二甲双胍对胰腺癌BxPC-3细胞恶性表型的影响

目的:探索二甲双胍对胰腺癌BxPC-3细胞恶性表型的影响。方法:以Smad4基因天然缺失型人胰腺癌BxPC-3细胞为对象,采用CCK-8法和流式细胞术分别检测不同剂量二甲双胍(5、10、20 mmol/L)作用24 h后的细胞增殖和凋亡情况,并计算细胞存活率和凋亡率;采用Transwell迁移试验检测不同剂量二甲双胍(10、20 mmol/L)作用24 h后的细胞迁移情况,记录迁移细胞数;采用实时定量聚合酶链反应法和Western blotting法分别检测细胞中钙黏着蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、补体反应基因32(RGC-32)的mRNA及蛋白表达情况。结果:与对照组和5 mmol/L二甲双胍组比较,10、20 mmol/L二甲双胍组细胞的存活率均显著降低,凋亡率均显著升高,且20 mmol/L二甲双胍组细胞的凋亡率显著高于10 mmol/L二甲双胍组(P<0.05)。与对照组比较,10、20 mmol/L二甲双胍组迁移细胞数均显著减少,且20 mmol/L二甲双胍组显著少于10 mmol/L二甲双胍组(P<0.05);10、20 mmol...     

胰腺癌细胞中GDNF对MMP-9表达的影响

目的探讨胰腺癌细胞中胶质细胞源神经营养因子(GDNF)对基质金属蛋白酶(MMP)-9表达的影响。方法用DMEM培养基进行人胰腺癌细胞株MIAPaCa-2和Capan-2细胞培养,利用RT-PCR、Westernblot和ELISA法研究胰腺癌细胞中GDNF对MMP-9mRNA及蛋白表达的影响。结果 RT-PCR实验发现胰腺癌细胞中GDNF能上调MMP-9mRNA的表达,Westernblot法、ELISA法检测结果表明胰腺癌细胞中GDNF能上调MMP-9蛋白的表达,且于GDNF浓度为100μg/L,作用48h时达最大值。结论 GDNF具有上调胰腺癌细胞MMP-9表达的作用,从而增强胰腺癌细胞的侵袭能力。     

阿霉素诱导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡过程中p38MAPK的表达

目的研究阿霉素诱导胰腺癌细胞凋亡过程中p38MAPK表达的变化,探讨p38MAPK在其中的作用。方法用膜联蛋白V-PI(annexinV-PI)染色及流式细胞技术分析阿霉素及应用p38MAPK抑制剂SB203580对胰腺癌细胞凋亡的影响,同时利用免疫细胞化学法观察经阿霉素及SB203580处理人胰腺癌BxPC-3细胞后,p38MAPK的表达水平。结果SB203580(20μmol/L)干预组胰腺癌BxPC-3细胞凋亡率为(20.1±1.4)%,阿霉素作用24 h后诱导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡,凋亡率为(31.1±2.7)%,加用SB203580抑制p38MAPK通路后可增强阿霉素诱导的凋亡作用,凋亡率达(40.4±2.6)%。采用单因素方差分析F=136.79,组间比较组与组之间差异有统计学意义。以20μmol/L阿霉素作用BxPC-3胰腺癌细胞24 h后可见p38MAPK在细胞染色后呈现深褐色颗粒散在分布于部分或整个细胞核及细胞质内,联合应用SB203580后可见p38MAPK表达颗粒密度减低,数量减少。结论阿霉素可以活化p38MAPK通路,p38MAPK可能起到保护胰腺癌BxPC-3细胞逃避阿霉素诱导的凋亡,阻断该通路可增强阿霉素诱导胰腺癌细胞凋亡的作用。     

miR-130a-3p下调CYLD表达对乳腺癌MCF-7细胞功能的影响

目的：探讨miR-130a-3p对人乳腺癌MCF-7细胞功能的影响及其可能的靶向基因。方法：应用脂质体介导方法将miR-130a-3p模拟物（实验组）或对照模拟物（对照组）转染MCF-7细胞,分别采用MTT方法和细胞划痕实验检测细胞增殖和迁移能力变化,印迹法检测细胞中miR-130a-3p靶基因圆柱瘤基因（CYLD）的表达。结果：与对照组比较,实验组MCF-7细胞的增殖和迁移能力增强（P＜0.05）,细胞中CYLD蛋白表达水平明显下调（P＜0.05）。结论：miR-130a-3p可能通过靶向调节CYLD蛋白表达增强人乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移。     

牛磺酸对胰腺癌细胞系BxPC-3和PANC-1细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的 探讨牛磺酸（Tau）对胰腺癌导管细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 体外培养胰腺癌BxPC-3和PANC-1细胞,采用不同浓度Tau(0、10、20、40、80、160 mmol/L)进行预处理。采用CCK-8、细胞划痕实验、TUNEL法观察Tau对BxPC-3和PANC-1细胞增殖、迁移和凋亡的影响;实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）和蛋白质免疫印迹法检测Tau影响BxPC-3和PANC-1细胞中相关细胞凋亡及细胞周期分子mRNA和蛋白表达的情况。结果 Tau可抑制BxPC-3和PANC-1的细胞增殖和迁移活性;同时,Tau能够促进BxPC-3和PANC-1细胞凋亡。与对照组相比,Tau处理后的BxPC-3细胞中相关凋亡因子P53、P21、Bcl-2关联X蛋白（BAX）表达水平呈上升趋势,而增殖细胞核抗原（PCNA）的表达降低;Tau处理后的PANC-1细胞中B淋巴细胞瘤-2蛋白（Bcl-2）、PCNA、细胞周期蛋白CyclinA2、CyclinB1、CyclinE、周期蛋白依赖性激酶CDK1、CDK2、CDK4、CDK6等的表达较对照组均下降,而相关凋亡蛋白P53、P21的表...     

雷公藤内酯醇体内外对HL-60细胞作用的研究

目的探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TPL)在体内外对人髓系白血病细胞株HL-60的作用。方法运用MTT比色法检测TPL对HL-60细胞的增殖抑制作用,采用TdT酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测TPL对HL-60细胞的诱导凋亡作用;建立HL-60裸鼠异种移植瘤模型,观察经TPL治疗后的肿瘤抑制率。结果在体外,TPL对HL-60细胞的增殖具有明显的抑制及诱导凋亡作用,呈时间和剂量依赖性;在体内,TPL可抑制HL-60细胞裸鼠异种移植瘤生长,抑制率最高可达53.5%。结论TPL在体内外均可抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡。     

TFARl9蛋白协同米非司酮对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响

目的初步探讨TFARl9协同米非司酮（MIF）对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响。方法构建TFARl9真核表达载体，用脂质体介导的方法转染PC-3M细胞。MTT法检测5、10、20、50和100μmol&#183;L^-1 MIF作用于前列腺癌PC-3M细胞24～96h的吸光度（A）值。在转染TFARl9的细胞中加入20mol&#183;L^-1 MIF培养24、48h，MTT比色法检测细胞增殖，原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡率，透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变。结果构建了PCI-neo-TFARl9真核表达载体并在转染的PC-3M细胞中得到了瞬时表达。MTT实验表明，与对照组相比，5、10μmol&#183;L^-1 MIF组的A值差异无统计学意义（P〉0．05），20、50和100μmol&#183;L^-1MIF组的A值差异有统计学意义（P〈0．01），MIF对前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用呈时间、剂量依赖性；转染PCI-neo-TFARl9并加入20mol&#183;L^-1 MIF后，与对照组及单独应用MIF组相比，细胞生长明显受到抑制（P〈0．01），细胞凋亡率明显增加（P〈0．01），透射电镜观察到典型的细胞凋亡特征（细胞体积缩小，核皱缩、碎裂，染色质呈块状边集等）。结论TFARl9蛋白能够协同米非司酮促进前列腺癌PC-3M细胞凋亡，有望成为前列腺癌的辅助治疗药物。     

放射诱导同步放大基因电路调控HSV-TK表达对肺癌移植瘤的抑制作用

目的构建由放射诱导的一氧化氮(NO)同步放大基因电路,并利用该基因电路调控单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)表达,以研究该基因电路对肺癌细胞体内的治疗作用。方法利用分子克隆的方法构建重组治疗载体pfos-iNOS/TK和对照载体pfos-TK/GFP,并采用脂质体介导重组治疗载体和对照载体转染肺癌细胞A549;G418筛选阳性克隆;建立BALB/c裸鼠移植瘤模型,检测接受照射和未接受照射的瘤组织内TK表达情况,分析给予照射和更昔洛韦(GCV)后肿瘤体积的变化。结果接受照射的瘤组织内TK表达明显强于未接受照射组,接受照射的转染治疗载体组强于接受照射的转染对照载体组,放射合并GCV可明显抑制转染治疗载体的移植瘤,且抑瘤率明显高于单纯照射、GCV治疗和转染对照载体的对照组。结论放射诱导的同步放大基因电路可明显提高体内转染细胞TK的表达,对肺癌移植瘤有显著的抑制作用,明显地提高了HSV-TK/GCV系统对肺癌细胞的敏感性,进一步完善了肿瘤的放射—基因治疗模式。     

胎盘滋养细胞bax与bcl-2基因表达对分娩发动及妊娠时限的影响

目的 :探讨胎盘滋养细胞凋亡调控基因bax、bcl-2表达对分娩的影响。方法 :采用免疫组化法测定14例自然早产 ,18例足月自然临产 ,19例足月择期剖宫产 ,12例延期或过期自然临产及12例延期或过期未临产而行剖宫产孕妇胎盘滋养细胞bax、bcl-2基因的表达水平。结果 :在自然临产的孕妇中早产、足月产和延期或过期妊娠3组bax基因表达差别无统计学意义 (P>0.05) ;在足月以及延期或过期妊娠中 ,自然临产组bax基因表达水平均显著高于未临产组 (P<0.05) ,而2组bcl-2基因表达水平差别均无统计学意义 (P>0.05) ;延期或过期妊娠组的bcl-2基因表达水平显著低于足月妊娠组。结论 :促凋亡调控基因bax较抑凋亡调控基因bcl-2在分娩发动中发挥了更大的作用 ,而bcl-2基因则在胎盘发育方面发挥着重要作用     

核糖核酸干扰下调ACE蛋白表达对胰腺癌细胞运动侵袭能力的影响

目的观察血管紧张素转换酶(ACE)下调对胰腺癌细胞株SW1990运动侵袭能力的影响。方法设计并体外合成靶向ACE的小干扰RNA,将其转染到SW1990细胞中,蛋白质印迹法检测转染前后细胞中ACE蛋白的表达,采用Transwell小室检测转染前后细胞运动侵袭能力的改变。结果 ACE siRNA能有效降低SW1990细胞中ACE的表达。抑制SW1990细胞中ACE的表达后,SW1990细胞的运动能力明显下降,穿过人工基底膜的细胞数显著低于对照组(P<0.05)。结论核糖核酸干扰下调ACE表达能明显抑制胰腺癌细胞SW1990在体外的运动侵袭能力。     

南瓜蛋白联合吉非替尼对人胰腺癌BxPC-3细胞的抑制作用

目的研究南瓜蛋白(cucurmosin,CUS)联合表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼(Gefitinib,GEF)对人胰腺癌细胞株Bx-PC-3的生长抑制作用。方法采用SRB法测定CUS与GEF联用对体外培养的BxPC-3细胞的增殖抑制作用;应用集落形成实验测定CUS与GEF联用对体外培养的BxPC-3细胞集落形成的影响;以Western blot技术检测CUS与GEF联用对体外培养的BxPC-3细胞EGFR的影响。结果 CUS联用GEF对BxPC-3细胞的增殖抑制率大于单用药物,q>0.85;CUS联用GEF对BxPC-3细胞的集落形成抑制率大于单用药物,q>1.15;CUS联合GEF干预BxPC-3细胞可明显下调其EGFR蛋白表达,q>2.0。结论 CUS联合GEF对人胰腺癌BxPC-3细胞的生长抑制具有协同作用。     

lncRNA SOX21-AS1的表达对卵巢癌细胞增殖和转移能力的影响及机制研究

目的 探讨长链非编码RNA SRY-box转录因子21反义RNA 1(lncRNA SOX21-AS1)对卵巢癌细胞增殖和转移能力的影响及其作用机制。方法 选取卵巢癌组织和其邻近的癌旁组织各75例,另选取卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、OVCR3和人卵巢正常上皮细胞HOSE作为实验对象,实时荧光定量PCR法检测lncRNA SOX21-AS1在组织和细胞中的表达。根据是否干扰lncRNA SOX21-AS1表达将细胞分为si-NC组和si-SOX21-AS1组。MTS实验和平板克隆实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞转移能力,TOP/FOP荧光素酶实验和Western blot实验检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路活性和相关蛋白表达水平。结果 与癌旁组织相比,lncRNA SOX21-AS1在卵巢癌组织中的表达上调（P<0.05）。与卵巢正常上皮细胞HOSE相比,lncRNA SOX21-AS1在卵巢癌细胞中的表达上调,SKOV3中最高（P<0.05）。与FIGO分期Ⅰ-Ⅱ期、无淋巴结转移的患者相比,FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期、有淋巴结转移患者lnc...     

The expression and function of histamine H3 receptors in pancreatic beta cells

BACKGROUND AND PURPOSE

Histamine and its receptors in the CNS play important roles in energy homeostasis. Here, we have investigated the expression and role of histamine receptors in pancreatic beta cells, which secrete insulin.

EXPERIMENTAL APPROACH

The expression of histamine receptors in pancreatic beta cells was examined by RT-PCR, Western blotting and immunostaining. Insulin secretion assay, ATP measurement and calcium imaging studies were performed to determine the function and signalling pathway of histamine H₃ receptors in glucose-induced insulin secretion (GIIS) from MIN6 cells, a mouse pancreatic beta cell line. The function and signalling pathway of H₃ receptors in MIN6 cell proliferation were examined using pharmacological assay and Western blotting.

KEY RESULTS

Histamine H₃ receptors were expressed in pancreatic beta cells. A selective H₃ receptor agonist, imetit, and a selective inverse H₃ receptor agonist, JNJ-5207852, had inhibitory and facilitatory effects, respectively, on GIIS in MIN6 cells. Neither imetit nor JNJ-5207852 altered intracellular ATP concentration, or intracellular calcium concentration stimulated by glucose and KCl, indicating that GIIS signalling was affected by H₃ receptor signalling downstream of the increase in intracellular calcium concentration. Moreover, imetit attenuated bromodeoxyuridine incorporation in MIN6 cells. The phosphorylation of cAMP response element-binding protein (CREB), which facilitated beta cell proliferation, was inhibited, though not significantly, by imetit, indicating that activated H₃ receptors inhibited MIN6 cell proliferation, possibly by decreasing CREB phosphorylation.

CONCLUSIONS AND IMPLICATIONS

Histamine H₃ receptors were expressed in mouse beta cells and could play a role in insulin secretion and, possibly, beta cell proliferation.     

高胆固醇血症改变大鼠血管功能及动脉平滑肌细胞钾通道基因表达(英文)

目的:研究高胆固醇血症对大鼠主动脉功能及主动脉平滑肌上内向整流和ATP敏感钾通道基因表达的影响。方法:大鼠灌胃高胆固醇乳剂两周,制备带内皮和去内皮的主动脉血管环检测收缩和舒张反应,应用RT-PCR观察基因表达的变化。结果:高胆固醇血症明显损伤血管内皮功能,但不影响血管内皮非依赖性舒张反应;在高胆固醇血症血管平滑肌中Kir6.2mRNA表达明显升高(P<0.05),而Kir3.1mRNA表达却显著降低(P<0.05)。结论:高胆固醇血症可改变血管功能,并影响某些内向整流和ATP敏感钾通道亚型的基因表达。     

人乳腺珠蛋白和亲脂素B共转染乳腺癌细胞T47-D

目的构建人乳腺珠蛋白（Mammaglobin A）和亲脂素B（Lipophilin B）真核表达载体,建立稳定高表达Mammaglobin A和同时稳定高表达Mammaglobin A和Lipophilin B的人乳腺癌T47-D细胞系。方法通过RT-PCR的方法从人乳腺癌细胞系MDA—MB-415中扩增MammaglobinA和LipophilinB基因,构建真核表达载体pc—MA、pc—LP,分别独立及共转染T47-D细胞,G418筛选阳性克隆,并利用RT—PCR、Western Blot鉴定。结果重组质粒pc—MA、pc—LP酶切图谱、序列分析证明pc—MA、pc—LP载体构建成功,目的基因序列与GenBank中的序列完全一致。RT-PCR与Western Blot结果证实,独立稳定高表达Mammaglobin A和同时稳定高表达Mammaglobin A和Lipophilin B的人乳腺癌细胞系建立成功。结论成功建立独立高表达Mammaglobin A和同时高表达Mammaglobin A和Lipophilin B的乳腺癌细胞系,为探讨Maremaglobin A和Lipophilin B在乳腺癌发生发展中的作用提供了实验基础。     

Th9细胞在兔骨髓炎局部组织中的表达

目的观察兔骨髓炎局部组织中Th9细胞效应因子IL-9、IL-10的含量,探讨Th9细胞在骨髓炎发病中的作用。方法于胫骨近端骨窗内注入金黄色葡萄球菌2周,制备兔胫骨近端骨髓炎模型。HE染色观察局部组织结构,免疫组织化学法检测局部组织中IL-9、IL-10的含量。结果与正常对照组相比,模型组局部组织中IL-9、IL-10的含量明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 Th9细胞在骨髓炎的发生发展中担负着重要的免疫调节作用。     

心肌细胞钾离子通道基因表达调节研究概述

概述了钾离子通道基因的分类和结构;钾通道基因在哺乳动物心肌细胞膜上表达的细胞特异性、组织区域特异性、种属特异性和发育阶段特异性;钾通道基因表达与疾病的发生、发展有关。细胞内第二信使、肾上腺皮质激素,ＰＫＣ等因素可以调节钾通道基因的转录。     

Nanog与CD44在胃癌细胞株MKN45球体细胞中的表达及其意义

目的检测与干细胞相关的2种因子胚胎干细胞相关转录因子4(Nanog)和分化抗原簇44(CD44)在胃癌细胞株MKN45悬浮球体细胞中的表达。方法选择人胃癌细胞株MKN45,在含有表皮生长因子(EGF)及成纤维生长因子(b FGF)无血清培养液中培养,观察球体形成情况;采用免疫印迹(Western blot)、免疫荧光与实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测干细胞相关基因Nanog和CD44在球体细胞及原代贴壁细胞中的表达差异。结果胃癌细胞株MKN45在无血清培养条件下能形成悬浮球体,球体细胞中的Nanog和CD44的m RNA相对表达量分别为2.34±0.22和1.18±0.04,明显高于贴壁细胞中的Nanog和CD44的m RNA相对表达量1.00±0.00和1.00±0.05;球体细胞中的Nanog和CD44的蛋白质相对表达量分别为0.18±0.02和0.24±0.04,明显高于贴壁细胞中的相对表达量0.07±0.02和0.18±0.01(P<0.05)。球体细胞中Nanog主要分布在细胞核周围及细胞质中,而CD44主要在细胞膜上表达,且同一个球体细胞中的Nanog与CD44大多同时表达。结论胃癌细胞株MKN45在无血清培养条件下形成的球体细胞具有肿瘤干细胞的特性。Nanog/CD44共表达细胞可能是胃癌干细胞的一种表型。     

垂体肿瘤转化基因在膀胱癌组织中的表达及其对T24细胞的影响

目的 探讨垂体肿瘤转化基因(PTTG)在膀胱癌组织中的表达水平及其对T24细胞恶性生物学行为的影响.方法 应用免疫组化法检测膀胱癌患者膀胱癌组织与癌旁组织中PTTG蛋白表达量,比较不同年龄、性别、病灶直径、淋巴结转移、临床分期患者膀胱癌组织中PTTG蛋白表达水平,应用Spearman分析PTTG与各指标的相关性.将PT...