Gli-1信号通路对TGF-β1诱导的人胃癌细胞上皮间质转化和侵袭的影响

目的:探讨核转录因子神经胶质瘤关联癌基因同源物1（glioma associated oncogene homolog 1,Gli-1）对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用机制。方法:体外采用10 ng/ml TGF-β1对胃癌SGC-7901细胞进行处理,使用倒置显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR和Western blot检测EMT上皮表型蛋白E-cadherin和间质表型蛋白Vimentin的表达水平;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力变化,检测TGF-β1 对SGC-7901细胞发生EMT 的影响;同时采用RT-PCR和Western blot检测Gli-1的mRNA和蛋白表达水平。随后进一步采用Gli-1基因特异性阻断剂GANT 61阻断Gli-1表达,并使用TGF-β1（10 ng/ml）对SGC-7901细胞进行处理,RT-PCR 和Western blot检测Gli-1、E-cadherin和Vimentin mRNA 及其蛋白表达水平的改变,并使用Transwell细胞侵袭实验检测阻断Gli-1对SGC-7901细胞侵袭能力的影响。结果:TGF-β1可以诱导人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化并促进细胞侵袭。TGF-β1可以在mRNA和蛋白水平下调上皮表型蛋白E-cadherin的表达、提高Gli-1和间质表型蛋白Vimentin的表达。TGF-β1可以明显提高SGC-7901细胞侵袭,而阻断Gli-1后可以抑制TGF-β1诱导的人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化和细胞侵袭。结论:胃癌SGC-7901细胞中Gli-1 可能参与TGF-β1 介导的EMT 的发生,Gli-1 可能作为胃癌基因治疗中的有效靶点发挥作用。     

miR-138-5p通过靶向TCF3实现对胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移的调控

目的:探讨miR-138-5p 与T细胞因子3 基因（T cell factor 3, TCF3）的靶向关系及其对人胃癌细胞SGC-7901 侵袭和迁移能力的影响。方法：miR-138-5p 模拟物转染SGC-7901 细胞后,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-138-5p 和TCF3 mRNA的相对表达;生物信息学方法预测miR-138-5p 与TCF3 基因的靶向匹配关系,采用荧光素酶报告基因系统鉴定该关系。miR-138-5p 转染正常胃癌细胞和TCF3 高表达胃癌细胞后,Western blotting 检测TCF3、神经钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指转录因子（Slug）和上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达,Transwell 小室检测胃癌细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果：miR-138-5p 过表达抑制TCF3 mRNA的表达;生物信息学软件预测显示miR-138-5p 与TCF3 mRNA有靶向结合区域,miR-138-5p mimic 降低TCF3 野生型质粒的荧光素酶活性,不影响TCF3 突变型质粒的荧光素酶活性。miR-138-5p 抑制TCF3 蛋白表达,miR-138-5p 减弱TCF3 过表达对SGC-7901 细胞侵袭和迁移能力的促进作用,同时其下调N-cadherin、Vimentin 和Slug 蛋白表达、上调E-cadherin 蛋白表达。结论：miR-138-5p 抑制胃癌细胞SGC-7901 的侵袭和迁移,与直接靶向调控TCF3 的表达有关。     

下调MYEOV抑制胰腺癌细胞PaTu8988增殖、迁移、侵袭

目的:研究骨髓瘤过表达基因（MYEOV）对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响,以及对上皮间质转化（EMT）相关蛋白和STAT3信号通路相关蛋白的调控作用。方法:利用UCSC Xena数据库分析MYEOV在胰腺癌及正常组织中的表达水平,利用ICGC数据库分析MYEOV与胰腺癌患者预后的关系。使用慢病毒重组构建稳定低表达MYEOV的胰腺癌PaTu8988细胞系,运用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测胰腺癌细胞系中MYEOV mRNA和蛋白的表达情况,采用CCK-8、划痕实验、Transwell迁移及侵袭实验分析细胞的增殖、迁移、侵袭能力。利用Western blot方法检测E-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9、STAT3、p-STAT3的表达情况。结果:经生物信息学分析发现,MYEOV在胰腺癌组织中高表达,且与胰腺癌预后不良有关。与对照组比较,下调MYEOV后胰腺癌细胞株PaTu8988的增殖、迁移和侵袭能力降低;与对照组比较,下调MYEOV后胰腺癌PaTu8988细胞系中E-cadherin蛋白表达水平升高,Vimentin、MMP2、MMP9、p-STAT3蛋白表达水平下降。结论:下调MYEOV的表达抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,其机制可能与抑制EMT过程有关,而STAT3通路蛋白在EMT发生过程中出现改变,提示STAT3通路可能参与了该表型的调控。     

去泛素化酶USP33对胃癌上皮细胞-间质转化的影响及对癌细胞迁移、侵袭的作用

摘 要：［目的］ 观察去泛素化酶USP33对胃癌上皮细胞-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及细胞迁移侵袭能力的影响,并探究其作用机制。［方法］ qRT-PCR法检测胃癌上皮细胞MGC-803、SGC-7901和人胃黏膜上皮细胞GES-1中去泛素化酶USP33的表达。MGC-803和SGC-7901细胞转染USP33-siRNA沉默USP33基因表达,qRT-PCR检测沉默效率,使用转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）信号通路抑制剂SB431542处理沉默USP33后的MGC-803和SGC-7901细胞,MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot法检测细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、TGF-β、Smad2和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）的表达水平。［结果］ qRT-PCR检测结果显示,与GES-1细胞比较,MGC-803、SGC-7901细胞中USP33表达水平显著性降低。MTT实验、划痕实验和Transwell实验检测结果显示,USP33基因敲低后,MGC-803、SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著性提高。Western blot检测结果显示,沉默USP33可使MGC-803和SGC-7901细胞E-cadherin表达降低,N-cadherin、Vimentin、TGF-β、Smad2和α-SMA表达升高,而TGF-β抑制剂SB431542则逆转了这一现象,上述指标差异均有统计学意义（P＜0.05）。［结论］ USP33能够抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及EMT转化,沉默USP33可增加其增殖、迁移和侵袭能力并促进EMT转化过程,其作用机制与抑制TGF-β信号通路的活化有关。     

环氧合酶-2对人SGC-7901胃癌细胞E-cadherin的表达及迁移能力的影响

目的 研究环氧合酶-2（COX-2）通过调控E-钙黏素（E-cadherin）对胃癌细胞侵袭迁移能力的影响。方法 分别应用塞来昔布（Celecoxib）及前列腺素E2(PGE2)对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901进行干预,采用实时荧光定量反转录PCR检测COX-2、E-cadherin mRNA的表达;运用免疫荧光标记法结合激光共聚焦荧光显微镜分析E-cadherin的蛋白表达量;应用Transwell法检测细胞迁移能力的变化。结果 实时荧光定量反转录PCR检测塞来昔布明显抑制体外培养人胃癌细胞SGC-7901中COX-2 mRNA的表达（P＜0.01）,而E-cadherin mRNA的表达随着COX-2的表达下降而呈浓度与时间依赖性升高（P＜0.01）;运用PGE2干预后E-cadherin mRNA表达呈浓度与时间依赖性下降（P＜0.05或P＜0.01）。塞来昔布30 μmol/L干预人胃癌细胞SGC-7901 24、36、48 h后,激光共聚焦荧光显微镜检测E-cadherin的蛋白表达量明显升高（P＜0.05）;PGE2 1 μmol/L干预24、48 h后,E-cadherin蛋白表达量明显下降（P＜0.05）。塞来昔布组穿过Transwell小室的细胞数明显少于对照组（P＜0.01）,PGE2组穿过Transwell小室的细胞数明显高于对照组（P＜0.05）。结论 COX-2特异性抑制塞来昔布通过抑制COX-2的表达,上调E-cadherin表达量,抑制体外培养人胃癌细胞SGC-7901的迁移能力;外源性PGE2能够下调SGC-7901胃癌细胞E-cadherin表达量从而促进肿瘤细胞的迁移能力。     

HMGA2在胃癌细胞SGC-7901上皮间质转化中的作用

目的 探讨TGF-β1调控人胃癌细胞SGC-7901由上皮向间质细胞转化过程中,HMGA2的表达及其作用。方法 用TGF-β1处理人胃癌细胞SGC-7901(0,3,6,24,48,72h),在显微镜下观察SGC-7901细胞形态的变化,蛋白质印记法检测HMGA2、E-cadherin和Vimentin蛋白的表达,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果 (1)随着TGF-β1作用时间的延长,SGC-7901细胞逐渐变长,变大,细胞融合;(2)在TGF-β1作用下,SGC-7901均不同程度地表达HMGA2、E-cadherin和Vimentin。HMGA2蛋白从0h开始表达,到6h表达最强,24h以后表达稍有下降。E-cad蛋白从0h开始表达,到3h表达最高,随后开始降低。Vimentin蛋白48h表达最高,72h有降低的趋势;(3)Transwell小室实验显示SGC-7901在TGF-β1处理后,3h时细胞穿膜最多,从6h起穿过的细胞开始降低,到72h最低。结论 在TGF-β1诱导人胃癌细胞SGC-7901细胞上皮间质转化的过程中,HMGA2蛋白起到重要作用,HMGA2可作为Snail的启动子,结合Smads,促进上皮间质转化HMGA2还可能通过调控Wnt/β-Catenin信号通路对肿瘤细胞的生长和凋亡发挥作用。     

熊果酸联合顺铂对卵巢癌干细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:观察熊果酸（ursolic acid,UA）联合顺铂(DDP)对卵巢癌干细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法:通过体外无血清悬浮培养人卵巢癌SKOV3干细胞并进行细胞鉴定。实验分为SKOV3干细胞组、熊果酸组、熊果酸联合顺铂组。MTT法检测干细胞的增殖,Transwell实验检测干细胞侵袭与迁移能力,采用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测干细胞凋亡。Real-time PCR检测上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关标记分子Vimentin、N-cadherin、E-cadherin、Fibronectin、Twist的mRNA表达情况,Western-blot检测E-cadherin、Vimentin、Twist蛋白表达情况。结果:熊果酸对SKOV3干细胞增殖有显著抑制作用,呈剂量依赖性（P＜0.05）;流式细胞术显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组均可提高SKOV3干细胞的凋亡率,与SKOV3干细胞组相比有统计学差异（P＜0.05）;熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可有效抑制SKOV3干细胞的侵袭和迁移能力（P＜0.05）;Real-time PCR测定熊果酸组、熊果酸联合顺铂组作用SKOV3干细胞后EMT基因表达水平,结果显示Fibronectin、Twist、Vimentin、N-cadherin表达降低,E-cadherin表达升高（P＜0.05）;Western-blot结果显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可上调E-cadherin蛋白的表达,下调Vimentin、Twist蛋白的表达;与熊果酸组相比,熊果酸联合顺铂组对干细胞凋亡率更高,迁移和侵袭能力更低,E-cadherin表达更高,Vimentin和Twist表达更低,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:熊果酸对卵巢癌干细胞有抑制增殖、侵袭和迁移,诱导凋亡的作用,联合顺铂作用效果更优,其机制可能与逆转EMT有关。     

柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭

目的:研究柴胡皂苷D（saikosaponin-D,SSD）对人结直肠癌细胞SW480迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨SSD抑制细胞迁移和侵袭的机制。方法:MTT检测SSD对细胞增殖的影响。划痕实验和Transwell迁移实验研究SSD对细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验研究SSD对细胞侵袭能力的影响。Western-blot检测SSD对上皮间质转化（epithelial mesenchymal transformation,EMT）相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）表达的影响。克隆球形成实验研究SSD对细胞干性的影响。结果:在划痕实验和Transwell迁移实验中,SSD显著抑制SW480的迁移能力（P<0.05）。在Transwell侵袭实验中,SSD显著抑制SW480的侵袭能力（P<0.05）。SSD处理后,细胞E-cadherin的表达增高,N-cadherin和Vimentin的表达降低（P<0.05）,同时SSD抑制SW480细胞克隆球的形成（P<0.05）。结论:柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭。     

HDAC在PPARγ途径抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭中的作用

背景与目的:有研究表明组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)能抑制过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)促进脂肪细胞分化的能力;最近发现PPARγ活化后,能够抑制多种肿瘤细胞的生长与侵袭.本研究旨在观察HDAC在PPARγ途径影响胃癌细胞株SGC-7901侵袭能力中的作用及机制.方法:用不同浓度的HDAC抑制剂曲古抑菌素A(TSA)和PPARγ配体罗格列酮(ROZ)分别作用于SGC-7901细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测两种药物对细胞增殖的抑制作用,以筛选出合适的联合浓度.将SGC-7901细胞随机分为对照组、TSA组、ROZ组和TSA与ROZ联合组.MTY法检测细胞增殖抑制率,Transwell小室法检测各组胃癌细胞侵袭能力,RT-PCR法检测各组细胞PPARγ、MMP-2 mRNA表达情况,Western blot检测MMP-2蛋白的表达.结果:5 μmol/L ROZ和40 nmol/LTSA为无明显细胞毒性作用的最高浓度,低于此浓度的ROZ及TSA可减弱SGC-7901细胞的侵袭能力(P<0.01).5 μmol/L ROZ与20 nmol/L TSA联合作用对SGC-7901细胞的侵袭抑制旱协同作用(q=1.41>1.15).ROZ可以下调SGC-7901细胞MMP-2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01),TSA与ROZ联合处理组细胞MMP-2表达下调较单用ROZ组明显(P<0.01).RT-PCR结果显示,TSA作用SGC-7901细胞后,可使PPARγ表达增加(P<0.01).结论:HDAC通过一系列分子机制限制PPARγ的激活,应用TSA抑制HDAC活性后,可以使ROZ抑制胃癌细胞的侵袭活性增强.     

蒿甲醚对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用研究

目的:研究蒿甲醚对胃癌细胞（AGS和SGC-7901）的增殖、侵袭以及迁移的影响并探讨其分子机制。方法:分别利用MTT、集落形成试验检测胃癌细胞的活力和生长;流式细胞技术检测胃癌细胞的凋亡率;利用细胞侵袭和划痕愈合试验检测胃癌细胞的侵袭和迁移;Western blot检测相关蛋白的表达水平。结果:蒿甲醚（0~800 μmol/L）能够浓度和时间依赖性的抑制 AGS和SGC-7901细胞的增殖（P＜0.05）。集落形成试验以及流式细胞术结果显示蒿甲醚（400 和 600 μmol/L）能够抑制AGS和SGC-7901细胞的生长以及促进细胞凋亡（P＜0.05）。细胞侵袭和划痕愈合试验发现蒿甲醚（400 和 600 μmol/L）能够抑制AGS和SGC-7901细胞的侵袭和迁移（P＜0.05）。Western blot结果显示蒿甲醚(400 和 600 μmol/L)能够增加AGS和SGC-7901细胞的cleaved caspase-3,cleaved caspase-9以及Bax的蛋白水平（P＜0.05）;同时能够抑制N-cadherin 和vimentin的蛋白表达并促进E-cadherin蛋白的表达。结论:蒿甲醚可以显著抑制胃癌细胞的增殖、侵袭以及迁移,其机制可能是与促进细胞凋亡以及抑制上皮间质转化有关。     

FMNL2通过Rho信号通路促进胃癌细胞的侵袭和迁移

目的:研究同源形成素样蛋白2（FMNL2）是否通过Rho信号通路促进胃癌细胞的侵袭和迁移。方法:利用Oncomine数据库中的大数据分析FMNL2在胃癌及癌旁组织中的表达水平。运用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测胃癌细胞系中FMNL2 mRNA和蛋白的表达情况,使用shFMNL2质粒和空载质粒转染胃癌细胞系,并分为敲减组和对照组。采用 CCK8法、划痕实验、Transwell侵袭实验分析细胞的生物学功能,包括增殖、迁移及侵袭能力,利用Western blot方法检测两组细胞经Rho信号通路抑制剂Y27632处理后的E-cadherin、Vimentin及Rho信号通路相关蛋白的表达情况。结果:经生物信息学分析发现FMNL2在胃癌组织中高表达。同样FMNL2在胃癌细胞中表达水平升高。划痕实验和Transwell侵袭实验结果表明敲减组的迁移和侵袭能力显著下降。Western blot结果显示与对照组相比,E-cadherin在敲减组表达上调,Vimentin、RhoA、ROCK在敲减组表达下调。加入通路抑制剂Y27632后,EMT相关蛋白表达可被逆转。结论:下调FMNL2的表达可抑制胃癌细胞的侵袭迁移能力,并且可通过抑制Rho信号通路来实现。     

沉默PD-L1基因表达抑制胃癌细胞黏附、迁移、侵袭及上皮间质转化

目的:初步探讨程序性死亡受体配体（programmed death-ligand 1,PD-L1）对胃癌细胞SGC7901侵袭、迁移的影响及PD-L1表达对上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响。方法:采用siRNA干扰技术,下调SGC7901细胞株中PD-L1的表达,采用RT-PCR法及Western blot法验证PD-L1的沉默,并将后续实验分为空白对照组、空载体组（siRNA-NC组）及PD-L1沉默组（siRNA-PD-L1组）。采用RT-PCR法及Western blot法分别对各组细胞EMT相关指标（E-cadherin、Vimentin、Snail）的mRNA和蛋白表达情况进行检测。利用MTT实验比较各组细胞的黏附能力,Transwell小室实验比较各组细胞的迁移能力及侵袭能力。结果:下调PD-L1表达后,siRNA-PD-L1组Vimentin及Snail 两项指标的mRNA和蛋白表达量,细胞的黏附能力、迁移能力及侵袭能力均低于空白对照组和siRNA-NC组,E-cadherin mRNA和蛋白表达量高于其他两组,差异均具有统计学意义（P＜0.001）,而空白对照组和siRNA-NC组之间上述指标的差异无统计学意义。结论:PD-L1的表达影响胃癌细胞黏附、迁移、侵袭等生物学行为,促进胃癌细胞的上皮间质转化,与胃癌的预后可能存在相关性。     

小白菊内酯对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的:研究小白菊内酯(parthenolide,PTL)对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的机制.方法:应用0、2.5、5、10、20μmol/L的PTL处理甲状腺癌TPC-1细胞24 h,CCK-8法检测不同浓度的PTL对TPC-1细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell实验观察PTL对TPC...