内质网应激关键因子PREK在应力加载下成肌细胞凋亡中的作用及机制

目的 研究周期性张应力对L6大鼠成肌细胞凋亡的影响,探讨蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)在这一过程中的作用及机制。方法 构建L6细胞力学刺激模型,加载参数为细胞拉伸形变率15%,频率10个循环/min,每循环包括3 s拉伸及3 s舒张,加力时间为2、6、12、24 h,以不加力组为对照组。应用DAPI染色观察各组细胞凋亡情况;应用实时荧光定量PCR检测各组PERK、CHOP mRNA的表达;应用Western免疫印迹检测各组PERK、p-PERK的表达变化。加入PERK抑制剂后重复实验,检测各组细胞凋亡情况,PERK、CHOP mRNA 的表达变化及p-PERK的蛋白表达变化。采用SPSS17.0软件包进行统计学分析。结果 DAPI染色显示,L6大鼠成肌细胞在周期性应力诱导下发生凋亡,24 h时达到凋亡最大值。PERK被抑制后,加力组的细胞凋亡程度与对照组无显著差别。RT-PCR 结果显示,随着加力时间的延长,CHOP mRNA 的表达逐渐增加;PERK mRNA 表达无差异。Western免疫印迹结果显示,p-PERK蛋白表达水平随加力时间延长而逐渐升高,总蛋白PERK的表达无明显变化;加入PERK抑制剂后,CHOP的mRNA表达与对照组无显著差异,p-PERK蛋白表达与对照组无显著差异。结论 内质网应激关键因子PERK参与了周期性应力条件下的成肌细胞凋亡,其作用机制可能与PERK磷酸化有关。     

降钙素基因相关肽对血清饥饿作用下MC3T3-E1成骨细胞凋亡和自噬的影响

目的 研究血清饥饿条件下降钙素基因相关肽（CGRP）对小鼠MC3T3-E1成骨细胞凋亡、自噬的影响以及二者之间的关系,以进一步明确CGRP对成骨细胞的保护机制。方法 体外培养小鼠MC3T3-E1成骨细胞。采用流式细胞术和蛋白质印迹检测正常血清、无血清（血清饥饿）、3-MA预处理+血清饥饿培养的成骨细胞的凋亡和微管相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白的表达。采用蛋白质印迹检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+不同浓度（10^-10、10^-9、10^-8、10^-7 mol·L^-1）CGRP培养的成骨细胞的LC3和P62蛋白表达;采用蛋白质印迹检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+10^-8 mol·L^-1 CGRP培养不同时间（2、6、12、24、48、72 h）的成骨细胞的LC3蛋白表达,流式细胞数检测细胞凋亡,MDC染色检测细胞自噬泡。采用流式细胞术检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿+10^-8 mol·L^-1 CGRP、3-MA预处理+血清饥饿、3-MA预处理+血清饥饿+10^-8 mol·L^-1 CGRP培养24 h的成骨细胞的凋亡。结果 血清饥饿培养时成骨细胞的LC3Ⅱ蛋白表达及细胞凋亡较正常血清时增加,3-MA预处理+血清饥饿培养时成骨细胞的凋亡较血清饥饿时增加（P<0.01）。与正常血清相比,血清饥饿、血清饥饿+CGRP培养时LC3Ⅱ蛋白表达增加,P62蛋白表达降低,以血清饥饿+10^-8 mol·L^-1 CGRP培养24 h时LC3Ⅱ/Ⅰ比值最高;血清饥饿+10^-8 mol·L^-1 CGRP培养能抑制成骨细胞的凋亡,促进自噬泡的合成。3-MA预处理后MC3T3-E1成骨细胞凋亡增加,CGRP部分逆转3-MA预处理所增加的成骨细胞凋亡。结论 CGRP能够增强血清饥饿下MC3T3-E1成骨细胞的自噬活性,并可能通过促进自噬抑制成骨细胞的凋亡。     

机械应力对大鼠成肌细胞凋亡的影响

目的：探讨周期性张应力对大鼠成肌细胞凋亡的影响及Caspase-3凋亡通路在此过程中的作用。方法：采用细胞体外加力装置将不同强度的周期性牵张力施加于体外培养的大鼠成肌细胞,24h后,立即使用流式细胞仪对各组凋亡细胞计数,统计学分析,Western-blot检测各组细胞内Caspase-3表达变化。同时采用Caspase-3抑制剂对照检测,进一步明确Caspase-3的具体作用。结果：随周期性牵张力强度的增加,细胞凋亡比例也随之增加,当牵张力达到20%细胞表面拉伸率时,凋亡细胞比例由不加力时的4.18%增加到7.78%,细胞内Caspase-3含量也呈强度依赖性升高,相对OD值由0.027增加到0.081,这一凋亡过程可被Caspase-3的抑制剂所阻断。结论：周期性张应力可以导致大鼠成肌细胞凋亡,并呈强度依赖性,该过程是由Caspase-3凋亡通路介导的。     

钙调神经磷酸酶-T细胞核因子信号通路在应力诱导成肌细胞凋亡中的作用

目的 探讨钙调神经磷酸酶（CaN）-T细胞核因子（NFAT）信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中的作用。方法 构建成肌细胞体外培养-力学刺激模型,利用多通道应力加载系统对细胞加载不同时间的周期性张应力,加入CaN的特异性抑制剂环孢素（CsA）作为对比。采用Hoechst 33258染色法和流式细胞术检测成肌细胞凋亡情况,实时聚合酶链式反应检测CaN和NFAT mRNA的表达情况,蛋白质印迹法检测NFAT3的蛋白含量。结果 随加力时间的延长,细胞凋亡逐渐增加,CaN亚基CnA、CnB及NFAT3的mRNA表达及NFAT3蛋白含量逐渐升高;加入 CsA后,细胞凋亡减少,CnA、NFAT3的mRNA表达及NFAT3的蛋白含量明显减少。结论 周期性张应力可以诱导成肌细胞发生凋亡;CaN-NFAT信号通路可能参与了周期性张应力诱导的成肌细胞凋亡。     

周期性张应力作用下Hippo-YAP信号通路调控人牙周膜细胞自噬

目的 探究周期性张应力（CTS）作用下人牙周膜细胞（hPDLCs）自噬激活的分子机制。方法 分离培养正常牙周组织的hPDLCs，利用Forcel四点弯曲细胞加力仪对hPDLCs加载张应力模拟正畸牙移动过程中正畸力诱导的张力侧hPDLCs自噬，利用XMU-MP-1抑制Hippo信号通路探究Hippo-YAP信号通路在张应力激活hPDLCs自噬中的作用。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测hPDLCs自噬相关基因（Beclin-1、LC3、p62）的表达；采用蛋白免疫印迹（Western blot）检测hPDLCs自噬相关蛋白（Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62）及Hippo-YAP通路相关蛋白（active-YAP、p-YAP）的表达；采用免疫荧光染色定位hPDLCs自噬相关蛋白（LC3-Ⅱ、p62）及Hippo-YAP通路相关蛋白（active-YAP）。结果 CTS激活hPDLCs的自噬，自噬相关因子表达随加力时间的延长呈先升高后降低的趋势，30 min自噬开始，3 h达到高峰，随后出现下调（P<0.05）;CTS促进active-YAP蛋白表达增加...     

过量氟对大鼠HAT-7细胞系自噬的影响

目的:研究过量氟对大鼠HAT-7细胞系自噬的影响.方法:取大鼠HAT-7细胞,分别加入不同浓度的氟化钠培养液,培养48 h后,透射电子显微镜检测过量氟对大鼠成釉细胞自噬泡的影响,Western免疫印迹和定量反转录聚合酶链反应技术检测过量氟诱导大鼠成釉细胞内微管相关蛋白轻链(LC3)和Beclin 1表达的变化.选择40只Wistar大鼠,随机分为A、B、C、D 4组,进行免疫组织化学实验,检测饮水氟对大鼠自噬分子表达的影响.采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:实验组自噬泡明显增多;Western免疫印迹及定量反转录聚合酶链反应结果显示,随着氟浓度的增加,HAT-7细胞自噬相关基因LC3和Beclin 1表达增加.回归分析结果显示,氟化钠与LC3及Beclin 1的表达有线性关系;大鼠体内免疫组织化学染色结果显示,实验组LC3以及Beclin 1为棕褐色,呈阳性表达.结论:过量氟诱导大鼠HAT-7细胞系自噬.     

尼古丁调控人牙周膜细胞自噬水平的实验研究

目的 探讨尼古丁对人牙周膜细胞（hPDLCs）自噬水平的影响。方法 选取因正畸治疗而拔除的前磨牙,采用组织块法分离培养hPDLCs。通过Western blot法筛选尼古丁影响hPDLCs自噬的最佳作用时间及浓度,使用透射电子显微镜（TEM）和免疫荧光染色法检测该作用时间及浓度下hPDLCs自噬体形成情况和自噬标志蛋白LC3的表达情况。结果 LC3Ⅱ蛋白表达在尼古丁作用的12 h内持续升高,从而确定12 h为最佳作用时间;LC3Ⅱ蛋白表达上调具有尼古丁浓度依赖性,1×10^-5 mol·L^-1为尼古丁最佳作用浓度。TEM和免疫荧光染色证实尼古丁在此浓度及作用时间下hPDLCs细胞质内自噬体的数量增加,自噬标志蛋白LC3表达升高。结论 在一定条件下,尼古丁能够上调hPDLCs自噬水平,为进一步研究细胞自噬与吸烟相关牙周炎的关系奠定了基础。     

不同加载时间周期性张应力对大鼠颅底软骨细胞的影响

目的: 构建颅底软骨细胞体外培养力学刺激模型,研究周期性张应力对颅底软骨细胞主要细胞外基质（Ⅱ型胶原）和Sox9表达的影响。方法: 采用FX-5000T应力加载系统对体外培养的第2代大鼠颅底软骨细胞分别施加3、6、12、24 h的周期性张应力,加力值均为10%形变率,频率均为1 Hz。加力后即刻收集细胞,提取总RNA,实时荧光定量 PCR技术检测颅底软骨细胞Ⅱ型胶原（type-Ⅱcollagen,Col-Ⅱ）和Sox9 mRNA的表达。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 与对照组（加力0 h）相比,加力3 h组Col-Ⅱ和Sox9表达下降,且后者有显著差异（P<0.05）;加力6 h组Col-Ⅱ和Sox9表达显著下降（Col-Ⅱ,P<0.01;Sox9,P<0.05）;加力12 h组Col-Ⅱ和Sox9表达较6 h组有所上升,与对照组相比差异无统计学意义;加力24 h组中,两者表达与对照组相比显著升高（P<0.05）。结论: 周期性张应力可影响颅底软骨细胞增殖及细胞外基质合成,加力短时间基质合成抑制,增加加力时间则明显促进基质合成,且成软骨分化标志物Sox9 mRNA表达水平差异先于Col-Ⅱ出现。     

PI3K/AKT/mTOR/p70S6K通路在人舌鳞癌细胞耐药中的作用

目的:通过抑制舌鳞癌细胞中PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路的表达,检测细胞凋亡与自噬的变化,探讨舌鳞癌耐药的机制。方法:以舌鳞癌细胞Cal27与舌鳞癌耐顺铂细胞Cal27/CDDP为研究对象。分别用PI3K/AKT抑制剂LY294002、mTOR抑制剂Rapamycin、p70S6K抑制剂LY2584702作用该通路各个环节。Western blot检测通路抑制剂作用后相关蛋白的变化。Cyto-ID荧光染色检测自噬体的形成。流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果:Western blot结果显示加入抑制剂后舌鳞癌细胞Beclin1表达分别高于对照组,LC3II与LC3I以及Bax与Bcl-2的比值均升高,该通路的p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K等蛋白均有下降(P<0.05)。流式结果显示加入抑制剂后的舌鳞癌细胞凋亡率分别较对照组升高(P<0.05)。Cyto-ID荧光染色后结果显示加入抑制剂后的舌鳞癌细胞自噬小体的数目明显高于对照组(P<0.05)。对比两组细胞显示加入抑制剂后的Cal27细胞发生凋亡与自噬的水平高于Cal27/CDDP(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路可诱导舌鳞癌细胞Cal27与舌鳞癌耐顺铂细胞Cal27/CDDP发生凋亡与自噬,激活的PI3K/AKT/mTOR/p70S6K通路抑制细胞凋亡与自噬是Cal27/CDDP细胞产生顺铂耐药的原因之一。     

煅烧牙粉影响人牙周膜干细胞体外矿化的自噬机制研究

目的 探讨自噬在煅烧牙粉调节牙周膜干细胞体外矿化中的作用,为牙周膜干细胞的定向诱导分化和牙周病的治疗提供参考。方法 选用成人完整的牙齿在300 ℃的条件下煅烧后,研磨成粉,与α-MEM混合制备成20 μg/mL牙粉条件培养基,与人牙周膜干细胞共培养。采用流式细胞技术检测其对牙周膜干细胞凋亡的影响,通过Western blot检测、免疫荧光染色、茜素红染色和ALP染色观察检测其对牙周膜干细胞自噬活性及体外矿化的影响。结果 流式细胞技术结果显示牙粉对牙周膜干细胞的凋亡无明显影响（P＞0.05）;Western blot结果显示煅烧牙粉显著上调人牙周膜干细胞的自噬相关蛋白Beclin1,ATG5的表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值,以及明显下调了P62的蛋白水平（P<0.05）;免疫荧光染色显示牙粉促进人牙周膜干细胞中LC3在胞质内点状聚集;茜素红染色显示牙粉促进牙周膜干细胞的体外矿化;ALP染色显示自噬活性抑制剂氯喹降低牙粉对牙周膜干细胞体外矿化的促进作用。结论 煅烧牙粉通过激活自噬调节牙周膜干细胞的体外矿化作用。     

凋亡蛋白酶依赖性凋亡途径在晚期糖基化终产物诱导人牙龈成纤维细胞凋亡中的作用

目的 观察晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGE)对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGF)凋亡的诱导作用,同时通过检测胱天蛋白酶(caspase)-8,9,3酶活性改变及caspase抑制剂对凋亡作用的影响,探讨凋亡蛋白酶依赖性凋亡途径在AGE诱导HGF凋亡过程中的作用.方法 将AGE修饰的人血清白蛋白(AGE-human serum albumin,AGE-HAS)与HGF共培养(以不加AGE-HAS的HGF为空白对照组),利用酶标仪分别测定12、24h后caspase-8,9,3酶活性的变化;分别添加caspase-8,9,3及caspase-8 +caspase-9抑制剂后(分别为caspase-8,9,3及caspase-8+ caspase-9抑制剂组,不添加caspase抑制剂的为阳性对照组),检测24h后Hoechst33258染色及膜联蛋白V-碘化丙啶双染检测细胞凋亡率,酶标仪测定caspase-3酶活性的变化.结果 caspase酶活性检测结果表明:HGF与AGE-HAS共培养后,caspase-8,9,3的酶活性分别为0.1097±0.0051、0.0965±0.0051及0.1280±0.0103,共培养24h后酶活性分别为0.1558±0.0053、0.1308±0.0035及0.1954±0.0051,组间差异均有统计学意义(P＜0.05);Hoechst33258染色结果显示caspase-9抑制剂组、caspase-8抑制剂组、caspase-8+ caspase-9抑制剂组、caspase-3抑制剂组阳性细胞数分别为(247.7±32.4)、(200.1±14.6)、(154.1±14.4)及(131.3±14.6)个,与阳性对照组[ (350.4±20.0)个]间差异均有统计学意义(P＜0.05);膜联蛋白V-碘化丙啶双染结果显示,caspase-9抑制剂组、caspase-8抑制剂组、caspase-8+ caspase-9抑制剂组及caspase-3抑制剂组凋亡率分别为(38.87±3.31)％、( 25.57±2.20)％、(17.17±2.24)％和(14.73±2.48)％,与空白对照组及阳性对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05);caspase-3酶活性在caspase-8、caspase-9及caspase-8+caspase-9抑制剂组分别为0.1274±0.0076、0.1465±0.0062、0.1044±0.0051,组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 AGE-HAS主要通过激活caspase依赖性凋亡途径诱导HGF凋亡;其中死亡受体途径可能在凋亡过程中占主导地位.     

Lipopolysaccharide-induced suppression of periodontal ligament cell proliferation and apoptosis are strengthened under high glucose conditions

The present study aimed to investigate the effect of lipopolysaccharide (LPS) on the proliferation and apoptosis of human periodontal ligament (hPDL) cells under normal glucose or high glucose conditions. Primary cultures of hPDL cells were prepared from extracted premolars of patients. The cells were incubated with 0, 1, or 10 μg/mL LPS under normal glucose (5.5 mmol/L) or high glucose (25 mmol/L) conditions for 24 h or 48 h. Cell proliferation was detected using a CCK-8 assay, and cell apoptosis was measured by Hoechst 33258 staining and Annexin V-fluorescein isothiocyanate (FITC)/propidium iodide (PI) double staining. BCL2 and BAX mRNA and protein levels were measured by real-time polymerase chain reaction and western blotting, respectively. LPS (10 μg/mL) induced significant inhibition of cell proliferation and cell apoptosis, and a significant decrease in the BCL2/BAX ratio in the cells cultured with 5.5 mmol/L glucose. These effects of LPS were increased significantly in cells treated with 25 mmol/L glucose. Analysis of variance of the factorial design revealed that high glucose and LPS had a significant interaction for cell apoptosis, but not for cell proliferation. High glucose augmented LPS-induced hPDL cell apoptosis and cell proliferation inhibition. LPS and high glucose might interact to induce cell apoptosis.     

高强度周期性牵张应力促进体外培养成肌细胞凋亡的机制探讨

目的：探讨高强度应力作用下体外培养成肌细胞凋亡的分子机制。方法：采用Flexercell Strain Unit系统对体外培养成肌细胞施加牵张应力,通过DNA ladder实验观察细胞凋亡情况。Western Blot检测磷酸化和总体JNK1的水平,通过NFkappa B报告系统检测其活性。通过JNK1的RNAi实验观察抑制JNK1后,是否补救被抑制的NFkappa B活性。结果：10%表面拉伸幅度的牵张应力作用24 h后,细胞形态梭形稍变长,且排列方向有一致性的趋势,DNA ladder实验证实15%以上较高强度应力引起C2C12细胞凋亡,高强度应力条件下成肌细胞凋亡过程中,JNK1通路被激活,抑制JNK1的活化,补救被抑制的NFkappa B活性。结论：高强度周期性牵张应力促进体外培养成肌细胞凋亡是通过激活JNK1通路而抑制NFkappa B活性实现的。     

丹参酮ⅡA对舌鳞状细胞癌细胞系TCA-83增殖和凋亡的影响

目的:体外研究丹参酮ⅡA对舌鳞状细胞癌细胞系TCA-83增殖和凋亡的影响。方法:用终浓度为0.625、1.25、2.5、5、10、20 mg/L的丹参酮ⅡA处理TCA-83细胞。应用MTT比色试验,Giemsa染色,Annexin-V-FITC和PI(propidium i-odide)双标记活细胞后,流式细胞仪和透射电镜检测TCA-83细胞在不同时间点的生长抑制率和凋亡情况。结果:丹参酮ⅡA对TCA-83的生长抑制率与药物浓度和作用时间具有明显的正相关性(P<0.01)。用药组细胞凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升,各组间差异有显著性(P<0.000 1)。结论:丹参酮ⅡA具有抑制舌癌细胞系TCA-83增殖和诱导其凋亡的作用,且具有浓度和时间依赖性。     

丹参对槟榔碱诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的:探讨丹参对槟榔碱诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(Vein Endothelial Cells,VEC)为模型,槟榔碱作为致伤因素,丹参作为保护因素,用Hoechst 33258染色,在荧光显微镜下观察凋亡细胞核形态学改变并计算凋亡百分率。结果:正常培养的血管内皮细胞凋亡较少,槟榔碱刺激后可见到明显的细胞凋亡,丹参预处理后则凋亡细胞明显减少,凋亡率与槟榔碱组相比有显著性差异(P<0.05)。结论:丹参对槟榔碱诱导的VEC凋亡有一定的保护作用。     

The vital status of human buccal epithelial cells and the bacteria associated with them

OBJECTIVE: We have shown that buccal epithelial cells (BEC) from humans can contain a polymicrobial intracellular flora. Members of that flora can induce proinflammatory responses. However, our subjects all had healthy oral mucosa. This might reflect tolerance of bacterial invasion by live BEC. Alternatively, inflammation might not occur if invaded cells were mostly dead, and thus unable to mount a response. This study addressed that issue, by determining the vital status of BEC and the bacteria associated with them. DESIGN: Initial experiments indicated that BEC were anomalously permeable to the DNA stain propidium iodide. We used that property to develop a protocol that combined the DNA stains SYTO 9 and propidium iodide (indicators of bacterial viability) with the esterase substrate calcein blue AM (an indicator of BEC viability), and Annexin V Alexa Fluor 647 conjugate (an apoptosis marker). That protocol was applied to BEC collected from 36 human subjects. RESULTS: On average, 70% of BEC displayed calcein blue staining, with no binding of Annexin V, 25% showed signs of apoptosis, and 5% did not stain with calcein blue. The mean percent of BEC with live cell-associated bacteria was 29%. Collectively, 25% of total BEC displayed calcein blue staining and live (SYTO 9 stained) bacteria. Only 1% of total BEC were negative for calcein blue and associated with live bacteria. CONCLUSIONS: Our findings suggest that live BEC are tolerant of bacterial invasion. This may be due to complex interactions between members of the polymicrobial flora and their host BEC.     

吴茱萸碱抑制涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖的实验研究

目的:研究吴茱萸碱对涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖的影响。方法:用终浓度为0.01、0.1、1、10、100μg/ml的吴茱萸碱处理ACC-M 24、48、72 h后,应用MTT比色试验、倒置显微镜、Giemsa染色、Annexin-V-FITC和流式细胞仪检测和观察ACC-M的生长抑制率和凋亡情况。结果:吴茱萸碱(1μg/ml以上)对ACC-M细胞具有时间-浓度依赖性生长抑制作用,最大生长抑制率可达89%。吴茱萸碱可诱导ACC-M细胞凋亡,凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升,各组间有显著差异。吴茱萸碱同时可引起ACC-M细胞坏死。结论:吴茱萸碱可以诱导细胞凋亡和/或坏死,从而抑制涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖。     

Trypsin‐like protease‐active extracellular protein extracts from Porphyromonas gingivalis ATCC 33277 induce apoptosis in bovine aortic endothelial cells

Tian N, Ouyang XY. Trypsin‐like protease‐active extracellular protein extracts from Porphyromonas gingivalis ATCC 33277 induce apoptosis in bovine aortic endothelial cells. J Periodont Res 2010; 45: 650–657. © 2010 John Wiley & Sons A/S Background and Objective: Certain virulence factors participating in periodontitis may relate to cardiovascular diseases. This study was to evaluate the pro‐apoptotic effect of protein extracts from Porphyromonas gingivalis on bovine aortic endothelial cells (BAECs). Material and Methods: The BAECs were exposed to trypsin‐like protease ‐ active protein extracts from P. gingivalis, and apoptosis was examined by Hoechst 33342 staining, DNA fragmentation assay and cleaved caspase‐3 detection. When BAECs were exposed to protein extracts pretreated with trypsin‐like protease inhibitor (TLCK), the apoptosis rate was evaluated by Annexin V–propidium iodide staining. To further study the potential mechanism of the pro‐apoptotic effect, immunoblotting was used to detect expression of α‐tubulin, integrin β1 and activated ERK1/2 in BAECs treated with protein extracts or cultured in suspension. Results: After exposure to the protein extracts, BAECs exhibited loss of cell adhesion and apoptotic cell death. The pro‐apoptotic effect could be delayed by TLCK pretreatment. In addition, BAECs treated with protein extracts showed decreased levels of α‐tubulin, integrin β1 and activated ERK1/2. When BAECs were cultured in suspension, ERK1/2 activation was also inhibited, but the percentage decrease in ERK1/2 activation was less than that induced by protein extracts. Moreover, no significantly altered expression of α‐tubulin was detected in suspended cells. Conclusion: Trypsin‐like protease‐active protein extracts from P. gingivalis could induce apoptosis of BAECs. The destruction of α‐tubulin and integrin β1 and decrease of ERK1/2 activation might contribute to the pro‐apoptotic effect of the protein extracts.