hsa-miR-133a在人食管鳞状细胞癌细胞株中的表达及其生物信息学分析北大核心CSCD

目的探讨hsa-miR-133a在人食管鳞状细胞癌细胞株中的表达,并对其靶基因进行预测和生物信息学分析,为深入研究hsa-miR-133a的功能提供理论指导。方法通过实时荧光定量PCR法,检测人食管鳞状细胞癌细胞株KYSE-150、Eca109和正常食管上皮细胞株Het-1A中hsa-miR-133a的相对表达;应用TargetScan、PicTar及miRanda预测hsa-miR-133a的靶基因,取三者预测结果的交集,并结合DIANALAB-TarBase5.0和miRTarBase两个实验证实的基因数据库,进行功能注释和通路富集分析。结果人食管鳞状细胞癌细胞株KYSE150、Eca109中hsa-miR-133a的表达水平显著低于正常食管上皮细胞;hsa-miR-133a的靶基因显著富集在与肿瘤密切相关的AKT和p53信号通路。结论 hsa-miR-133a可能是参与调控食管鳞状细胞癌致病的靶基因。     

新疆哈萨克族食管鳞癌与长链非编码RNA表达的关系

目的：对新疆哈萨克族食管鳞癌组织及癌旁组织长链非编码RNA（lncRNA）表达谱进行分析，并探讨其与食管癌发生和发展的关系。方法：采用基因芯片技术，对4组食管鳞癌及其癌旁组织中差异表达的lncRNA进行筛选，通过lncRNA-mRNA共表达网络对靶基因进行预测，利用GO和KEGG数据库进行富集分析和通路分析，明确lncRNA的功能。结果：癌组织和癌旁组织之间差异表达的lncRNA共318个，与癌旁组织比较，癌组织中193个lncRNA表达上调，125个lncRNA表达下调（P < 0.01）。富集分析表明共有5个GO类别，其中细胞成分有3个，生物过程有1个，分子功能有1个，均通过反式调控方式调控靶基因。通路分析表明这些差异表达的基因可能参与轴突导向信号通路和ECM受体相互作用途径信号通路。结论：新疆哈萨克族食管鳞癌组织中lncRNA的表达水平与癌旁组织有明显差异，差异表达的lncRNA可能参与食管癌的复杂调控网络，并与肿瘤发生和发展有一定的关系。     

新疆哈萨克族食管鳞癌与长链非编码RNA表达的关系

目的:对新疆哈萨克族食管鳞癌组织及癌旁组织长链非编码RNA(lnc RNA)表达谱进行分析,并探讨其与食管癌发生和发展的关系。方法:采用基因芯片技术,对4组食管鳞癌及其癌旁组织中差异表达的lnc RNA进行筛选,通过lnc RNA-m RNA共表达网络对靶基因进行预测,利用GO和KEGG数据库进行富集分析和通路分析,明确lnc RNA的功能。结果:癌组织和癌旁组织之间差异表达的lnc RNA共318个,与癌旁组织比较,癌组织中193个lnc RNA表达上调,125个lnc RNA表达下调(P<0.01)。富集分析表明共有5个GO类别,其中细胞成分有3个,生物过程有1个,分子功能有1个,均通过反式调控方式调控靶基因。通路分析表明这些差异表达的基因可能参与轴突导向信号通路和ECM受体相互作用途径信号通路。结论:新疆哈萨克族食管鳞癌组织中lnc RNA的表达水平与癌旁组织有明显差异,差异表达的lnc RNA可能参与食管癌的复杂调控网络,并与肿瘤发生和发展有一定的关系。     

miR-124抑制食管鳞癌细胞TE-1增殖及侵袭的研究

目的 分析微RNA-124(microRNA-124,miR-124)在食管癌组织中的表达情况,并探讨miR-124在食管鳞癌增殖及侵袭中的作用及机制.方法 采用实时荧光定量RT-PCR检测miR-124在18例食管癌组织(Ⅰ期6例,Ⅱ期8例,Ⅲ期4例,Ⅳ期0例)及相应的癌旁组织中的表达情况.在食管癌细胞TE-1中转染miR-124 mimic,采用细胞集落形成实验、细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、细胞划痕实验检测miR-124过表达对食管癌细胞增殖及侵袭的影响.通过Targetscan预测细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases 4,CDK4)为miR-124的直接靶基因,并用荧光素酶报告基因实验及蛋白质印迹法实验进行验证.结果 食管癌组织miR-124的表达水平较癌旁正常组织明显下降(P＜0.01).通过转染miR-124 mimics使TE-1细胞过表达miR-124,过表达miR-124后TE-1细胞增殖及侵袭能力明显下降(P＜0.01).结论 miR-124在食管癌组织中低表达,miR-124可能通过调控CDK4表达来影响食管癌细胞TE-1增殖及侵袭能力.     

miR-520a在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的:探讨miR-520a在人食管鳞癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法:采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测59例食管鳞癌组织和45 例癌旁组织中miR-520a的表达,分析其与临床病理特征之间的关系。结果:miR-520a在食管鳞癌组织中的表达明显低于癌旁组织（P＜0.05）,并与患者淋巴转移明显相关（P＜0.05）。结论:miR-520a在食管鳞癌中低表达,提示其可能发挥抑癌基因的功能。     

miR-203基因在食管鳞癌中的表达及其甲基化状态的研究

[摘要] 目的：检测食管鳞状细胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）中miR-203基因的表达及其甲基化状态,探讨miR-203基因在食管鳞癌发生及发展中的作用。方法：分别应用实时定量RT-PCR（Real-Time RT-PCR, qRT-PCR）以及甲基化特异性PCR（Methylation specific PCR, MSP）的方法检测DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-aza-2’-deoxycitydine, 5-aza-dC）处理前后的食管癌细胞系（TE1、TE13、YES-2、EC109、T.TN）以及食管鳞癌组织及相应癌旁正常组织中miR-203基因的表达和甲基化状态。结果：未经5-aza-dC处理的五种食管癌细胞系中miR-203基因的表达均相对较低,经5-aza-dC处理后,五种食管癌细胞系中miR-203基因的表达均增高。五种食管癌细胞系在5-aza-dC处理前表现为miR-203基因高甲基化状态,应用5-aza-dC处理后,YES-2细胞系中miR-203基因甲基化程度降低,非甲基化程度增加,其余四种细胞系中miR-203基因均表现为非甲基化状态。miR-203基因在食管鳞癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织（P＜0.05）,并与TNM分期和组织学分化程度密切相关（P＜0.05）。食管鳞癌组织中miR-203基因的启动子区甲基化率为62.7%（52/83）,显著高于癌旁正常组织（7.22%, 6/83） （P＜0.05）,并与TNM分期和组织学分化程度密切相关（P＜0.05）。发生miR-203基因甲基化的食管鳞癌组织中miR-203基因的表达显著低于未发生甲基化的食管鳞癌组织（P＜0.05）。结论：miR-203基因在食管鳞癌中的异常低表达与食管鳞癌的发生、发展密切相关,且其启动子区甲基化可能是导致其表达沉默的机制之一。     

食管鳞状细胞癌差异表达基因的筛选及功能分析

目的 通过生物信息学方法分析食管鳞状细胞癌组织与癌旁正常组织之间的差异表达基因及关键基因。方法 自基因表达综合（GEO）数据库下载的基因芯片数据集GSE38129、GSE17351、GSE92396中筛选出食管鳞状细胞癌与癌旁正常组织之间的差异基因,通过DAVID数据库对差异基因行功能富集分析,通过京都基因与基因组百科全书（KEGG）数据库对差异基因进行相关通路分析,通过Cytoscape构建蛋白-蛋白互作网络并从中找出关键基因,应用UALCAN数据库对关键基因进行表达分析。结果 本研究共筛选出食管鳞状细胞癌与癌旁正常组织中共同表达差异且差异有统计学意义的基因250个。差异基因主要作为细胞组件（CC）中的细胞-细胞黏附连接、细胞外环境等参与生物学途径（BP）中的核糖核酸聚合酶Ⅰ启动子转录的正调控、氧化还原反应、细胞黏附等作用,参与的分子功能（MF）有蛋白质结合、钙离子结合、细胞间黏附等功能。后从250个基因中筛选出13个关键基因,13个基因在食管鳞状细胞癌组织与正常食管组织中的表达情况比较,差异均有统计学意义（P﹤0.05）。结论 通过生物信息学的方法对差异基因和关键基因进行分析,探寻...     

miR-1246通过靶向GSK3β促进食管癌转移的机制

目的:探讨miRNA-1246(miR-1246)促进食管癌细胞转移的作用及其机制.方法:Realtime-PCR法检测miR-1246在癌旁组织、食管癌组织、正常食管上皮和食管癌细胞系中的表达差异.Transwell侵袭实验观察转染miR-1246 mimics或inhibitors对食管癌细胞EC109转移能力的影响;裸鼠尾静脉转移实验观察稳定表达miR-1246对食管癌转移能力的影响;生物信息学分析miR-1246的候选靶基因为GSK3β,荧光素酶报告基因实验检测过表达miR-1246后EC109细胞中野生型和突变型GSK3β的荧光素酶活性.Westernblot检测miR-1246对GSK3β蛋白表达的影响.结果:食管癌组织中的miR-1246表达显著高于癌旁组织（P<0.05);多个食管癌细胞中miR-1246的表达比正常食管上皮细胞Het-1A明显增高（P<0.05).与阴性对照相比,miR-1246 mimics显著促进EC109细胞的侵袭能力（P<0.05).反之,miR-1246 inhibitors明显抑制EC109细胞的侵袭能力（P<0.05);体内实验发现稳定过表达miR-1246明显升高EC109细胞的肺转移能力.荧光素酶报告基因结果证实miR-1246能够抑制GSK3β的3'-UTR区荧光素酶活性;转染miR-1246后,EC109细胞中的GSK3β蛋白水平明显低于对照组;miR-1246过表达显著抑制GSK3β-wt,而不能抑制GSK3β-mut的蛋白表达.结论:miR-1246能够通过靶向GSK3β促进食管癌转移,抑制miR-1246的表达或增加GSK3β的表达可能是抑制食管癌转移的有效手段.     

Hedgehog信号通路在食管癌中的异常活化

  目的   探讨Hedgehog（Hh）信号通路与食管鳞状细胞癌（ESCC）的关系。   方法   采用免疫组织化学随机分析30例ESCC及癌旁组织样本的Hh信号通路中主要组分Smo和Gli2及靶蛋白CyclinD1表达。构建分泌型配体ShhN的条件培养液,利用条件培养液及Hh信号通路激动剂Purmorphamine或Hh通路抑制剂环杷明及GANT61处理CaEs-17细胞后,MTT法检测细胞生存率的变化。   结果   ESCC组织中的Smo、Gli2和CyclinD1表达普遍高于癌旁组织。含有ShhN的条件培养液能有效激活Hh信号通路下游靶基因CCND1的表达并明显促进食管癌CaEs-17细胞的生存率,提示食管癌中Hh信号通路以配体依赖的方式激活。直接作用于Smo的Hh信号通路激动剂Purmorphamine促进食管癌CaEs-17细胞的生长;而Smo特异性抑制剂环杷明有效地抑制CaEs-17细胞生存率。Gli1/Gli2的抑制剂GANT61比环杷明更为有效地抑制CaEs-17细胞生存率。   结论   Hh信号通路在ESCC中异常活化,将可能成为新的治疗食管癌的药物靶点。      

miR-769对食管鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移能力及紫杉醇耐药性的影响

目的:探讨hsa-miR-769（miR-769）在食管鳞癌组织中的表达及其对癌细胞增殖、侵袭和迁移能力及紫杉醇耐药性的影响。方法:通过生物信息学技术挖掘,我们对肿瘤相关的hsa-miR-769（miR-769）的表达进行了深入研究,进而进行临床样本的验证,并通过细胞生物学和分子生物学研究对其作用机制进行了进一步探索。结果:公共数据库的挖掘结果显示miR-769在食管癌组织中表达异常升高,且在临床样本中我们观察到了相同的升高异常,通过细胞实验和分子生物学实验,我们发现miR-769调控肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力,同时引起肿瘤细胞的上皮间质转化过程发生改变,后续的研究中,我们成功构建了紫杉醇耐药的食管鳞癌细胞系,并发现miR-769在食管鳞癌对于紫杉醇的获得性耐药中起到了重要作用。结论:miR-769影响食管鳞癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力及对紫杉醇的耐药性,本研究旨在探索食管鳞癌发生发展的机制,并为食管鳞癌靶向治疗提供了新的潜在靶点。     

CAC1在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨CAC1在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化方法检测CAC1在食管鳞癌组织、癌旁组织及正常食管黏膜组织中的表达水平,对CAC1在食管鳞癌组织中的表达情况与肿瘤临床病理学特征相关性进行分析,对CAC1在食管鳞癌组织中的表达情况与增殖相关指标Ki67的表达情况进行分析。结果:CAC1在食管鳞癌组织中的表达水平显著高于其在癌旁组织及正常食管黏膜组织中的表达水平（P<0.05),CAC1表达水平与食管鳞癌的TNM分期及肿瘤分化程度显著相关（P<0.05),与食管鳞癌的发病年龄、性别及是否存在淋巴结转移无显著相关性（P>0.05),CAC1表达水平与增殖相关指标Ki67有显著相关性（P<0.05)。结论:CAC1表达与食管癌的恶性生物学特性相关,可能成为预测食管癌患者预后的指标和潜在的治疗靶点。     

miR-196a-5p在食管鳞状细胞癌中表达及靶基因预测的生物信息学分析

目的:探讨hsa-miR-196a-5p在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)发生发展过程中的作用,并对其生物学特征及表型功能进行预测分析,为最终研究miR-196a-5p的功能提供有利线索.方法:通过Quantitative Real-time PCR方法,...     

长链非编码RNA HAGLROS在食管鳞癌组织中的表达及其对食管鳞癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA HAGLROS在食管鳞癌组织中的表达及其与食管鳞癌患者临床病理参数之间的关系,分析HAGLROS对食管鳞癌细胞增殖及转移的影响.方法 运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HAGLROS在42对食管鳞癌组织与癌旁食管正常组织及食管上皮细胞Het1A及食管鳞癌细胞EC109和KYSE30...     

MEK抑制剂显著增强EGFR CAR-T细胞对口腔鳞癌的抗肿瘤活性

目的:构建靶向表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的二代嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）-T细胞,以探索MEK抑制剂联合EGFR CAR-T细胞是否可以对口腔鳞癌产生显著的抗肿瘤活性。方法:免疫组化法检测口腔鳞癌患者癌和癌旁组织中EGFR的表达;流式细胞术检测口腔鳞癌细胞系中EGFR的表达;慢病毒感染法构建EGFR CAR-T细胞;生物发光法检测EGFR CAR-T细胞联合MEKi对靶细胞的杀伤活性;流式细胞术检测共孵育后效靶细胞的占比情况;活体成像监测小鼠肿瘤的生长;免疫组化法检测小鼠肿瘤组织中CD3的表达;ELISA法检测肿瘤组织中IFN-γ和GrmB的含量。结果:人口腔鳞癌组织较癌旁组织EGFR显著高表达,大部分口腔鳞癌细胞系高表达EGFR。联合MEKi在短时间的共孵育中并不能显著增强EGFR CAR-T细胞对肿瘤细胞系的杀伤活性,但在较长时间的共孵育后,联合MEKi显著增强EGFR CAR-T细胞的增殖（P＜0.01）和对肿瘤细胞的细胞毒性（P＜0.001）。体内实验也表明,联合MEKi较单独使用EGFR CAR-T细胞而言对肿瘤抑制能力更强（P＜0.01）,肿瘤组织中CD3+T细胞的浸润更多（P＜0.001）,肿瘤部位细胞因子IFN-γ（P＜0.001）和GrmB（P＜0.001）的含量也更高。结论:联合MEKi可以在体内外条件下显著增强EGFR CAR-T细胞的抗肿瘤活性,有望成为针对口腔鳞癌的潜在治疗策略。     

3-磷酸甘油酸脱氢酶在宫颈鳞状细胞癌中高表达

目的:检测宫颈鳞状细胞癌组织和细胞中3-磷酸甘油酸脱氢酶(3-phosphoglycerate dehydrogen-ase,PHGDH)的表达水平,探讨其在肿瘤发生发展中的作用.方法:使用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学法检测宫颈鳞状细胞癌和正常宫颈组织中PHGDH mRNA转录水平和蛋白翻译水平;利用实时荧光定量...     

EphB1通过PI3K/AKT信号通路促进食管鳞状细胞癌EC-9706细胞增殖、迁移、侵袭并抑制其凋亡

目的:研究促红细胞生成素产肝细胞受体B1(erythropoietin-producing human hepatocellular receptor B1,EphB1)对食管鳞状细胞癌EC-9706细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并探索其可能的作用机制。方法:qRT-PCR法分析40对食管鳞状细胞癌手术患者的癌组织及邻近正常组织中EphB1表达情况,并分析其临床特征。在EC-9706细胞中分别转染si-EphB1 RNA和oe-EphB1 RNA及其阴性对照。通过qRT-PCR和蛋白免疫印迹实验检测转染效率;CCK-8实验分析EphB1对细胞活力的影响;Hoechst 33258染色和流式细胞学实验检测细胞凋亡;划痕愈合实验及Transwell侵袭实验明确细胞迁移及侵袭能力;蛋白免疫印迹实验检测EphB1蛋白、增殖相关蛋白［增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）］、凋亡相关蛋白［Bad、Bcl-2、Caspase 3 及剪切型-Caspase 3（cleaved-Caspase 3）］、侵袭转移相关蛋白［基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2）、Snail、波形蛋白(Vimentin)、N-cadherin、E-cadherin］以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白（PI3K、AKT、p-AKT）的表达水平。结果:EphB1在食管鳞状细胞癌组织及细胞系中高表达(P均＜0.05),EphB1的表达水平与食管鳞状细胞癌患者的TNM分期、有无淋巴结转移和远处转移具有显著相关性(P均＜0.05)。与对照组相比,通过细胞转染技术沉默EphB1和过表达EphB1使EC-9706细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显降低或增强,并诱导或抑制细胞凋亡(P均＜0.05)。在蛋白水平上,si-EphB1和oe-EphB1处理EC-9706细胞48 h后,增殖相关蛋白PCNA蛋白表达水平分别显著降低或增加（P均＜0.05）,并分别增加或降低促凋亡相关蛋白Bad、cleaved-Caspase 3的表达水平（P均＜0.05）,下调或上调抗凋亡蛋白Bcl-2、Caspase 3的蛋白表达（P均＜0.05）,抑制或促进侵袭转移相关蛋白MMP-9、MMP-2、Snail、Vimentin、N-cadherin的蛋白活性,但却上调或下调 E-cadherin的表达水平（P均＜0.05）。同时,Western blotting实验结果还证实EphB1可诱导食管鳞状细胞癌EC-9706细胞中通路蛋白PI3K、p-AKT的活性增强（P均＜0.05）。结论:EphB1可能通过调控PI3K/AKT信号通路促进食管鳞状细胞癌EC-9706细胞的增殖、迁移及侵袭,并抑制其凋亡。     

HIF-1α靶向SP1促进食管鳞状细胞癌转移及血管生成的机制研究

目的:探究HIF-1α对食管鳞状细胞癌转移及血管生成的作用及其可能的机制。方法:RT-PCR检测细胞HIF-1α和SP1 mRNA表达;Western blot检测细胞HIF-1α和SP1蛋白表达;CCK-8检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;体外血管生成实验检测人脐静脉血管内皮细胞HUVEC血管形成能力;ChIP-PCR实验检测HIF-1α和SP1启动子的结合。结果:与人食管上皮细胞HEEC相比,在食管鳞状细胞癌细胞Ec109、KYSE30、KYSE150和KYSE410中HIF-1α和SP1 mRNA和蛋白表达显著上调（P＜0.05）,其中Ec109细胞变化最为明显。与sh-NC组相比,sh-HIF-1α组Ec109细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著下调（P＜0.05）;与oe-NC组相比,oe-HIF-1α组Ec109细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著上调（P＜0.05）。HIF-1α靶向结合SP1启动子区。与sh-NC组相比,sh-HIF-1α组Ec109细胞SP1 mRNA和蛋白表达、细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著下调（P＜0.05）;与sh-HIF-1α+oe-NC组相比,sh-HIF-1α+oe-SP1组Ec109细胞SP1 mRNA和蛋白表达、细胞活力、迁移和侵袭能力、HUVEC细胞管道数目显著上调（P＜0.05）。结论:HIF-1α通过靶向SP1促进食管鳞状细胞癌转移及血管生成。     

Ki-67、TOPOⅡα在食管鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的:探讨Ki-67、TOPOⅡα在食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义。方法:收集我院食管鳞状细胞癌组织标本60例,采用免疫组织化学法检测Ki-67、TOPOⅡα在食管鳞状细胞癌组织中的表达情况。结果:食管鳞状细胞癌组织中Ki-67表达的阳性率为86.7%（52/60）,Ki-67阳性表达与组织学分级、浸润深度、淋巴结转移、脉管侵犯及临床分期相关,差异具有统计学意义（P＜0.05）。食管鳞状细胞癌组织中TOPOⅡα表达的阳性率为83.3%（50/60）,TOPOⅡα 阳性表达与淋巴结转移、脉管侵犯、临床分期相关,差异具有统计学意义（P＜0.05）。Ki-67与TOPOⅡα共表达与组织学分级、淋巴结转移、脉管侵犯、临床分期相关（P＜0.05）。Spearman 相关分析显示Ki-67 和TOPOⅡα 两者在食管鳞状细胞癌组织中的表达呈正相关（r=0.351,P=0.006）。结论:Ki-67和TOPOⅡα 与食管鳞状细胞癌的发生发展相关,可作为食管鳞状细胞癌预后的预测指标。