miR-125b-5p 靶向STAT3 调控血管内皮细胞凋亡

目的:探讨miR-125b-5p靶向STAT3对血管内皮细胞凋亡影响。方法:过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡,qPCR法测定miR-125b-5p表达。血管内皮细胞中转染miR-125b-5p mimics,MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞PCNA和C-caspase-3蛋白水平。靶基因预测软件预测STAT3与miR-125b-5p的靶向关系,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。血管内皮细胞共转染STAT3过表达载体及miR-125b-5p mimics,检测细胞活力、凋亡及PCNA、C-caspase-3蛋白表达。结果:过氧化氢处理后的血管内皮细胞中miR-125b-5p水平下降,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞PCNA蛋白表达降低,C-caspase-3蛋白表达提高。转染miR-125b-5p mimics可提高过氧化氢条件下血管内皮细胞活力,减少细胞凋亡,提高细胞PCNA蛋白水平,降低细胞C-caspase-3蛋白水平。miR-125b-5p靶向调控STAT3表达。STAT3过表达载体可逆转miR-125b-5p mimics对过氧化氢诱导的血管内皮细胞活力和凋亡的影响。结论:miR-125b-5p靶向STAT3抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡。     

过表达miR-151a-3p抑制PC-3前列腺癌细胞增殖和迁移

目的研究上调微小RNA-151a-3p(miR-151a-3p)对前列腺癌细胞增殖和迁移的影响和机制。方法采用实时荧光定量PCR检测PC-3M、C4-2B、22RV1、DU-145、PC-3、LNCaP人前列腺癌细胞和RWPE-1人正常前列腺上皮细胞中miR-151a-3p的表达量。以miR-151a-3p表达量最低的PC-3细胞为研究对象,生物信息学预测并采用双荧光素酶报告基因实验检验miR-151a-3p的潜在靶基因。转染miR-151a-3p模拟物或阴性对照微小RNA(miR-NC)至PC-3细胞。实时荧光定量PCR检测miR-151a-3p和潜在靶基因mRNA的表达量,Western blot法检测靶基因及下游信号通路蛋白表达量。采用MTT法检测PC-3细胞的增殖,Transwell~(TM)实验检测PC-3细胞的迁移能力。结果 miR-151a-3p在前列腺癌细胞的表达量明显低于RWPE-1人正常前列腺上皮细胞,其中PC-3细胞中的表达量最低。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验表明NIMA相关激酶2(NEK2)是miR-151a-3p的潜在靶基因。转染miR-151a-3p模拟物后,PC-3细胞中miR-151a-3p的表达量明显上升,NEK2基因的表达量明显降低,NEK2基因下游磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K-AKT-mTOR)信号通路蛋白水平降低。上调miR-151a-3p明显抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖和迁移。结论miR-151a-3p在前列腺癌细胞中表达降低,上调miR-151a-3p的表达可通过降低NEK2基因及下游PI3K-AKT-mTOR信号通路蛋白的表达抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖和迁移。     

miR-99a-5p通过靶向mTOR抑制前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长

目的 探讨miR-99a-5p靶向mTOR对前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长的影响。方法 CCK-8法检测miR-99a-5p对DU-145细胞增殖的影响;miR-99a-5p mimics转染前列腺癌DU-145细胞,通过实时定量PCR检测miR-99a-5p和mTOR mRNA表达,Western blot检测miR-99a-5p过表达后DU-145细胞mTOR蛋白的表达;通过生物信息学网站预测mTOR是否为miR-99a-5p潜在的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证,CCK-8和肿瘤异种移植裸鼠模型验证miR-99a-5p通过靶向mTOR对前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长的影响。结果 转染miR-99a-5p mimics抑制DU-145细胞体外增殖活性,降低mTOR mRNA和蛋白的表达,miR-99a-5p结合mTOR mRNA 3’UTR区域,且miR-99a-5p通过靶向mTOR抑制前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长。结论 miR-99a-5p通过靶向调控mTOR抑制前列腺癌细胞的增殖及肿瘤生长。     

喉癌组织中的microRNA差异表达谱及miR-125a-5p抑制喉癌细胞增殖的初步研究

 目的：筛选并分析喉癌组织与周围正常喉黏膜的微小RNA(microRNAs,miRNAs) 之间的表达谱差异,为进一步研究miRNA与喉癌发生、发展的关系提供线索。方法：收集喉癌组织和癌旁正常喉黏膜标本共42对,随机选取10对标本进行miRNA微阵列基因芯片分析, 另选取32对标本进行实时荧光定量PCR （qRT-PCR）验证,获得喉癌组织中的miRNA差异表达谱。应用MTT法和克隆形成实验检测miR-125a-5p对喉癌Hep2细胞增殖的影响。结果：喉癌组织中的let-7f-5p、miR-10a-5p、miR-125a-5p、miR-144-3p、miR-195-5p、miR-203等6个miRNA在基因芯片以及qRT-PCR中表达均显著下调。与对照组相比,转染miR-125a-mimics组的喉癌Hep2细胞增殖能力受到抑制,而转染miR-125a-inhibitor组Hep2细胞增殖能力增强。结论：基因芯片与qRT-PCR结果一致;喉癌与正常喉黏膜之间存在明显的miRNA差异表达,这些miRNA的差异性表达可能与喉癌的发病、侵袭等相关。miR-125a可以抑制喉癌Hep2细胞的增殖,可能作为喉癌生物治疗的新靶点。     

过表达miR-130a-3p对心肌细胞肥大的缓解作用研究

本研究旨在探索miR-130a-3p对心肌细胞肥大的作用及其可能机制。通过胸主动脉缩窄法(TAC)构建压力超负荷所致心肌肥厚小鼠模型。使用去甲肾上腺素(NE)刺激SD乳鼠原代心肌细胞(NRCMs)及H9c2大鼠心肌细胞系,诱导这两种心肌细胞发生肥大表型转变。检测miR-130a-3p的表达变化,并进一步探索其对心肌细胞肥大是否有调控作用。结果表明,miR-130a-3p在肥厚心肌组织、肥大NRCMs及H9c2细胞中的表达均明显降低。给予miR-130a-3p mimics使其过表达后,H9c2细胞中肥大标志基因心房利钠肽(ANP)、脑利钠肽(BNP)和肌球蛋白重链β(β-MHC)的表达较对照组(mimics N.C.+NE组)明显下调,且细胞面积明显减小。而给予miR-130a-3p inhibitor抑制其表达后,肥大心肌细胞中ANP、BNP、β-MHC的表达进一步上升,且细胞面积进一步增加。Western blot检测发现,过表达miR-130a-3p后心肌细胞中磷酸化Akt和磷酸化mTOR的表达水平下调。以上结果提示,miR-130a-3p mimics可缓解心肌细胞肥大的程度;其inhibitor则可使心肌细胞肥大进一步加剧。过表达miR-130a-3p可能通过影响Akt通路来缓解H9c2心肌细胞肥大的程度。     

端粒酶核酶抑制裸鼠移植瘤生长的实验研究

目的　探讨端粒酶核酶对裸鼠移植瘤生长的影响。方法　构建了人子宫颈癌细胞株HeLa 裸鼠移植瘤,将不同剂量端粒酶核酶真核表达质粒pXJ-neo-teloRZ用脂质体包裹后进行瘤体内多点注射,对照组注射生理盐水或空质粒载体。连续注射14 天,测量肿瘤体积和重量,检测瘤组织端粒酶活性,并作病理切片检查。结果　端粒酶核酶使肿瘤组织端粒酶活性下降,肿瘤组织凋亡增加,明显地抑制了裸鼠移植瘤生长。结论　该端粒酶核酶可望成为有效的端粒酶抑制剂,在肿瘤基因治疗中发挥作用。     

miR-125b-5p靶向STAT3调控免疫因子IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-125b-5p对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法采用荧光定量PCR检测子宫内膜癌组织中miR-125b-5p的表达,免疫组织化学染色法检测子宫内膜癌组织中STAT3、IL-6/10的表达;双荧光素酶报告基因检测和Western blot检测验证miR-125b-5p和STAT3的靶向调控关系;荧光定量PCR和Western blot检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对子宫内膜癌HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达的影响;CCK-8法、Transwell小室分别检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对HEC-1B细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果与癌旁正常组织相比,子宫内膜癌组织中miR-125b-5p表达明显降低,而STAT3、IL-6/10蛋白的表达水平明显升高(P0.05)。子宫内膜癌中STAT3表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著正相关(P0.05),而miR-125b-5p表达与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著负相关(P0.05)。STAT3是miR-125b-5p的潜在靶基因,miR-125b-5p可负向调控STAT3表达。miR-125b-5p过表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达水平以及细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显降低;干扰STAT3表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10表达及细胞增殖、迁移、侵袭能力与miR-125b-5p过表达的结果相一致。结论 miR-125b-5p可通过靶向STAT3调控IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

TNF-α通过miR-125a-5p/JAK2/STAT3通路参与亚急性甲状腺炎发病的机制研究

目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对甲状腺滤泡细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法 选择50例亚急性甲状腺炎患者（观察组）,其中男性23例,女性27例;年龄29～57岁,平均年龄46.02岁。50例健康体检人群（正常对照组）,其中男性24例,女性26例;年龄28～56岁,平均年龄45.86岁。用质量浓度10、50、100 ng/mL TNF-α处理甲状腺滤泡上皮FRTL-5细胞。FRTL-5细胞分别转染miR-125a-5p mimcs(miR-125a-5p组)、阴性对照miR-NC(miR-NC组),无任何处理的细胞作为Contol组。四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测细胞增殖能力,流式细胞术、TUNEL染色检测细胞凋亡,酶联免疫吸附分析（ELISA）法检测血清TNF-α、细胞上清液白细胞介素6(IL-6)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测细胞miR-125a-5p、IL-6水平,Western blot检测细胞JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平。结果观察组患者外周血TNF-α、IL-6、miR-125a-5p含量高于正常对照组,差异有...     

卵巢癌患者miR-497、miR-125a-5p的表达及与其临床特征和生存率的关系

目的:分析卵巢癌患者癌组织中微小RNA-497(miR-497)和微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)的表达情况及其临床意义.方法:选取2018-06—2019-12在本院手术治疗的96例卵巢癌患者作为研究对象,将手术切除的卵巢癌组织作为试验组,癌旁(>2cm)正常组织为对照组.采用实时荧光定量PCR(...     

miR-125b通过靶向STAT3抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭迁移能力

目的研究miR-125b靶向STAT3对胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移能力的影响。方法运用qPCR法检测miR-125b在胃癌及癌旁组织中的表达,运用Western blot法检测STAT3在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达,用双荧光素酶报告基因系统检测miR-125b对STAT3转录活性的影响,用Transwell实验检测过表达miR-125b对SGC-7901细胞侵袭迁移能力的影响,用Western blot法检测过表达miR-125b后SGC-7901细胞STAT3的表达变化。结果与癌旁正常组织比较,胃癌组织miR-125b的表达水平明显降低,STAT3蛋白表达水平明显升(P0.01)。双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-125b可以直接调控STAT3的转录活性。过表达miR-125b后,SGC-7901细胞的侵袭和转移能力明显降低,STAT3的表达水平下调(P0.01)。结论miR-125b可靶向STAT3的表达调控SGC-7901细胞的侵袭迁移能力。     

miR-20a-3p、miR-449b-5p在妊娠糖尿病中的表达及临床意义

目的 通过基于基因表达数据库（GEO）的基因表达数据,描述miR-20a-3p、miR-449b-5p与妊娠糖尿病之间的关系。方法 本研究选择了GEO数据库中的GSE182737及GSE98403两个数据集,将妊娠糖尿病组（GDM）和正常组（normal）的外周血标本分别作为实验组和对照组,分别筛选表达差异cicrRNA及miRNA,通过cicrRNA数据库筛选靶向miRNA,取交集miRNA。利用mirPATH软件对交集的差异miRNA行京都基因与基因组百科全书（KEGG）、基因本体（GO）功能分析。收集2019年1月至2020年12月在常熟市第二人民医院产科就诊的GDM的患者60例,同期正常妊娠的产妇60例,对采集的血液标本进行qPCR验证miR-20a-3p、miR-449b-5p的表达。结果 GSE182737的差异cicrRNA为10个,GSE98403的差异miRNA为73个,两个数据集表达差异miRNA交集为7个。通过miPATH软件对交集的差异miRNA行KEGG富集,结果显示在脂肪酸代谢及合成等通路上显著富集。GO富集分析显示在应激反应及细胞死亡等通路上显著富集。通过...     

miR-30a-5p靶向SIRT1调控骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的研究

为研究miR-30a-5p对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制,运用实时荧光RT-PCR检测人原代OA软骨细胞及正常软骨细胞中miR-30a-5p、沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(silent information regulator 1, SIRT1)的表达。研究分为正常对照组(正常软骨细胞)、OA+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、OA+anti-miR-30a-5p组(转染anti-miR-30a-5p)、OA+pcDNA组(转染pcDNA)、OA+pcDNA-SIRT1组(转染pcDNA-SIRT1)、OA+anti-miR-30a-5p+si-NC组(anti-miR-30a-5p和si-NC共转染)、OA+anti-miR-30a-5p+si-SIRT1组(anti-miR-30a-5p和si-SIRT1共转染),用脂质体法进行细胞转染,Western blotting检测各组细胞中SIRT1的表达,MTT试验检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,双荧光素酶报告基因检测试验检测细胞的荧光活性。结果显示,与正常软骨细胞比较,OA软骨细胞中miR-30a-5p表达显著升高(P0.05),SIRT1表达显著降低(P0.05);抑制miR-30a-5p、过表达SIRT1均可促进OA软骨细胞增殖,抑制其凋亡。miR-30a-5p靶向SIRT1。敲减SIRT1表达可逆转抑制miR-30a-5p对OA软骨细胞的增殖促进和凋亡抑制作用。提示miR-30a-5p可促进OA软骨细胞增殖,抑制其凋亡,其机制可能与靶向SIRT1有关,这可为OA的靶向治疗提供依据。     

过表达NEDD9对miR-193a-3p抑制结肠癌细胞SW480侵袭转移的影响

目的:观察转染miR-193a-3p结肠癌细胞SW480增殖、迁移和侵袭能力变化及过表达神经前体细胞表达下调蛋白9(NEDD9)对其影响。方法:将购自美国菌种保藏中心结肠癌细胞SW480分为NC组、miR-con组、miR-193a-3p组、si-co组、si-NEDD9组、miR-193a-3p+pcDNA组、miR-193a-3p+pcDNA-NEDD9组,每组9例。采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测NEDD9、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞核增殖抗原标记物(Ki67)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平;采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;采用Transwell检测细胞迁移和侵袭数量。结果:转染miR-193a-3p后,miR-193a-3p组结肠癌细胞SW480存活率、迁移和侵袭数量及相关蛋白Cyclin D1、Ki-67、MMP-2、MMP-9表达水平明显低于NC组和miR-con组(均P<0.01)。沉默NEDD9时,si-NEDD9组上述指标检测水平显著低于NC组和si-con组(均P<0.01)。过表达NEDD9时,上述指标检测水平显著高于miR-193a-3p+pcDNA组(P<0.01)。过表达miR-193a-3p,E-cadherin表达水平较miR-con组升高,N-cadherin、Vimentin表达水平降低(P<0.01)。结论:转染miR-193a-3p可抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,过表达NEDD9可能逆转这种作用。     

miR-496过表达抑制结肠癌细胞生长和转移

目的:研究miR-496过表达对结肠癌细胞生长和转移的影响及其分子机制。方法:运用生物信息学软件筛选miR-496靶向相互作用蛋白;real-time PCR和Western blot法测定结肠癌细胞系HT29、HCT116、SW480以及正常结肠上皮细胞NCM460中miR-496、CTNNB1 mRNA和β-catenin蛋白的表达;运用Lipofectamine 2000将miR-496 mimics转染HT29、HCT116和SW480细胞,分别命名为HT29-miR-496 mimics、HCT116-miR-496 mimics和SW480-miR-496 mimics细胞,转染scramble为阴性对照;运用MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒法、克隆形成实验和Transwell分别测定细胞活力、LDH漏出率、克隆形成能力和转移能力;萤光素酶报告基因实验测定miR-496启动子活性;Western blot法测定β-catenin、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)、p-4E-BP1、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)、p-LRP6、MMP-7、MMP-9、MMP-13以及TIMP-2的蛋白水平。结果:miR-496与β-catenin内源性相互作用;miR-496在HT29、HCT116和SW480细胞中低表达,而在NCM460高表达;β-catenin在HT29、HCT116和SW480细胞中高表达,而在NCM460低表达;培养24 h、48 h、72 h、96 h的HT29-miR-496 mimics、HCT116-miR-496 mimics和SW480-miR-496 mimics细胞活力、LDH漏出率、克隆形成率和转移的细胞数均显著低于对照组(P0.05);萤光素酶报告基因实验结果显示转染miR-496 mimics细胞中的miR-496启动子活性明显增加(P0.05),分别是对照组的1.75倍、2.04倍和1.61倍。Western blot实验结果显示miR-496过表达抑制β-catenin蛋白表达,p-4E-BP1和p-LRP6的蛋白水平降低;siRNA或miR-496过表达介导的β-catenin表达下调能显著抑制MMP-7和MMP-9的表达,促进TIMP-2的表达。结论:miR-496在结肠癌细胞中低表达,在正常结肠上皮细胞中高表达;miR-496过表达抑制结肠癌细胞的生长和转移,其机制是通过抑制Wnt/β-catenin通路进一步抑制MMP-7和MMP-9表达,促进TIMP-2表达,从而抑制结肠癌细胞的恶性表型。     

过表达miR-299-3p抑制人肾癌细胞系增殖和迁移

目的探讨miR-299-3p在肾癌细胞系增殖、迁移和侵袭的作用及机制。方法 RT-qPCR检测肾癌细胞系(786-O、769-P、ACHN和A498)和人正常肾小管上皮细胞系(HK-2)中miR-299-3p的表达;MTT法、细胞划痕实验、Transwell小室法检测miR-299-3p mimic对肾癌786-O细胞系增殖、迁移和侵袭的影响;在线生物信息学数据库对miR-299-3p的靶基因进行了预测。Western blot检测E-cadherin,N-cadherin、vimentin和MAP3K12的蛋白表达。结果 miR-299-3p在肾癌细胞系中均低表达(P0.05),且在786-O细胞中表达最低。过表达miR-299-3p可显著抑制肾癌细胞系786-O增殖、迁移、侵袭、体外成瘤和上皮间质转化(EMT),综合4个数据库的结果,发现预测的miR-299-3p的共同靶基为MAP3K12,荧光素酶报告基因验证了miR-299-3p与MAP3K12的靶向关系。miR-299-3p+MAP3K12共转染786-O细胞后,能够有效降低miR-299-3p mimic诱导的细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-299-3p在肾癌细胞中的作用机制可能是通过miR-299-3p靶向下调MAP3K12表达,调控EMT途径影响肾癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-196a-5p抑制小鼠胚胎干细胞的自我更新

目的 研究miR-196a-5p在小鼠胚胎干细胞(mESC)自我更新中的功能.方法 定量PCR法确定miR-196a-5p在mESC早期分化过程中的表达.在胚胎干细胞中过表达miR-196a-5p类似物,通过集落形成实验、细胞周期分析、碱性磷酸酶染色和Oct4染色确定miR-196a-5p过表达对mESC自我更新及增殖的影响.结果 miR-196a-5p在mESC早期分化过程中表达上升(P＜0.05),在mESC中过表达miR-196a-5p类似物后,ESC的集落形成及增殖能力被明显抑制(P＜0.01),碱性磷酸酶活性下降,Oct4蛋白水平也出现明显下降.结论 miR-196a-5p具有抑制mESC自我更新的能力,在mESC早期分化过程中可能发挥重要作用.     

miR-106a-5p靶向GAB1影响人心肌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的 探究心力衰竭患者血浆中miR-106a-5p的表达水平及其影响人心肌细胞增殖和凋亡的潜在机制.方法 利用RT-qPCR检测45例心力衰竭患者和健康志愿者血浆中miR-106a-5p的表达水平;利用Lipofectamine 2000转染miR-106a-5p模拟物及模拟物对照至人心肌细胞系,RT-qPCR验证转染...     

miR-135a-5p靶向抑制Kif3B调控小鼠腭胚突间充质细胞的自噬

背景：研究表明,在地塞米松诱导腭裂的小鼠胚胎腭突间充质细胞中miR-135a-5p呈高表达,初级纤毛及其介导的Shh信号通路参与小鼠胚胎腭突间充质细胞的自噬。由此猜测miR-135a-5p可能通过初级纤毛及其介导的Shh信号途径调控小鼠胚胎腭突间充质细胞的自噬。目的：探讨miR-135a-5p对小鼠胚胎腭突间充质细胞自噬的调控作用。方法：体外提取并培养C57BL/6J小鼠胚胎腭突间充质细胞。细胞转染分别设置为：(1)对照组、miR-135a-5p阴性对照组、miR-135a-5p模拟物组。(2)NC+miR-NC组、KIF3B过表达组、miR-135a-5p+KIF3B组。qRT-PCR验证miR-135a-5p、KIF3B的转染效率;透射电镜观察各组细胞中自噬小体/自噬溶酶体的数目;免疫荧光技术测定自噬标记物LC3B的荧光表达程度;Western blot检测KIF3B、LC3和P62的蛋白表达。(3)miR-135a-5p阴性对照组、SAG处理组、SAG+miR-135a-5p组。qRT-PCR检测Shh信号下游关键转录因子Gli3的mRNA表达水平;Western blot检测自...