SARS患者康复期淋巴细胞功能状态及T细胞受体Vβ24个亚家族表达的格局

背景:严重急性呼吸道综合征(severe acuterespi ratory syndrome,SARS)是由SARS相关冠状病毒感染引起的急性传染性疾病。但目前其康复期患者细胞免疫状态仍有待进一步研究。目的:观察SARS患者康复期淋巴细胞功能状态和T细胞受体(TCR)Vβ24个亚家族表达的格局。设计:前后对照观察。单位:广东省中医院中心实验室。对象:选择2003-01/04在广州中医药大学第二附属医院收治的76例治愈的SARS患者,全部病例均符合"非典型肺炎的临床诊断标准"、"非典型肺炎重症病例诊断标准、出院标准"及《中医临床诊疗术语证候部分》的诊断标准,男30例,女46例,平均(32±11)岁。选择10名同期健康到院体检者,女5名,男5名,平均(32±7)岁,所有受试对象对检测项目知情同意。方法:①TCRVβ24个亚家族的表达检测:取受试对象全血2mL,用EDTA-K2抗凝管抗凝。在流式细胞术检测专用管中,分别加入各种荧光素标记的mAb:抗CD3、抗CD4、抗CD8、抗CD25、抗CD28、抗HLA-DR、PC5-抗CD3mAb、TCRVβ1(PE FITC)、Vβ2(PE FITC)、Vβ3(FITC)、Vβ4(PE FITC)、Vβ5.1(PE FITC)、Vβ5.2(PE)、Vβ5.3(PE)、Vβ7.1(PE FITC)、Vβ7.2(FITC)、Vβ8(FITC)、Vβ9(PE)、Vβ11(PE)、Vβ12(FITC)、Vβ13.1(PE)、Vβ13.2(PE)、Vβ13.6(PE FITC)、Vβ14(FITC)、Vβ16(FITC)、Vβ17(PE FITC)、Vβ18(PE)、Vβ20(FITC)、Vβ21.3(FITC)、Vβ22(PE FITC)和Vβ23(PE)10μL,然后加入抗凝血50μL。混匀后,于室温避光孵育15min,再加入溶血素溶血、洗涤。最后将沉淀溶在300μLPBS中,用CoulterESP流式细胞仪进行检测。②T细胞亚群,T、B细胞的活化状态及Ts细胞和Tc细胞百分率的检测:每次收集5000个细胞,用仪器所带软件分别计算T细胞亚群(CD3、CD4和CD8)、活化的T、B细胞(CD3 /CD25 、CD3 /HLA-DR 、和CD3-/HLA-DR )、Ts细胞和Tc细胞(CD8 /CD28 、CD8 /CD28-)的百分率。主要观察指标:①T细胞亚群(CD3、CD4和CD8)的表达。②活化的T、B细胞(CD3 /CD25 、CD3 /HLA-DR 、和CD3-/HLA-DR )的表达。③Ts细胞和Tc细胞(CD8 /CD28 、CD8 /CD28-)的百分率。④TCRVβ24个亚家族的表达。结果:所有受试对象均进入TCRVβ24个亚家族检测结果分析,74例SARS患者及健康对照者10名均进入其余检测结果分析。①T细胞亚群的检测结果:CD4 细胞的百分率均数低于参考值[(33.33±6.64)%,(43±9)%,P<0.01],CD8 细胞的百分率高于参考值[(34.07±6.40)%,(30±9)%,P<0.01]。②活化的T、B细胞表达检测:表达HLA-DR的T、B细胞增加,而表达CD25的T细胞减少。有53例CD25 细胞的百分率低于正常参考值,有64例CD3 /CD25 T细胞的百分率低于正常参考值。只有CD3 /HLA-DR 和CD3-/HLA-DR 细胞的百分率高于正常参考值,其中表达CD3 /HLA-DR 的T细胞增加36例,表达CD3-/HLA-DR 的T细胞增加30例。③Ts细胞和Tc细胞的百分率:Ts细胞(CD8 /CD28-)的百分率较参考值增高[(28.75±7.31)%,(15.99±5.1)%,P<0.01];Tc细胞(CD8 /CD28 )的百分率则低于参考值[(5.99±3.60)%,(13.2±4.1)%,P<0.01]。其中有39例Tc细胞的百分率降低,有48例Ts细胞的百分率升高,CD4 与CD8 T细胞的比值均在正常参考值范围内。④TCRVβ24个亚家族表达:康复期SARS患者TCRVβ24个亚家族表达中,TCRVβ14的表达最高,TCRVβ5.3、和23表达次之,出现TCRVβ24个亚家族表达的不同。正常对照组中只有TCRVβ14表达最高,与SARS患者的结果相一致,但TCRVβ24个亚家族的分布格局不同。两组进行比较,Vβ1、Vβ5.2、Vβ5.3、Vβ7.2、Vβ9、Vβ11、Vβ13.1、Vβ13.2、Vβ17、Vβ18、Vβ22和Vβ23的表达差异显著,康复期SARS患者组均高于正常对照组(P<0.05-0.01)。结论:康复期SARS患者CD8 CD28-T细胞数的升高可导致CD8 T细胞数升高;而Ts细胞数的增加,因其分泌的抑制因子增多,从而造成CD3 和CD4 T细胞数降低。SARS患者康复期TCRVβ24个亚家族在T细胞上的表达不同。CD3 /HLA-DR 和CD3-/HLA-DR T细胞数的升高,可能与T、B细胞的活化较晚有关。     

血小板抗体和T细胞亚群检测在诊断原发免疫性血小板减少症中的意义

目的探讨血小板抗体和T细胞亚群检测在诊断原发免疫性血小板减少症(ITP)中的意义。方法回顾性分析2017年3月至2018年5月广元市第二人民医院收治的143例免疫性血小板减少症患者的临床资料,其中ITP患者93例(ITP组),继发免疫性血小板减少症(sITP)患者50例(sITP组)。选取同期在该院体检的健康志愿者50例为对照组。采用流式细胞仪检测患者血小板抗体(PAIgG、PAIgM、PAIgA)和T细胞亚群(CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+)水平。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价血小板抗体和T细胞亚群诊断ITP的作用。结果 ITP组患者PAIgG、PAIgM、PAIgA均明显高于sITP组和对照组,差异有统计学意义(P0.05);CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平明显低于sITP组和对照组,差异有统计学意义(P0.05),而CD8~+水平明显高于sITP组和对照组,差异有统计学意义(P0.05)。ITP组患者PAIgG、PAIgM、PAIgA异常率均明显高于sITP组和对照组,差异有统计学意义(P0.05);CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+异常率均明显高于sITP组和对照组,差异有统计学意义(P0.05)。血小板抗体联合T细胞亚群诊断ITP的ROC曲线下面积为0.932,灵敏度为86.5%,特异度为87.5%。结论 ITP患者存在血小板抗体升高和T细胞亚群紊乱的现象,联合检测血小板抗体和T细胞亚群能够更加准确地反映患者病情,提高诊断效能,为疾病的临床治疗提供更好的支持。     

原发免疫性血小板减少症患者外周血Treg细胞程序性死亡受体-1的表达

目的：检测原发免疫性血小板减少症（immune thrombocytopenia, ITP）患者外周血中的调节性T细胞（regu-latory T cells, Treg细胞）百分比以及Treg细胞上程序性死亡受体-1（programmed death-1, PD-1）的表达情况,并探讨其临床意义。方法：将30例确诊的ITP患者依据治疗后血小板计数是否恢复正常分为治疗有效组（21例）和治疗无效组（9例）,用流式细胞术分别检测其治疗前后外周血中CD3⁺T淋巴细胞计数、Treg细胞百分比及PD-1⁺ Treg细胞百分比。结果：治疗有效组治疗前、后CD3⁺ T淋巴细胞计数分别为（6.39±5.74）×10⁹/L和（5.49±4.86）×10⁹/L（P>0.05）;治疗无效组治疗前、后CD3⁺ T淋巴细胞计数分别为（8.34±2.95）×10⁹/L和（7.87±1.47）×10⁹/L（P>0.05）,治疗有效组与治疗无效组间比较,治疗前比较、治疗后比较的CD3⁺ T淋巴细胞计数差异无统计学意义。治疗有效组患者外周血中Treg细胞百分比由治疗前的16.96%±4.61%升至32.74%±9.38%,PD-1⁺ Treg细胞百分比由治疗前的14.88%±6.75%升至29.62%±7.97%,差异均有统计学意义（P<0.000 1）。而治疗无效组患者外周血中Treg细胞比例由治疗前的17.41%±6.77%上调至19.18%±7.64%,PD-1⁺ Treg细胞比例由治疗前的15.30%±6.57%上调至19.58%±6.91%,但差异均无统计学意义（P>0.05）。接受治疗后,治疗有效组的外周血中Treg细胞百分比及PD-1⁺ Treg细胞百分比均明显高于无效组（P<0.05）。结论：Treg细胞及PD-1⁺ Treg细胞可能在ITP的发生、发展中发挥重要作用,检测外周血中这2种细胞的百分比可能提示患者治疗有效。     

AMLM2a型细胞诱导自体及异体优势增殖TCR Vβ亚家族T细胞的研究

目的：研究急性髓细胞性白血病M2a亚型（AML-M2a）患者外周血白血病细胞反应性T细胞受体V区β链(TCR Vβ)亚家族T细胞体内外优势表达情况及其体外细胞毒性分析。方法：采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养法(MLTC)将AML-M2a细胞与自体或正常人外周血T细胞体外混合培养和扩增,用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)分析MLTC前后患者和正常人T细胞TCR 24个Vβ亚家族的表达情况,同时用四甲基偶氮唑盐(MTT)法对其进行细胞毒性分析。结果：AML-M2a患者和正常人T细胞在MLTC培养后均出现了TCR Vβ亚家族优势表达情况,与淋巴因子激活杀伤细胞(LAK细胞)相比具较高特异性的细胞毒性(P<0.01)。结论：AML-M2a细胞可以诱导自体与异体特异性细胞毒性T细胞(CTL),且其主要为一些优势的TCR Vβ亚家族T细胞。     

AML—M2a型细胞诱导自本及导体优势增殖TCRVβ亚家族T细胞的研究

目的：研究急性髓细胞性白血病M2a亚型（AML－M2a）患者外周血白血病细胞反应性T细胞受体V区β链（TCRVβ）亚家族T细胞体内外优势表达情况及其体外细胞毒性分析。方法：采用混合淋巴细胞／肿瘤细胞培养法（MLTC）将AML－M2a细胞与自体或正常人外周血T细胞体外混合培养和扩增,用反转录－多聚酶链反应（RT－PCR）分析MLTC前后患者和正常人T细胞TCR24个Vβ亚家族的表达情况,同时用四甲基偶氮唑盐（MTT）法对其进行细胞毒性分析。结果：AML－M2a患者和正常人T细胞在MLTC培养后均出现了TCRVβ亚家族优势表达情况,与淋巴因子激活镣伤细胞（LAK细胞）相比具有较高特异性的细胞毒性（P＜0．01）。结论：AML－M2a细胞可以诱导自体与异体特异性细胞毒性T细胞（CTL）,且其主要为一些优势的TCRVβ亚家族T细胞。     

免疫性血小板减少症患者外周血中滤泡辅助性T细胞和IL-21的水平及临床意义

目的探讨滤泡辅助性T细胞(Tfh细胞)和IL-21在免疫性血小板减少症(ITP)中的作用。方法采集15例ITP患者及20例健康对照者外周血,用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中CXCR5+CD4+Tfh细胞的百分率,ELISA法检测血清IL-21水平;用实时荧光定量PCR检测PBMC中IL-21 mRNA的表达。结果 ITP组PBMC中CXCR5+CD4+Tfh细胞比例(17.55±1.015)%显著高于健康人对照组(10.19±0.343)%,差异有统计学意义(t=7.657,P0.01);ITP组血清中IL-21水平(100.7±3.71)pg/mL显著高于健康人对照组(64.6±0.81)pg/mL,差异有统计学意义(t=10.84,P0.01),且两者之间存在明显相关性(r=0.689 3,P0.01)。ITP患者IL-21 mRNA的相对表达量4.319±0.767明显高于健康人对照组1.125±0.052,差异有统计学意义(t=4.813,P0.01)。结论 ITP患者外周血Tfh细胞比例、IL-21水平及IL-21 mRNA表达均增高,可能在ITP的发病机制中发挥重要作用。     

Breg细胞与Treg细胞在免疫性血小板减少症患者外周血中的表达及临床意义

目的 研究免疫性血小板减少症(ITP)患者治疗前后外周血中调节性B细胞(Breg细胞)、调节性T细胞(Treg细胞)的表达及与白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子 α(TNF-α)的相关性,探讨以上指标在ITP患者发病中的免疫调节机制.方法 选取2017年3月至2019年12月该院血液病科收治的初诊患有ITP的住院患...     

急性髓系白血病患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖分析

本研究探讨AML患者在初发、治疗缓解后、复发等不同疾病状态下外周血T细胞TCRVB亚家族表达及T细胞克隆性增殖的情况,分析不同白血病细胞负荷对患者外周血T淋巴细胞数量及功能．尤其是对抗白血病功能的影响。应用RT-PCR扩增11例AML白血病患者不同疾病状态下及3名正常供者外周血的TCRBV24个家族的基因序列,通过基因扫描（genescan）的方法判断TCRBV家族的克隆表达、CDR3克隆性质,比较不同疾病状态下白血病患者外周血T细胞的Vβ亚家族的应用、克隆性增殖、T细胞的复杂性以及T细胞免疫表型的变化。结果表明：11例AML白血病患者初诊时外周血T细胞均表达部分TCR Vβ亚家族,经体外诱导后TCR Vβ亚家族表达增加;完全缓解期患者外周血T细胞TCRVβ亚家族数量明显增多,但未达到完全正常;4例患者在复发时TCR Vβ亚家族表达数量明显下降;11例患者中有9例在初诊时外周血有1至2个TCR Vβ亚家族T细胞克隆性增殖,缓解期克隆性增殖的Vβ亚家族T细胞有增加趋势,在多数病例观察到部分Vβ亚家族T细胞在初发、缓解、体外诱导扩增以及复发时仍维持克隆性增殖状态;AML白血病患者初发及复发时T细胞CDR3复杂性明显降低,呈偏态分布,而疾病缓解时T细胞复杂性有所改善。结论：AML白血病患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族呈限制性表达;在大多数病例中无论是疾病初发抑或缓解及体外诱导、甚至在疾病复发时均可观察到克隆性T细胞的存在;在部分病例中某些Vβ亚家族在上述不同疾病状态下始终维持克隆性增殖状态,部分Vβ亚家族的克隆性增殖同白血病细胞的存在相关;在疾病状态下,AML白血病患者外周血T细胞的复杂性有所降低,而疾病缓解后可部分恢复。     

急性单核细胞白血病患者外周血和骨髓TCR Vβ亚家族T？…

采用ＲＴ－ＰＣＲ扩增急性单核细胞白血病（ＡＭＬ－Ｍ５）患者外周血和骨髓单个核细胞的ＴＣＲ Ｖβ２４个亚家族基因,分析其ＴＣＲ Ｖβ亚家族的利用情况。结果发现,不同标本中可检测到１－１９Ｖβ亚家族的Ｔ细胞,不同患者外周血和骨髓中ＴＣＲ Ｖβ亚家族Ｔ细胞分布不尽相同。研究结果提供了ＡＭＬ－Ｍ５患者外周血和骨髓中ＴＣＲ ＶβＴ细胞倾斜性分布的细胞免疫功能改变特点。     

慢性粒细胞白血病患者外周血初始T细胞水平和T细胞受体Vβ谱系利用特点

目的了解慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血初始(naive)T细胞的水平和T细胞受体(TCR)Vβ基因谱系利用和克隆性,从而了解CML患者的胸腺近期输出功能和TCRVβ亚家族T细胞增殖情况。方法采用实时定量PCR(TaqMan)方法检测20例CML患者外周血单个核细胞中T细胞受体重排删除环(Tcellreceptorrearrangementexcisioncircles,TREC)的水平,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3+细胞中TREC水平。利用逆转录PCR和基因扫描分析其中14例患者外周血单个核细胞的TCRVβ24个亚家族基因表达和克隆性。9名正常人外周血作为对照。结果CML患者外周血TREC含量(0.06±0.16/1000CD3+细胞)明显低于正常人(6.84±4.71/1000CD3+细胞,P<0.01)。14例CML患者外周血T细胞表达不同数量Vβ亚家族(1～12个),其中13例CML患者外周血中的一些Vβ亚家族出现克隆性T细胞,Vβ3,Vβ10,Vβ19,Vβ21和Vβ22亚家族的克隆性增殖多见。结论CML患者胸腺近期输出初始T细胞功能明显降低,但仍存在优势利用和克隆性增殖Vβ亚家族T细胞,提示尽管整体T细胞免疫功能低下,但对白血病细胞相关抗原仍具有一定特异性免疫反应的能力。     

免疫性血小板减少症患者3项指标联合检测的临床意义

目的研究免疫性血小板减少症(ITP)患者T细胞亚群、血小板相关抗体及叶酸联合检测的临床意义。方法本院免疫性血小板减少症患者60例纳入ITP组,同期体检健康者40例纳入对照组。采用美国贝克曼库尔特LX流式细胞分析仪及其配套试剂检测ITP组治疗前后及对照组被试T细胞亚群和血小板相关抗体水平,美国贝克曼库尔特Access2全自动化学发光免疫分析仪及其配套试剂检测ITP组治疗前后及对照组被试叶酸水平。结果与对照组相比,ITP组治疗前CD3+、CD3+CD4+、CD4+/CD8+、叶酸水平降低,CD3+CD8+水平升高,比较差异有统计学意义(P<0.05);ITP组治疗前和对照组血小板抗体IgG、IgM水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。ITP组治疗后与对照组比较CD3+CD4+、CD4+/CD8+水平降低,CD3+CD8+水平升高,比较差异有统计学意义(P<0.05);血小板抗体中IgG、IgM水平明显高于对照组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后IgG、IgM水平明显降低,叶酸水平升高,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论联合检测T细胞亚群、血小板相关抗体及叶酸对提高免疫性血小板减少症诊断的准确度,并能为临床治疗方案的选择提供依据。     

调节性T细胞与免疫性血小板减少症

调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)在维持机体自身免疫耐受平衡状态中起重要作用.免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)患者不仅Tregs数量减少,而且伴有明显的功能下降.但与其相关的细胞因子和分子机制等尚不明确.临床常用的治疗手段对Tregs的数量和功能...     

TRAIL在原发免疫性血小板减少症患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的：探讨原发免疫性血小板减少症（primary immune thrombocytopenia,ITP）中TRAIL的表达及其在发病机制中的作用。方法使用Ficoll密度梯度离心法,收集28例ITP患者和30例健康对照的外周血单个核细胞（PBMC）。采用实时荧光定量PCR检测TRAIL基因的表达,采用 ELISA方法检测血清中细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-4和 IL-10的量,并分析TRAIL与患者TNF-α,INF-γ,IL-10和血小板计数的相关性。结果与健康对照组相比,ITP患者 PBMC中 TRAIL表达显著增高（2.80±0.43 vs 1.00±0.24,t＝19.72,P＜0.001）。与健康对照组相比,ITP患者血清中IFN-γ和TNF-α升高（52.43±11.04 pg/ml vs 23.26±8.15 pg/ml;69.14±10.89 pg/ml vs 36.14±13.17 pg/ml,t＝10.36～11.50,P值均＜0.001）,IL-10降低（11.18±6.13 pg/ml vs 33.28±9.85 pg/ml,t＝10.17,P＜0.001）,IL-4的变化差异无统计学意义（35.75±12.52 pg/ml vs 40.16±14.26 pg/ml,t＝1.25,P＞0.05）。且ITP患者TRAIL的表达与血清中IFN-γ,TNF-α正相关（r＝0.432,0.541,P 值均＜0.05）,与 IL-10,血小板计数负相关（r＝-0.424,-0.553,P 值均＜0.05）。结论TRAIL可能通过介导细胞因子免疫紊乱,参与了 ITP的发生与发展,这为进一步研究 ITP的免疫干预治疗提供了新的线索和思路。     

基因扫描分析B-CLL的TCR Vβ亚家族T细胞的表达和克隆性

利用RT-PCR扩增12例B-CLL外周血单个棱细胞的TCR Vβ基因24个亚家族的互补决定区3(CDR3)．以了解T细胞的表达情况。PCR产物进一步经基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果显示：12例BCLL共表达13个TCR Vβ亚家族T细胞，每例病人仅表达3—9个 Vβ亚家族，主要为Vβ3，Vβ6，Vβ7，Vβ17或Vβ19，9制病人的一个或两个Vβ3家族T细胞呈克隆性生长。提示B-CLL选择性地表达TCR vβT细胞。大部分B-CLL出现克隆性增殖T细胞，这可能是对白血痛细胞相关抗原的免疫反应。     

免疫性血小板减少症患者骨髓滤泡辅助性T细胞数量及功能的研究

本研究检测免疫性血小板减少症（ITP）患者骨髓滤泡辅助性T细胞（Tfh细胞）数量及功能,探讨Tfh细胞在ITP发病机制中的作用。选取2013年1月至10月在天津医科大学总医院血液科就诊的21例初治ITP患者、20例恢复期ITP患者及18名正常对照者,采用流式细胞术检测骨髓Tfh细胞数量、Tfh细胞功能相关分子CD40L、ICOS、IL-21的表达,采用RT-PCR技术检测BMMNC转录因子BCL-6mRNA相对表达水平;并将各项指标与疾病严重程度进行相关性分析。结果表明,ITP初治组骨髓CD4＋CXCR5＋／CD4＋细胞比例[（5．532±2．599）％]高于恢复期组[（4．064±2．026）％]和对照组[（4．048±1．413）％]（P〈0．05）;ITP初治组骨髓CD4＋CXCR5＋ICOS＋／CIM＋CXCR5＋细胞比例[（14．586±8．561）％]高于恢复期组[（12．884±10．161）％]和对照组[（7．487±5．176）％],初治组与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）;ITP初治组和恢复期组骨髓CIM＋CXCR5＋CD40L＋／CD4＋CXCR5＋细胞比例[（15．309±10．756）％]及[（18．242±12．243）％],高于对照组[（8．618±5．719）％]（P〈0．05）;ITP初治组和恢复组骨髓CD4＋CXCR5＋IL-21＋／CD4＋CXCR5＋细胞比例1（58．560±26．285）％]及[（57．035±30．936）％]高于对照组[（36．289±24．868）％]（P〈0．05）;初治组、恢复组、对照组BCL-6mRNA的表达水平分别为（1．407±0．264）、（1．149±0．217）和（0．846±0．157）,差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。结论：Tfh细胞在ITP患者的骨髓中数量增加,功能分子表达增多,功能亢进,在ITP发病机制中可能有重要作用。     

原发免疫性血小板减少症患儿中T淋巴细胞亚群、NK细胞及B细胞在外周血中的表达情况分析

目的研究原发免疫性血小板减少症患儿中T淋巴细胞亚群、NK细胞及B细胞在外周血中的表达情况。方法选择ITP患儿241例作为研究组,另选择252例健康儿童作为对照组,检测并比较2组患儿T淋巴细胞亚群(CD_3、CD_4、CD_8细胞)、B细胞和NK细胞水平。结果研究组外周静脉血中CD_3水平、CD_4水平和CD_4/CD_8显著低于对照组,CD_8水平显著高于对照组(P0.05);研究组血清中B细胞水平低于对照组。研究组的PAIgG、PAIgA、PAIgM水平显著高于对照组(P0.05),IFN-γ水平高于对照组,IL-4水平低于对照组;研究组CD(16+56)水平高于对照组。结论 ITP患儿机体存在T淋巴细胞水平失衡,NK细胞以及B细胞表达未见异常发生。     

弥漫性大B细胞淋巴瘤患者外周血T细胞受体Vα与T细胞受体Vβ亚家族T淋巴细胞的分布与克隆性增殖特点

目的 探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者外周血T淋巴细胞表达的T细胞受体(TCR)Vα与TCR Vβ亚家族基因谱系及克隆性增殖情况.方法 选取2006年4～5月及7月,于广州医科大学附属第一医院肿瘤血液科收治的3例DLBCL患者作为研究对象,并纳入研究组;选取同期于本院体检的3例健康个体纳入对照组.本研究遵循的程序符合广州医科大学附属第一医院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象本人的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书.两组受试对象性别与年龄等一般临床病历资料比较,差异无统计学意义(P＞0.05).通过本院检验科采集研究组与对照组血液10 mL,采用实时聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增两组受试者外周血T淋巴细胞中29个TCRVα与24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区(CDR)3,采用基因扫描分析两组RT-PCR产物的CDR3序列及其长度.回顾性分析研究组和对照组的临床数据:对比分析TCR Vα与TCR Vβ亚家族基因在两组受试者T淋巴细胞中的表达情况,以及分析研究组T淋巴细胞克隆性增殖的特点.结果 ①与对照组外周血T淋巴细胞表达全部的29个TCR Vα与24个TCR Vβ亚家族基因不同,研究组3例DLBCL患者外周血T淋巴细胞表达TCR Vα亚家族基因成员的数量为20～22个,表达TCR Vβ亚家族基因成员的数量为9～17个.②3例DLBCL患者均存在寡克隆、双克隆或克隆性增殖趋势的T淋巴细胞,其中克隆性增殖T淋巴细胞表达TCR Vα亚家族基因成员主要为TCR Vα6、Vα8、Vα14、Vα15、Vα21、Vα22、Vα23及Vα25.克隆性T淋巴细胞表达TCR Vβ亚家族基因成员主要为TCR Vβ1、Vβ3、Vβ13、Vβ15及Vβ16.表达TCR Vα6、Vα8、Vα14、Vα15、Vα23及TCR Vβ13、Vβ15亚家族基因的T淋巴细胞均全部为克隆性增殖T淋巴细胞.TCR Vα6、Vα23亚家族T淋巴细胞与TCR Vβ3、Vβ13亚家族T淋巴细胞呈明显克隆性增殖,基因扫描分析所得图形接近单克隆图形.结论 DLBCL患者外周血TCR Vα与TCR Vβ亚家族T淋巴细胞均呈优势利用及克隆性增殖的特点.     

初发免疫性血小板减少症患者外周血中维生素D及其受体mRNA的表达水平和意义

为了探讨维生素D（VD）对初发免疫性血小板减少症（ITP）发病与治疗的作用,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测45例初发ITP患者和30例健康体检者外周血中25羟基维生素D3[25（OH）D3]和1,25-二羟基D3[1,25（OH）2D3]的浓度,利用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）法检测患者外周血VD受体（VDR）mRNA表达水平。研究结果表明,ITP患者外周血中25（OH）D3（10.6±7.7 ng/ml）和1,25（OH）2D3（69.9±29.0 pg/ml）的浓度明显低于健康对照组（13.7±9.1 ng/ml,87.3±19.9 pg/ml）（P〈0.05）,而VDR mRNA的表达（1.588±0.127）明显高于健康对照组（1.055±0.734）（P〈0.05）。结论：VD水平及其受体的表达异常可能参与了ITP的发病,VD及类似物可用于ITP的治疗。     

免疫性血小板减少症患者白介素-22及相关CD4~+ T细胞亚群的表达

本研究通过检测初治的成人免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中白介素-22(IL-22)及相关CD4+T细胞亚群的表达,探讨其在ITP发病机制中的作用。以我院住院治疗的40例新诊断的急性ITP患者及40例健康对照者为研究对象,应用ELISA法检测外周血血浆中IL-22的含量,采用流式细胞术检测Th1、Th17、Th22细胞亚群的比例,并分析其相关性。结果表明,新诊断的ITP患者血浆中IL-22的含量为(364.12±94.22)pg/ml,显著高于健康对照者(P<0.001);ITP患者外周血Th1细胞比例为(18.92±6.03)%,Th22细胞比例为(2.28±0.51)%,显著高于健康对照者(P<0.05);且ITP患者血浆IL-22水平与Th1和Th22细胞比例之间存在正相关(Th1:r=0.42,P=0.022;Th22:r=0.40,P=0.030);而ITP患者Th17细胞比例与健康对照者比较无明显差异,且与IL-22水平无相关性。结论:成人ITP患者外周血中IL-22水平明显升高,且与Th1、Th22细胞比例之间密切相关,提示IL-22与Th1和Th22细胞在ITP的发病中可能起着协同作用,而Th17细胞可能与ITP的发病无关。     

急性单核细胞白血病患者外周血和骨髓TCR Vβ亚家族 T细胞的倾斜性分布特点

采用RT-PCR扩增急性单核细胞白血病(AML-M5)患者外周血和骨髓单个核细胞的TCR Vβ 24个亚家族基因,分析其TCR Vβ亚家族的利用情况.结果发现,不同标本中可检测到1-19 Vβ亚家族的T细胞,不同患者外周血和骨髓中TCR Vβ亚家族T细胞分布不尽相同.研究结果提供了AML-M5患者外周血和骨髓中TCR Vβ T细胞倾斜性分布的细胞免疫功能改变特点.