蒿甲醚对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用研究

目的:研究蒿甲醚对胃癌细胞（AGS和SGC-7901）的增殖、侵袭以及迁移的影响并探讨其分子机制。方法:分别利用MTT、集落形成试验检测胃癌细胞的活力和生长;流式细胞技术检测胃癌细胞的凋亡率;利用细胞侵袭和划痕愈合试验检测胃癌细胞的侵袭和迁移;Western blot检测相关蛋白的表达水平。结果:蒿甲醚（0~800 μmol/L）能够浓度和时间依赖性的抑制 AGS和SGC-7901细胞的增殖（P＜0.05）。集落形成试验以及流式细胞术结果显示蒿甲醚（400 和 600 μmol/L）能够抑制AGS和SGC-7901细胞的生长以及促进细胞凋亡（P＜0.05）。细胞侵袭和划痕愈合试验发现蒿甲醚（400 和 600 μmol/L）能够抑制AGS和SGC-7901细胞的侵袭和迁移（P＜0.05）。Western blot结果显示蒿甲醚(400 和 600 μmol/L)能够增加AGS和SGC-7901细胞的cleaved caspase-3,cleaved caspase-9以及Bax的蛋白水平（P＜0.05）;同时能够抑制N-cadherin 和vimentin的蛋白表达并促进E-cadherin蛋白的表达。结论:蒿甲醚可以显著抑制胃癌细胞的增殖、侵袭以及迁移,其机制可能是与促进细胞凋亡以及抑制上皮间质转化有关。     

脂肪抑制素对宫颈癌细胞增殖、克隆形成、侵袭、迁移的抑制作用及相关机制研究

目的:探究脂肪抑制素对宫颈癌细胞增殖、克隆形成能力、侵袭及迁移能力以及细胞周期、细胞凋亡的影响。方法:选取宫颈癌细胞系SiHa,利用不同浓度脂肪抑制素进行培养。通过MTT实验、平板克隆形成实验、Transwell实验及流式细胞术检测实验分别检测脂肪抑制素对宫颈癌细胞增殖、克隆形成能力、侵袭/迁移能力以及细胞周期/细胞凋亡的影响,探究脂肪抑制素对宫颈癌细胞的抗肿瘤作用。结果:MTT实验显示,脂肪抑制素对SiHa细胞的增殖/生长具有明显抑制作用,存在时间和剂量依赖性(P＜0.05);根据细胞增殖率得出72 h时SiHa细胞的IC50为16.98 μmol/L。平板克隆形成实验显示,脂肪抑制素明显降低了SiHa细胞的克隆形成能力,具有剂量依赖性（P＜0.01）。Transwell实验显示,脂肪抑制素也明显降低SiHa细胞侵袭/迁移能力,具有剂量依赖性（P＜0.001）。流式细胞术检测实验显示,较高浓度脂肪抑制素可诱导宫颈癌细胞SiHa的细胞周期停滞在G2/M期,促进其细胞凋亡（P＜0.05）。结论:脂肪抑制素对宫颈癌细胞具有明显抗肿瘤作用,可作为宫颈癌治疗的新药物。     

吡格列酮对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖、凋亡的影响及分子机制研究

目的 探讨吡格列酮对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法 体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1,分别以吡格列酮（0 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、50 μmol/L）和吉西他滨（50 μmol/L）作用0 h、12 h、24 h、48 h、72 h后,采用CCK-8检测各时间点的细胞增殖情况,流式细胞仪检测72 h细胞周期及凋亡情况,4,6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）染色检测48 h细胞凋亡形态学变化,Western blot检测48 h细胞凋亡相关蛋白及MAPK/ERK信号通路相关蛋白的表达。结果 与0 μmol/L吡格列酮相比,吉西他滨及各剂量吡格列酮组细胞作用24 h、48 h、72 h的OD值均降低（P＜0.05）;48 h 的G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、Bax及caspase-3、p-ERK蛋白表达均升高（P＜0.05）,而S期细胞比例、Bcl-2蛋白表达降低（P＜0.05）,且细胞逐渐收缩,细胞核逐渐碎裂。与50 μmol/L吉西他滨组相比,10 μmol/L吡格列酮组细胞作用24 h、48 h、72 h的OD值均升高（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均降低（P＜0.05）;10 μmol/L吡格列酮组细胞作用48 h 的G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、Bax及caspase-3、p-ERK蛋白表达均降低（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均升高（P＜0.05）;10 μmol/L吡格列酮组细胞48 h 的S期细胞比例、Bcl-2蛋白表达均升高（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均降低（P＜0.05）。结论 吡格列酮能抑制人胰腺癌细胞株PANC-1增殖,诱导其凋亡,可能通过上调MAPK/ERK通路实现。     

紫甘蓝提取物对X线照射后舌癌细胞双向作用的实验研究

目的:探讨紫甘蓝提取物（purple cabbage extract,PCE）对X线照射后舌癌细胞的双向作用。方法:将对数生长期的人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞及人正常口腔黏膜HOK细胞分为Tca8113细胞对照组（Tca CON）、Tca8113细胞10 μmol/L PCE组（Tca PCE-10 μmol/L）、Tca8113细胞50 μmol/L PCE组（Tca PCE-50 μmol/L）、Tca8113细胞照射组（Tca IR）、Tca8113细胞照射加10 μmol/L PCE组（Tca IR+PCE-10 μmol/L）、Tca8113细胞照射加50 μmol/L PCE组（Tca IR+PCE-50 μmol/L）及HOK细胞对照组（HOK CON）、HOK细胞10 μmol/L PCE组（HOK PCE-10 μmol/L）、HOK细胞50 μmol/L PCE组（HOK PCE-50 μmol/L）、HOK细胞照射组（HOK IR）、HOK细胞照射加10 μmol/L PCE组（HOK IR+PCE-10 μmol/L）、HOK细胞照射加50 μmol/L PCE组（HOK IR+PCE-50 μmol/L）。MTT实验检测加入不同浓度PCE对舌癌细胞Tca8113及正常口腔黏膜HOK细胞增殖的影响;流式细胞术检测6 MeV X 线直线加速器照射后（6 Gy）PCE对Tca8113及HOK细胞凋亡的影响;qRT-PCR实验检测在加入不同浓度PCE作用下对照射后Caspase 3及Caspase 9表达的影响。结果:MTT结果显示,PCE可明显抑制Tca8113细胞的增殖,其增殖抑制率随药物浓度的增加而升高,PCE对正常口腔黏膜HOK细胞增殖无明显的抑制率。流式细胞术结果显示,对于Tca8113细胞,PCE显著提高了照射后Tca8113细胞凋亡率（P＜0.05）;但对于HOK细胞,PCE显著降低了照射后HOK细胞凋亡率（P＜0.05）。qRT-PCR结果显示,对于Tca8113细胞,照射给药组（加10 μmol/L PCE组、加50 μmol/L PCE组）Caspase 3及Caspase 9的表达较单纯照射组明显上调（P＜0.05）;对于HOK细胞,照射给药组（加10 μmol/L PCE组、加50 μmol/L PCE组）Caspase 3及Caspase 9的表达较单纯照射组明显下调（P＜0.05）。结论:PCE通过调节凋亡通路对舌癌Tca8113细胞起到放射增敏的作用,对正常口腔黏膜细胞起到放射防护作用,即PCE对X线照射后舌癌细胞起到双向作用。     

高良姜素通过激活cGAS/STING信号通路抑制骨肉瘤MG63细胞的恶性生物学行为

目的：探讨高良姜素（Gal）是否通过调节cGAS/STING信号通路影响骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡。方 法：体外培养人骨肉瘤MG63细胞,分别使用0、5、15、25、50、100、200 μmol/L的Gal培养48 h后,CCK-8法检测Gal对细胞活力的 影响。将MG63细胞分为对照组（未处理细胞）、Gal低浓度组（Gal-L组,50 μmol/L Gal处理）、Gal高浓度组（Gal-H组,100 μmol/L Gal处理）和Gal-H+STING抑制剂组（Gal-H+H-151组,100 μmol/L Gal+8 μmol/L H-151处理）。采用EdU染色法、划痕愈合实验、 Transwell小室法、流式细胞术检测各组细胞增殖活力、迁移、侵袭和凋亡能力,WB法检测各组细胞中cGAS、STING蛋白的表达 水平。结果：与对照组比较,Gal-L 组、Gal-H 组细胞增殖活力、迁移、侵袭能力均显著降低（均 P<0.05）,细胞凋亡率和 cGAS、 STING蛋白表达水平均显著升高（均P<0.05）;与 Gal-H 组比较,Gal-H+H-151组细胞增殖活力、迁移和侵袭能力均显著升高（均 P<0.05）,细胞凋亡率和cGAS、STING蛋白表达水平均显著降低（均P<0.05）。结论：Gal可能通过激活cGAS/STING信号通路抑 制骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。     

COX-2抑制剂Mavacoxib对骨肉瘤干细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响

目的 探讨COX-2抑制剂Mavacoxib对骨肉瘤干细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响。方法 体外培养人骨肉瘤MG-63细胞以获取骨肉瘤干细胞,经Mavacoxib（0、1、10、50、100 μmol/L）处理后采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测增殖抑制率的变化,同时采用流式细胞术Annexin-FITC/PI双染法及PI单染法检测不同浓度Mavacoxib处理24、48 h的凋亡情况（早、晚期凋亡率）及48 h的细胞周期情况,Western blotting检测不同浓度Mavacoxib 处理48 h的骨肉瘤干细胞中PI3K/Akt及Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果 在10～100 μmol/L范围内,Mavacoxib可呈剂量和时间依赖的方式升高骨肉瘤干细胞的增殖抑制率,差异均有统计学意义（P＜0.05）;与0 μmol/L相比,除1 μmol/L 24 h的晚期凋亡率无统计学差异,10～100 μmol/L的早晚期凋亡率、G0/G1期细胞比例均升高,S期、G2/M期细胞比例均降低（P＜0.05）。Mavacoxib处理后的PI3K/Akt通路中的PTEN水平升高,Akt水平降低;Wnt/β-catenin通路中β-catenin、C-myc和Cyclin D1水平均降低（P＜0.05）。结论 Mavacoxib 对骨肉瘤干细胞有毒性作用,且可诱导其凋亡及细胞周期阻滞并抑制PI3K/Akt和Wnt/β-catenin信号通路的激活。     

蒲公英萜醇调控ABHD11-AS1介导上皮间质转化对膀胱癌细胞侵袭转移的作用

摘 要：［目的］ 探究蒲公英萜醇通过调控α/β水解酶域11反义RNA1（ABHD11-AS1）对膀胱癌细胞侵袭转移的作用,并分析相关机制。［方法］ 将对数生长期的人膀胱癌细胞系EJ细胞分为空白对照组（细胞不做特殊处理）、蒲公英萜醇组（给予蒲公英萜醇100 μmol/L处理24 h）、蒲公英萜醇-pcDNA组（转染pcDNA 24 h给予细胞蒲公英萜醇100 μmol/L处理24 h）、蒲公英萜醇-pcDNA-ABHD11-AS1组（转染pcDNA-ABHD11-AS1 24 h后细胞给予蒲公英萜醇100 μmol/L药物处理24 h）。实时荧光定量PCR法检测细胞ABHD11-AS1水平;细胞增殖-毒性8检测试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖;划痕实验、Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力;蛋白免疫印迹法检测上皮间质转化标志蛋白E-钙黏附蛋白（E-cadherin）、N-钙黏附蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达变化。［结果］ 与空白对照组比较,蒲公英萜醇组EJ细胞ABHD11-AS1水平、侵袭细胞数、细胞迁移率、N-Cadherin、Vimentin蛋白水平均降低（P＜0.05）,EJ细胞增殖抑制率、E-cadherin蛋白水平升高（P＜0.05）。与蒲公英萜醇组、蒲公英萜醇-pcDNA组比较,蒲公英萜醇-pcDNA-ABHD11-AS1组EJ细胞ABHD11-AS1水平、侵袭细胞数、细胞迁移率、N-Cadherin、Vimentin蛋白水平均升高（P＜0.05）,EJ细胞增殖抑制率、E-cadherin蛋白水平降低（P＜0.05）。［结论］ 蒲公英萜醇能够抑制膀胱癌细胞侵袭及迁移,可能是通过抑制ABHD11-AS1介导的上皮间质转化发生实现的。     

光甘草定对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制

目的:探讨光甘草定对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法:以0、1、2.5、5、10和20 μmol/L光甘草定作用于体外培养的Hela细胞24 h后,采用细胞计数（CCK-8)法检测细胞存活率并计算出光甘草定的半抑制浓度。将体外培养的Hela细胞分别以0、2.5和5 μmol/L光甘草定处理后,采用Transwell小室检测细胞侵袭变化,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期变化,免疫印迹法检测细胞中Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和生存素（Survivin）的表达情况。结果:与对照（0 μmol/L）组相比,1、2.5、5、10和20 μmol/L 光甘草定处理组细胞存活率均明显降低（P<0.05）,且呈浓度依赖性;同时,光甘草定对Hela细胞的半抑制浓度为4.56 μmol/L。与对照（0 μmol/L）组相比,2.5和5 μmol/L光甘草定处理组中侵袭细胞数和细胞在S期与G2/M期的百分比以及细胞中Wnt1、β-catenin、CyclinD1、MMP-2、Survivin蛋白的表达水平均明显减少,而细胞凋亡率和细胞在G0/G1期百分比明显升高（P<0.05）,且5 μmol/L光甘草定处理组细胞的变化更为显著。结论:光甘草定可抑制Hela细胞增殖、侵袭并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化有关。     

去甲斑蝥素对白血病细胞系K562的增殖、凋亡、细胞周期及NF-κB活性的影响

目的 探讨去甲斑蝥素（NCTD）对白血病细胞系K562的增殖、凋亡、细胞周期及核因子（NF）-κB活性的影响。方法 采用CCK-8试剂盒检测不同浓度NCTD（0、10、25、50、100 μmol／L）处理K562细胞24、48、72、96 h后的增殖抑制率,采用流式细胞术检测不同浓度NCTD处理24、48 h后的细胞凋亡率和处理48 h后的细胞周期,采用原位细胞凋亡检测试剂盒（Tunnel）检测不同浓度NCTD处理24、48 h后的细胞凋亡指数,采用Western blotting检测不同浓度NCTD处理48 h后的NF-κB p65及IκB α水平以评价NF-κB活性的变化。结果 在10～100 μmol／L范围内,NCTD可呈时间和浓度依赖的方式升高K562细胞的增殖抑制率,各浓度间的差异有统计学意义（P＜0.05）;与0 μmol／L相比,其余各浓度处理24、48 h后的凋亡率和凋亡指数均升高,处理48 h后的G0／G1期细胞比例升高,S、G2／M期细胞比例均降低,NF-κB p65水平降低,IκB-α水平升高,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 NCTD对白血病细胞系K562有细胞毒性,可抑制该细胞的增殖、诱导其凋亡及细胞周期阻滞并下调NF-κB表达。     

辛伐他汀通过调控Chk1基因的表达对宫颈癌细胞增殖、凋亡以及放疗敏感性的影响

目的:探讨辛伐他汀（simvastatin,SVA）通过调控细胞周期检测点激酶1（checkpoint kinase 1,Chk1）基因表达对宫颈癌细胞增殖、凋亡及放疗敏感性的影响。方法:体外培养宫颈癌Hela细胞,采用不同浓度（3.25 μmol/L、6.25 μmol/L、12.5 μmol/L、25 μmol/L、50 μmol/L)SVA处理细胞,以0 μmol/L SVA为空白组（Con组）。采用MTT法检测SVA对细胞的增殖抑制率,筛选SVA最适浓度（SVA组）用于后续研究。流式细胞术检测各组细胞凋亡率。采用2、4、6、8 Gy剂量X射线照射细胞。将Chk1阴性对照质粒、Chk1 siRNA分别转染至Hela细胞,分别命名为si-NC、si-Chk1组;重组pcDNA 3.1/Chk1基因过表达质粒及空载体对照质粒分转染至SVA组细胞中,分别命名为SVA+pcDNA-Chk1组、SVA+pcDNA组。采用qRT-PCR与Western blot法检测各组细胞中Chk1 mRNA及蛋白表达水平;MTT法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;克隆形成实验检测细胞放疗敏感性。结果:随着SVA浓度的增加Hela细胞增殖抑制率明显升高且呈剂量依赖性,SVA浓度为12.5 μmol/L时Hela细胞增殖抑制率约为50%,以此用作后续实验研究。SVA组Hela细胞凋亡率显著高于Con组,且不同剂量X射线照射后Hela细胞存活分数明显降低（P＜0.05）;SVA处理Hela细胞后可显著降低Chk1 mRNA及蛋白表达水平（P＜0.05）;si-Chk1组Hela细胞中Chk1蛋白表达水平及细胞存活分数均显著低于si-NC组（P＜0.05）,细胞增殖抑制率及凋亡率均显著升高（P＜0.05）;SVA+pcDNA-Chk1组Hela细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均显著低于SVA+pcDNA组（P＜0.05）,细胞存活分数显著升高（P＜0.05）。结论:SVA可通过下调Chk1基因表达进而抑制宫颈癌细胞增殖并促使细胞凋亡,同时能够增强宫颈癌细胞放疗敏感性。     

索拉菲尼抑制肿瘤细胞PKM2蛋白表达

目的:探讨索拉菲尼对肿瘤细胞中PKM2蛋白表达的影响。方法:以人肝癌细胞HepG2、人胆管癌细胞QBC939、人肺癌细胞NCI-H446、人宫颈癌细胞Hela为研究对象,体外培养上述肿瘤细胞;光镜下观察不同肿瘤细胞经不同浓度索拉菲尼处理后细胞形态学改变;CCK-8法检测索拉菲尼对上述肿瘤细胞增殖的影响。用Western blot 检测索拉菲尼对上述细胞的PKM2表达变化。结果:光镜下观察可见随着索拉菲尼浓度的增加,肿瘤细胞离巢、凋亡,并且随着浓度的增加而增加。细胞增殖实验可见,索拉菲尼显著抑制HepG2、QBC939、NCI-H446、Hela细胞的增殖,不同浓度（2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、20.0 μmol/L）的索拉菲尼处理上述细胞48 h后,各药物处理组与对照组比较（P均<0.01）,呈剂量效应关系;索拉菲尼处理上述肿瘤细胞48 h的IC50分别为10.61 μmol/L、13.88 μmol/L、15.66 μmol/L、12.86 μmol/L。Western blot检测结果显示,不同浓度的索拉非尼显著抑制HepG2、QBC939、NCI-H446、Hela细胞的PKM2的蛋白表达,并且表达与浓度呈剂量关系。蛋白表达半定量分析可见,各肿瘤细胞经过索拉菲尼处理后与对照组比较,蛋白表达差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:索拉菲尼能抑制人多种肿瘤细胞增殖并显著抑制PKM2蛋白表达。     

阿帕替尼调控WWOX对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨阿帕替尼（Apatinib）是否通过包含氧化还原酶的WW结构域（WWOX）影响子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭。方法:噻唑蓝（MTT）比色法检测4 μmol/L、8 μmol/L、16 μmol/L、32 μmol/L Apatinib作用于子宫内膜癌细胞HEC-1 24 h、48 h、72 h后的细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、WWOX蛋白水平,Transwell小室法检测迁移细胞数、侵袭细胞数。在HEC-1中转染pcDNA3.1-WWOX,或转染si-WWOX并用16 μmol/L Apatinib进行处理,采用上述方法评估细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况。结果:Apatinib明显降低HEC-1细胞活性（P＜0.05）,呈剂量、时间依赖性;Apatinib显著增加HEC-1细胞凋亡率及p21、Bax蛋白表达量（P＜0.05）,呈剂量依赖性;Apatinib明显降低Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量（P＜0.05）,呈剂量依赖性;16 μmol/L Apatinib显著减少HEC-1细胞的迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白表达量（P＜0.05）,明显提高E-cadherin、WWOX蛋白表达量（P＜0.05）。过表达WWOX明显降低HEC-1细胞中Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量、细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数（P＜0.05）,提高p21、Bax、E-cadherin、WWOX蛋白表达量及细胞凋亡率（P＜0.05）。抑制WWOX表达逆转了Apatinib对HEC-1细胞中Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量、细胞活性、迁移、侵袭的抑制作用,以及逆转了其对p21、Bax、E-cadherin、WWOX蛋白表达量、细胞凋亡的促进作用。结论:阿帕替尼通过调控WWOX表达,抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导细胞凋亡。     

YKL-40调控子宫内膜癌顺铂化疗耐药性的实验研究

目的 探讨沉默甲壳质酶蛋白 40（YKL-40）表达对子宫内膜癌顺铂（DDP）耐药细胞株Ishikawa／DDP的影响。方法 采用DDP长期浓度梯度递增法体外建立Ishikawa／DDP耐药细胞株，并检测多药耐药相关基因（MDR1）和Bcl-2、Bax和caspase-3的表达，采用MTT法检测Ishikawa细胞和Ishikawa／DDP细胞的增殖活性，计算半数抑制浓度（IC50）。Ishikawa／DDP分别转染NC阴性序列（NC组）和siRNA YKL-40（si-YKL-40组），另设未转染细胞作为对照组，采用MTT法、划痕实验和Annexin V／PE双染法检测DDP对si-YKL-40组Ishikawa／DDP细胞增殖、迁移能力和凋亡的影响。结果 体外成功建立Ishikawa／DDP耐药细胞株，3.125、6.25、12.5、25、50、100 μmol／L DDP对Ishikawa／DDP细胞的增殖抑制率分别为（6.93±2.45）％、（8.14±4.50）％、（11.37±4.62）％、（15.18±3.97）％、（26.29±5.08）％、（41.32±7.64）％，明显低于Ishikawa细胞（P＜0.05）。DDP对Ishikawa和Ishikawa／DDP的IC50分别为14.58 μmol／L和116.70 μmol／L，Ishikawa／DDP的耐药指数为8.004。QPCR检测结果显示，Ishikawa细胞YKL-40、MDR1、Bcl-2、Bax、caspase-3 mRNA表达量分别为0.82±0.15、0.43±0.11、1.05±0.23、1.17±0.20、0.96±0.18，而Ishikawa／DDP细胞分别为1.87±0.40、2.34±0.46、1.52±0.28、0.72±0.21、0.49±0.17，差异有统计学意义（P＜0.05）。3.125、6.25、12.5、25、50、100 μmol／L DDP对si-YKL-40组细胞的增殖抑制率分别为（10.95±2.74）％、（18.73±5.30）％、（32.79±5.47）％、（52.28±6.58）％、（61.73±5.26）％、（65.45±7.33）％，明显高于对照组和NC组，差异有统计学意义（P＜0.05）。DDP对si-YKL-40组细胞的IC50为22.19 μmol／L。与对照组和NC组比较， si-YKL-40组细胞凋亡率升高、愈合率下降；YKL-40、MDR1、Bcl-2蛋白表达量下调， Bax和caspase-3蛋白表达量上调，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 沉默YKL-40可显著提高Ishikawa／DDP细胞株对DDP的敏感性，并促进细胞凋亡，其具体机制可能与下调MDR1、Bcl-2表达，及上调Bax和caspase-3表达有关。     

黄芪甲苷调节miR-21基因抑制肾癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的机制探讨

目的:探讨黄芪甲苷对肾癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:用终浓度为20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L、160 μmol/L的黄芪甲苷处理肾癌细胞A498作为不同浓度黄芪甲苷处理组,正常培养的细胞作为对照（NC）组;将anti-miR-con、anti-miR-21转染至细胞A498中,记为anti-miR-con组、anti-miR-21组;将miR-con、miR-21转染至细胞A498中再用80 μmol/L黄芪甲苷处理作为HSJG+miR-con组、HSJG+miR-21组。四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞存活率;蛋白质印迹（Western Blot）检测裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cleaved-caspase-3）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-21表达水平。结果:与对照组相比,不同浓度黄芪甲苷处理组肾癌细胞A498中细胞存活率显著降低,Cyclin D1表达水平显著降低,Cleaved-caspase-3表达水平显著升高,细胞凋亡率显著升高,小鼠肿块重量显著降低,miR-21表达水平显著降低（P＜0.05）。miR-21低表达Cyclin D1表达水平显著降低,Cleaved-caspase-3表达水平显著升高,细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）。miR-21高表达逆转了黄芪甲苷对肾癌细胞A498增殖抑制和凋亡促进的作用。结论:黄芪甲苷可抑制肾癌细胞A498增殖,促进细胞凋亡,抑制肾癌实体瘤的生长,其机制可能与miR-21表达水平有关。     

蛇床子素对人前列腺癌LNCaP细胞衰老的影响及其机制研究

目的:探讨天然化合物蛇床子素对人前列腺癌LNCaP细胞衰老的影响及分子机制。方法:采用CCK8法检测蛇床子素对LNCaP细胞增殖的影响；用EdU细胞增殖检测试剂盒检测细胞增殖情况；流式细胞仪检测蛇床子素对其周期阻滞情况；β-半乳糖苷酶染色法检测蛇床子素对LNCaP细胞衰老的影响；Western blot检测衰老相关蛋白SKP2、p27的表达情况。结果:CCK8结果显示蛇床子素对LNCaP细胞的增殖有明显的抑制作用，且呈现一定剂量依赖性（P＜0.05）；EdU结果发现药物处理组细胞在荧光电镜下观察增殖细胞数较空白对照组逐渐减少，当蛇床子素浓度为150 μmol/L时，增殖细胞数较空白对照组下降30%（P＜0.01）；流式细胞仪检测结果显示当蛇床子素浓度为100、150 μmol/L时，阻滞于G2/M期的细胞数明显增多，并且呈现一定的浓度依赖（P＜0.05）；药物处理组细胞于倒置显微镜观察可见，蛇床子素浓度为150 μmol/L时，β-半乳糖苷酶阳性染色细胞数较对照组明显增加（P＜0.01）；免疫印迹法结果显示随着蛇床子素浓度的增加，衰老相关蛋白SKP2的表达减少、p27的表达增加（P＜0.05）。结论:蛇床子素可以抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖并进一步诱导其衰老。     

鱼藤素通过FZD7调控Wnt通路抑制三阴性乳腺癌细胞侵袭、迁移、EMT的实验研究

目的:探讨鱼藤素对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞增殖、侵袭、迁移和上皮-间质转化（EMT）的抑制作用及可能的机制。方法:体外培养人TNBC细胞系（MDA-MB-231和BT-20）,加入鱼藤素（5、10、20 μmol/L）诱导后,采用CCK-8法检测MDA-MB-231和BT-20细胞的存活率;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术分析细胞凋亡情况;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western Blot检测细胞中卷曲同源物7（FZD7）、Ki-67、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、β-连结蛋白（β-catenin）、c-myc蛋白表达。利用FZD7过表达载体质粒（pcDNA-FZD7）转染建立FZD7过表达细胞,进一步研究FZD7过表达对鱼藤素抗TNBC作用的影响;裸鼠成瘤实验检测鱼藤素对MDA-MB-231细胞体内生长的影响。结果:与对照组（0 μmol/L）相比,鱼藤素（5、10、20 μmol/L）呈剂量依赖性的显著降低MDA-MB-231和BT-20细胞存活率,并显著增加MDA-MB-231和BT-20细胞的凋亡率（P＜0.05）。与对照组相比,鱼藤素可显著降低MDA-MB-231和BT-20细胞增殖活力、克隆形成能力、迁移与侵袭能力和细胞内Vimentin、FZD7、β-catenin、c-myc蛋白表达,升高细胞凋亡率和细胞内E-cadherin蛋白表达（P＜0.05）;过表达FZD7可逆转鱼藤素对TNBC细胞恶性表型的影响。体内实验中,与对照组相比,鱼藤素组裸鼠的肿瘤体积和肿瘤质量、肿瘤中FZD7蛋白表达和FZD7、Ki-67阳性表达显著降低（P＜0.05）,与鱼藤素组和鱼藤素+pcDNA-NC组相比,鱼藤素+pcDNA-FZD7组肿瘤体积和肿瘤质量、肿瘤中FZD7蛋白表达和FZD7、Ki-67阳性表达显著升高（P＜0.05）。结论:鱼藤素可抑制TNBC细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调FZD7的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化有关。     

多烯紫杉醇诱导的卵巢癌SK-OV-3多倍体肿瘤巨细胞增殖、迁移和凋亡的特性研究

目的:探讨多烯紫杉醇（Docetaxel,Doc）诱导的卵巢癌SK-OV-3多倍体肿瘤巨细胞增殖、迁移和凋亡的特性。方法:0.8 μmol/L Doc处理SK-OV-3细胞16 h,更换为完全培养液继续培养细胞至第3天和第5天。免疫荧光染色法观察细胞形态和增殖,流式细胞术检测细胞倍性、周期和凋亡,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果:Doc处理后SK-OV-3细胞体积变大,细胞核增多,细胞增殖能力降低。Doc（3 day）组和Doc（5 day）组多倍体细胞（>4 N）百分比高于对照组（P＜0.01）。Doc诱导Doc（16 h）组发生细胞周期阻滞。Doc（5 day）组细胞迁移能力低于对照组（P＜0.01）。Doc（3 day）组和Doc（5 day）组早期凋亡细胞百分比高于对照组（P＜0.05）。Doc（16 h）组、Doc（3 day）组和Doc（5 day）组促凋亡蛋白表达逐渐上调,抗凋亡蛋白表达下调。结论:Doc诱导卵巢癌SK-OV-3细胞形成多倍体肿瘤巨细胞,SK-OV-3多倍体肿瘤巨细胞增殖和迁移能力降低,早期凋亡增加,这为探索多倍体肿瘤巨细胞特性提供了研究基础。     

Cav3.1在宫颈癌组织中的表达及靶向下调Cav3.1对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的:分析Cav3.1在宫颈癌组织中的表达及靶向下调Cav3.1对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用免疫组织化学染色法检测Cav3.1在68例宫颈癌组织和40例非癌宫颈组织中的表达;实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）、Western blot检测宫颈癌HeLa细胞中Cav3.1的表达;采用siRNA瞬时转染技术靶向下调Cav3.1表达,CCK-8检测下调Cav3.1表达后宫颈癌HeLa细胞增殖情况,流式细胞仪检测下调Cav3.1表达后宫颈癌HeLa细胞凋亡情况;Western blot检测宫颈癌HeLa细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3的表达。结果:Cav3.1在宫颈癌组织中的表达显著高于对照组（P＜0.01）。宫颈癌HeLa细胞中Cav3.1的表达水平显著高于HcerEpic 细胞（P＜0.01）。与对照组相比,siRNA-Cav3.1组的Cav3.1相对表达水平显著下降（P＜0.01）。与空白对照组、mock组相比,siRNA-Cav3.1组HeLa细胞的增殖能力减弱,凋亡能力增强,差异有统计学意义（P＜0.01）。Western blot显示siRNA-Cav3.1组Bax、Cleaved-Caspase3的相对表达量比对照组升高,而Bcl-2降低(P＜0.01)。结论:Cav3.1在宫颈癌组织和细胞中高表达。靶向下调Cav3.1可以抑制HeLa细胞的增殖、促进其凋亡。Cav3.1在宫颈癌的生物学行为中可能起着关键的作用,有望成为一种新的有效的宫颈癌治疗靶点及肿瘤检测的分子生物学标志物。