TPX2 shRNA对乳腺癌细胞生长、凋亡、侵袭、迁移能力的影响

目的:研究Xklp2靶蛋白（TPX2）shRNA对乳腺癌细胞生长、凋亡、侵袭、迁移能力的影响。方法:乳腺癌细胞MCF-7感染靶向TPX2基因shRNA慢病毒和阴性对照慢病毒,设置为TPX2 shRNA组、shRNA-NC组,把不做慢病毒感染的细胞设为对照组（Control组）。Real time PCR和Western blot测定沉默效果,MTT测定细胞增殖活性,克隆形成实验测定细胞克隆形成能力,流式细胞术测定细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot测定细胞中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、活化型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、活化型Caspase-9（Cleaved Caspase-9）蛋白水平。结果:TPX2 shRNA组TPX2 mRNA和蛋白水平均低于shRNA-NC组和Control组（P<0.05）。TPX2 shRNA组细胞增殖活性和细胞克隆形成能力降低,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力降低,细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平升高,与shRNA-NC组和Control组比,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:下调TPX2明显抑制乳腺癌细胞生长、侵袭和迁移能力,并诱导乳腺癌细胞凋亡。     

siRNA沉默Rac1表达促进增生期血管瘤内皮细胞内质网应激和抑制细胞增殖的作用与机制研究

目的:研究慢病毒介导Rac1沉默对增生期血管瘤内皮细胞内质网应激及Caspase-12活化水平的影响。方法:用Rac1 siRNA慢病毒载体和阴性对照慢病毒载体感染人增生期血管瘤内皮细胞,用Realtime PCR和Western blot检测细胞中Rac1表达变化。MTT法测定细胞增殖能力,PI单染法检测细胞周期变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡变化,Western blot检测细胞中周期蛋白p21、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）和凋亡蛋白活化的Caspase-3（C-Caspase-3）表达水平,同时检测细胞中内质网应激相关蛋白CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、活化的Caspase-12（C-Caspase-12）表达水平。结果:Rac1 siRNA慢病毒载体感染后的血管瘤内皮细胞中Rac1表达水平明显降低,阴性对照慢病毒对细胞中Rac1表达水平没有影响。沉默Rac1后的增生期血管瘤内皮细胞增殖能力下降,细胞G0/G1比例升高,p21蛋白水平升高,Cyclin D1蛋白水平下降,凋亡率升高,C-Caspase-3蛋白水平升高,CHOP、C-Caspase-12蛋白水平也升高,与没有感染慢病毒的细胞比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。阴性对照慢病毒感染对血管瘤内皮细胞增殖、凋亡、细胞周期及细胞中p21、Cyclin D1、C-Caspase-3、CHOP、C-Caspase-12蛋白水平没有影响。结论:慢病毒介导Rac1沉默诱导增生期血管瘤内皮细胞凋亡,阻滞细胞周期,诱导内质网应激发生,诱导Caspase-12活化。     

SALL4对白血病HL-60细胞放射敏感性影响研究

目的 探讨下调SALL4对白血病细胞放射敏感性影响,为提高白血病患者放射敏感性提供新思路。方法 人急性髓系白血病细胞株HL-60感染shRNA SALL4和shRNA control慢病毒记为Lv-shSALL4组和Lv-shNC组,用RT-PCR和蛋白印迹法检测细胞中SALL4水平,同时取感染后的细胞给予8Gy剂量照射处理记为Lv-shSALL4＋放射组、Lv-shNC＋放射组,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白水平。取Lv-shSALL4组和Lv-shNC组细胞,给予0、2、4、6、8Gy照射,细胞克隆形成实验测定放射增敏比。结果 Lv-shSALL4组细胞中SALL4水平低于Lv-shNC组(P<0.05)。细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白水平升高,与Lv-shNC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Lv-shSALL4＋放射组细胞增殖能力降低,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白水平升高(P<0.05)。Lv-shSALL4组细胞放射增敏比为1.323。结论 下调SALL4增加白血病细胞放射敏感性,抑制白血病细胞增殖并诱导凋亡。     

沉默半乳糖凝集素-3体外诱导卵巢癌细胞凋亡和内质网应激的实验研究

目的:研究沉默半乳糖凝集素-3(Galectin-3)对卵巢癌细胞凋亡和内质网应激的影响。方法:卵巢癌SKOV3细胞感染Galectin-3 siRNA 重组慢病毒,Real time PCR和Western blot检测沉默效果。MTT方法测定细胞增殖变化,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot检测细胞中c-caspase-3、CHOP、ATF4蛋白水平变化。结果:与感染阴性对照慢病毒和未感染的细胞比较,Galectin-3 siRNA 重组慢病毒感染后的SKOV3细胞中Galectin-3 mRNA和蛋白表达水平均降低。与感染阴性对照慢病毒和未感染的细胞比较,Galectin-3 siRNA 重组慢病毒可以明显下调SKOV3细胞的增殖、克隆形成能力,提高细胞凋亡率,促进细胞中c-caspase-3、CHOP、ATF4蛋白水平。结论:沉默Galectin-3抑制卵巢癌细胞生长,诱导卵巢癌细胞凋亡,促进细胞内质网应激。     

shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性的实验研究

目的:研究shRNA靶向沉默E盒结合锌指蛋白2（zinc finger E-box binding homeobox,ZEB2）表达对肺癌细胞增殖活性的影响。方法:用shRNA-ZEB2慢病毒和shRNA阴性对照慢病毒感染肺癌细胞,Real time PCR和Western blot检测沉默效果。MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、β-连环蛋白（β-catenin）、C-myc蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理沉默ZEB2的肺癌细胞,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白水平。结果:shRNA-ZEB2慢病毒可以明显沉默肺癌细胞中ZEB2的表达和转录,shRNA阴性对照慢病毒对肺癌细胞中ZEB2的表达没有影响。沉默ZEB2后的肺癌细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中激活型Caspase-3蛋白水平升高,β-catenin、C-myc蛋白水平降低。Wnt/β-catenin信号通路抑制剂下调沉默ZEB2的肺癌细胞株中Wnt/β-catenin信号通路的激活水平,同时可以降低细胞存活率,诱导细胞凋亡,促进细胞中激活型Caspase-3的表达。结论:shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性。     

敲低EN2诱导肝癌细胞凋亡并提高PTEN蛋白的表达

 目的 探讨EN2对肝癌细胞凋亡及细胞中PTEN蛋白表达的影响。方法 用EN2 siRNA慢病毒感染肝癌细胞HuH-7，qRT-PCR和Western blot方法检测干扰效果。MTT方法测定细胞活力变化，PI单染法测定细胞周期分布，Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡变化，Western blot测定细胞中激活型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、激活型Caspase-9（Cleaved Caspase-9）、第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白（PTEN）及细胞周期素B 1( Cyclin B l)蛋白水平，JC-1法测定线粒体膜电位变化，Western blot测定胞浆中细胞色素C（Cytochrome C）蛋白水平。结果 EN2 siRNA慢病毒感染可明显下调肝癌细胞中EN2的表达。沉默EN2表达后的肝癌细胞活力降低，细胞凋亡率升高，细胞G2/M期比例升高，细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、PTEN蛋白水平明显升高，Cyclin B1蛋白水平明显降低，线粒体膜电位下降，胞质中Cytochrome C蛋白水平升高。结论 敲低EN2可以阻滞肝癌细胞周期，诱导肝癌细胞凋亡，其作用机制可能与PTEN、线粒体凋亡途径有关。     

GOLPH3对食管癌细胞系增殖凋亡及放射敏感性影响研究

目的 研究GOLPH3对食管癌细胞系增殖凋亡及放射敏感性的影响。方法 以qRT-PCR和蛋白印迹法分别检测食管癌细胞系和正常食管上皮细胞GOLPH3 mRNA和蛋白水平,在OE33细胞中转染GOLPH3 siRNA,同时给予照射处理。MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞克隆实验检测放射敏感性,蛋白印迹法检测活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的Caspase-9(Cleaved Caspase-9)蛋白水平。结果 食管癌细胞中GOLPH3 mRNA和蛋白水平明显高于正常食管上皮细胞(P<0.05)。GOLPH3 siRNA可明显下调食管癌OE33细胞中GOLPH3 mRNA和蛋白水平。下调GOLPH3或者照射处理以后的食管癌细胞的增殖活性降低,细胞凋亡率升高,并且细胞中Cleaved Caspase-3、Bax、Cleaved Caspase-9蛋白水平也升高(P<0.05)。下调GOLPH3后的OE33细胞经照射处理以后,细胞增殖活性下降更多,细胞凋亡率和细胞中Cleaved Caspase-3、Bax、Cleaved Caspase-9蛋白水平升高更多(P<0.05)。下调GOLPH3后OE33细胞经照射处理后,细胞放射增敏比为1.673。结论 GOLPH3在食管癌细胞中高表达,下调其表达可以增加OE33细胞放射敏感性,诱导细胞凋亡并抑制其增殖。     

PDCD4促进吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的:研究程序性细胞死亡因子4（programmed cell death 4,PDCD4）在吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡中的作用。方法:用吉西他滨处理胰腺癌细胞PANC-1,荧光定量PCR和Western blot分别检测胰腺癌细胞中PDCD4的表达变化。PANC-1细胞感染PDCD4-pGC-Fu-GFP重组慢病毒和对照pGC-Fu-GFP重组慢病毒,荧光定量PCR和Western blot检测过表达效果。用吉西他滨处理过表达PDCD4的PANC-1细胞,MTT测定细胞增殖,克隆形成实验测定细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot检测细胞中剪切的Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、剪切的Caspase-9（Cleaved Caspase-9）蛋白水平和胞浆、线粒体中细胞色素C（Cytochrome C）蛋白水平。结果:吉西他滨处理后的PANC-1细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平均明显升高。吉西他滨处理和过表达PDCD4的PANC-1细胞增殖、克隆形成能力明显降低,细胞凋亡率明显升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平升高,胞浆中Cytochrome C蛋白水平也升高,线粒体中Cytochrome C蛋白水平降低。吉西他滨处理过表达PDCD4的PANC-1细胞增殖能力、克隆形成能力降低更多,细胞凋亡率更高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平也更高,胞浆中Cytochrome C蛋白水平更高,线粒体中Cytochrome C蛋白水平更低。结论:吉西他滨通过上调PDCD4表达水平激活线粒体途径诱导胰腺癌细胞凋亡。     

下调Akt1表达对胆管癌HUCCA-1细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察Akt1干扰后胆管癌HUCCA-1细胞增殖、细胞周期及凋亡变化,及其与下游蛋白的相关性.方法:构建干扰质粒siAkt1转染胆管癌HUCCA-1细胞,Western印迹法及qRT-PCR法检测转染效率及Akt1下调后凋亡相关基因表达.MTT法检测细胞增殖,PI法检测细胞周期,流式细胞术检测细胞凋亡.结果:MTT显示,与MOCK组和siRNA control组对比,siAkt1转染后HUCCA-1细胞增殖能力减弱,在72h及96h差异均具有显著性(P＜0.05);转染siAkt1细胞停留在G1期比例增高,G2及S期比例减少(P＜0.05);转染后早期凋亡及晚期凋亡率均升高(P ＜0.05;P ＜0.01).在siAkt1转染后,凋亡相关基因p85mRNA及p-Akt1(磷酸化的Akt1)mRNA表达水平降低(P＜0.05),Cleaved Caspase-9 mRNA及Cleaved Caspase-8mRNA表达升高(P＜0.05).凋亡相关基因p85及p-Akt1蛋白表达降低(P＜0.05),Cleaved Caspase-9及Cleaved Caspase-8蛋白表达水平升高(p＜0.05).结论:对胆管癌HUCCA-1细胞中Akt1表达进行下调导致细胞增殖能力下降,促进细胞进入G1期,凋亡率升高,机制与其下游Cleaved Caspase基因表达具有相关性.     

抑制survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞顺铂药物敏感性的影响

目的：探讨应用RNAi技术下调survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡及顺铂敏感性的影响。方法：构建survivin基因shRNA真核表达载体,转染人卵巢癌SKOV3细胞。定量PCR和Western blotting观察SKOV3细胞survivinmRNA和蛋白表达的改变;噻唑蓝（Myr）检测细胞增殖活性和药物敏感性;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：SKOV3-siRNA组细胞survivinmRNA及蛋白表达下降,同时细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡率显著增加（P〈0．05）。SKOV3-siRNA组细胞对顺铂的化学敏感性升高,顺铂的IC50值降低（P〈0．05）。结论：下调survivin基因表达能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖能力,诱导细胞凋亡,增强细胞顺铂药物敏感性。因此,survivin基因可能成为抗肿瘤治疗的潜在靶点。     

牛蒡子苷元对卵巢癌细胞耐药性的影响

目的:探讨牛蒡子苷元对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP细胞耐药性的影响及其可能的作用机制。方法:构建卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP。用不同浓度的牛蒡子苷元(1、5、10、15、20、25 mmol/L)分别处理SKOV3和SKOV3/DDP细胞,CCK-8法检测细胞生长,筛选适用浓度。随后用10 mmol/L牛蒡子苷元处理SKOV3/DDP细胞。流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-3/9和Cleaved Caspase-3/9蛋白表达。CCK-8法检测细胞半数抑制浓度(50%inhibition concentration, IC₅₀)。RT-PCR和Western blot分别检测Survivin的mRNA和蛋白表达。在牛蒡子苷元处理的SKOV3/DDP细胞中转染Survivin过表达质粒检测IC₅₀和细胞凋亡水平。结果:不同浓度牛蒡子苷元对SKOV3和SKOV3/DDP细胞生长均有抑制作用,并且当牛蒡子苷元的浓度≥10 mmol/L时,对SKOV3/DDP细胞生长抑制作用高于SKOV3细胞(P&...     

miR-144-3p靶向zeb1调控卵巢癌细胞SKOV3的增殖和凋亡

目的:探讨miR-144-3p是否通过靶向E盒锌指结合蛋白1（zeb1）调控卵巢癌细胞SKOV3的增殖和凋亡。方法:qRT-PCR检测miR-144-3p在卵巢癌细胞和正常人卵巢上皮细胞中的表达差异。在卵巢癌细胞SKOV3中转染miR-144-3p mimics,MTT法测定细胞增殖,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中cyclinD1、p27、C-caspase-3蛋白表达。生物信息学软件预测miR-144-3p的靶基因可能为zeb1,荧光素酶报告系统鉴定其靶向关系。在卵巢癌细胞SKOV3中共转染miR-144-3p mimics、pcDNA3.1-zeb1,利用上述方法测定细胞增殖、周期和凋亡变化。结果:miR-144-3p在卵巢癌细胞中的表达水平低于正常人卵巢上皮细胞。转染miR-144-3p mimics后的卵巢癌细胞SKOV3增殖能力下降,细胞周期被阻滞在G1期,细胞凋亡增多,细胞中cyclinD1蛋白表达减少,p27、C-caspase-3蛋白表达增加。miR-144-3p靶向调控zeb1表达。pcDNA3.1-zeb1可以逆转miR-144-3p mimics对卵巢癌细胞增殖抑制、周期阻滞和凋亡促进作用。结论:miR-144-3p靶向zeb1抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖并诱导细胞凋亡。     

CDX1对结直肠癌细胞增殖凋亡及p38MAPK磷酸化水平的影响

目的:探讨尾侧同源盒转录因子1（CDX1）对结直肠癌细胞增殖凋亡及p38MAPK磷酸化水平的影响。方法:用荧光定量PCR和Western blot检测正常肠上皮细胞FHC和结直肠癌细胞SW480、HCT116、Caco2中CDX1 mRNA和蛋白表达水平。在SW480细胞中转染pIRES-CDX1和pIRES记为CDX1组和载体组,以不做转染的细胞为对照组,荧光定量PCR和Western blot测定CDX1 mRNA和蛋白表达水平,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot测定细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3（p-STAT3）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、磷酸化的p38MAPK（p-p38MAPK）蛋白水平。结果:结直肠癌细胞SW480、HCT116、Caco2中CDX1 mRNA和蛋白表达水平均明显低于正常肠上皮细胞FHC（P<0.05）,SW480细胞中CDX1 mRNA和蛋白表达水平明显低于HCT116、Caco2（P<0.05）。CDX1组细胞中CDX1 mRNA和蛋白水平明显高于对照组（P<0.05）,载体组细胞中CDX1 mRNA和蛋白水平与对照组相比没有统计学差异（P>0.05）。CDX1组细胞存活率明显降低,细胞凋亡率明显升高,细胞中Cleaved Caspase-3、p-p38MAPK水平升高,细胞中Bcl-2、p-STAT3水平降低,与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。载体组细胞存活率、凋亡率及细胞中Cleaved Caspase-3、Bcl-2、STAT3、p-STAT3、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白水平与对照组相比没有明显变化（P>0.05）。结论:CDX1抑制结直肠癌细胞增殖,诱导Caspase-3介导的细胞凋亡,促进细胞中p38MAPK磷酸化,抑制细胞中STAT3磷酸化。