蟾毒灵抗肿瘤作用分子机制

蟾酥在中医药抗肿瘤治疗方面已有悠久的历史,其单体蟾毒灵被认为是具有抗肿瘤活性的有效成分之一.从诱导肿瘤细胞凋亡、分化,抑制细胞增殖及血管生成,增强放化疗药物的敏感性等方面阐述蟾毒灵抗肿瘤作用的分子机制,可以为深入研究蟾毒灵及其发展和临床用药提供依据.     

蟾毒灵抗肿瘤作用及其分子机制研究进展

蟾毒灵属于传统中药蟾酥中的蟾酥二烯羟酸内脂之一,其结构与地高辛相似,是一种拓朴异构酶Ⅱ抑制剂.它通过诱导细胞凋亡及阻滞细胞增殖周期进程而抑制肿瘤细胞增殖,同时还具有诱导肿瘤细胞分化及抗肿瘤血管生成作用.其作用机制与特定信号转导通路及癌基因和抑癌基因的表达有关.     

蟾毒灵抗肿瘤作用及其分子机制研究进展

蟾毒灵属于传统中药蟾酥中的蟾酥二烯羟酸内脂之一,其结构与地高辛相似,是一种拓朴异构酶II抑制剂。它通过诱导细胞凋亡及阻滞细胞增殖周期进程而抑制肿瘤细胞增殖,同时还具有诱导肿瘤细胞分化及抗肿瘤血管生成作用。其作用机制与特定信号转导通路及癌基因和抑癌基因的表达有关。     

蟾毒灵抑制人结肠癌HCT116细胞侵袭机制探讨

目的 肿瘤侵袭转移的发生是影响结肠癌治疗的重要原因,结肠癌细胞黏附能力的下降以及迁移能力的增强是促进结肠癌细胞侵袭转移的重要原因.有研究发现,蟾毒灵具有抑制结肠癌细胞侵袭能力的作用,但其作用机制尚不明确.本研究探讨蟾毒灵对人结肠癌HCT116细胞侵袭的影响,并探索其可能的作用机制.方法 用蟾毒灵溶液干预结肠癌HCT116细胞,采用细胞划痕实验与细胞黏附实验检测蟾毒灵溶液对结肠癌HCT116细胞侵袭能力的影响;ELISA法检测蟾毒灵溶液干预结肠癌HCT116细胞培养基中细胞外泌TGFβ1蛋白的含量;蛋白质印迹法检测蟾毒灵干预后结肠癌HCT116细胞中P-smad3、smad4和钙黏链蛋白(E-cadherin)表达的变化;免疫荧光实验检测蟾毒灵干预后各组HCT116细胞中P-smad3与smad4蛋白表达的变化.结果 细胞划痕实验结果显示,低、中、高剂量蟾毒灵均可降低HCT116细胞迁移能力;细胞黏附实验显示,对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组黏附细胞平均值分别为833.33±7.80、877.00±17.75、1 304.00±15.82和1 406.00±20.53,相对黏附率分别为100％、105.24％、156.48％和168.73％,差异有统计学意义,x2 =297.597,P＜0.001.ELISA检测结果显示,对照组、低、中和高剂量细胞培养液中转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGFβ1)蛋白含量分别为(1 198.78±38.96)、(1 106.58±35.76)、(1 040.80±47.47)和(987.74±37.52) pg/mL,F=16.357,P=0.005.蛋白质印迹法检测结果显示,与对照组相比,中、高剂量蟾毒灵处理后HCT116细胞中P-smad3表达呈现明显下降;而smad4蛋白表达明显上调,组间差异有统计学意义,F=56.993,P＜0.001;低剂量蟾毒灵也可上调smad4蛋白的表达,t=5.342,P=0.006.各用药组HCT116细胞中E-cadherin蛋白的表达水平也随着蟾毒灵剂量的增加而增加,分别为对照组的2.514±0.385(t=4.833,P=0.008)、3.524±0.397(t=9.200,P=0.001)和3.937±0.318(t=10.675,P＜0.001)倍;免疫荧光法检测发现,蟾毒灵处理后结肠癌HCT116细胞中P-smad3与smad4蛋白的表达呈现出与蛋白质印迹法检测相似的趋势.结论 蟾毒灵可通过抑制TGFβ1/smad信号通路的信号传导抑制结肠癌HCT116细胞的侵袭.     

蟾毒灵诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展

本文从蟾毒灵的药物作用靶点、对信号通路的改变、对相关基因及蛋白的调节等几个角度阐述蟾毒灵诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究进展.     

蟾毒灵对人肝癌细胞HepG2细胞周期的影响及其机制研究

目的:探讨蟾毒灵对人肝癌细胞HepG2细胞周期的影响及其相关机制.方法:MTT方法检测蟾毒灵单体对肝癌细胞HepG2的生长抑制作用;FCM法检测蟾毒灵单体诱导HepG2细胞周期阻滞的作用;Western blot方法观察蟾毒灵单体对细胞周期相关蛋白的作用.结果:蟾毒灵能够抑制HepG2细胞的生长,该抑制作用呈时间和剂量依赖性.蟾毒灵能够诱导HepG2细胞周期阻滞于G2/M期.蟾毒灵对HepG2细胞周期的阻滞作用可能与cyclinB1、CDK1的表达下调有关.结论:蟾毒灵能够通过下调细胞周期相关蛋白的表达,诱导HepG2细胞阻滞于G2/M期.     

蟾毒灵对人肝癌细胞HepG2细胞周期的影响及其机制研究

目的：探讨蟾毒灵对人肝癌细胞HepG2细胞周期的影响及其相关机制。方法：MTT方法检测蟾毒灵单体对肝癌细胞HepG2的生长抑制作用;FCM法检测蟾毒灵单体诱导HepG2细胞周期阻滞的作用;WestelTlblot方法观察蟾毒灵单体对细胞周期相关蛋白的作用。结果：蟾毒灵能够抑制HepG2细胞的生长,该抑制作用呈时间和剂量依赖性。蟾毒灵能够诱导HepG2细胞周期阻滞于G2／M期。蟾毒灵对HepG2细胞周期的阻滞作用可能与cyclinB1、CDK1的表达下调有关。结论：蟾毒灵能够通过下调细胞周期相关蛋白的表达,诱导HepG2细胞阻滞于G2／M期。     

蟾毒灵与紫杉醇协同抑制乳腺癌细胞增殖的机制

目的:研究蟾毒灵(Bufalin)与紫杉醇是否可协同抑制乳腺癌细胞增殖,探索可能的协同机制.方法:采用MTT法测定细胞活力、采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用Western Blot法检测AKT、p-AKT、p38、p-p38、β-actin蛋白的表达.结果:MTT结果显紫杉醇和Bufalin可以剂量依赖方式抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖.两药联合作用可协同抑制MCF-7细胞增殖.流式分析显40nmoL/L的紫杉醇作用24小时可诱导乳腺癌MCF-7发生明显的G2M期阻滞和12.5％的细胞凋亡,10nmol/L的Bufalin作用24小时未诱导明显的细胞凋亡,10nmol/L的Bufalin与40nmol/L的紫杉醇联合作用24小时后可诱导23.7％的MCF-7细胞凋亡.Western Blot分析显紫杉醇作用后导致AKT和p38的活化,Bufalin与紫杉醇联合作用后可抑制紫杉醇诱导的AKT活化,增强紫杉醇诱导的p38活化.结论:Bufalin可通过抑制AKT的活化、上调p38的活化与紫杉醇协同抑制乳腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

蟾毒灵对人骨肉瘤细胞化疗增敏作用的实验研究

目的 探讨蟾毒灵对人骨肉瘤细胞Saos 2和U2OS的化疗增敏作用。方法 采用无毒剂量的蟾毒灵联合不同浓度的阿霉素（0.01、0.1、1.0μg／ml ADM）和顺铂（0.5、1.0、2.0μg／ml DDP）分别作用于Saos-2和U2OS细胞24h,用CCK-8法观察药物对细胞增殖的抑制作用,Hoechst 33258 染色法观察细胞凋亡的形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果CCK-8法检测显示,蟾毒灵对Saos 2和U2OS细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性;无细胞毒剂量（0.005μmol／L）的蟾毒灵可以显著增强不同浓度ADM和DDP 对Saos-2和U2OS细胞增殖的抑制作用（q＞1.15）。Hoechst 33258染色法显示,蟾毒灵联合DDP或ADM后Saos-2和U2OS细胞的凋亡形态学变化较DDP或ADM单药更显著。流式细胞术检测显示,0.005μmol／L蟾毒灵联合1.0μg／ml DDP或2.0μg／ml ADM组Saos-2和U2OS细胞的凋亡率显著高于DDP或ADM单药组（q＞1.15,P＜0.05）。结论 无毒剂量的蟾毒灵可以增强化疗药物诱导的人骨肉瘤细胞凋亡的能力,具有化疗增敏作用。     

蟾毒灵联合阿霉素对膀胱癌T24细胞生长的影响及机制

目的:观察蟾毒灵联合阿霉素对膀胱癌T24细胞生长的影响，探讨蟾毒灵联合阿霉素抗肿瘤作用的可能机制。方法:用不同浓度的蟾毒灵和阿霉素分别作用于T24细胞，用MTT法检测细胞增殖抑制率，流式细胞仪检测细胞凋亡率，RT-PCR检测凋亡基因Bax及Bcl-2表达水平，再联合使用两组药物作用T24细胞，检测相关凋亡指标。结果:MTT 结果显示，蟾毒灵与阿霉素联合应用比单独应用阿霉素对T24细胞的增殖抑制率要明显提高，差异有统计学意义(P＜0.05)；流式细胞仪结果显示，当蟾毒灵和阿霉素联合应用T24细胞的凋亡率要明显高于单独应用两种药物，差异有统计学意义(P＜0.05)；RT-PCR结果显示，蟾毒灵联合阿霉素能明显下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达，上调促凋亡基因Bax的表达，与单独用药相比差异有统计学意义(P＜0.05)。结论:蟾毒灵联合阿霉素可增敏阿霉素对T24细胞的增殖抑制及诱导细胞凋亡的能力;其抗肿瘤活性的机制可能与影响凋亡基因Bax及Bcl-2的表达有关。     

蟾蜍灵通过抑制端粒酶活性诱导人脑胶质瘤细胞死亡

目的:探讨蟾蜍灵对人脑胶质瘤的作用。方法:将不同浓度的蟾蜍灵作用于胶质瘤细胞后,用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,克隆形成实验检测细胞法检测增殖抑制,Western-blot测定人端粒酶逆转录酶（hTERT）的蛋白表达,Real time-PCR检测hTERT基因表达水平,CCK-8法检测蟾蜍灵对人原代胶质瘤细胞的杀伤作用。结果:蟾蜍灵对胶质瘤细胞株细胞U251、U87增殖具有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,并且能够有效抑制U251及U87细胞的克隆形成。Western-blot结果显示hTERT蛋白表达随药物浓度增加而递减,Real time-PCR结果证实蟾蜍灵降低了hTERT基因表达。同时体外实验证明,蟾蜍灵对人原代胶质瘤细胞具有明显杀伤作用。结论:蟾蜍灵能够抑制胶质瘤细胞系细胞及人原代胶质瘤细胞增殖,同时通过抑制hTERT表达降低端粒酶活性以发挥其抗肿瘤的作用。     

EGCG抗肿瘤作用及其相关靶点的研究进展

表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate,EGCG）是绿茶的主要生物活性成分，是一种多酚类物质，属于茶多酚的一种。多年来研究发现其在抗氧化、抗炎、抗心血管疾病、抗肥胖、抗糖尿病、抗神经系统疾病、抗肿瘤等等方面发挥了预防及潜在的治疗作用，并可与多种蛋白靶点作用，影响多种化学通路发挥其上述生物学作用，如跟自噬相关蛋白LC3-I直接结合促进LC3-II的形成进而促进自噬，作用于PI3K/AKT通路影响细胞自噬、细胞凋亡、血管生成和细胞周期调控等等。现对其在抗肿瘤方面的作用及其相关靶点作一综述。     

Hedgehog信号通路与肿瘤的研究新进展

Hedgehog（Hh）信号通路在果蝇中被首次发现。该信号通路能有效调控哺乳动物的胚胎发育过程,此外,在调控细胞的分化、增殖、血管形成及肿瘤形成方面起重要作用。Hh信号通路是一个Hh-Ptch-Smo-Gli的级联反应过程。该通路的配体包括:Hedgehog配体［Sonic Hh（SHh）、Indian Hh（IHh）和Desert Hh（DHh）］,Ptch受体（Ptch1、Ptch2）,Smoothened受体（Smo）,融合同源物（Sufu）的抑制因子,驱动蛋白Kif7,蛋白激酶A（PKA）和环腺苷一磷酸（cAMP）。该级联反应中的终末转录因子Gli调控的下游基因过度表达可能是导致肿瘤产生的关键因素。许多研究者已经发现,Hegehog信号通路与一系列人类实体瘤的形成关系密切。本文就近年来Hedgehog信号通路及其与肿瘤关系的研究进行综述。     

Hippo通路在肿瘤发生发展中作用机制的研究进展

Hippo通路最先在果蝇体内被发现,在哺乳动物中具有高度保守性,其主要功能是调节器官发育及维持内环境稳态。此外,越来越多的研究发现Hippo通路的失调与肿瘤的发生、发展密切相关。本文主要总结了Hippo通路在调节肿瘤细胞增殖、凋亡、转移、肿瘤干细胞特性以及肿瘤免疫抑制等方面的作用,希望可以为相关研究提供借鉴和参考。     

Th9细胞抗肿瘤免疫作用及机制研究进展

Th9细胞作为新命名的辅助T细胞亚群,在抗肿瘤免疫治疗中起着重要作用,由转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）和白细胞介素-4（interleukin,IL-4）共同诱导初始CD4+T细胞分化而来,也可在特定的条件下由其他T细胞转化而来,表现出一定的可塑性。动物实验表明Th9可以抑制肿瘤生长,主要通过分泌IL-9等细胞因子以及其他方式发挥抗肿瘤免疫作用,细胞因子等分子可通过不同的信号途径调控Th9细胞分化、发育。本文旨在对Th9细胞的来源、抗肿瘤免疫作用及机制、相关信号通路等进行阐述,为抗肿瘤治疗提供新的视野和思路。      

多囊蛋白在肿瘤研究中的新进展

多囊蛋白（polycystin,PC）作为一个细胞表面的膜受体,是一种位于细胞表面的多功能跨膜蛋白,在多种上皮细胞中表达。作为一种新型的机械敏感分子,参与常染色体显性多囊肾病、多囊肝等疾病中囊肿形成扩张、骨骼生长发育及创伤愈合等多种生理病理过程。近年来研究发现多囊蛋白与肿瘤的发生发展密切相关,通过cAMP/PKA、Wnt/β-catenin、mTOR、GSK3β等多个信号传导通路,参与肿瘤细胞的增殖、黏附、凋亡及迁移过程,并与肿瘤治疗及预后相关。现总结近年来PC在肿瘤中的生物学作用及研究进展作一综述。     

miR-129对乳腺癌肿瘤干细胞自我更新能力的调控作用及其机制探讨

目的:探究miR-129在乳腺癌中对肿瘤干细胞自我更新能力的调控作用及其机制。方法:应用免疫组化检测乳腺癌肿瘤干细胞在肿瘤组织与癌旁组织中的数量及其与乳腺癌肿瘤分期的关系,验证miR-129和Numb与乳腺癌肿瘤干细胞之间的相关关系。在体外实验中应用Western Blotting及RT-PCR验证miR-129通过阻断雌激素受体alpha（ER alpha,ESR1）对Notch信号通路的调节作用及其调节的具体机制;应用裸鼠成瘤实验验证miR-129在裸鼠体内水平对乳腺癌肿瘤干细胞的影响。结果:肿瘤组织中乳腺癌肿瘤干细胞的比例高于癌旁组织并与肿瘤分期具有相关性;乳腺癌肿瘤干细胞比例与临床样本中miR-129和Numb的表达水平呈负相关;乳腺癌肿瘤干细胞中miR-129的过表达与Notch信号通路的抑制直接相关,这种作用很可能是miR-129通过调控ESR1所引起的Let-7b的表达下调进而导致Numb的释放来实现的;miR-129在裸鼠体内实验中可以抑制乳腺癌肿瘤干细胞的成瘤。结论:miR-129在乳腺癌组织中可以通过调控Notch信号通路影响乳腺癌肿瘤干细胞自我更新的能力,具体的调节机制可能是通过调控ESR1所引起的Let-7b的表达下调进而导致Numb的释放来最终抑制Notch信号通路的激活。     

bufalin调控信号转导通路抗肿瘤机制的研究进展

中药是祖国医学的瑰宝,在我国,中成药或多或少的应用在癌症患者治疗的不同阶段,但是有部分医生或患者对中药的作用持保留态度,限制了中药的推广和应用。华蟾素具有抗肿瘤、抗病毒、强心、增强免疫力、止痛、麻醉、诱导血管收缩等作用,在恶性肿瘤治疗中应用广泛。其中bufalin是其发挥功能的重要单体,而部分医生对其抗肿瘤机制并不熟悉,本文拟对bufalin的抗肿瘤机制作出综述,为其临床应用提供理论依据。     

SOCS3结构和作用机制研究进展

SOCS3是酪氨酸蛋白激酶/信号传导子和转录激活子(JAK/STAT)途径的负反馈调节因子之一,由SOCS盒、SH2结构域和激酶抑制区三个部分组成.SOCS3参与了体内多种信号分子转导的调控.本文结合近年的研究成果对其结构和作用机制进行了综述,并对其中尚存在的问题进行展望.