2575,差异有统计学意义（t =2.725,P <0.05）,以上结果与TCGA数据库分析结果一致。转染HIF-1过表达组发生转移的细胞数量（78.33±10.84）较对照组（35±10.84）增多,差异有统计学意义（t =3.999,P <0.05）;转染HIF-1过表达组细胞增殖能力（OD72h=1.64,OD96h=1.85）均高于对照组（OD72h=1.34,OD96h=1.59）,差异有统计学意义（t =1.715,P <0.05）。结论 HIF-1促进下咽癌细胞FaDu的迁移和增殖能力,并参与下咽癌的转移。     

LncRNA SNHG12靶向结合miR-206对甲状腺乳头状癌增殖、凋亡及AKT3蛋白的作用机制CSCD

目的 研究lncRNA SNHG12靶向结合miR-206对甲状腺乳头状癌增殖、凋亡及AKT3蛋白的作用机制。方法选取2020年1月～2021年1月于新乡市中心医院接受治疗的甲状腺乳头状癌患者的癌组织与癌旁组织标本各10例作为研究对象。将甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞分成3组：实验组（TPC-1常规培养无处理组）、转染组（SNHG12基因沉默组）和对照组（转染不相关序列组）。RT-PCR检测lncRNA SNHG12、miR-206水平，CCK-8检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，免疫印迹检测AKT3，双荧光素酶报告检测lncRNA SNHG12靶向miR-206，双荧光素酶报告检测向miR-206靶向AKT3。结果 lncRNA SNHG12在甲状腺乳头状癌组织中的表达量高于癌旁组织（t=11.240,P<0.05）,miR-206在甲状腺乳头状癌组织中的表达量低于癌旁组织（t=6.795,P<0.05）。lncRNA SNHG12在正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中的表达水平最低，在TPC-1中的表达量高于在K1、BCPAP细胞中的表达（t=5.753,P<0.05）。miR-206在正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中的表达水平最高，在TPC-1细胞中的表达低于在K1、BCPAP细胞中的表达（t=11.000,P<0.05）。与对照组相比，转染组lncRNA SNHG12表达水平、细胞凋亡率、AKT3蛋白表达降低（t=5.306,P <0.05;t=19.850,P <0.001;t=12.440,P <0.001），而miR-206表达升高（t=2.504,P<0.05），转染组在24、48、72 h的细胞增殖低于对照组（F=42.000、69.740、52.510,P<0.01）。结论 低表达的lncRNA SNHG12通过靶向上调miR-206表达、抑制AKT3蛋白，从而抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖并促进其凋亡。     

基于丝氨酸/苏氨酸激酶信号观察芬太尼对鼻咽癌细胞增殖侵袭的作用机制

目的　基于丝氨酸/苏氨酸激酶（RhoA/Rho）信号通路观察芬太尼（简称芬太尼）对鼻咽癌细胞增殖侵袭的影响。方法　传代培养高侵袭性鼻咽癌细胞系CNE2,分为空白对照组（加入无血清培养基）、抑制剂组（加入RhoA激酶抑制剂C3转化酶）、芬太尼组（加入药物芬太尼）。MTT实验、划痕实验及Transwell检测细胞增殖、迁移 和侵袭能力,采用qRT-PCR法、Western blot法检测 RhoA、Rho的mRNA和蛋白表达。采用Western blot法检测RhoA/Rho激活后的下游效应产物MYPT1蛋白。结果　与空白对照组比较,芬太尼组与抑制剂组细胞克隆数、细胞增殖率、细胞迁移率均显著降低（t =24.947、22.329、5.361、4.789、9.262、8.968,P 均＜0.05）;抑制剂组与芬太尼组RhoA以及Rho的mRNA转录水平显著低于空白对照组（t =7.712、8.261、7.983、7.905,P 均＜0.05）;与空白对照组相比,芬太尼组与抑制剂组的RhoA、Rho以及MYPT1蛋白表达明显降低（t =2.661、3.105、3.862、3.429、4.656、4.648,P 均＜0.05）。结论　芬太尼可抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭,该作用可能与其抑制Roha/Rho激酶信号密切相关。     

微小RNA-30a-5p调控喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的　探讨miR-30a-5p对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖凋亡的影响及其机制。方法 用实时荧光定量PCR检测喉癌及癌旁组织中miR-30a-5p的表达;将Hep-2细胞分为NC组（转染miR-30a-5p mimics阴性对照）、miR-30a-5p组（转染miR-30a-5p mimics）、anti-NC组（转染miR-30a-5p inhibitor阴性对照）和anti-30a-5p组（转染miR-30a-5p inhibitor）,MTT实验、平板克隆形成实验和Annexin V-FITC/PI 双染实验分别检测细胞增殖、克隆形成和细胞凋亡情况。双荧光素酶报告基因实验检测miR-30a-5p和SOX9的靶向关系。结果　与癌旁组织表达量（1.00±0.10）相比,喉癌组织中miR-30a-5p的表达水平（0.37±0.03）显著降低（P <0.05）。与NC组相比,miR-30a-5p组细胞活性（48小时：0.42±0.03 vs 0.58±0.04）降低,细胞克隆数（75.36±6.85 vs 136.25±10.50）降低,细胞凋亡率[（23.86±2.21）% vs（9.95±1.16）%]升高（P <0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示,转染SOX9-WT质粒的Hep-2细胞荧光素酶活性明显降低（P <0.05）,而转染SOX9-MUT质粒的Hep-2细胞荧光素酶活性无显著变化。anti-miR-30a-5p组对He p -2细胞的作用与miR-30 a -5p组相反。结论  miR-30a-5p可能通过靶向下调SOX9抑制喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖并促进细胞凋亡。     

白藜芦醇对甲状腺癌SW579细胞株的抗肿瘤作用及机制探讨

目的 观察白藜芦醇对甲状腺癌SW579细胞株的抗肿瘤作用并探讨可能作用机制。方法　体外常规培养甲状腺癌SW579细胞,将细胞分为对照组和白藜芦醇组（终 浓度为20、40、80 μmol/L）,MTT法检测甲状腺癌SW579细胞活性,BrdU荧光染色检测甲状腺癌SW579细胞增殖,DAPI染色法检测细胞凋亡,caspase-3和caspase-9活性检测试剂盒分析白藜芦醇对甲状腺癌SW579细胞亡的作用机制。结果　白藜芦醇（20、40、80 μmol/L）组甲状腺癌SW579细胞活性、BrdU表达、DAPI染色显著低于对照组,但细胞内caspase-3和caspase-9活性上升（P＜0.01）。Ac-DEVD-CHO和ZLEHD-FMK可显著提高白藜芦醇组（80 μmol/L）中甲状腺癌SW579细胞的活性（P＜0.05）。结论  白藜芦醇对抗甲状腺癌细胞具有抑制作用,通过激活caspase-3和caspase-9内源性凋亡信号通路可能是其作用机 制之一。     

生存素调控季节性变应性鼻炎患者鼻黏膜CD4+T细胞凋亡的机制

目的　探讨生存素（Survivin）调控季节性变应性鼻炎（seasonal allergic rhinitis,SAR）患者鼻黏膜CD4+T细胞凋亡的机制。方法　选择2018年5月～2019年5月西安市中医院收治的50例SAR患者为研究组,同期收治的50例单纯进行鼻中隔检查者为对照组,比较两组鼻黏膜组织中Survivin浓度。分离50例SAR患者鼻黏膜CD4+T细胞,将CD4+T细胞分为空白对照组、阴性对照组、Survivin过表达组,空白对照组不作任何处理,阴性对照组转染无关干扰序列,Survivin过表达组转染Survivin过表达质粒,采用流式细胞术检测各组CD4+T细胞凋亡率,采用Western blot检测各组CD4+T细胞中Survivin、磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphoinositide3-kinase,PI-3K）、磷酸化丝氨酸苏氨酸激酶（phosphorylated ser ine threonine kinase,p-AKT）蛋白表达量。结果  研究组鼻黏膜组织中Survivin浓度较对照组明显升高（P＜0.05）;Survivin过表达组CD4+T细胞中Survivin蛋白表达量明显高于空白对照组、阴性对照组（P＜0.05）;阴性对照组与空白对照组CD4+T细胞中Survivin蛋白表达量比较差异无统计学意义（P＞0.05）;Survivin过表达组CD4+T细胞凋亡率明显低于空白对照组、阴性对照组（P＜0.05）;阴性对照组与空白对照组CD4+T细胞凋亡率比较差异无统计学意义（P＞0.05）;Survivin过表达组CD4+T细胞中PI3K、p-AKT蛋白表达量明显高于空白对照组、阴性对照组（P＜0.05）;阴性对照组与空白对照组CD4+T细胞中PI3K、p-AKT 蛋白表达量比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论　Survivin可能通过激活PI3K/AKT信号通路抑制SAR患者鼻黏膜CD4+T细胞凋亡。     

甲状腺微小乳头状癌潜在高风险侵袭性的生物信息学初步分析

目的　基于转录组测序技术筛选甲状腺微小乳头状癌潜在高风险侵袭性相关的差异表达基因,生物信息学进一步分析探讨具有调控作用的分子通路并寻找功能性靶向基因。方法　应用转录组测序技术对15例潜在高风险侵袭性（7例局部淋巴结转移,3例腺体外组织侵犯,5例多癌灶）和9例惰性甲状腺微小乳头状癌进行差异表达基因的 筛查,并对差异基因进一步行生物信息学在线分析。结果  共筛选出1269个差异基因。经GO数据库分析,差异基因主要聚类在趋化性、细胞黏附、细胞-基质黏附、钙黏蛋白结合等集合中（P <0.05）;经KEGG数据库分析,肌动蛋白细胞骨架调节通路（regulation of actin cytoskeleton）、细胞的焦点粘连通路（focal adhesion）、PI3K-Akt信号通路（PI3K-Akt signaling pathway）、黏着小带通路（adherens junction）以及癌症途径通路（pathways in cancer）差异基因富集的显著程度高（P <0.05）,是应关注的关键通路;其中,功能性下调基因ITGA2、ITGA3和ITGAV差异表达明显,富集程度较高,处于信号通路的核心调控位置,是与PTMC潜在高风险侵袭性相关的重要基因（P <0.05）。结论  与惰性PTMC相比,具有潜在高风险侵袭性特征的PTMC在基因表达的整体模式上存在明显差异,而整合素家族的ITGA2、ITGA3和ITGAV基因是需要重点关注的与PTMC潜在高风险侵袭性相关的功能性靶向基因。     

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征导致脑干损伤的颈性前庭诱发肌源性电位评估

目的　通过颈性前庭诱发肌源性电位（cVEMP）评估阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）患者氧化应激、局部缺血、周期性缺氧引起的脑干损伤情况。方法 搜集了2015年11月～2018年3月收治的33例OSAHS患者，中度8例，重度25例，双侧均行cVEMP测试的临床资料；以33例健康成年人作对照组。比 较OSAHS组、对照组cVEMP的引出率、潜伏期和振幅的差异。结果　①组内比较：OSAHS组的左右侧、对照组左右侧cVEMP的引出率、潜伏期、振幅进行比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。②组间比较：OSAHS组与对照组的cVEMP的引出率分别66.67%、100.00%，差异具有统计学意义（P＜0.05），其中重度OSAHS的cVEMP引出率为64.00%。OSAHS组、对照组cVEMP的P1潜伏期分别为（14.145±1.934）ms、（13.982±2.047）ms，差异无统计学意义（P＞0.05）。OSAHS组与对照组cVEMP的N1潜伏期分别为（24.032±2.081）ms、（23.732±2.125）ms，差异无统计学意义（P＞0.05）。OSAHS组、对照组cVEMP的P1-N1的振幅分别为（37.893±20.776）μV、（76.882±16.956）μV，差异具有统计学意义（P＜0.05），其中重度OSHAS患者的P1-N1振幅显著减小。结论　中度和重度OSAHS患者的cVEMP的引出率、P1-N1振幅均下降，提示其脑干的神经传导通路出现异常。cVEMP作为一种无创的检查手段因而也可以用于 检测因OSAHS引起的脑干损伤。     

长链非编码RNA KCNQ1OT1在鼻咽癌中的表达及对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响

目的　分析长链非编码RNA KCNQ1OT1在鼻咽癌组织和细胞中的表达,观察其对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响。方法　采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测KCNQ1OT1在鼻咽癌组织和细胞株中的表达。选取表达量最低的鼻咽癌细胞株转染过表达KCNQ1OT1的质粒及空载质粒。qRT-PCR检测KCNQ1OT1和 SEMA3BmRNA的表达,Western blot检测SEMA3B蛋白的表达,采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）和Transwell迁移实验检测KCNQ1OT1对鼻咽癌细胞增殖能力和迁移能力的影响。结果　KCNQ1OT1在鼻咽癌组织的表达量（1.78±0.10）明显低于癌旁组织（3.24±0.29）（t =4.65,P <0.01）,在鼻咽癌细胞株的表达量明显低于鼻咽上皮细胞NP69（P <0.05）,其中CNE-2Z细胞表达量最低（t =12.61,P <0.01）。转染KCNQ1OT1质粒后可显著促进KCNQ1OT1的表达（P <0.01）,SEMA3B 在mRNA和蛋白水平上的表达量明显升高（P <0.01）。KCNQ1OT1过表达后,鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖能力和迁移能力明显被抑制（P <0.01）。结论　KCNQ1OT1在鼻咽癌组织和细胞中呈低表达,过表达KCNQ1OT1可通过增加SEMA3B基因的表达,抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖能力和迁移能力,有望成为鼻咽癌治疗的新靶点。     

血小板衍生生长因子-BB对喉癌Hep2细胞增殖侵袭的影响及其可能分子机制

目的 研究不同浓度血小板衍生因子-BB(PDGF-BB)对喉癌Hep2细胞增殖侵袭的影响及黏着斑激酶（FAK）、磷酸化黏着斑激酶397（FAKpY397）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶9（MMP9）蛋白表达的变化。方法 不同浓度(0ng／mL、1ng／mL、20ng／mL、100ng／mL)PDGF-BB诱导人喉癌Hep2细胞株,western blot方法检测FAK、FAKpY397、MMP2、MMP9表达变化,MTT法检测细胞增殖,侵袭实验检测诱导后细胞侵袭能力的变化。结果 MTT示诱导后Hep2细胞增殖,在20ng/mL浓度时达到最高,为（0.488±0.133）,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。侵袭细胞数在各组均有增加,在20ng/mL组达高峰为（22.75±1.42）,较对照组差异有统计学意义（P＜0.05）,FAK、FAKpY397、MMP9、MMP2在20ng/mL浓度时表达上调。结论 PDGF-BB上调Hep2细胞中FAK、FAKpY397、MMP9及MMP2表达,促进Hep2细胞增殖侵袭能力增强。