长链非编码RNA TUG1调控miR-138-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)牛磺酸调节基因1(TUG1)调控miR-138-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:在骨肉瘤细胞U-2OS中转染TUG1 siRNA和siRNA control,qRT-PCR测定干扰效果,MTT测定增殖,流式细胞术测定凋亡,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移。starBase预测TUG1与miR-138-5p有结合位点,双荧光素酶报告载体鉴定靶向调控关系。将miR-138-5p抑制物和TUG1 siRNA共转染至骨肉瘤细胞中,测定干扰miR-138-5p对下调TUG1的骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果:转染TUG1 siRNA后的骨肉瘤细胞中TUG1表达水平明显低于转染siRNA control后的细胞（P<0.05）。下调TUG1后的骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,细胞凋亡率升高（P<0.05）。野生型TUG1荧光素酶报告载体与miR-138-5p共转染后细胞荧光素酶活性降低（P<0.05）。与转染TUG1 siRNA的细胞比较,miR-138-5p抑制物和TUG1 siRNA共转染后的细胞增殖、侵袭和迁移能力升高,细胞凋亡率降低（P<0.05）。结论:下调LncRNA TUG1表达通过调控miR-138-5p表达抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力并诱导细胞凋亡。     

微小RNA-9-5p干扰RhoA表达调控胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移

[目的]探讨微小RNA(miR)-9-5p在胰腺导管腺癌（pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC）中表达及影响其生物学行为的机制。[方法]实时定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）测定40例PDAC与正常人胰腺细胞系HPDE6-C7中miR-9-5p的表达。miR-9-5p模拟物转染PDAC细胞株PANC-1;甲基噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖活性;划痕实验、Transwell侵袭实验测定细胞侵袭、迁移能力。qPCR及蛋白印迹实验检测RhoA、ROCK1、PCNA、CyclinD1、MMP-2、MMP-9及p21表达。双荧光素酶报告基因分析实验检测miR-9-5p对RhoA的调控功能。[结果](1)临床样本中miR-9-5p在PDAC组织中的表达显著性低于癌旁组织（0.34±0.08 vs 1.01±0.24,t=13.222,P<0.001）。miR-9-5p表达降低与胰腺癌淋巴结转移、肿瘤分期存在相关性。(2)miR-9-5p在胰腺癌细胞系PANC-1中表达明显低于正常人胰腺细胞系HPDE6-C7(0.28±0.04 vs 0.53±...     

miR-885-5p通过靶向CTNNB1抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-885-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明miR-885-5p和CTNNB1基因在胰腺癌细胞中的作用机制。方法:MTT、细胞划痕和Transwell实验测定各组细胞增殖、迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验分析CTNNB1是否为miR-885-5p的靶基因。使用胰腺癌TCGA数据进行预后分析,并进行miR-885-5p与CTNNB1表达的相关性分析。结果:下调miR-885-5p明显促进胰腺癌细胞增殖、迁移与侵袭,而过表达miR-885-5p则相反。miR-885-5p可靶向CTNNB1 3' UTR并抑制其转录后表达。在下调miR-885-5p的细胞中进行回复性实验,结果表明,miR-885-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用部分依赖于CTNNB1。TCGA数据库结果显示,miR-885-5p高表达的胰腺癌患者有较好的预后,且与CTNNB1表达呈负相关。结论:miR-885-5p通过靶向CTNNB1抑制胰腺癌细胞增殖、迁移与侵袭,miR-885-5p有望成为胰腺癌治疗的新靶点。     

miR-138-5p通过靶向TCF3实现对胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移的调控

目的:探讨miR-138-5p 与T细胞因子3 基因（T cell factor 3, TCF3）的靶向关系及其对人胃癌细胞SGC-7901 侵袭和迁移能力的影响。方法：miR-138-5p 模拟物转染SGC-7901 细胞后,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-138-5p 和TCF3 mRNA的相对表达;生物信息学方法预测miR-138-5p 与TCF3 基因的靶向匹配关系,采用荧光素酶报告基因系统鉴定该关系。miR-138-5p 转染正常胃癌细胞和TCF3 高表达胃癌细胞后,Western blotting 检测TCF3、神经钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指转录因子（Slug）和上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达,Transwell 小室检测胃癌细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果：miR-138-5p 过表达抑制TCF3 mRNA的表达;生物信息学软件预测显示miR-138-5p 与TCF3 mRNA有靶向结合区域,miR-138-5p mimic 降低TCF3 野生型质粒的荧光素酶活性,不影响TCF3 突变型质粒的荧光素酶活性。miR-138-5p 抑制TCF3 蛋白表达,miR-138-5p 减弱TCF3 过表达对SGC-7901 细胞侵袭和迁移能力的促进作用,同时其下调N-cadherin、Vimentin 和Slug 蛋白表达、上调E-cadherin 蛋白表达。结论：miR-138-5p 抑制胃癌细胞SGC-7901 的侵袭和迁移,与直接靶向调控TCF3 的表达有关。     

lncRNA CDKN2B-AS1对黑色素瘤B16-F10细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨长链非编码RNA CDKN2B反义RNA1（long non-coding RNA CDKN2B-antisense RNA 1, lncRNA CDKN2B-AS1）通过靶向miR-7-5p影响黑色素瘤B16-F10细胞的恶性生物学行为的影响。方法：选用黑色素瘤B16-F10细胞,构建shRNA CD‐KN2B-AS1载体并转染到B16-F10细胞,实验分为对照组、sh-CDKN2B-AS1 组、miR-7-5p mimics 组、miR-7-5p inhibitor组。用RT-PCR检测转染后B16-F10细胞中CDKN2B-AS1表达水平,用克隆形成实验和MTT法检测克隆形成数及细胞的增殖能力,用划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。用荧光素酶报告基因实验检证CDKN2B-AS1和miR-7-5p相互间靶向关系。用RT-PCR和Western blotting检测转染miR-7-5p mimics、inhibitor后B16-F10细胞中miR-7-5p和Ki67、cleaved caspase-3、上皮钙黏蛋白（E-cadherin）、神经钙黏蛋白（N-cadherin）、Twist1蛋白的表达水平。结果：与对照组比较,sh-CDKN2B-AS1组 B16-F10细胞中CDKN2B-AS1表达水平显著下调（P<0.01）,细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著下降（均P<0.01）。荧光素酶报告基因实验证明 CDKN2B-AS1 与 miR-7-5p 存在靶向作用关系。sh-CDKN2B-AS1 组与 miR-7-5p mimics 组细胞中 miR-7-5p 和cleaved caspase-3、E-cadherin水平均明显上调（均P<0.05）,Ki67、N-cadherin、Twist1水平明显下调（均P<0.05）。结论：CDKN2BAS1通过靶向miR-7-5p促进黑色素瘤发展,干扰CDKN2B-AS1可抑制黑色素瘤B16-F10细胞的恶性生物学行为。     

LncRNA PVT1抑制miR-497-5p表达调控子宫内膜癌细胞增殖和迁移侵袭的分子机制研究

目的:研究长链非编码RNA PVT1和miR-497-5p在子宫内膜癌组织中的表达以及其对癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:运用实时荧光定量法测定子宫内膜癌组织、癌旁正常组织及子宫内膜癌细胞HEC-1-B中PVT1和miR-497-5p的表达。用脂质体法将siRNA-PVT1和miR-497-5p mimic转染至子宫内膜癌细胞HEC-1-B;MTT法、Transwell法检测HEC-1-B细胞的增殖、迁移和侵袭。Targetscan在线分析网站预测和双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA PVT1和miR-497-5p的靶向关系。将siRNA-PVT1和miR-497-5p inhibitor共转染至HEC-1-B细胞,MTT法、Transwell法检测HEC-1-B细胞的增殖、迁移和侵袭。结果:与癌旁正常组织相比,子宫内膜癌组织中PVT1表达显著上调,miR-497-5p表达显著下调（P<0.05）。沉默PVT1、过表达miR-497-5p均可抑制HEC-1-B细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.05）。PVT1靶向miR-497-5p。抑制miR-497-5p的表达可逆转沉默PVT1对HEC-1-B细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:沉默PVT1可抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与PVT1靶向miR-497-5p有关,将可为子宫内膜癌的靶向治疗提供新靶点。     

miR-138-5p靶向调控RAB22A表达抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-138-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移与侵袭的影响以及其作用机制。方法:U251细胞分为miR-NC组(对照组)、miR-mimics组、miR-inhibitor组以及miR-mimics+RAB22A-pcDNA3.1组。qRT-PCR检测miR-138-5p在胶质瘤细胞中的表达量;CCK8实验检测U251细胞的增殖能力;Transwell实验检测U251细胞的迁移和侵袭能力;Targetscan数据库预测miR-138-5p的下游靶基因;运用双荧光素酶报告基因实验验证细胞周期蛋白RAB22A是miR-138-5p的靶基因;RNA结合蛋白免疫沉淀实验进一步验证miR-138-5p与RAB22A之间的相互作用;运用蛋白免疫印迹实验检测组织和细胞中RAB22A的蛋白表达水平。结果:与正常人星形胶质细胞相比较,miR-138-5p 在胶质瘤细胞中表达量降低(P<0.05);CCK8和Transwell实验结果表明,在U251细胞中,过表达miR-138-5p能显著抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P＜0.05);运用Targetscan数据库预测miR-138-5p下游靶基因为RAB22A,miR-138-5p作用于RAB22A的3' UTR区域,双荧光素酶报告基因实验与蛋白免疫沉淀实验结果证实miR-138-5p与RAB22A之间的相互作用;RAB22A在胶质瘤细胞中明显高表达(P＜0.05),在U251细胞中过表达miR-138-5p明显抑制RAB22A的表达(P＜0.05)。结论:miR-138-5p在胶质瘤细胞中表达降低,miR-138-5p通过下调RAB22A表达而抑制细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-520b靶向DAD1调控肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制

目的:探讨miR-520b和抗细胞凋亡因子（DAD1）对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法:qRT-PCR和Western blot实验检测A498人肾癌细胞中miR-520b和DAD1表达。将miR-520b mimics或DAD1 siRNA转染至A498细胞，MTT和Transwell实验检测细胞活力、迁移和侵袭。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western blot实验验证miR-520b和DAD1的靶向关系。将miR-520b mimics和pcDNA-DAD1共转染至A498细胞，检测细胞活力、迁移和侵袭。结果:在A498细胞中，miR-520b表达下调而DAD1表达上调。在A498细胞中过表达miR-520b或敲减DAD1，细胞活力下降，迁移和侵袭细胞数减少。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western blot实验结果表明，miR-520b可负调控DAD1蛋白表达。过表达DAD1可逆转miR-520b对A498细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:miR-520b能够通过靶向调节DAD1表达抑制A498细胞增殖、迁移和侵袭。     

circ_0000989通过调控miR-183-5p/LRP6轴促进视网膜母细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探究环状RNA circ_0000989在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的表达情况,及其对RB细胞功能的影响和调控机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测RB组织和细胞中circ_0000989的表达水平。采用CCK-8和Transwell检测circ_0000989过表达质粒和miR-183-5p mimics对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。采用Western blot检测circ_0000989和miR-183-5p对LRP6表达水平的影响。采用双荧光素酶报告基因分析circ_0000989对miR-183-5p的调控。结果:RB组织和细胞中circ_0000989表达显著上调。circ_0000989可以显著促进RB细胞的增殖、迁移和侵袭;而miR-183-5p可减弱此作用。双荧光素酶报告基因和Western blot显示circ_0000989通过吸附miR-183-5p促进LRP6的表达。结论:circ_0000989通过调控miR-183-5p/LRP6轴促进RB细胞增殖、迁移和侵袭,为临床RB患者的诊断和治疗提供了潜在的分子靶点。     

miR-138-5p靶向调控SOX4对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

目的:研究微小RNA-138-5p(miR-138-5p)通过调控SOX4抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡的机制。方法:分别利用miR-NC与miR-138-5p体外模拟物(mimics)转染骨肉瘤细胞系MG63,构建阴性对照与miR-138-5p上调表达模型;采用CCK8法检测细胞增殖活力;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力和迁移能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡变化;通过双荧光素酶活检检测miR-138-5p与SOX4的相互作用关系;利用Real-time PCR(RT-PCR)法检测不同处理组中miR-138-5p与SOX4的mRNA水平表达变化;利用Western blot法检测不同处理组中SOX4及凋亡相关蛋白BAX与BCL2的表达变化。结果:利用miR-138-5p mimics转染MG63细胞后,细胞中miR-138-5p表达较对照组显著上调(t=8.661,P=0.001);miR-NC与miR-138-5p mimics分别转染细胞24 h、48 h以及72 h后,CCK8结果显示MG63细胞的增殖能力较对照组显著降低(24 h:t=4.145,P...     

circ_0001429 靶向miR-139-5p/TGIF1 分子轴调控膀胱癌T24 细胞恶行生物学行为

目的：探究circ_0001429 通过调控miR-139-5p/ 转录生长因子影响因子1（TGF-interacting factor 1,TGIF1）分子轴对膀胱癌T24 细胞恶性生物学行为的影响。方法：采用qPCR实验检测circ_0001429 在膀胱癌细胞系SW780、T24、5637 和人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1 中的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p、circ_0001429 与TGIF1 之间的靶向调控关系;将T24 细胞分为NC组、sh-circ_0001429 组、miR-139-5p mimics 组、sh-TGIF1 组、pcDNA-circ_0001429+sh-TGIF1 组、miR-139-5p mimics+pcDNA-TGIF1 组以及sh-circ_0001429+miR-139-5p inhibitor 组,Western blotting 检测各组细胞中TGIF1 的表达水平,CCK-8 法、Transwell 实验和流式细胞术分别检测circ_0001429、miR-139-5p 和TGIF1 对T24 细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。结果：circ_0001429 在3 珠膀胱癌细胞系中呈高表达（均P<0.01）,敲降circ_0001429 可以显著抑制T24 细胞增殖、侵袭、迁移并促进细胞凋亡（P<0.05 或P<0.01）;双荧光素酶报告基因验证结果显示,circ_0001429 与miR-139-5p、miR-139-5p 与TGIF1 存在靶向关系;过表达miR-139-5p 显著抑制T24 细胞增殖、侵袭、迁移并促进细胞凋亡（均P<0.01）。回复实验进一步证实circ_0001429 和TGIF1 竞争性结合miR-139-5p 促进T24 细胞增殖、侵袭、迁移且抑制细胞凋亡（均P<0.01）。结论：circ_0001429 与TGIF1 竞争结合miR-139-5p 促进膀胱癌细胞T24 的增殖、侵袭、迁移且抑制细胞凋亡。     

miR-379-5p靶向CTSL调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的分子机制

目的:探讨微小RNA-379-5p（miR-379-5p）通过靶向组织蛋白酶L(CTSL)调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的作用机制。方法:选择本院收治的肺癌患者57例,取患者肺癌组织与癌旁组织,应用qRT-PCR法检测miR-379-5p与CTSL mRNA的表达水平;免疫组化法检测CTSL蛋白的表达情况。miR-con（miR-con组）、miR-379-5p mimics（miR-379-5p组）分别转染肺癌NC-H446细胞,miR-379-5p mimics与pcDNA（miR-379-5p+pcDNA组）、miR-379-5p mimics与pcDNA-CTSL（miR-379-5p+pcDNA-CTSL组）分别共转染肺癌NC-H446细胞,MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell迁移与侵袭实验检测细胞迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-379-5p与CTSL之间的靶向关系。Western blot检测CTSL、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Cleaved caspase-3蛋白的表达。结果:肺癌组织中miR-379-5p的表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.05）,而CTSL mRNA及蛋白阳性率均显著高于癌旁组织（P＜0.05）;与miR-con组比较,miR-379-5p组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著增加（P＜0.05）,明显抑制Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达（P＜0.05）,而促进Cleaved caspase-3蛋白表达（P＜0.05）;双荧光素酶报告实验证明miR-379-5p可负向调控CTSL表达与活性;CTSL过表达可逆转miR-379-5p过表达对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的调控作用。结论:miR-379-5p过表达通过靶向CTSL而减弱肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,诱导细胞凋亡。     

LncRNA GATA3-AS1通过调控miR-362-3p/FABP5轴抑制宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探究长链非编码RNA GATA3反义RNA 1(lncRNA GATA3-AS1)调控微小RNA-362-3p(miR-362-3p)表达对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:qRT-PCR检测宫颈癌细胞中lncRNA GATA3-AS1、miR-362-3p、FABP5表达;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA GATA3-AS1和miR-362-3p的靶向关系、miR-362-3p和FABP5的靶向关系;将细胞分为pcDNA-NC组、pcDNA-GATA3-AS1组、si-NC组、si-GATA3-AS1组、si-GATA3-AS1+inhibitor-NC组、si-GATA3-AS1+miR-362-3p inhibitor组、miR-NC组、miR-362-3p mimics组、miR-362-3p mimics+pcDNA-NC组、miR-362-3p mimics+pcDNA FABP5组;Western blot检测蛋白表达;EdU法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移侵袭。结果:在宫颈癌细胞系中,GATA3-AS1、FABP5均为高表达,miR-362...     

miR-148a 靶向HMGB3抑制非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭和增强顺铂抗肿瘤效应的机制研究

目的:探讨miR-148a靶向HMGB3抑制非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭的作用机制。方法:采用RT-qPCR和Western blot检测非小细胞肺癌组织和癌旁组织标本中miR-148a和HMGB3相对表达水平;以A549、H1299细胞为研究对象,Transwell和MTT法分别检测过表达miR-148a、敲低HMGB3和DDP干预对细胞迁移、侵袭及细胞活力的影响;TargetScan在线预测、双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-148a与HMGB3的靶向关系;miR-148a过表达或敲减HMGB3并联合DDP,Transwell和MTT法检测细胞迁移、侵袭和细胞活力。结果:非小细胞癌组织中miRNA-148a表达明显下调（P<0.05）,HMGB3在mRNA和蛋白水平表达均明显上调（P<0.05）,miR-148a与HMGB3表达呈负相关（r=-0.856 8,P<0.000 1）;过表达miR-148a或敲低HMGB3能明显抑制细胞迁移和侵袭（P<0.05）,过表达miR-148a或敲低HMGB3联合DDP干预,细胞活力明显下降（P<0.05）;TargetScan在线预测、双荧光素酶报告基因实验和Western blot检测表明miR-148a能调控HMGB3表达。结论:miR-148a在非小细胞肺癌组织中表达下调,HMGB3是miR-148a的靶基因,过表达miR-148a能抑制HMGB3表达从而抑制非小细胞肺癌细胞A549、H1299迁移和侵袭并增强顺铂抗肿瘤效应。     

长基因间非编码RNA 1475调控微小RNA-423-5p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨长基因间非编码RNA 1475(LINC01475)对微小RNA-423-5p(miR-423-5p)的靶向调控作用及在胃癌细胞增殖、侵袭和迁移中的作用。方法 采用实时荧光定量PCR(q PCR)检测胃癌组织和细胞的LINC01475和miR-423-5p水平并进一步通过双荧光素酶报告基因实验鉴定两者的靶向关系。选择胃癌SGC-7901细胞并分为4组:对照组(未转染)、LINC01475过表达组(转染过表达载体pc DNA3.1-LINC01475+miR-NC)、miR-423-5p过表达组(转染miR-423-5p模拟物mimics+空载体pc DNA3.1)和共过表达组(转染pc DNA3.1-LINC01475+miR-423-5p mimics);采用q PCR、MTT法、划痕实验和Transwell小室实验评估转染效果、细胞活力及迁移侵袭能力的变化。结果 与癌旁组织相比,胃癌组织的LINC01475水平降低,而miR-423-5p水平升高,两者水平呈负相关(r=-0.686,P<0.05)。与人正常胃上皮GES-1细胞相比,胃癌细胞的LINC01475水平降...     

lncRNA RHPN1-AS1靶向miR-485-5p调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及其分子机制

目的:探讨lncRNA RHPN1反义RNA1（RHPN1-AS1）靶向miR-485-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响和机制。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测20例骨肉瘤组织与其对应的癌旁组织、人正常成骨细胞hFOB1.19以及3种骨肉瘤细胞（U-2OS、SAOS-2、HOS）中RHPN1-AS1和miR-485-5p的表达水平。利用脂质体转染法将RHPN1-AS1小干扰RNA（si-RHPN1-AS1）、小干扰RNA阴性对照（si-NC）、miR-485-5p模拟物（miR-485-5p mimics）、miRNA阴性对照（miR-NC）分别转染U-2OS细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印记（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、p27、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和基质金属蛋白酶14（MMP-14）蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证RHPN1-AS1和miR-485-5p的靶向调控关系。结果:与癌旁组织比较,骨肉瘤组织中RHPN1-AS1的表达水平显著升高,miR-485-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）;与hFOB1.19细胞比较,3种骨肉瘤细胞中RHPN1-AS1的表达水平显著升高,miR-485-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）。与si-NC组比较,si-RHPN1-AS1组U-2OS细胞的活力显著降低,迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9和MMP-14蛋白的表达水平显著降低,p21、p27和Bax蛋白的表达水平显著升高（P＜0.05）;与miR-NC组比较,miR-485-5p组U-2OS细胞的活力显著降低,迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平显著降低,p21和Bax蛋白的表达水平显著升高（P＜0.05）。RHPN1-AS1靶向负性调控miR-485-5p表达。干扰miR-485-5p表达逆转了抑制lncRNA RHPN1-AS1表达对骨肉瘤U-2OS细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论:抑制RHPN1-AS1通过上调miR-485-5p抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡。     

miR-509-5p通过靶向HMGA2调控非小细胞肺癌H1299细胞增殖、迁移和侵袭及其机制探讨

目的:探讨miR-509-5p通过靶向HMGA2对非小细胞肺癌H1299细胞增殖、迁移和侵袭的调控作用及其机制。方法:体外培养人正常肺细胞株CCD-19LU和肺腺癌细胞株A549、H1299,采用qRT-PCR检测miR-509-5p的表达;转染miR-509-5p mimics构建miR-509-5p过表达的H1299细胞后,采用MTT和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot检测TWIST1、β-catenin和AXIN1蛋白的表达。通过生物信息学分析预测HMGA2可能是miR-509-5p的靶点,并采用双荧光素酶报告基因系统和Western blot检测miR-509-5p和HMGA2的靶向关系。转染干扰质粒载体pLL2G-shHMGA2构建HMGA2沉默的H1299细胞,采用MTT实验、克隆形成实验和Transwell小室实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测TWIST1、β-catenin和AXIN1蛋白的表达。结果:与CCD-19LU细胞相比,A549和H1299细胞中miR-509-5p表达明显降低（P<0.05）,且在H1299细胞中低于在A549细胞中的表达（P<0.05）。与miR-NC组相比,miR-509-5p组细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱（P<0.05）,TWIST1和β-catenin蛋白的表达明显降低（P<0.05）,而AXIN1蛋白的表达明显升高（P<0.05）;野生型miR-509-5p组细胞的荧光素酶活性明显低于miR-NC组（P<0.05）,而野生型anti-miR-509-5p组细胞的荧光素酶活性明显明显高于anti-miR-NC组（P<0.05）;miR-509-5p过表达可抑制HMGA2表达,反之则促进其表达。沉默HMGA2表达后,H1299细胞的变化趋势与miR-509-5p过表达的结果相一致。结论:miR-509-5p可通过靶向HMGA2调控非小细胞肺癌H1299细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为

目的：探讨miR-192-5p靶向E盒锌指结合同源框2(ZEB2)对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响及其作用机制。方法：利用TCGA数据库数据分析miR-192-5p和ZEB2在胰腺癌组织中的表达及两者的相关性。采用qPCR法和WB法分别检测人正常胰腺上皮细胞HPNE和胰腺癌PANC-1细胞中miR-192-5p和ZEB2的表达水平。利用脂质体转染技术转染PANC-1细胞,实验分为miR-192-5p mimic组、Mimic NC组、miR-192-5p inhibitor组、Inhibitor NC组、Mimic NC+pcDNA3.1组、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1组、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1-ZEB2组。CCK-8法、克隆形成、划痕愈合、Transwell实验分别检测转染PANC-1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。qPCR法、WB法、双重免疫荧光实验检测PANC-1细胞中ZEB2、E-cadherin、vimentin的表达水平。通过生物信息学网站预测miR-192-5p的靶基因,并利用双...     

利多卡因通过调控lncRNA TTN-AS1/miR-524-5p表达对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究利多卡因对骨肉瘤细胞MG-63增殖、迁移和侵袭的影响,并探索其作用机制。方法:使用1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L浓度利多卡因处理MG-63细胞,MTT法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白表达,qRT-PCR检测长链非编码RNA TTN-AS1（TTN-AS1）和微小RNA-524-5p（miR-524-5p）表达,starBase软件结合双荧光素酶报告实验分析TTN-AS1与miR-524-5p的靶向关系。MG-63细胞中转染si-TTN-AS1、miR-524-5p或pcDNA-TTN-AS1（并进行10 mmol/L利多卡因处理）,观察细胞的增殖、迁移、侵袭。结果:不同浓度利多卡因明显提高细胞增殖抑制率和p21蛋白表达量（P＜0.05）,显著减少迁移细胞数、侵袭细胞数和CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量（P＜0.05）,均呈剂量依赖性。TTN-AS1可靶向调控miR-524-5p表达。抑制TTN-AS1表达与miR-524-5p过表达显著增加MG-63细胞的增殖抑制率和p21蛋白表达量（P＜0.05）,明显降低迁移细胞数、侵袭细胞数和CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量（P＜0.05）。TTN-AS1过表达逆转了利多卡因对MG-63细胞增殖、迁移、侵袭和CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用,以及对miR-524-5p、p21蛋白表达的促进作用。结论:利多卡因通过调控lncRNA TTN-AS1/miR-524-5p表达抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖、迁移和侵袭。     

lncRNA MAFG-AS1通过调控miR-11181-3p/GLG1轴促进胃癌AGS细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解

目的：探讨lncRNA MAFG-AS1/miR-11181-3p/GLG1分子轴对胃癌（gastric cancer,GC）细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解的影响及其可能的机制。方法：选取 MAFG-AS1 相对高表达的 GC 细胞系 AGS 作为研究对象,采用 qPCR 法检测其 MAFGAS1、miR-11181-3p、GLG1的RNA表达水平,Transwell实验、糖酵解分析等检测细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解的变化,利用生物信息学分析及双荧光素酶报告基因验证MAFG-AS1、miR-11181-3p、GLG1之间的相互作用关系。结果：敲减MAFG-AS1显著上调miR-11181-3p及下调GLG1的表达（均P<0.01）,并可显著抑制GC细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解（均P<0.01）;荧光素酶报告基因证实MAFG-AS1竞争性吸附miR-11181-3p（P<0.01）;抑制miR-11181-3p或过表达GLG1可部分逆转敲减MAFG-AS1对GC细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解的抑制作用（均P<0.05或P<0.01）。结论：MAFG-AS1通过miR-11181-3p/GLG1分子轴增强GC迁移、侵袭和有氧糖酵解,可能是GC诊疗的潜在分子靶点。