CD166对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响

目的 探讨CD166对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响.方法 采用流式细胞术检测鼻咽癌CNE-2细胞膜CD166阳性表达率,免疫磁珠分选技术获得CNE-2-CD166(+)、CNE-2-CD166(-)细胞亚群,克隆形成实验验证其放射敏感性,CCK-8法及流式细胞术检测10 Gy剂量照射前后的细胞增殖率及细胞凋亡率.结果 CNE-2细胞膜CD166阳性表达率为(24.27±5.31)％,分选后CNE-2-CD166(+)细胞CD166阳性表达率为96.5％,CNE-2-CD166(-)细胞为0.6％.克隆形成实验结果显示,CNE-2-CD166(-)细胞相对CNE-2-CD166(+)细胞的放射增敏比(sensitization enhancement ratio,SER)为1.24.10Gy照射后24 h、48 h和72 h,CNE-2-CD166(+)细胞的存活分数分别为(76.66±3.36)％、(62.44± 1.66)％和(55.21±3.39)％,CNE-2-CD166(-)细胞为(60.34±5.13)％、(41.11±3.00)％和(35.28±4.36)％,同时段内两组细胞的存活分数比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).10 Gy照射前,CNE-2-CD 166(+)细胞和CNE-2-CD166(-)细胞凋亡率分别为(5.87±1.14)％和(6.67±1.68)％,差异无统计学意义(P＞0.05);10 Gy照射后48 h,CNE-2-CD166(+)细胞凋亡率为(19.37±2.54)％,显著低于CNE-2-CD166(-)细胞的(28.90±4.04)％,差异有统计学意义(P=0.026).结论 CD166表达阳性的鼻咽癌CNE-2细胞对放射更具抗拒性,可能与减少细胞受照射后的凋亡率降低有关.     

人鼻咽癌细胞系CNE-2Z及克隆株的放射敏感性差异

实验结果显示人鼻咽癌细胞系CNE2比CNE1对放射线更为敏感,说明鼻咽癌细胞群中存在放射敏感性差异.那么,人鼻咽癌细胞系CNE-2Z中克隆株之间是否也存在放射敏感差异呢？为此笔者采用成克隆法测定了CNE-2Z及克隆株CNE-2Z-S1、CNE-2Z-F1的放射生物学参数,现将结果报道如下.     

甘草素通过影响鼻咽癌CNE-2 细胞的自噬增强其放疗敏感性

[摘要] 目的：探讨甘草素（licorice）对鼻咽癌CNE-2 细胞放疗增敏的影响及其作用机制。方法：体外培养构建放射抵抗性的鼻咽癌细胞株CNE-2-RR。MTT细胞实验检测不同浓度的甘草素对鼻咽癌细胞增殖活性的影响,透射电镜检测甘草素处理鼻咽癌细胞后自噬体的变化情况,Western blotting 检测甘草素对鼻咽癌细胞自噬蛋白水平的影响,彗星实验检测不同组鼻咽癌细胞DNA损伤修复情况,流式细胞术检测鼻咽癌细胞株凋亡率的变化。结果：成功构建放射抵抗细胞株CNE-2-RR,20 mmol/L甘草素对鼻咽癌细胞的最高抑制率为（58.86±5.02）%。甘草素处理鼻咽癌CNE-2-RR细胞后胞内自噬体数量增加,线粒体和细胞核形态异常;细胞中自噬体蛋白LC3-II 水平升高、LC3-I 水平降低（P<0.05）;甘草素作用CNE-2-RR细胞后彗星尾距长度大于对照组,表明对DNA损伤修复能力明显降低。甘草素作用导致CNE-2-RR细胞的凋亡率明显增加（P<0.05）。结论：甘草素通过影响鼻咽癌CNE-2-RR细胞的自噬行为及DNA修复能力增强其对放疗的敏感性。     

盐霉素增加鼻咽癌CNE-2细胞放疗敏感性的实验研究

目的:探讨盐霉素（Sal）对鼻咽癌CNE-2细胞的放疗增敏作用及其可能的机制。方法:CCK8测定不同浓度盐霉素、不同剂量放疗及联合应用对CNE-2细胞增殖的抑制作用;平板克隆实验观察盐霉素联合放疗后细胞的克隆形成率;Hoechst33258染色观察细胞凋亡;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化情况。结果:CCK8结果显示,盐霉素和放疗对鼻咽癌CNE-2细胞的生长有显著的抑制作用,呈浓度和剂量依赖性,且联合组抑制作用强于单纯药物组或放疗组。平板克隆实验显示盐霉素联合放疗后能显著降低细胞的克隆形成率;Hoechst33258染色显示盐霉素联合放疗治疗后细胞凋亡现象更明显;细胞流式术检测显示联合组较单纯药物组或放疗组凋亡率增加,盐霉素对放疗具有增敏作用。药物组和放疗组均能使G2/M期细胞比例增加,两者联合效果更明显。结论:盐霉素能增加人鼻咽癌CNE-2细胞的放疗敏感性,其作用机制可能与周期阻滞及其凋亡诱导相关。     

整合素αⅤ对鼻咽癌CNE-2Z细胞放疗敏感性的影响

目的:探讨粘附分子整合素αV通过细胞间相互作用,是否对鼻咽癌CNE-2Z细胞的放疗敏感性产生影响,进而初步探讨其可能机制。方法:采用liquid overlay技术进行CNE-2Z细胞三维立体(多细胞球)培养;血球计数器计数法比较在阻断整合素αV作用前后CNE-2Z细胞的放射敏感性;AnnexinV/PI双标流式细胞术检测细胞凋亡。结果:(1)成功建立CNE-2Z多细胞球培养模型;(2)CNE-2Z多细胞球在接受X射线照射后,并在一定的照射剂量下,其表达的整合素αV量,随着照射剂量的增加而增加;(3)阻断整合素αV作用后CNE-2Z多细胞球放疗敏感性增强、细胞凋亡率上调。结论:以多细胞球培养模型模拟体内实体瘤情况,证实粘附分子整合素αV的表达情况可以影响鼻咽癌CNE-2Z细胞的放疗敏感性,抑制细胞凋亡是其可能的作用机制。     

整合素αV对鼻咽癌CNE-2Z细胞放疗敏感性的影响

目的：探讨粘附分子整合素αV通过细胞间相互作用,是否对鼻咽癌CNE-2Z细胞的放疗敏感性产生影响,进而初步探讨其可能机制。方法：采用liquid overlay技术进行CNE-2Z细胞三维立体（多细胞球）培养;血球计数器计数法比较在阻断整合素αV作用前后CNE-2Z细胞的放射敏感性;AnnexinV／PI双标流式细胞术检测细胞凋亡。结果：（1）成功建立CNE-2Z多细胞球培养模型;（2）CNE-2Z多细胞球在接受X射线照射后,并在一定的照射剂量下,其表达的整合素αV量,随着照射剂量的增加而增加;（3）阻断整合素αV作用后CNE-2Z多细胞球放疗敏感性增强、细胞凋亡率上调。结论：以多细胞球培养模型模拟体内实体瘤情况,证实粘附分子整合素αV的表达情况可以影响鼻咽癌CNE-2Z细胞的放疗敏感性,抑制细胞凋亡是其可能的作用机制。     

2Gy多分割不同顺序照射对鼻咽癌CNE-2细胞生物效应的研究

目的探讨总剂量为2 Gy时部分分割和顺序照射对鼻咽癌CNE-2细胞的杀伤效应的差异。方法采用克隆形成法和四唑盐（MTT）比色法,检测2 Gy剂量照射后鼻咽癌CNE-2细胞的细胞生存率和具有代谢活性细胞比例。结果在多个等分割照射中,较小分割（≤0.5 Gy）多次照射的细胞存活率均明显低于单次照射组（2 Gy）,差异有统计学意义（P〈0.05）,而较大分割（1 Gy）照射与单次照射组细胞生存率差异无统计学意义;在2个部分分割和3个部分分割照射中,随着S分割剂量的增大,各S-L和S-S-L照射组细胞生存率呈逐渐下降趋势,至S分割为0.4 Gy（S-L）或者0.5Gy（S-S-L）组时细胞生存率最低;大部分S-L照射组细胞生存率明显低于L-S照射组,大部分S-S-L照射组细胞生存率和相对细胞生存率明显低于L-S-S照射组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论总剂量为2 Gy照射时,分割剂量大小和照射顺序是影响鼻咽癌CNE-2细胞放射治疗生物效应的重要因素。     

沙利度胺对人鼻咽癌细胞株体外放射敏感性的影响

[目的]探讨沙利度胺对人鼻咽癌细胞株细胞周期分布及体外放射敏感性的影响。[方法]应用MTT法检测不同时间点、不同浓度沙利度胺对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞增殖的抑制率。采用沙利度胺及放射线单独或联合作用于CNE-2细胞,用克隆形成法经单击多靶模型拟合细胞存活曲线,获得不同处理条件下的放射增敏比;流式细胞技术分析沙利度胺对CNE-2细胞周期分布的影响。[结果]沙利度胺可抑制CNE-2细胞的增殖,且呈浓度依赖性;20mg／L和40mg/L沙利度胺作用CNE-2细胞24h后均见到放射增敏作用,SER分别为1．29（0．941／0．728）和1．57（0．941／0．598）;流式细胞仪分析表明沙利度胺作用24h,随着沙利度胺浓度的增加．CNE-2细胞中处于G0／G1期的细胞增多,S期和G2/M期细胞减少．但变化差异无显著性。[结论]沙利度胺能够抑制CNE-2细胞的增殖,并具有一定的放射增敏作用,为临床放疗和沙利度胺的联合应用提供了实验依据。     

化合物UC2288对CNE-2R细胞体外及裸鼠移植瘤放射敏感性影响

目的:探讨化合物UC2288对CNE-2R细胞及裸鼠移植瘤放射敏感性影响。方法:化合物UC2288浓度参照以往实验结果(IC 50＝12.20 μmol/L),克隆形成实验检测UC2288联合2、4、6、8 GyX线照射对CNE-2R细胞放射敏感性影响。CCK8实验检测UC2288联合X线2、4、6、8 G...     

吉西他滨对人鼻咽癌细胞系CNE-1的放射增敏作用

目的：观察吉西他滨对鼻咽癌细胞CNE-1的放射增敏作用并探讨其作用机理。方法：用克隆形成法制作不同处理条件的细胞存活曲线,用流式细胞仪分析测定细胞周期分布。结果：单纯用药0.1μmol/L和2μmol/L吉西他滨短时间作用时（12小时）未见到肿瘤细胞毒性作用。两个浓度的吉西他滨处理CNE-1鼻咽癌细胞12小时和24小时后均见到放射增敏作用,放射增敏比（SERD0）及2Gy时的放射增敏比（SERSF2）分别为1.36,1.83;1.56,2.16及1.55,1.36,1.43,1.40。0.1μmol/L和2μmol/L的吉西他滨作用24小时后照射均见到G1期细胞阻滞。准阈剂量（Dq）值在2μmol/L中比较低,特别是在作用24小时后照射组。结论：吉西他滨对CNE-1鼻咽癌细胞具有明显的放射增敏作用,并且在高剂量照射时（Gy）随着剂量的增加及作用时间的延长增敏作用愈加明显,其作用机制可能与该药能阻止细胞由G1期进入S期及在高浓度、长时间作用时亚致死性损伤修复比较少有关。     

顺铂诱导鼻咽癌CNE-2细胞自噬和凋亡的体外研究

目的:研究顺铂在体外应用对人鼻咽癌CNE-2细胞凋亡与自噬的影响,并探讨其可能机制。方法:采用流式细胞术检测细胞周期分布、细胞凋亡率和MDC阳性率;RT-PCR法检测Mcl-1、Bcl-2、Bad、Bax、Caspase-3、Beclin1和LC3 mRNA表达。结果:在实验浓度范围内,顺铂作用CNE-2细胞48h后,2、4、8μg/ml各干预组总凋亡率分别为(8.71±1.03)%、(11.34±1.17)%、(15.30±2.24)%;MDC阳性率分别为(5.36±0.48)%、(7.52±0.32)%、(10.65±0.70)%;与0μg/ml组比较,G2/M期阻滞率分别增加45.97%、73.99%、267.34%;Bcl-2和Mcl-1 mRNA表达剂量依赖性降低,Bax、Bad、Caspase-3、Beclin1和LC3 mRNA表达剂量依赖性增加,且4μg/ml和8μg/ml与0μg/ml组比较,以上研究指标差别均有统计学意义(P<0.05)。结论:顺铂可诱导鼻咽癌CNE-2细胞发生G2/M期阻滞、细胞凋亡和自噬性细胞死亡,对CNE-2细胞具有杀伤作用,其分子机制可能与Bcl-2表达下调和Caspase-3、Beclin1表达上调有关。     

鼻咽癌肿瘤干细胞样细胞亚群的分离及初步鉴定

  目的   分离和鉴定具有肿瘤干细胞特性的鼻咽癌球形成细胞亚群。   方法   利用无血清干细胞球悬浮培养技术从不同分化程度鼻咽癌细胞株中分离成球细胞,然后利用MTT法,软琼脂克隆形成实验,分别评价成球细胞的耐药性、克隆形成能力,最后利用RT-PCR和免疫荧光细胞技术分析干性基因及Wnt信号通路关键转录因子β-catenin在成球及未成球细胞中的表达情况。   结果   低分化鼻咽癌细胞含有较高成球细胞,而高分化细胞株CNE-1中未见成球细胞。与CNE-2相比较,CNE-2S（来源于CNE-2的成球细胞）具有较强的抗肿瘤药物耐药性、克隆形成能力、高表达干性基因,且β-catenin在胞浆和核内都呈高表达。   结论   本研究分离到干细胞样鼻咽癌成球细胞亚群,为最终靶向杀灭鼻咽癌肿瘤干细胞提供了可能。      

口虾蛄抗鼻咽癌细胞生长活性成分的初步分析

目的:提取并初步分析口虾蛄抗鼻咽癌细胞生长活性成分。方法:系统溶剂法分离口虾蛄乙醇提取物,MTT法测定其抗人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长作用,并以薄层色谱法初步分析性质。结果:MTT结果显示,乙酸乙酯提取物(B)和正丁醇提取物(C)对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长均有较明显的抑制作用,而石油醚提取物(A)的作用不明显;薄层显色结果显示,A及B均可能含有蛋白质类、甾体和萜类等物质;C可能含有蛋白质类、生物碱类以及糖类等物质。结论:B有较强抗鼻咽癌细胞生长活性,可能因含有甾体、萜类等物质;C有较强抗鼻咽癌细胞生长活性,可能因其含有生物碱类物质。     

人鼻咽癌细胞系CNE-2Z两种明胶酶表达及分泌的差异

目的：探讨人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z两种明胶酶表达及分泌的差异。方法：免疫细胞化学法检测CNE-2Z细胞明胶酶A及明胶酶B的表达;明胶酶谱法检测两种明胶酶的分泌情况。结果：CNE-2Z细胞明胶酶B强阳性表达率明显高于明胶酶A,明胶酶B的分泌量或活性比明胶酶A高。结论：明胶酶B在鼻咽癌恶性进展中作用可能强于明胶酶A,有可能成为鼻咽癌的潜在治疗靶点。     

模拟IMRT模式下相对剂量率变化对CNE-2细胞周期及Cyclin D1、Cyclin B1蛋白表达的影响

目的探讨模拟调强放射治疗（intensity-modulated radiation therapy IMRT）对人鼻咽低分化鳞癌细胞株（CNE-2）细胞周期及Cyclin D1、Cyclin B1蛋白水平的影响。方法选取CNE-2为实验对象,分为空白对照组、急速照射组（acute radiation AR）及模拟IMRT（simulational intensity-modulated radiation SIMR）组,后2组分别给予6MV-X线2、4、6、8 Gy 4个剂量点的照射。急速照射组完成时间1-3分钟;模拟IMRT组：各个剂量点分别等分分割5次,每次间隔8-8.5分钟,总时间35分钟照射完成。应用流式细胞术（FCM）分析细胞周期再分布的差异;应用Western blotting检测细胞周期相关因子Cyclin B1、Cyclin D1的蛋白水平。结果在相同剂量点,模拟IMRT组G2期细胞比例低于急速照射组,G2期细胞比例随照射剂量的增加而逐渐增加。急速照射与模拟IMRT组不同剂量点之间以及在相同剂量点比较,Cyclin D1的蛋白表达差异均无统计学意义（P值均〉0.05）;Cyclin B1的蛋白表达差异均有统计学意义（P值均〈0.05）,且随照射剂量的增加而下降,模拟IMRT组Cyclin B1的表达高于急速照射组。结论模拟IMRT照射时间延长,对G2期阻滞作用下降,细胞周期素Cyclin B1的表达相对升高。