miR-181a诱导慢性淋巴细胞白血病细胞周期阻滞及细胞凋亡的分子机制探讨

目的:探讨miR-181a在慢性淋巴细胞白血病细胞周期阻滞及细胞凋亡中的作用并初步阐明其调控机制。方法:利用荧光定量PCR检测慢性淋巴细胞白血病患者肿瘤细胞中miR-181a的表达水平;利用双荧光素酶试验验证miR-181a的靶基因MCL-1和BCL-2,利用免疫印迹试验检测过表达miR-181a对p53通路中关键蛋白MCL-1和BCL-2的影响,利用流式细胞仪检测过表达miR-181a对慢性淋巴细胞白血病细胞凋亡和周期的影响。结果:RT-qPCR结果显示,慢性淋巴细胞白血病细胞中miR-181a的表达下调;双荧光素酶试验验证发现,p53通路下游基因MCL-1和BCL-2均是miR-181a的靶基因;免疫印迹试验结果显示,过表达miR-181a抑制了MCL-1和BCL-2蛋白的表达;流式细胞仪检测结果显示,过表达miR-181a阻滞细胞周期G1/S期转换,促进细胞凋亡。结论:miR-181a 通过靶向作用p53通路中关键基因MCL-1和BCL-2,诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡,可能在慢性淋巴细胞白血病中扮演着抑癌基因的角色。     

miR-152在急性髓系白血病患者骨髓和细胞系中的表达及生物学功能的初步研究

目的:检测miR-152在急性髓系白血病(AML)患者骨髓和细胞系中的表达水平。初步研究miR-152在急性髓系白血病中的生物学功能。方法:收集急性髓系白血病患者40例,非恶性血液病对照组20例,提取骨髓有核细胞;培养U937、Kasumi-1、THP-1三种急性髓系白血病细胞系。RT-PCR检测miR-152的表达水平。分别对U937细胞系和Kasumi-1细胞系转染miR-152 mimics和inhibitor,CCK-8法检测U937细胞及Kasumi-1细胞增殖情况,Annexin V/PI流式实验检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期。结果:miR-152在急性髓系白血病患者骨髓及细胞系中较非恶性血液病对照组表达明显下降。U937细胞系转染miR-152 mimics后,增殖受抑制,细胞凋亡增加,细胞阻滞在G0-G1期;Kasumi-1细胞系转染miR-152 inhibitor后,增殖增加,细胞凋亡减少,G0-G1期细胞减少。结论:miR-152在急性髓系白血病患者骨髓及细胞系中的表达水平均较正常对照组显著降低。miR-152在急性髓系白血病中起抑癌基因的作用,过表达miR-152可以抑制细胞增殖,促进凋亡。     

紫杉醇通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖的实验研究

目的：探究紫杉醇对人鼻咽癌细胞株HONE1增殖、凋亡及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法用终浓度为1、5、10、20 ng/ml的紫杉醇处理HONE1细胞,分别在培养0、12、24、48 h后,用CCK-8检测HONE1细胞的增殖情况。培养48 h后,用平板细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成数;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western Blot检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt4、β-catenin及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达情况。用终浓度为10 ng/ml的紫杉醇及100 ng/ml的Wnt阻断剂DKK-1单独或共同处理HONE1细胞48 h后,用CCK-8和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况。结果1、5、10、20 ng/ml的紫杉醇能够不同程度地抑制HONE1细胞的增殖,减少HONE1细胞的克隆形成数目,促进HONE1细胞发生凋亡,下调Wnt4、β-catenin和Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,与对照组相比差异均有统计学意义（P﹤0.05）;用DKK-1抑制Wnt/β-catenin信号通路能够增强紫杉醇对细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用,与紫杉醇处理组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论紫杉醇能够抑制人鼻咽癌细胞株HONE1增殖,并促进其发生凋亡,作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关。     

miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制

目的:探究miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制。方法:在四株结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中,通过转染miR-302a mimic构建miR-302a过表达模型,RT-PCR检测过表达效果;CCK-8法检测转染48 h后高表达miR-302a细胞的增殖能力及对奥沙利铂的敏感性;蛋白质印迹法检测转染后P-gp蛋白及Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的变化。结果:相比正常小肠上皮细胞HIEC,miR-302a在结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中的表达较低。转染mimic后,miR-302a的表达明显上调（P<0.001）。增殖实验发现miR-302a的上调并不影响结直肠癌细胞的增殖,而在转染miR-302a的细胞中加入奥沙利铂,miR-302a组HT29、HCT8、SW480和SW1463细胞存活率相比miR-NC组分别降低2.46、1.89、2.39、2.86倍。进一步探究miR-302a增加奥沙利铂敏感性的机制,发现miR-302a可抑制P-gp蛋白的表达,并且抑制Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的表达。结论:miR-302a可增加结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性,其机制可能是通过抑制P-gp的蛋白表达,并抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达而实现。     

miR-144-3p 通过靶向FZD4 阻断Wnt/β-catenin 通路抑制肝癌Huh-7 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的: 探讨miR-144-3p 通过阻断卷曲受体4（FZD4）/Wnt/β-catenin 信号通路对肝癌Huh-7 细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其作用机制。方法：收集2012 年3 月至2017 年7 月在柳州市工人医院手术切除的18 例肝癌患者的癌组织及相应的癌旁组织标本,以及肝癌细胞系Huh-7、SMMC7721 和MHCC97 和人正常肝上皮细胞株THLE-3,用qPCR 检测肝癌组织及细胞系中miR-144-3p 的表达水平。将miR-144-3p mimics/inhibitor 和FZD4 敲降载体转染至Huh-7 细胞中,用CCK-8、Transwell、划痕愈合实验和Annexin V-FITC/PI 染色流式细胞术检测Huh-7 细胞的增殖、迁移和凋亡水平。用双荧光素酶报告基因验证miR-144-3p 和FZD4 的靶向关系。结果：在肝癌组织和细胞系中miR-144-3p 均呈低表达（P<0.05 或P<0.01）。过表达miR-144-3p 可显著抑制Huh-7 细胞增殖、迁移并诱导细胞凋亡（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证明miR-144-3p 靶向作用FZD4 并下调其表达水平。体外实验进一步证实,过表达miR-144-3p 靶向FZD4 并阻断Wnt/β-catenin 通路,进而抑制Huh-7 细胞增殖、迁移和促进细胞凋亡（均P<0.01）。结论：miR-144-3p 通过阻断FZD4/Wnt/β-catenin 通路抑制肝癌Huh-7 细胞的恶性生物学行为,为肝癌诊断或治疗提供了潜在分子靶点。     

Trim37过表达通过激活Wnt/β-catenin通路促进乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及EMT

目的:探讨Trim37通过Wnt/β-catenin通路对乳腺癌发展的影响及其作用机制。方法:实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)和Western blot检测Trim37在乳腺癌组织、癌旁正常组织、人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)和人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A细胞)中的表达。pcDNA-Trim37或Trim37 siRNA转染MCF-7细胞后,CCK-8法检测过表达及下调Trim37对细胞增殖的影响,Transwell实验检测过表达及下调Trim37对细胞侵袭的影响,细胞划痕愈合实验检测过表达及下调Trim37对细胞迁移的影响,Western blot检测过表达及下调Trim37对细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Snail)及β-catenin、CyclinD1、p-ERK、p-AKT和p-FAK蛋白表达的影响。Wnt/β-catenin通路抑制剂(XAV939)作用MCF-7细胞后,检测MCF-7细胞增殖、...     

miR-613通过下调Wnt/β-catenin信号通路活性抑制前列腺癌细胞的增殖与侵袭

目的:研究miR-613在人前列腺癌组织中的表达情况,探讨miR-613是否通过下调Wnt信号通路活性抑制前列腺癌细胞系细胞的增殖和侵袭能力。方法:收集临床前列腺癌组织及配对癌旁组织20例,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组组织中miR-613的表达情况。进一步在细胞实验中,通过转染miR-613 mimic和miR-NC至离体培养的PC-3、DU-145细胞中,随后,采用MTT法、平板克隆实验检测细胞增殖和Matrigel侵袭实验测定前列腺癌细胞的侵袭情况,采用荧光素酶分析方法评估Wnt信号通路活性变化,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因的转录(包括Cyclin D1和c-Myc),WB法检测细胞中β-catenin、c-Myc和Cyclin D1的表达量。结果:相比配对癌旁组织,miR-613在前列腺癌组织中的表达降低(P<0.01);在体外细胞实验中,相比于miR-NC组,转染miR-613 mimic后,PC-3、DU-145细胞增殖能力下降(P<0.05),PC-3、DU-145细胞的迁移侵袭能力下降(P<0.01);miR-613的过表达显著降低Wnt信号通路活性、β-catenin蛋白表达及Wnt信号下游靶基因Cyclin D1和c-Myc的转录及蛋白表达。结论:miR-613通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来影响前列腺癌细胞的增殖与侵袭,为前列腺癌的潜在治疗靶点之一。     

miR-128在急性淋巴细胞白血病中的表达

目的 探讨miR-128在急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及其意义.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应法对62例ALL患者和20例骨髓正常患者骨髓单个核细胞miR-128的相对表达量进行检测,并与患者的临床资料进行相关性分析.结果 miR-128在ALL患者中的相对表达量高于健康对照组(P＜0.05),但其在急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)及急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)中的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05),miR-128的表达与是否存在bcr-abl融合基因及其mRNA的表达水平均无相关性(均P＞ 0.05).结论 miR-128在ALL患者中表达上调,可作为临床诊断ALL的潜在分子标志物,bcr-abl融合基因的表达对miR-128在ALL中的表达无明显影响.     

雷帕霉素联合5-氮-2'-脱氧胞苷对急性白血病Nalm-6细胞生长抑制作用及其机制研究

目的 探讨雷帕霉素(RAPA)联合5-氮-2'脱氧胞苷(5-Aza-dC)对急性白血病Nalm-6 细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 培养复苏后的Nalm-6细胞至对数生长期,采用不同浓度的RAPA、5-Aza-dC单药及两药联用处理Nalm-6细胞.CCK-8比色法检测细胞增殖,AnnexinV-PE/7-AAD标记及流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞TSC2及磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达.结果 RAPA及5-Aza-dC均能抑制Nalm-6细胞增殖和诱导Nalm-6细胞凋亡(P＜0.05),RAPA联合5-Aza-dC对Nalm-6细胞的增殖抑制和凋亡诱导具有协同作用(P＜0.05).5-Aza-dC上调Nalm-6细胞的TSC2蛋白表达,RAPA及5-Aza-dC降低mTOR的磷酸化水平,RAPA联合5-Aza-dC可提高对mTOR磷酸化的抑制.结论 RAPA联合5-Aza-dC可增强对Nalm-6细胞增殖的抑制作用及凋亡的诱导作用,作用机制可能是抑制了mTOR的磷酸化.     

Wnt信号通路在姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡中作用机制

目的 探讨Wnt通路在姜黄素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的作用机制.方法 将MCF-7细胞培养液随机分为5组,分别加入15、30、60、120μmol/L的姜黄素,对照组不加,培养12,24,48 h后采用CCK-8法检测细胞增殖能力.分A、B两组(剂量组、时间组)采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术(FCM)观测细胞凋亡及细胞周期分布;Western Blotting法检测A、B两组的Wnt通路相关蛋白,并进行相应的相关性分析探讨Wnt通路与乳腺癌MCF-7细胞凋亡的关系.结果 CCK-8结果显示,随培养时间延长,姜黄素各浓度组MCF-7细胞增殖抑制率逐渐增高(均P<0.05);在同一时间点,随着姜黄素浓度升高,细胞增殖抑制率逐渐增高(均P<0.05).FCM染色结果显示,随着姜黄素浓度增加、作用时间延长MCF-7细胞凋亡指数逐渐上升(均P<0.05),且G1/S期细胞增加越多(P<0.05).Western Blotting实验结果显示MCF-7细胞中Wnt1、β-catenin的表达下调程度呈现剂量时间依赖性(P<0.05).相关性分析显示细胞抑制率、G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率均与Wnt通路相关蛋白Wnt1、β-catenin的表达呈现较明显的相关性(P<0.05).结论 姜黄素的抗癌活性与抗增殖能力具有明显的剂量时间依赖性,且Wnt通路在姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞抑制、凋亡过程中发挥了重要作用.     

Wnt10a及Wnt/β-catenin信号通路促进宫颈癌细胞增殖及其机制研究

目的:探讨Wnt10a及其Wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌中的作用及其机制。方法:qPCR检测Wnt10a在正常宫颈细胞和不同宫颈癌细胞系中的表达,选取Wnt10a高表达细胞进行后续实验。构建Wnt10a过表达质粒,将细胞分为对照组、Wnt10a过表达组、LGK-974(Wnt抑制剂)组和Wnt10a过表达+LGK-974组。qPCR和Western blot检测细胞中Wnt10a mRNA和蛋白的表达,CCK-8检测细胞增殖能力,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、c-Myc的表达。结果:Wnt10a在C-33 A、Ca Ski、HeLa、HeLa 229宫颈癌细胞中的表达均显著高于正常宫颈细胞(P<0.05),且在C-33 A细胞中的表达水平最高。与对照组相比,Wnt10a过表达组细胞增殖能力、细胞中Wnt10a mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.01),Bcl-2、Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、c...     

Axin过表达下调β-catenin和TCF-4表达并抑制肺癌BE1细胞的增殖和侵袭

背景与目的 Axin是Wnt通路的重要负性调节因子,其低表达和β-catenin、TCF-4的高表达与多种肿瘤有关.本研究旨在探讨axin在肺癌细胞中的表达与β-catenin和TCF-4的关系,及其对肺癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响.方法 将axin基因转染入axin低表达的肺癌BE1细胞系,应用免疫荧光方法观察转染组和对照组细胞中axin的表达对β-catenin和TCF-4的影响;采用RT-PCR方法检测axin和β-catenin、TCF-4 mRNA表达的变化;采用流式细胞术、MTT和Transwell检测肺癌细胞凋亡、增殖和侵袭能力的变化.结果 肺癌BE1细胞转染axin基因后(BE1-axin),axin的mRNA和蛋白水平均明显增加,β-catenin蛋白表达明显减少,TCF-4的蛋白和mRNA表达均明显下降.同时,BE1-axin细胞的凋亡率增加,增殖和侵袭能力明显下降.结论 Axin过表达能下调β-catenin的蛋白表达和TCF-4的转录,抑制肺癌细胞的增殖和侵袭能力,并诱导肺癌细胞凋亡.     

环孢素诱导白血病细胞系Nalm—6细胞凋亡

目的：研究环孢素（环孢霉素A，CsA）在体外对B－细胞性白血病细胞株Nalm-6细胞增殖的影响，并探讨其可能的作用机制。方法：应用细胞形态学、DNA凝胶电泳等方法检测在体外CsA对B－细胞性白血病细胞株Nalm-6细胞增殖的作用。结果：临床耐受剂量CsA能明显抑制Nalm-6细胞增殖，且证实诱导细胞凋亡是CsA抑制增殖的主要机理之一。结论：CsA能有效地通过诱导人类B－细胞性白血病细胞株凋亡而起到抑制增殖的作用。     

miR-153-3p通过靶向FZD3调控胃癌SGC7901细胞的增殖、侵袭与迁移

目的：探讨miR-153-3p对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭和迁移的作用及其机制。方法：收集2018年5月至2020年6 月宁夏医科大学总医院收治的60例胃癌患者的癌和配对癌旁组织标本,以及人胃癌细胞系NCI-N87、AGS、SNU-5、SGC7901和胃上 皮细胞 GES-1,qPCR 法检测 miR-153-3p 在胃癌组织与细胞中的表达水平。将 miR-153-3p mimic 及 mimic 对照序列转染至 SGC7901细胞,用CCK-8、克隆形成、流式细胞术、TUNEL、Transwell和划痕愈合实验分别检测上调miR-153-3p对SGC7901细胞 增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。构建裸鼠SGC7901细胞移植瘤模型,观察miR-153-3p对肿瘤生长的影响。通过生物信息学数 据库和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-153-3p与FZD3靶向关系,WB法检测miR-153-3p对FZD3蛋白及Wnt/β-catenin 通路相关蛋白表达的影响。结果：miR-153-3p在胃癌组织和细胞中表达水平分别显著低于癌旁组织和GES-1细胞（均P<0.01）,以SGC7901细胞中表达水平最低。上调 miR-153-3p 显著抑制 SGC7901 细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并提高细胞凋亡率 （均P<0.01）,同时上调细胞中E-cadherin表达而下调N-cadherin、MMP2和MMP9表达（均P<0.01）。在体内实验表明,静脉注射 miR-153-3p mimic显著降低移植瘤体积和瘤组织中Ki-67表达而上调P57表达（均P<0.01）。机制分析表明 ,miR-153-3p 靶向 结合FZD3基因的3′UTR区域,上调 miR-153-3p 会抑制FZD3表达并上调β-catenin、TCF-4和cyclin D1水平（均P<0.01）。结论： miR-153-3p靶向FZD3并通过Wnt/β-catenin信号通路调控胃癌SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移。     

miR-21沉默下调β-catenin表达对食管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-21沉默对食管癌细胞增殖和凋亡的影响及其与β-catenin表达的关系。方法:通过脂质体转染法沉默食管癌Eca9706细胞株中的miR-21,采用荧光定量（RT-PCR）检测miR-21、β-catenin mRNA的相对表达水平;蛋白质印迹法（Western blot）检测β-catenin蛋白的相对表达水平。MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果:转染48 h后,与对照组和NC组相比,miR-21组Eca9706细胞中miR-21、β-catenin mRNA和β-catenin蛋白的相对表达水平均明显降低。MTT检测miR-21组细胞的光密度值（OD值）较对照组和NC组明显下降。与NC组和对照组相比,流式细胞仪检测miR-21组中细胞的凋亡率明显上升,G0/G1期细胞所占比例明显升高,S期细胞所占比例明显下降。结论:沉默miR-21能够通过下调β-catenin的表达来抑制食管癌Eca9706细胞增殖及诱导其凋亡。     

过表达KLF4通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT和细胞周期的实验研究

目的:探讨过表达KLF4通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞上皮-间质转化和细胞周期的作用机制。方法:将课题组前期已成功转染过表达KLF4的BGC-823细胞分为KLF4过表达载体组(BGC823-OE组)、空病毒载体组(BGC823-NC组)和未经处理的BGC-823细胞组（BGC823-Ctrl组）。Western blot和qRT-PCR检测KLF4、EMT和Wnt信号通路相关蛋白和mRNA在三组细胞中的表达水平。CCK-8实验、划痕实验、Transwell迁移实验、平板克隆实验和流式细胞术观察各组细胞的增殖能力、迁移能力、克隆形成能力和细胞周期变化情况。结果:Western blot和qRT-PCR实验结果显示BGC823-OE组KLF4蛋白和mRNA表达水平明显升高。上皮-间质转化的上皮标志物E-cadherin蛋白和mRNA表达水平升高,间质标志物N-cadherin蛋白和mRNA表达水平降低。Wnt信号通路下游靶基因β-catenin和Cyclin D1的蛋白和mRNA表达水平降低。CCK-8增殖实验结果显示BGC823-OE组的增殖能力下降。划痕实验和Transwell迁移实验结果显示BGC823-OE组的迁移能力下降。平板克隆结果显示BGC823-OE组的克隆能力下降。流式细胞术结果显示BGC823-OE组G0/G1期比例增高,S期比例降低。结论:过表达KLF4可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT及阻滞胃癌细胞的细胞周期。     

毛萼乙素通过Wnt/β-catenin通路抑制结直肠癌细胞增殖的机制探讨

目的:探讨毛萼乙素（Eriocalyxin B,EriB）通过Wnt/β-catenin通路抑制结直肠癌（colorectal cancer,CRC）细胞增殖的机制。方法:CCK-8、软琼脂克隆形成实验检测EriB对结直肠癌细胞增殖活力的影响,流式细胞术检测EriB对结直肠癌细胞周期和凋亡的影响,无血清悬浮培养实验检测EriB对结直肠癌细胞干性的影响,Western blot 检测周期、凋亡以及分子机制相关蛋白的表达变化,裸鼠皮下瘤实验体内检测EriB对结肠癌细胞生长增殖的影响,免疫组织化学染色检测小鼠皮下瘤组织Ki67的表达,SynergyFinder用于分析EriB对5-FU抗结直肠癌的协同作用。结果:与对照组相比,EriB处理显著抑制了结直肠癌细胞的存活（P＜0.05或P＜0.001）,抑制干细胞球体数量（P＜0.001）。流式细胞术检测结果表明,与对照组相比,EriB处理组S期和G2期细胞百分比增加（P＜0.001）,细胞凋亡增加（P＜0.001）。Western blot结果显示,EriB处理细胞后,干性相关分子CD44、Sox2、Klf4表达下调,细胞周期相关蛋白CyclinA、Cdk2表达下调,凋亡相关蛋白Cl-PARP、Cl-caspase-3表达上调,Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、TCF4、CyclinD1、c-myc表达下调。EriB与5-FU联合应用,经SynergyFinder分析,ZIP synergy得分大于＋10,有协同作用。裸鼠异种移植瘤模型结果表明,与对照组相比,EriB处理显著抑制肿瘤生长,并减小裸鼠皮下异种移植瘤的体积（P＜0.05）。免疫组织化学分析显示,EriB处理组显著降低了肿瘤组织中Ki67的表达。结论:EriB可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制结直肠癌细胞增殖。     

miR-139-5p通过调节Wnt/β-catenin信号通路在卵巢癌中发挥抑癌作用

目的:探讨miR-139-5p表达的改变对卵巢癌的影响,并进一步探索其中的信号通路。方法:通过RT-PCR（real time-polymerase chain reaction）测量卵巢癌组织样品中miR-139-5p的表达水平。通过细胞实验,包括CCK-8（cell counting kit-8）、集落形成和Transwell测定,探索miR-139-5p对卵巢癌细胞功能的影响。通过荧光素酶基因测定确认miR-139-5p的靶基因,并通过质粒转染检验miR-139-5p对Wnt/β-catenin信号通路的作用。结果:miR-139-5p在卵巢癌组织及卵巢癌细胞中表达明显降低。miR-139-5p过表达可明显抑制卵巢癌细胞的活性、增殖和迁移能力,并且在裸鼠体内可明显抑制卵巢癌的体积和质量。miR-139-5p过表达可抑制β-catenin蛋白的表达,从而抑制卵巢癌的增长。结论:miR-139-5p的过表达可通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌的发展,其可能是一种抑制卵巢癌进展的肿瘤抑制因子。     

P53介导miRNA-30e-5p抑制乳腺癌细胞恶性表型的实验研究

目的：探讨P53介导的miR-30e-5p对乳腺癌细胞恶性表型的抑制作用。方法：利用染色质免疫共沉淀试验与荧光定量PCR验证P53对miR-30e-5p的转录激活作用;分别采用CCK8试验、划痕试验和Transwell小室试验检测miR-30e-5p对于乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;通过激光共聚焦技术探究miR-30e-5p对β-catenin亚细胞定位的影响,并利用Western blot法检测β-catenin及其靶蛋白的表达情况。结果：P53可与MCF-7、MDAMB-453细胞的miR-30e-5p启动子区域结合,转录激活miR-30e-5p的表达（P <0.05）;乳腺癌细胞转染miR-30e-5p后,其增殖、迁移、侵袭能力受到不同程度抑制（P <0.05）;此外,miR-30e-5p可减少β-catenin的核内分布,抑制β-catenin靶基因表达。结论：P53可介导抑癌基因miR-30e-5p表达,通过抑制经典Wnt通路而抑制乳腺癌细胞恶性表型。     

Gab2基因在肺癌细胞表达及对癌细胞凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响

摘 要：［目的］ 探讨Gab2结合蛋白2（Gab2）基因在肺癌细胞表达及对癌细胞凋亡及Wnt信号/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响。［方法］ 以人胚肺成纤维细胞MRC5作为对照细胞,通过Western bloting检测肺癌H322、A549、PC9、H1299、SPC-A-1细胞中Gab2的蛋白表达;转染48h后Western bloting检测Gab2、Cleaved Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1（cyclin D1）、c-myc蛋白表达;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。［结果］ 与MRC5细胞比较,Gab2在肺癌细胞中的表达显著性升高（P<0.05）。与对照组比较,Gab2-siRNA组Gab2 的蛋白表达降低,细胞凋亡率升高,Cleaved caspase3和Bax蛋白上调表达,Bcl-2、β-catenin、cyclin D1、c-myc蛋白表下调表达,差异均具有统计学意义（P<0.05）。［结论］ 抑制肺癌细胞Gab2表达能诱导细胞凋亡,机制是下调Wnt/β-catenin信号通路。