miR-129-5p在人脑胶质瘤组织中表达下调的表观遗传学机制

目的:检测miR-129成熟体miR-129-5p在人脑胶质瘤组织中的表达特点,探讨人脑胶质瘤组织中miR-129-2表达异常是否与miR-129-2启动子甲基化有关.方法:收集湘雅医院神经外科2013年10-12月收治的胶质瘤患者肿瘤组织21例、脑外伤患者非肿瘤脑组织标本21例.Real-time PCR检测脑胶质瘤组织和非肿瘤脑组织、脑胶质瘤细胞株和正常脑胶质细胞株中miR-129-5p的表达;甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测胶质瘤组织中miR-129-2基因启动子甲基化的情况;亚硫酸氢盐硫化测序PCR(bisulfite-sequencing PCR,BSP)分析经甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycitydine,5-Aza-dC)处理后的胶质瘤细胞miR-129-2基因启动子甲基化水平的变化,同时Real-time PCR检测miR-129-5p的表达变化.结果:miR-129-5p在人脑胶质瘤组织和细胞中表达显著低于非肿瘤脑组织和正常脑胶质细胞(P＜0.05),胶质瘤组织中miR-129-2基因的启动子甲基化率显著高于正常脑组织(P＜0.05),使用5-Aza-dC去甲基化处理脑胶质瘤细胞后miR-129-2基因的启动子甲基化程度降低、miR-129-5p表达显著升高(P＜0.05).结论:miR-129-5p在脑胶质瘤中显著低表达,miR-129-2启动子甲基化是导致其低表达的机制之一.     

子宫内膜癌中STAT3蛋白的表达及临床意义

目的:探讨STAT3基因蛋白在子宫内膜癌、子宫内膜上皮内瘤变及正常子宫内膜组织中的表达及意义,探讨其与子宫内膜癌临床病理参数间的关系.方法:运用组织芯片技术与免疫组织化学相结合的方法检测45例子宫内膜癌组织、30例癌旁子宫内膜上皮内瘤变组织及30例癌旁正常子宫内膜组织中STAT3蛋白的表达,分析其与临床病理特征之间的关系.结果:STAT3蛋白在子宫内膜癌组织中的阳性表达率为73.3％,在癌旁子宫内膜上皮内瘤变组织中的阳性率为16.7％,在癌旁正常子宫内膜组织中的阳性表达率为0％,子宫内膜癌组织中的阳性表达率高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.001),与子宫内膜癌患者的肿瘤分化程度有关,高分化组的阳性表达率低于中-低分化组(P＜0.05),与肿瘤临床分期、患者年龄、肌层浸润及绝经情况无关(P＞0.05).结论:子宫内膜癌组织中STAT3呈高表达,STAT3的阳性表达率与肿瘤分化程度相关,高分化的子宫内膜癌组的阳性表达率明显低于中-低分化组,可能与子宫内膜癌的发生发展有关.     

miR-155-5p和ELK3在胆囊癌组织中的表达及其临床意义

目的:分析miR-155-5p和ELK3在胆囊癌组织中的表达水平,并探讨其表达与胆囊癌临床病理特征及预后的关系。方法:收集2014年1月至2015年5月在本院进行手术治疗的45例胆囊癌患者的肿瘤组织和癌旁非肿瘤组织,采用RT-PCR检测组织中miR-155-5p和ELK3 mRNA表达水平,采用免疫组织化学染色法检测组织中ELK3蛋白表达情况,分析肿瘤组织中miR-155-5p和ELK3表达水平的关系,分析miR-155-5p和ELK3表达水平与胆囊癌患者肿瘤大小、转移、浸润等病理特征及3年总生存率的关系。结果:肿瘤组织中miR-155-5p、ELK3 mRNA表达水平及ELK3蛋白阳性率均高于癌旁非肿瘤组织（P＜0.05）;肿瘤组织中miR-155-5p和ELK3表达水平呈正相关（P=0.002）;miR-155-5p表达水平与肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移、远处转移、血管浸润、胆管侵犯、肝脏侵犯有关（P＜0.05）,ELK3阳性率与FIGO分期、淋巴结转移、血管浸润、胆管侵犯和肝脏侵犯有关（P＜0.05）;miR-155-5p高表达组患者3年总生存率低于miR-155-5p低表达组患者（P＜0.05）,ELK3阳性表达患者3年生存率低于ELK3阴性表达患者（P＜0.05）。结论:胆囊癌组织中miR-155-5p和ELK3表达上调,与胆囊癌转移、侵袭等恶性生物学行为及不良预后密切相关,可作为胆囊癌临床预后预测的检测指标。     

miR-155在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

背景与目的:MicroRNAs是一类19～25 bp内源非编码的小分子RNA,能通过靶向抑制基因的转录和翻译水平.本研究旨在探讨hsa-miR-155(Homo sapiens miR-155,miR-155)在子宫内膜癌患者组织中的表达及其临床意义.方法:收集2007年9月-2009年12月子宫内膜癌患者手术标本66例,癌旁组织标本作为正常对照,并取其表达水平为1,应用原位杂交(in situ hybridization,ISH)及实时荧光定量PCR (real time quantity PCR,qRT-PCR)检测子宫内膜癌患者组织及癌旁组织中miR-155的表达水平,miR-155表达与子宫内膜癌临床病理参数及临床分期之间的关系,并分析miR-155表达与患者预后关系.结果:ISH结果显示,在66例子宫内膜癌组织中miR-155阳性表达率为84.85％,与癌旁对照组18.18％相比,差异有统计学意义(x2=58.72,P＜0.01);qRT-PCR结果显示,临床Ⅰ/Ⅱ、Ⅲ/Ⅳ子宫内膜癌患者组织miR-155表达水平为(4.54±0.55)、(7.93±0.88)倍,差异有统计学意义(t=13.51,P＜0.01);有、无盆腔淋巴结转移子宫内膜癌患者组织miR-155的表达水平分别为(9.56±0.86)、(5.49±0.47)倍,差异有统计学意义(t=15.12,P＜0.01);高、中、低分化子宫内膜癌组织中miR-155表达水平分别为(6.42±0.63)、(6.97±0.59)、(6.27±0.46)倍,差异均无统计学意义(t=0.412,P＞0.05); Kaplan-Meier生存分析显示,miR-155表达越高患者生存率越低(P=0.001).结论:miR-155与子宫内膜癌的发生、进展及淋巴结转移等密切相关,对子宫内膜癌潜在的治疗靶点及预后判断具有重大意义.     

miR-93-5p和miR-106b-5p在酒精相关性肝癌中的表达及其临床意义

目的： 探讨miR-93-5p和miR-106b-5p在酒精性肝硬化肝癌（酒精相关性肝癌）患者中的表达水平及其临床意义。方法： 选取酒精相关性肝癌患者穿刺组织蜡块10例,根据性别、年龄配对原则选取10例酒精性肝硬化患者穿刺组织蜡块,采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测组织中的miR-93-5p和miR-106b-5p表达水平。另收集河北医科大学第四医院2014年1月1日—2016年12月31日住院治疗的酒精相关性肝癌患者资料71例,治疗前抽取患者外周血,qPCR法检测血清中miR-93-5p和miR-106b-5p的表达水平,分析miR-93-5p和miR-106b-5p表达水平与患者临床病理指标和预后的关系。结果： 酒精相关性肝癌患者癌组织中miR-93-5p和miR-106b-5p的表达水平显著高于酒精性肝硬化患者（均P<0.01）。miR-93-5p或miR-106b-5p高表达组肿瘤最大径较低表达组显著增加（P<0.01）,且临床分期较晚（P<0.01）。全组患者中,年龄<60岁组患者生存率显著优于≥60岁组患者（P=0.03）;肿瘤最大径<5 cm组患者生存率显著优于≥5 cm组患者（P=0.01）;TNM分期Ⅰ+Ⅱ期患者生存率高于Ⅲ期患者（P=0.02）;miR-93-5p或miR-106b-5p高表达组患者生存率较低表达组患者显著降低（P≤0.01）;年龄和miR-106b-5p表达水平是患者预后的独立影响因素（P值分别为0.02和0.03）。结论： miR-93-5p和miR-106b-5p有作为酒精相关性肝癌肿瘤标志物的潜力,治疗前检测其表达水平可以预测患者临床病理指标和预后。     

STAT3、ER、PR在子宫内膜癌中的表达及意义

目的：研究STAT3、ER、PR在子宫内膜癌中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学方法检测126例子宫内膜癌（Ⅰ型114例,Ⅱ型12例）和50例癌旁组织中STAT3、ER、PR的表达。结果：STAT3、ER、PR在子宫内膜癌中的阳性表达率均显著高于癌旁子宫内膜组织（P〈0.05）;在子宫内膜癌中STAT3阳性表达率与病理分级、淋巴结转移及病理分型有统计学意义（P〈0.05）,ER、PR阳性表达率与临床分期、病理分级、淋巴结转移及病理分型有统计学意义（P〈0.05）。结论：STAT3与肿瘤的发生、发展、侵袭、转移及预后密切相关,可作为判断预后的指标和浸润的新靶点。ER、PR水平的高低对于评估预后和临床选择内分泌治疗具有指导意义。     

miR-24-3p通过靶向STAT3抑制鼻咽癌细胞增殖

目的:探究miR-24-3p是否通过调控STAT3抑制鼻咽癌细胞增殖。方法:荧光素酶报告基因验证miR-24-3p与STAT3的3' UTR结合,qPCR、Western Blot法检测miR-24-3p对STAT3的mRNA和蛋白表达量的影响,CCK8法检测miR-24-3p对鼻咽癌细胞增殖的抑制作用,并检测过表达STAT3是否逆转miR-24-3p的抑制增殖效果。结果:miR-24-3p与STAT3的3' UTR可直接结合,过表达miR-24-3p可减少STAT3表达量,而抑制miR-24-3p可增加STAT3表达量,过表达miR-24-3p抑制鼻咽癌细胞增殖,这一效果可被过表达STAT3逆转。结论:miR-24-3p通过直接靶向STAT3抑制鼻咽癌细胞增殖。     

血清miR-17-5p在卵巢癌患者中的表达及临床意义

目的:探讨血清miR-17-5p在卵巢癌患者中的表达及其在诊断及预后方面的价值.方法:利用qRT-PCR方法检测77例卵巢癌患者及健康对照血清标本中miR-17-5p的表达情况,并利用统计学方法分析miR-17-5p的诊断和预后价值.结果:qRT-PCR结果发现血清miR-17-5p在卵巢癌患者中的表达显著高于健康对照组.ROC曲线显示血清miR-17-5p为卵巢癌有效的诊断分子靶点.卡方检验显示血清miR-17-5p与卵巢癌患者的临床分期呈显著正相关.Kaplan-Meier生存曲线显示血清miR-17-5p的表达水平与卵巢癌患者术后5年生存率呈显著负相关.结论:血清miR-17-5p在卵巢癌患者中表达水平显著增高,为卵巢癌诊断和判断预后的潜在分子指标.     

miR-93-5p和miR-27a-3p在直肠癌组织中的表达及其意义

目的 探讨在直肠癌组织中呈现出特异性表达的miRNA与临床病理分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移等参数之间的关系及其可能的意义。方法 用微阵列基因芯片技术分析未经任何术前放化疗的71例直肠癌患者癌组织与癌旁组织间miRNA表达的区别,筛选出上调的miR-93-5p和下调的miR-27a-3p,扩大样本量后进行qRT-PCR验证,随后进行多种临床病理参数分析并探讨其可能存在的意义。结果 miR-27a-3p的表达在芯片检测中呈现出低表达,但在PCR验证时呈现出了高表达,且数据较为离散;miR-93-5p在两种检测方法中均显示出高表达的特性(癌组织表达量是癌旁组织的3.165倍,P=0.006),并与肿瘤体积(P=0.004)、治疗前癌胚抗原水平(P=0.001)及淋巴结转移数目(r=0.534,P=0.005)具有相关性,其中与治疗前癌胚抗原水平及淋巴结转移阳性组受侵数目存在正相关。结论 在直肠癌组织中存在特异性表达的miRNA。根据miR-93-5p和miR-27a-3p在直肠癌组织中的表达特点,miR-93-5p有望作为新型生物标记物,为直肠癌的临床诊疗提供参考价值。     

鼻咽癌患者血清中miR-141-3p和miR-155-3p的表达水平及其临床意义

目的:探讨鼻咽癌患者血清中miR-141-3p及miR-155-3p的表达水平及临床意义.方法:选取2017年01月至2020年09月我院收治的95例鼻咽癌患者和45例健康对照组作为研究对象,采用实时荧光定量PCR法检测miR-141-3p及miR-155-3p表达水平.应用受试者工作特征(receiver opera...     

结肠癌细胞中miR-145-5p、miR-143-3p的表达变化对多药耐药的影响

目的:探讨人结肠癌细胞中miR-145-5p、miR-143-3p的表达发生变化后对P-gp和MRP的影响。方法:采用Western Blot和qRT-PCR法检测人结肠癌细胞分别转染miR-145-5p mimics/inhibitor、miR-143-3p mimics/inhibitor后P-gp 和MRP的表达。结果:转染miR-145-5p mimics后P-gp和MRP的蛋白和基因表达均降低（P<0.05）,转染miR-145-5p inhibitor后P-gp 和MRP的蛋白和基因表达均升高（P<0.05）。转染miR-145-5p mimics NC和miR-145-5p inhibitor NC后P-gp 和MRP的蛋白和基因表达无明显变化（P>0.05）。转染miR-143-3p mimics后P-gp和MRP的蛋白和基因表达均降低（P<0.05）,miR-143-3p inhibitor后P-gp和MRP的蛋白和基因表达均升高（P<0.05）。转染miR-143-3p mimics NC和miR-143-3p inhibitor NC后P-gp 和MRP的蛋白和基因表达无明显变化（P>0.05）。结论:miR-145-5p及miR-143-3p对多药耐药蛋白P-gp、MRP具有调控作用,参与了结肠癌的多药耐药。     

乳腺癌患者组织中miR-6861-5p的表达及临床意义

目的:研究乳腺癌患者组织中微小RNA-6861-5p（miR-6861-5p）的表达水平及临床意义。方法:完全随机选取本院2013年7月至2017年7月住院患者乳腺癌组织139例、良性病变组织101例及癌旁组织79例,实时定量PCR检测miR-6861-5p表达水平并分析乳腺癌组织miR-6861-5p的表达与临床病理特征的相关性。以43例完成随访患者治疗前miR-6861-5p表达量的中位数,将其分为miR-6861-5p高表达组（24例）和低表达组（19例）,Log-rank单因素分析比较两组患者的生存期差异。结果:乳腺癌组织中miR-6861-5p的RNA表达水平（9.242±3.188）显著高于良性病变组织（7.224±3.249）（P<0.01）及癌旁组织（7.221±2.594）（P<0.01）,其表达水平与肿瘤分期、淋巴结转移情况及激素受体表达相关（P<0.05）;miR-6861-5p在Luminal B-like型的表达量（10.910±2.386）显著高于TNBC亚型（7.605±2.565）（P<0.001）;miR-6861-5p高表达组的3年生存率低于miR-6861-5p低表达组（P=0.023）。结论:乳腺癌组织中miR-6861-5p的表达水平显著增高,是乳腺癌疾病进展、淋巴结转移及分子分型的潜在生物标志物。     

血清miR-129-5p水平与HER-2阳性晚期乳腺癌患者曲妥珠单抗敏感性的相关性分析

目的:探索HER-2阳性晚期乳腺癌患者的血清miR-129-5p水平对曲妥珠单抗敏感性的预测价值。方法:入组HER-2阳性晚期乳腺癌患者107例,均接受曲妥珠单抗靶向治疗,依据实体瘤疗效评价标准（RECIST 1.0）将患者分为曲妥珠单抗敏感组（76例）和曲妥珠单抗耐药组（31例）,实时荧光定量PCR法检测初次曲妥珠单抗治疗前患者血清miR-129-5p水平,并与同期35名健康体检女性人群的血清miR-129-5p水平比较;分析患者的血清miR-129-5p水平与其临床病理特征的关系;使用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic,ROC）确定患者血清miR-129-5p水平对曲妥珠单抗治疗敏感性的预测价值和其阈值。结果:曲妥珠单抗敏感组患者的血清miR-129-5p水平显著低于健康对照组（0.627±0.058 vs 1.027±0.129,P=0.001）,而曲妥珠单抗耐药组患者的血清miR-129-5p水平显著低于敏感组患者（0.276±0.031 vs 0.627±0.058,P=0.002）。HER-2阳性晚期乳腺癌患者的血清miR-129-5p水平与年龄、月经情况、ECOG评分、肿瘤转移部位均无关,但与组织学分级及肿瘤转移部位数量有关,I-II级患者的miR-129-5p水平显著低于III级患者,有一个或两个肿瘤转移部位的患者的血清miR-129-5p水平显著低于有三个或以上肿瘤转移部位的患者,差异有统计学意义（P＜0.05）。ROC曲线分析表明患者的血清miR-129-5p水平对区分曲妥珠单抗敏感与耐药患者的阈值为0.43,灵敏度为0.89,特异度为0.72,且曲妥珠单抗耐药组患者血清miR-129-5p≤0.43的患者比例显著高于敏感组患者（71.0% vs 26.3 %,P＜0.05）。结论:HER-2阳性晚期乳腺癌患者的血清miR-129-5p水平可有效预测其对曲妥珠单抗的疗效,有望成为预测患者曲妥珠单抗疗效的有效生物标记物。     

miR-144-5p通过靶向ACTG1和STAT1调控甲状腺乳头状癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的:探讨miR-144-5p在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)细胞中的表达趋势及对 PTC 细胞系增殖、侵袭及迁移能力的影响及相关分子机制研究。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测人PTC细胞系TPC-1、 BCPAP及人正常甲状腺滤泡细胞系Nthy-ori 3-1中miR-144-5p的表达情况。将miR-144-5p-mimics、miR-144-5p-inhibitor及inhibitor-NC和mimics-NC分别以LipofectaminTM2000转染至TPC-1细胞。分为4组:阴性对照组(mimics-NC 组)和过表达组(mimics-144-5p组)。阴性对照组(inhibitor-NC 组)和抑制组(inhibitor-144-5p组)。以CCK-8生长曲线、小室侵袭实验和划痕实验检测4组细胞增殖、侵袭和迁移能力。ENCORI数据库验证miR-144-5p在TCGA中的表达趋势。在线数据库预测miR-144-5p下游靶基因。通过STING得到靶基因蛋白互作网络图。通过Cytascap插件CytoHubba得Degree值为 Top10的基因。GEPIA数据库检测ACTG1和STAT1在TCGA数据库中的表达趋势。HPA 数据库验证ACTG1和STAT1蛋白表达水平。qRT-PCR和TaretScan在线数据库验证miR-144-5p与ACTG1和STAT1之间的调控关系。结果:PTC细胞系中miR-144-5p表达趋势明显低于Nthy-ori 3-1人正常甲状腺滤泡上皮细胞。上调miR-144-5p后TPC-1细胞的增殖活性、侵袭和迁移能力明显下降,而抑制miR-144-5p则起到相反的作用。在线数据库预测miR-144-5p下游靶基因为584个。通过STING得到靶基因蛋白互作网络图。通过Cytascap插件CytoHubba得Degree值为 Top10的基因。在线数据库ENCORI验证ACTG1和STAT1可能是miR-144-5p的下游靶基因。qRT-PCR验证miR-144-5p与ACTG1和STAT1之间存在负调控关系。结论:miR-144-5p在PTC细胞中低表达,过表达或敲低miR-144-5p可能是通过调控ACTG1和STAT1影响PTC细胞的增殖、侵袭及迁移。     

The Effects of Combination of Mimic miR-155-5p and Antagonist miR-324-5p Encapsulated Chitosan in Ovarian Cancer SKOV3

Objective: Ovarian cancer is a malignant tumor that attacks reproductive organs of women. MicroRNA is known to have an involvement in the prognosis of ovarian cancer. One of them is miR-155-5p which is down regulated and miR-324-5p which is up regulated. Chitosan is used as microRNA delivery system. The aims of this study is to find out the effects of combination microRNA encapsulated chitosan in cell line SKOV3. Methods: Cell line SKOV3 obtained from Stem Cell and Cancer Institute (Kalbe). Mimic miR-155-5p and Antagonist miR-324-5p formulated with chitosan. Total RNA was extracted from nine samples (three as control and six as treatment), and prepared for cDNA synthesis. Expression of RNA and mRNA target was measured using q-PCR Biorad CFX96 C.100 and Gen Ex 7 software. Statistics analysis was measured using SPSS 16.0. Results: The administration of combination microRNA encapsulated with chitosan affect the expression of miR-155-5p and miR-324-5p endogen (p <0.05). The expression of mRNA target HIF1α and GLI1 was down regulated after treatment. The correlation between expression of microRNA and mRNA target was strongly (p <0.05). Conclusion: This study successfully presented effects of combination of mimic miR-155-5p and antagonist miR-324-5p encapsulated chitosan which be considered as a potential therapy targets for ovarium cancer.