实验性脂肪栓塞动物模型的建立

目的建立可控性强、重复性好、趋近真实的脂肪栓塞动物模型。方法首先,将兔麻醉,从股静脉注入同种异体骨髓脂肪（0.2ml/kg）建立脂肪栓塞模型。动物术后存活足够时间处死,取其肺、脑、肾、心进行大体标本观察。同时行HE常规染色,光镜观察。再取新鲜肺组织做冰冻切片、油红O脂肪染色观察。结果本法的动物模型成功率为83.33%。结论用该方法建立急性脂肪栓塞有很高的科研价值和可行性。     

脂肪栓塞综合征发病因素的实验研究

本文用同种异体犬长骨骨髓脂肪静脉注射法建立脂肪栓塞综合征动物模型，通过周围静脉血血凝块块速冰切切片油红０脂肪染色，周围静脉血与肺内血游离脂肪酸测定，股动脉血氧分压分析，并结合脂肪栓塞后４８ｈ犬的肺，脑，心肾等主要脏器的大体标本观察和病理组织学检查，以探讨其脂肪综合征的病理变化和发病机制。结果显示脂肪栓塞综合征的主要病变在肺，肺部病变是发生脂肪栓塞综合征的基础。脂滴和血小板在肺内的机械性阻塞和游离脂     

脂肪栓塞综合征的早期诊断方法——血凝块快速冰冻切片油红…

脂肪栓塞综合征是创伤骨折后的严重并发症，治疗比较困难，残废率高。若能早期诊断及时治疗，是可以中断其病理过程的。本文介绍了血凝块快速冰冻切片油红Ｏ染色后光镜下观察，见到大小不等的红色圆形脂肪球的检查方法，并用此法对５０例创伤骨折和８例髋关节置换术后患者进行检查，发现脂肪滴阳性者３０例，脂滴直径为２￣５０μｍ，其中２０￣５０μｍ者９例，有６例发生脂肪栓塞综合征，３例因及时预防性应用地塞米松或低分子右旋     

脂肪栓塞综合征的早期诊断方法——血凝块快速冰冻切片油红O染色

脂肪栓塞综合征是创伤骨折后的严重并发症，治疗比较困难，残废率高。若能早期诊断及时治疗，是可以中断其病理过程的。本文介绍了血凝块快速冰冻切片油红Ｏ染色后光镜下观察，见到大小不等的红色圆形脂肪球的检查方法，并用此法对５０例创伤骨折和８例髋关节置换术后患者进行检查，发现脂肪滴阳性者３０例，脂滴直径为２～５０μｍ，其中２０～５０μｍ者９例，有６例发生脂肪栓塞综合征，３例因及时预防性应用地塞米松或低分子右旋糖酐而未发生脂肪栓塞综合征；另外２１例其脂滴直径在２０μｍ以下的阳性患者以及２８例阴性患者，均未发生脂肪栓塞综合征。从而为临床提供了一种可靠的早期诊断方法。     

不同浓度淫羊藿苷对大鼠脂肪干细胞成骨分化相关因子的体外研究

目的 探究淫羊藿苷对大鼠脂肪干细胞成骨分化的影响。方法 分离、培养SPF级SD雌性大鼠脂肪干细胞后,流式细胞术进行表面标志物检测,然后通过茜素红、油红O染色观察脂肪干细胞的成骨分化及成脂分化。将第3代脂肪干细胞分为空白组、白藜芦醇组(100μmol/L)、淫羊藿苷Ⅰ～Ⅳ组(1、10、50、100μmol/L),培养21 d后对脂肪干细胞LIM结构域蛋白Ajuba(Ajuba)、Runt相关转录因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)进行荧光定量RT-PCR、Western-blotting检测。结果 培养至第3代的脂肪干细胞表面标志物表现为CD90(95%)、CD34(9.26%)。成骨诱导21 d时茜素红染色可见橘红色钙化结节,成脂诱导21 d时油红O染色可见红色脂滴。白藜芦醇与100μmol/L淫羊藿苷均能促进脂肪干细胞Runx2、ALP基因及蛋白表达,且与白藜芦醇比较,同浓度的淫羊藿苷呈现出显著的促进效应(P<0.01,P<0.05)。白藜芦醇及各浓度淫羊藿苷均可抑制Ajuba基因及蛋白表达,且与100μmol/L白藜芦醇比较,50、100μmol/L淫羊藿苷抑制A...     

增龄对Wistar大鼠非脂肪组织脂肪异位沉积的影响

目的 观察增龄对Wistar大鼠非脂肪组织脂肪异位沉积的影响.方法 将Wistar大鼠30只分为青年组(4月龄组15只)和老年组(24月龄组15只),给予正常饮食饲养60d后观察体重及腹腔内脂肪重量变化,检测血生化指标,行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验测定INS敏感性.结果 老年组大鼠体重(730.9±9.57)g明显高于青年组大鼠(495.6±7.53)g(P＜0.01),肝脏、肾周和附睾脂肪重量较青年组明显增加(P＜0.01),TG、TC、FFA明显高于青年组大鼠(P＜0.05),INS(2.37±0.06)ng/ml明显高于青年组INS(0.59±0.32)ng/ml(P＜0.01);而两组血糖无明显变化.高胰岛素-正葡萄糖钳夹结果显示青年组大鼠葡萄糖输注速率为(26.07±2.80)mg/(kg·min),老年组为(10.79±0.7 1)mg/(kg·min)(P＜0.05).HOMA-IR在青年组和老年组分别为(3.07±0.75)和(13.15±1.56)(P＜0.05).油红O染色结果显示老年组大鼠肝脏、肌肉脂滴较青年组比较明显增多,两组胰腺镜下均未见脂滴.老年组肝脏脂肪染色灰度值(116.60±4.56),青年组为(175.48±3.02)(P＜0.05).老年组大鼠肌肉染色灰度值(121.70±4.60),青年组为(150.65±3.60)(P＜0.05).结论 老龄大鼠肝脏、肌肉脂肪沉积增加,存在一定的胰岛素抵抗.     

血管内皮生长因子165基因修饰的人脂肪间充质干细胞与改性丝素蛋白体内构建血管化组织工程脂肪的研究

目的：探讨血管内皮生长因子165（VEGF165）基因修饰的人脂肪间充质干细胞（hADSCs）与壳聚糖修饰的丝素蛋白支架材料体内构建血管化组织工程脂肪的可行性。方法分离提取hADSCs,选取生长状态良好的第3代hADSCs,用携带重组人VEGF165基因的慢病毒进行感染（感染复数=50）。选用慢病毒感染和未感染的第3代hADSCs分别接种于支架材料上,记为实验组与对照组,同时成脂诱导5 d后,使用氯甲基苯甲酰胺标记细胞。取24只雌性Wistar大鼠,将上述实验组与对照组细胞—支架复合物移植于背部皮下,每组12只。移植后8,12周分别取材并行冰冻切片、HE染色、油红O染色及扫描电镜,同时观察支架材料的降解情况,观察移植物。免疫印迹法检测VEGF165及过氧化物酶体增殖体激活受体-γ2（PPARγ-2）蛋白的表达。结果移植后8,12周,免疫印迹法结果显示实验组移植物均表达VEGF165,对照组未见表达;实验组与对照组均表达PPARγ-2,实验组中的表达量明显多于对照组（P<0.05）。扫描电镜、油红O染色及HE染色均表明实验组与对照组生成大量脂肪样细胞,且实验组明显多于对照组（P<0.05）。结论携带重组人VEGF165基因的慢病毒感染的hADSCs与壳聚糖/丝素蛋白支架材料复合物在大鼠体内可持续表达VEGF165及PPARγ-2蛋白,能显著促进工程化脂肪组织的构建,为血管化组织工程脂肪的构建奠定了基础。     

两种成脂诱导培养基诱导人和大鼠脂肪干细胞的研究

目的：比较两种培养基诱导人和大鼠脂肪干细胞(Adipose-derived stem cell, ADSC)的成脂分化能力,探寻更为适宜的ADSC成脂诱导方案。方法：提取3例临床患者的脂肪干细胞(hADSCs)及出生6周大鼠的脂肪干细胞(rADSCs)。将hADSCs、rADSCs分别接种于六孔板,分为未诱导组、成脂诱导Ⅰ组和Ⅱ组,分别使用普通培养基,成脂诱导培养基Ⅰ和Ⅱ,培养10天后以油红O染色,镜下观察及检测490nm吸光度值(OD490),比较脂滴形成情况。结果：未诱导的hADSCs和rADSCs均呈成纤维细胞样生长。成脂诱导培养3天后出现脂滴;油红O染色显示,成脂诱导组脂滴呈橘红色。hADSCs和rADSCs的成脂诱导Ⅱ组形成的脂滴均明显大于诱导Ⅰ组,统计学分析显示hADSCs的成脂诱导Ⅱ组测得的OD490明显高于诱导Ⅰ组（P<0.01); 而两组的rADSCs的OD490无明显差异（P>0.05）。结论：hADSCs和rADSCs在两种诱导培养基中均可成脂分化,但成脂诱导Ⅱ组优于成脂诱导Ⅰ组。     

两种培养基诱导人和大鼠脂肪干细胞向脂肪细胞分化的比较

目的比较两种培养基诱导人和大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cell,ADSC)的成脂分化能力,探寻更为适宜的ADSC成脂诱导方案。方法提取3例临床患者的脂肪干细胞(h ADSCs)及出生6周大鼠的脂肪干细胞(r ADSCs),将h ADSCs、r ADSCs分别接种于六孔板,分为未诱导组、成脂诱导I组和II组,分别使用普通培养基、成脂诱导培养基I和II,培养10 d后以油红O染色,镜下观察及检测490 nm吸光度值(A490),比较脂滴形成情况。结果未诱导的h ADSCs和r ADSCs均呈成纤维细胞样生长,成脂诱导培养3 d后出现脂滴;油红O染色显示,成脂诱导组脂滴呈橘红色,h ADSCs和r ADSCs的成脂诱导II组形成的脂滴均明显大于诱导I组,统计学分析显示h ADSCs的成脂诱导II组测得的A490明显高于诱导I组(P<0.01);而两组的r ADSCs的A490无明显差异(P>0.05)。结论 h ADSCs和r ADSCs在两种诱导培养基中均可成脂分化,但成脂诱导II组优于成脂诱导I组。     

骨骼肌活组织检查病理诊断技术的改进及应用

目的:对300例骨骼肌活组织检查(活检)标本进行组织学切片和染色,总结分析技术方法的操作过程和改进,重点探讨各种肌酶及非酶组织化学染色技术在神经肌肉病诊断中的应用选择和价值.方法:将标本经异戊烷-液氮速冻后进行冰冻切片,应用HE及Gomori三色(GMR)、糖原(PAS)、脂肪(油红O)等特殊染色,肌球蛋白三磷酸腺苷酶(ATP酶)、还原型辅酶Ⅰ四唑氮还原酶(NADH-TR)等酶组织化学染色,并对各种染色技术进行调整和改进.结果:标本经异戊烷-液氮速冻及恒冷切片,可以有效避免产生冰晶.GMR染色主要显示线粒体及肌纤维变性坏死的病变,油红O染色显示肌纤维内有无脂质增多,PAS染色主要显示糖原和糖蛋白.对于肌肉组织,应用冰冻切片优于石蜡切片.NADH-TR及ATP酶染色可以区分两型肌纤维,并可观察肌纤维内部结构及线粒体酶的变化等.结论:通过骨骼肌酶与非酶组织化学染色技术,可以清晰地显示出两型肌纤维的分布情况及各种特征性的病理改变,几种方法可互为补充.     

雪菊黄酮对脂肪变肝细胞的降脂效果

目的：研究雪菊黄酮对发生脂肪变的正常人肝细胞系L-02的影响。方法：医用脂肪乳注射液制备人肝L-02细胞的高脂细胞模型。以不同浓度（20、50、100 μmol/L）的雪菊黄酮进行共培养,分别孵育高脂变性的肝细胞不同时间（3、12、24、48 h）后,用油红脂肪染色法观察细胞脂滴形成情况。检测细胞培养上清内的酶学指标谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）及甘油三酯（TG）的含量。结果：医用脂肪乳培育人肝L-02细胞脂肪变性模型可行。高浓度的雪菊黄酮（100 μmol/L）培养后高脂肝细胞胞浆内脂滴明显减少,TG含量降低。不同孵育时间培育（3、12、24、48 h）后,TG含量随培育时间延长而逐步降低。结论：雪菊黄酮能降低脂肪变性肝细胞中TG的含量,作用效果与雪菊黄酮的作用浓度和培育时间相关,未见明显肝细胞酶学损害。     

高脂饲料中添加丙硫氧嘧啶对大鼠血脂、体质量及体脂的影响

目的 研究添加丙硫氧嘧啶对高脂饲料诱发的高脂血症模型大鼠的血脂、体质量、体脂含量及脂肪细胞大小的影响,探讨含有丙硫氧嘧啶的高脂饲料诱发的高脂血症动物模型的适用性。方法 SD大鼠采用数字表法随机分为4组,分别为正常饲料组、正常饲料+丙硫氧嘧啶组、高脂饲料组、高脂饲料+丙硫氧嘧啶组,分别给予相应的饲料,灌胃给予丙硫氧嘧啶50 mg·kg^-1·d^-1,共4周,期间记录动物的采食量、体质量、体长,检测血脂、转氨酶、甲状腺激素浓度,计算Lee's指数、肝系数、睾周脂肪和肾周脂肪系数,并进行肝脏油红O染色,脂肪组织HE染色,Image J测量脂肪细胞大小。结果 添加丙硫氧嘧啶可显著升高高脂饲料诱发的动物血浆总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C）浓度,肝系数升高,肝脏脂质沉积,造模速度快、效果好,但是随着给予丙硫氧嘧啶时间的延长,动物采食量迅速降低,继之动物体质量、睾周脂肪质量、肾周脂肪质量、脂肪细胞面积及Lee's指数显著降低,同时伴有动物毛色发暗、缺乏光泽、活动减少及对刺激反应下降等。结论 添加丙硫氧嘧啶为制作高胆固醇血症及脂肪肝模型的有效方法,但是在血浆总胆固醇和LDL-C浓度升高、肝脏脂肪沉积的同时,动物体质量明显下降,体脂减少,脂肪细胞面积减小的特点与临床常见的饮食相关的高血脂特征不符,并且丙硫氧嘧啶对多种脂代谢酶有影响,进行降脂药物机制研究时可能会影响对药物作用靶点的分析,因此进行降胆固醇药物药效学研究可适当选用,进行药物机制研究时需根据研究目的慎重选用。     

扩髓及髓腔内固定引发肺脂肪栓塞病理变化的实验研究

目的：探讨临床股骨骨折内固定或人工全髋关节置换术中扩髓，髓腔内固定导致的肺脂肪栓塞的病理变化。方法：精雄性SPF大鼠14只。分为实验组及对照组，每组7只，对照组除扩髓髓腔内固定外，皆同实验组。分别测定两组不同时间的动脉血气，血像，实验后取大鼠左肺行髓过氧化物酶（MPO）检查，大鼠右肺采用肺灌注后行HE染色，光镜下观察。计数骨碎片及骨髓脂肪组织栓塞的肺小动脉及毛细血管数，白细胞栓子形成的肺内血管数，伴有血管周围水肿（“水肿袖”）的血管数，肺泡水肿，肺泡扩张破坏面积，由此计算出肺损伤分数.结果：（1）运用因气显示两组动物在扩髓髓腔内固定后即150min时，Po2差异显著（P＜0．05）；(2)MPO差异显著（P＜0．05）。（3）肺损伤分数两组差异显著（P＜0．05）。结论：扩髓髓腔内固定导致肺小动脉及毛细血管 内骨碎片及骨髓脂肪组织的机械栓塞，以及肺内血管白细胞栓子形成， 中性粒细胞，巨噬细胞浸润等炎性改变，并由此引起肺损伤。     

小鼠急性脂肪栓塞综合征模型中炎症因子及炎症信号通路的激活

目的 研究急性脂肪栓塞动物模型中炎症因子的激活及可能的信号转导途径。方法 经健康雄性C57小鼠尾静脉注射同种异体小鼠肾周脂肪建立小鼠脂肪栓塞模型,采用Bliss法求出脂肪栓塞的半数致死剂量（LD50）。比较实验组（静脉注射LD50的脂肪）和对照组（给予相同剂量的生理盐水）大体和镜下肺组织表现、动脉血气、肺组织干湿质量比值（D/W）、肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性、血浆IL-1β、TNF-α水平以及肺组织匀浆液中IKKβ基因和NF-κB蛋白的表达。结果 与对照组相比,实验组肺组织呈严重损伤表现,血管腔和肺泡腔中有脂滴存积,肺组织D/W明显上升;实验组小鼠动脉血PaO₂明显降低,PaCO₂升高,血浆IL-1β和TNF-α水平显著上升,肺组织MPO活性升高,IKKβ基因表达上调,核转录因子NF-κB表达升高（P<0.05）。结论 炎症反应在脂肪栓塞综合征病理过程中发挥了重要作用,NF-κB相关基因和蛋白表达升高提示NF-κB介导的炎症信号通路参与了脂肪栓塞激发的炎症病理过程。     

同种脂肪所致的犬RDS模型

同种脂肪所致的大呼吸窘迫综合征(RDS)的血气、X线胸片及病理改变均与成人呼吸窘迫综合征相近,是较理想的RDS模型。肺脂肪栓塞为本模型发病关键,补体激活和氧自由基亦有重要作用,维生素E在抗氧化作用中被消耗。     

制动应刺激造成兔肺脂肪栓塞的实验研究

本研究首次应用制动应激的力法,建立了家兔非创伤肺脂肪栓塞的实验模型。同时测定了左、右心血肝素后血浆脂蛋白酯酶(PHP-LPL)活性和游离脂肪酸(FFA)浓度。结合血浆儿茶酚胺的测定、血气分析、肺形态学(包括超微结构)和组织化学的研究,探讨了肺脂肪栓塞的发生机理。实验观察到,制动应激5h可造成成年家兔肺血管内脂肪栓塞,同时伴有肺环循中PHP-LPL活性和FFA浓度增高,低碳酸血症、及肺泡表面活性物质不足的倾向。结果提示,应激时的内环境紊乱,足以造成肺脂肪栓塞,而无须骨折等机械因素的参与。     

漆黄素及漆黄素纳米粒对卵巢癌细胞作用的研究

目的 探讨一种新的饮食性黄酮类化合物——漆黄素及漆黄素纳米粒对人卵巢癌细胞株SK0V3的抗增殖和促凋亡作用。 方法 体外实验采用MTT法测定漆黄素和漆黄素纳米粒作用后对卵巢癌细胞存活率的影响，选取下一步实验的药物浓度。裸鼠荷瘤后取肿瘤块制成SKOV3细胞混合液。取15只裸鼠腹腔接种人卵巢癌SKOV3细胞混合液肿瘤造模，第5天随机分成3组尾静脉注射药物，每3 d注射1次，每次0.2 mL，共12次:A组为肿瘤模型组（注射50 mL/L葡萄糖溶液），B组为漆黄素组（注射1.25 mg/kg漆黄素），C组为漆黄素纳米粒组（注射1.25 mg/kg漆黄素的米粒）。治疗结束后记录肿瘤质量，取心、肝、脾、肺和肾切片行HE染色观察组织病理损害，肿瘤组织切片通过Ki67免疫组织化学染色检测SKOV3细胞增殖，TUNEL法检测SKOV3细胞凋亡。 结果 MTT结果显示，随漆黄素及漆黄素纳米粒质量浓度的增加，SKOV3细胞的存活率减小；漆黄素及漆黄素纳米粒半数抑制浓度（IC₅₀）值分别为125~250 μg/mL和62.5~125 μg/mL，故选择工作浓度为125 μg/mL。共11只小鼠完成体内肿瘤造模并存活至实验结束（A组3只，B组4只，C组4只）。A组裸鼠腹腔内散在菜花状肿瘤结节，B、C组仅见极小颗粒状肿瘤结节，B、C组腹腔内肿瘤质量相当（P>0.05），但均低于A组（P<0.05）。各组心、肝、脾、肺和肾切片HE染色均未见明显损害。与A组相比，B组和C组肿瘤组织增殖指数Ki67均降低，细胞凋亡率均升高（P<0.05），但B组和C组之间差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 漆黄素及漆黄素纳米粒均具有抗卵巢癌细胞增殖和促进其凋亡的作用，安全性好。     

苯妥英锌的药理毒理学初步研究

苯妥英锌腹腔注射的ED_(50)和LD_(50)分别为9.74和138.1mg/kg,治疗指数与苯妥英钠接近,刺激性比苯妥英钠小。在亚急性毒性试验中,白细胞总数和血小板数似有减少趋势,血红蛋白含量和血清谷丙转氨酶活力无较大改变。服药结束后,心脏、肝脏、肾脏和全脑病理切片观察,两药毒性差异无显著性。