周期蛋白E在细胞周期调节中的作用

ｃｙｃｌｉｎ Ｅ是Ｇ１期的周期蛋白,基因定位于１９ｑ１２－１３,参与细胞周期的调节及肿瘤的发生。ｃｙｃｌｉｎ Ｅ与ＣＤＫ２结合在Ｇ１期末发挥作用,促进细胞进入Ｓ期。ｃｙｃｌｉｎ Ｅ的过量表达通过对ｐＲＢ及其它低物的磷酸化、释放出转录因子进而启动ＤＮＡ的合成,加速细胞的Ｇ１期进程。ｐ２１、ｐ２７及ＴＧＦ－β通过对ｃｙｃｌｉｎ Ｅ－ＣＤＫ２活性的抑制而减缓Ｇ１期的进程。ｃｙｃｌｉｎ Ｅ是周期进程的基本     

G1期细胞周期调节因子与细胞癌变

目前研究结果表明，细胞周期中的多种调整因子参与细胞癌变，特别是Ｇ１期的Ｄ型细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎＤ）的过表达，细胞周期蛋白依赖性抑制因子（ＣＤＩ）的ｐ１６，ｐ１５，ｐ２１，ｎ２７及参与Ｇ１期负向调节的抑癌基因产物ｐ５３，Ｒｂ的低表达或基因突变皆可导致恶性肿瘤的发生。     

p27表达和DNA倍体在软骨肉瘤中的研究

目的：软骨肉瘤是常见的骨恶性肿瘤之一。其形态多变、生物学行为复杂，对软骨瘤和高分化软骨肉瘤，只凭病理组织学特征鉴别它们通常是很困难的，并且软骨肉瘤组织学分级与其生物学行为时常不一致。因此，需要更为客观可靠的指标来协助诊断，指导软骨肉瘤的分级和估计软骨肉瘤的预后。肿瘤细胞周期的研究是当前肿瘤研究热点之一，肿瘤细胞周期受一系列细胞周期调节因子控制，包括Ｇ１期细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎｓ）和相应的细胞周期素依赖激酶（ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅｓ，ＣＤＫｓ），ＣＤＫｓ活性又受一系列细胞周期素依赖激酶抑制物（ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＣＤＫＩｓ）控制。ｐ２７是新近发现的ＣＤＫＩｓ家族之一，在细胞周期增殖和分化调控中起非常重要作用。ｐ２７蛋白主要抑制Ｇ１期ｃｙｃｌｉｎＥ－ＣＤＫ２复合物及ｃｙ－ｃｌｉｎＤ－ＣＤＫ４／６复合物活性，它过度表达可使细胞周期停滞在Ｇ１中期。软骨肉瘤ｐ２７表达国内外尚未见报道。检测软骨肉瘤中ｐ２７表达，从而探讨ｐ２７表达与软骨肉瘤组织分级和ＤＮＡ倍体的关系及其对软骨肉瘤的诊断和预后判断是否具有应用价值十分必要。方法：３６例经典软骨肉瘤未脱钙     

p16和p15基因缺失与造血系统恶性疾病

ｐ１６／ｐ１５基因为定位于染色体ｑｐ２１的抑癌因子，通过抑制细胞周期调节蛋白（ＣＹＣ）和细胞周期蛋白依赖性激酶Ｃ（ＣＤＫ）复合物的形成与激活，阻止细胞由Ｇ１期进入Ｓ期，从而减少细胞的异常生长及变异，防止肿瘤的发生和发展。ｐ１６／ｐ１５基因缺失与造血系统恶性疾病密切相关。肿瘤抑制基因ｐ１５，ｐ１６的发现，为基因治疗血液系统恶性肿瘤提供了新的途径。     

p16基因在肺癌中表达的研究

癌症是一种危害人类健康的恶性疾病,目前研究表明,许多细胞周期调节因子与癌症的发生和发展有着密切的关系。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子ｐ１６,其编码基因为ＭＴＳ１／ｐ１６ＣＤＫ４Ｉ,简称ｐ１６基因,为该研究领域较引人注目的研究热点。自１９９４年美国的Ｋａｍｂ［１］和Ｃａｒ－ｓｏｎ首次发表了有关ｐ１６基因的研究工作以来,人们对其进行了大量的研究。ｐ１６基因编码一个相对分子质量为１６×１０３的蛋白质,此蛋白质是一种细胞周期蛋白依赖性激酶４（ＣＤＫ４）的抑制因子（ＣＤＫ４Ｉ）。我们应用免疫组化Ｓ－Ｐ方法…     

G1期细胞周期调节因子与细胞癌变

目前研究结果表明，细胞周期中的多种调整因子参与细胞癌变，特别是Ｇ１期的Ｄ型细胞周期蛋白的过表达，细胞周期蛋白依赖性抑制因子的ｐ１６，ｐ１５，ｐ２１，ｐ２７及参与Ｇ１期负向调节的抑癌基因产物ｐ５３，Ｒｄ的低表达或基因突变皆可导致恶性肿瘤的发生。     

细胞周期调控与细胞癌变

细胞周期受多种因子的调控，包括细胞周期蛋白、细胞周期蛋白依赖性激酶、细胞周期蛋白依赖性抑制因子、ｐ５３和Ｒｂ等，其核心为ＣＤＫｓ的活性表达和调控。这些调控因子在细胞周期的许多关卡发生负调控，与细胞癌变密切相关。     

血管紧张素Ⅱ和血小板源生长因子对心肌细胞周期素和p27蛋白表达量的调节

目的：细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎ）和ＣＤＫ抑制蛋白（ＣＫＩ）是对细胞周期起正性和负性调节作用的两类物质。ｐ２７蛋白是ＣＫＩ的一种，主要对细胞外部促进或抑制增殖的信号起反应。本文观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对心肌细胞细胞周期素和ｐ２７蛋白表达量的影响。方法：培养的心肌细胞除血清２４ｈ使其处于静止状态，加入ＡｎｇⅡ１０－６ｍｏｌ／Ｌ、ＰＤＧＦ－ＢＢ２０ｎｇ／ｍＬ后不同时间收集细胞，用碘化丙啶（ＰＩ）标记细胞ＤＮＡ，以确定细胞所处的周期。用细胞周期素或ｐ２７蛋白的单抗和标记ＦＩＴＣ的二抗标记细胞，用流式细胞仪测定被激发出的荧光量来测定细胞周期素和ｐ２７蛋白表达的相对量。结果：ＡｎｇⅡ可促进细胞周期素的表达，但对ｐ２７蛋白的表达没有影响，不能促进心肌细胞增殖；ＰＤＧＦ明显促进心肌细胞细胞周期素的表达，也不能明显抑制ｐ２７的表达，也不能促进心肌细胞增殖。结论：细胞周期素的表达增加与心肌细胞能否进入细胞周期并不一致，ｐ２７蛋白是心肌细胞能否进入细胞周期并进行有丝分裂的重要调节因子。     

钙调素拮抗剂对HeLa细胞S期进程的影响

目的　探讨钙调素拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）对ＨｅＬａ细胞Ｓ期进程的影响及其分子机理。　方法　通过ＴｄＲ双阻断法获得同步化的Ｓ期ＨｅＬａ细胞,以３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和Ｗｅｓｔｅｒｎ 技术分别观察了ＴＦＰ对ＨｅＬａ 细胞Ｓ期进程和胸苷激酶（ｔｈｙｍ ｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ,ＴＫ）活性及细胞周期引擎分子ＣｙｃｌｉｎＡ、Ｃｄｋ２ 和细胞周期调节蛋白ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ、ＰＣＮＡ、ｐ２１ 蛋白表达水平的影响。　结果　ＴＦＰ（２０μｍ ｏｌ／Ｌ）能使３ Ｈ－ＴｄＲ的掺入峰值后移,并抑制了Ｃｙ－ｃｌｉｎＡ、ＰＣＮＡ、ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ的表达和提高了ｐ２１ 蛋白的水平,但对Ｃｄｋ２的表达几乎无影响。　结论　ＣａＭ 除了能通过影响ＰＣＮＡ的水平直接作用于ＤＮＡ 合成,同时又可通过作用于ＣｙｃｌｉｎＡ、ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ、ｐ２１ 等周期引擎分子和调控因子水平正调ＨｅＬａ 细胞Ｓ期进程。     

转化生长因子α,β1对大鼠肺泡Ⅱ型细胞生长的影响

目的 探讨转化生长因子α和β１对肺泡Ⅱ型细胞增生的影响及其作用机制。方法 采用原代培养的成年大鼠肺泡Ⅱ型细胞,加入ＴＧＦα、ＴＧＦβ１作用４８小时,测定肺泡Ⅱ型细＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量和细胞数量,并用斑点杂交、原位杂交和免疫组化方法检测细胞内细胞周期蛋白Ｄ１、细胞周期依赖性激酶４ ｍＲＮＡ和蛋白的表达。结果 随ＴＧＦα浓度递增,肺泡Ⅱ型细胞＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量和细胞数量均逐渐增加,呈量效正相关;ＴＧ     

HIV—1gp120基因及其与IFN—α基因共表达产物的构建和 …

目的 研究细胞因子ＩＦＮ－α在机体免疫应答过程中的免疫佐剂效应。方法 以表达中国流行株ＨＩＶ－１ｇｐ１２０基因的核酸疫苗质粒ｐＧＰ及共表达中国流行株ＨＩＶ－１ｇｐ１２０基因与ＩＦＮ－α基因的核酸疫苗质粒ｐＧＰＩＦＮ－α免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠，用流式细胞仪测定１００００个免疫鼠脾淋巴细胞中ＣＤ４＾＋，ＣＤ８＾＋Ｔ细胞数及ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋比值。结果 ｐＧ－ＰＩＦＮ－α与ｐＧＰ比较，ｐＧＰＩＦＮ－α免     

p53和细胞周期G_1停滞及细胞凋亡

本文综述了有关ｐ５３介导细胞周期Ｃ１停滞和ｐ５３介导细胞凋亡研究的最新进展。作为细胞转录调节因子，细胞ＤＮＡ受损甚至未受报时，ｐ５３或者主要通过影响其调控基因ｐ２１／Ｗａｌｆｌ／Ｃｉｐｌ、ｍｄｍ－２、ＣＡＤＤ４５等的表达介导细胞Ｃ１停滞，以利于受损ＤＮＡ的修复。或者主要通过影响其调控基因ｂｃｌ－２、ｂａｘ等的表达，以及Ｆａｓ／ＡＰＯ－１的表达，甚至通过ｐ５３自身的作用，介导细胞凋亡，除去ＤＮＡ受损或碱基受损细胞，以防癌变和遗传性状改变。     

反义周期蛋白B1基因转染HT29细胞后若干细胞增殖调控相关基因表达的变化

用基因重组技术将插入有反义周期蛋白Ｂ１（ｃｙｃｌｉｎＢ１）基因ｐＸＪ４１－ｎｅｏ质粒，转染人结肠腺癌ＨＴ２９，获得了ＨＴＢ１细胞株。ＨＴＢ１细胞显示出ｃｙｃｌｉｎＢ１ｍＲＮＡ明显的表达抑制。为了探讨ＨＴＢ１细胞生长变慢和它的增殖相关基因表达之间的关系，我们用异硫氰酸胍－酚一步法提取ＨＴＢ１和ＨＴ２９细胞的总ＲＮＡ，并用一些有关的基因探针进行杂交实验。其结果表明：ｃ－ｍｙｃ和ＣＤＫ４在ＨＴＢ１中的表达低于在ＨＴ２９中的表达；而另一方面，ｐ５３、Ｒｂ、ＴＧＦβ和ｃｙｃｌｉｎＤ３在ＨＴＢ１细胞中的表达高于对照组。而ｃｄｃ２基因表达二者维持相似水平。根据研究结果我们发现，转染有反义ｃｙｃｌｉｎＢ１基因的ＨＴＢ１细胞在一组正、负调节基因的协同作用下，导致细胞周期运转的变化。     

p53基因诱导G1停滞研究进展

ｐ５３基因可与其专一的ＤＮＡ交感结合部位结合，通过活化含有此反应元件的ＣＤＫ抑制剂ｐ２１＾ｗａｆ－１／ｃｉｐ－１／ｃｄｉ－１及ｇａｄｄ４５基因的转录，使ＤＮＡ受损伤的细胞生长停滞在Ｇ１关卡。ｐ５３基因还可和ＴＡＴＡ结合蛋白结合，抑制细胞增殖的速发早期基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、ＰＣＮＡ等的转录，抑制细胞增殖。ｐ５３蛋白还可和复制因子Ａ相互作用，抑制ＤＮＡ复制。Ｇ１停滞在细胞对ＤＮＡ损伤的修复中有重     

CKIs蛋白在视黄酸诱导HL-60细胞分化中的作用研究

从细胞周期调控这一途径探讨视黄酸抑制细胞增殖、诱导细胞分化的分子机制。结果显示：５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ全反式视黄酸（ＡＴＲＡ）及芳维甲（ＡＥ）处理的ＨＬ－６０细胞生长受抑,４ｄ后９０％细胞停滞于Ｇ０／Ｇ１期,Ｇ１→Ｓ期转换受阻,同时ＮＢＴ还原反应增强,ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析及免疫细胞化学染色表明处理后的细胞ｐ１６、ｐ２１两种细胞周期素依赖激酶抑制物（ＣＫＩｓ）表达增加,而ＣｙｃｌｉｎＤ１和ｐＲｂ蛋白则降低,其中尤以ＡＴＲＡ作用为明显。结果提示,细胞周期调控相关蛋白可能在视黄酸及其衍生物抑制细胞增殖、诱导细胞分化过程中起重要作用。     

抗人CD3单链抗体的表达及其分离纯化

本研究将构建的抗人ＣＤ３单链抗体基因，克隆到融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１中，用ＩＰＴＧ诱导表达ＧＳＴ－ＳｃＦｖ融合蛋白，并以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，在Ｍｒ为５２０００左右出现一条新生蛋白带，表达量约占菌体总蛋白的４０％。经初步纯化和复性后，用ＧＳＴ亲和色谱纯化，再经凝血酶水解获得抗人ＣＤ３ＳｃＦｖ，竞争结合抑制实验证明，该表达产物具有ＣＤ３亲和活性     

单核细胞趋化蛋白－1在大肠杆菌中的表达

将人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的ｃＤＮＡ插入融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１中，构建成质粒ｐＧＥＸ／ＭＣＰ转化大肠杆菌ＪＭ１０９，经ＩＰＴＧ诱导后合成ＧＳＴ－ＭＣＰ－１融合蛋白。用１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测在３０ｋＤ左右有新生蛋白条带出现，表达量约占菌体总蛋白的３１．７％。趋化实验证明，该产物具备明确的单核细胞趋化活性。     

p53基因诱导G_1停滞研究进展

ｐ５３基因可与其专一的ＤＮＡ交感结合部位结合，通过活化含有此反应元件的ＣＤＫ抑制剂ｐ２１ｗａｆ－１／ｃｉｐ－１／ｃｄｉ－１及ｇａｄｄ４５基因的转录，使ＤＮＡ受损伤的细胞生长停滞在Ｇ１关卡。ｐ５３基因还可和ＴＡＴＡ结合蛋白结合，抑制细胞增殖的速发早期基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、ＰＣＮＡ等的转录，抑制细胞增殖。ｐ５３蛋白还可和复制因子Ａ相互作用，抑制ＤＮＡ复制。Ｇ１停滞在细胞对ＤＮＡ损伤的修复中有重要意义。     

抗人CD4单链抗体的表达及其分离纯化

本研究将构建的抗人ＣＤ３单链抗体基因，克隆到融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１，用ＩＰＴＧ诱导表达ＧＳＴ－ＳｃＦｖ融合蛋白，并以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，在Ｍｒ为５２０００左右出现的一条新生蛋白带，表达量约占菌体总蛋白的４０％。经初步纯化和复性后，用ＧＳＴ亲和色谱纯化，再经凝血酶水解获得抗人ＣＤ３ＳｖＦｖ，竞争结合抑制实验证明，该表达产物具有ＣＤ３亲和活性。     

胆固醇缺乏抑制Jurkat T淋巴细胞增殖及分子机制研究

人蛋白酪氨酸激酶信号传递系统及细胞周期调控这一角度来探讨胆固醇缺乏抑制Ｊｕｒｋａｔ细胞增殖的分子机制。方法采用接免疫荧光染色，流式细胞久仰分析技术及免疫细胞化学染色等方法做相关分析。结果经去脂血清培养基培养的Ｊｕｒｋａｔ细胞加ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ处理３ｄ后，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入率明显下降，细胞增殖受抑细胞受阻于Ｇ０／Ｇ１期，ＰＴＫ活性及细胞ｃｙｃｌｉｎＤ１、ＣＤＫ４蛋白的表达明显降低，加入ＬＤＬ可以