抗恶性疟原虫单克隆抗体的研究

在二次细胞融合中,经2～4次克隆后已建成28株抗恶性疟原虫(FCC-1/HN)的杂交瘤。其中针对裂殖子和成熟裂殖体抗原的McAb有9株,仅对裂殖体特异的有4株,对裂殖体和滋养体期原虫产生荧光反应的有15株。 应用间接荧光抗体技术,检查这28株McAb对7种不同疟原虫的交叉反应。结果,仅有93D4和94B5属株特异性McAb,其余各株均对恶性疟原虫(安徽株)有明显荧光反应。有5株McAb(92A3,94A2,94A6,94B3和96B5)对间日疟原虫也有交叉,而96B5株还对诺氏疟原虫和含蟹猴疟原虫产生交叉反应。     

抗人间日疟原虫子孢子单克隆抗体的研制及初步鉴定

为了准确快速地检查子孢子,提高媒介按蚊的检测水平,我们开展了抗人间日疟原虫(P.V)子孢子单克隆抗体(McAb)的研制,经过克隆培养筛选,获得了8株抗人P.V子孢子McAb的杂交瘤细胞株,并制备了抗体效价高、特异性强的McAb。材料和方法一、抗原制备抗原为人P. V子孢子。采集P.V病人血,膜饲中华按蚊,于第15d处死蚊子,用玻璃棉套管离心法收集子孢子,用白细胞计数板计数,-20℃保存备用。二、动物免疫和免疫脾细胞的制备用收集的子孢子,免疫10周龄的BALB/c小鼠三次,每次用子孢子10～12万条,每次间隔10～14d,于融合前3d加强     

用间接荧光抗体方法筛选抗间日疟原虫子孢子单克隆抗体

用间接荧光抗体方法筛选抗间日疟原虫子孢子单克隆抗体云南省疟疾病防治研究所思茅６６５０００余蕾，余文祥，李菊异，李崇珍ＩＦＡ是检测抗体的较敏感而特异的方法。我们用此法筛选抗间日疟原虫（Ｐ．ｖ）子孢子单克隆抗体，获得较满意结果。材料与方法１抗原与试剂子孢...     

用ELISA检测乌头按蚊体内恶性疟原虫子孢子的初步研究

本文比较了用ELISA法与解剖蚊体法检测恶性疟子孢子的效果。以实验室喂养的乌头按蚊叮咬带配子体的志愿者。每组20只蚊,于第10,11及12天以氯伤致死,解剖10只蚊,检查唾腺中的子孢子;另10只置小指管中冷冻后保存于有干燥剂的容器内,置-20℃ 2～3周。每只蚊加50μl含NP-40的BB液(含1％ BSA,0.5％酪蛋白,0.03％硫汞撤及0.01％酚红的PBS)研磨成匀浆后,再加350μl BB液,即成蚊提取液。保存于-20℃备用。以Writz改良的ELISA二点法进行检     

用单克隆抗体鉴定恶性疟原虫裂殖子表面抗原

用海南省恶性疟原虫Fcc7801/HN作为抗原,制备的抗恶性疟原虫单克隆抗体C6株具有明显的抑制体外恶性疟原虫生长的作用,并且与恶性疟原虫Fcc-1/HN,Fcc7802/HN,Fcc8703/JS和伯氏疟原虫、食蟹猴疟原虫有较广泛的交叉免疫荧光反应。用免疫电镜观察,此株单克隆抗体能识别恶性疟原虫裂殖子表面抗原,用免疫印迹法测得该抗原分子量为71kDa,此抗原有可能成为疟疾疫苗的候选抗原。     

感染恶性疟原虫或间日疟原虫蚊体内子孢子和环子孢子抗原的定量测定

准确地估计蚊虫体内疟原虫子孢子的数量对于疟疾的监测、预防和媒介控制都是非常必要的。目前使用的蚊虫体内子孢子数量测定法是定量环子孢子(CS)ELISA试验。该法快速、准确,具有种特异性。但近年来的实践证明,该法需要改进。为使目前用于恶性和间日疟原虫子孢子定量检测的CS ELISA法试剂标准化,以及进一步确定蚊虫体内CS抗原量与子孢子数之间的相关性,开展了双抗体夹心法ELISA定量测定恶性疟原虫(Pf)、间日疟原虫(Pv210)和Pv247CS抗原和子孢子的研究。抗Pf、Pv210和Pv247CS抗原的单克隆抗体(MAb)来自WHO疟疾子孢子参考实验…     

经EB病毒转化的人淋巴细胞产生抗恶性疟原虫子孢子的抗体

为了制备抗恶性疟原虫红内期无性体的人体单克隆抗体,作者曾用聚蔗糖-泛影葡胺液密度梯度离心获得的外周血淋巴细胞,与EB病毒的细胞株B95-8于37℃培养1小时后,以含有20%V/V胎牛血清、100IU/ml青霉素、100mg/ml链霉素和2 mmol/l谷氨酰胺的RPMI 1640培养基制成10~6细胞/ml的悬液。将上述淋巴细胞加入25 ml Falcon     

单克隆抗体对间日疟原虫子孢子入侵培养细胞及…

本文在体外观察了抗间日疟原虫子孢子的单克隆抗体２Ｆ２，ＮＶＳ３和２Ｅ１０以及抗间日疟原虫红内期单克隆抗体４Ｂ２，８Ｅ３对日疟原虫子孢子入侵入肝癌细胞以及侵入后的进一步发育的影响。     

恶性疟原虫子孢子重组DNA疫苗的安全性和功效

恶性疟原虫环子孢子基因的克隆化和环子孢子重复抗原决定簇的确定促进了人疟疫苗研究的迅速发展,一系列在大肠杆菌中表达的恶性疟原虫环子孢子蛋白可以作为子孢子候选疫苗,本文报道了其中一种用明矾吸附的重组蛋白在人体阶段Ⅰ的安全性和免疫原性试验和初步功效试验的结果,这种重组蛋白被命名为恶性疟子孢子疫苗1(FSV-1)。把FSV-1分为5种剂量(10μg、30μg、100μg、300μg和800μg),每种剂量给3名经体检证明健康的志愿者作肌肉注射,初次免疫     

恶性疟原虫子孢子从猴感染给猴的实验

Collins等(1972)报告按蚊能感染夜猴的恶性疟原虫,并能传染给人或猩猩,完成孢子生殖环。但至今用子孢子从猴感染猴仅有一次成功。Sodeman等(1969)观察到夜猴体内恶性疟原虫红细胞外期裂殖体的部分发育,但染色后表现异常,也不释放感染性裂殖子,认为夜猴的肝细胞里缺乏一种裂殖子发育成熟所必需的物质。从野外捕回来经实验感染的夜猴,在肝组织的病理检查中,6只夜猴中发现2只有进行性脂肪肝或水肿性的肝     

PCR检测蚊体内恶性疟原虫子孢子方法的建立

为建立能检测蚊体内恶性疟原虫的聚合酶链反应技术,根据恶性疟原虫ＣＳＰ基因序列,设计合成１对引物,以Ｃｈｅｌｅｘ－１００煮沸法制备ＤＮＡ模板,采用ＰＣＲ方法,恶性疟原虫子孢模板预期被扩增出２４５ｂｐ的ＤＮＡ条带,并将该法与蚊虫解剖镜检子孢方法相比较。结果经人工感染恶性疟原虫的３１只大劣按蚊中１４只ＰＣＲ阳性,被扩增出预期大小的ＤＮＡ片段,其余１７只ＰＣＲ阴性;以该技术检测野外捕捉的９８只按蚊,结果均     

PCR检测蚊体内恶性疟原虫子孢子方法的建立

为建立能检测蚊体内恶性疟原虫的聚合酶链反应技术 ,根据恶性疟原虫 CSP基因序列 ,设计合成 1对引物 ,以 Chelex- 10 0煮沸法制备 DNA模板 ,采用 PCR方法 ,恶性疟原虫子孢子模板预期被扩增出 2 45 bp的 DNA条带 ,并将该法与蚊虫解剖镜检子孢子方法相比较。结果经人工感染恶性疟原虫的 31只大劣按蚊中 14只 PCR阳性 ,被扩增出预期大小的 DNA片段 ,其余 17只 PCR阴性 ;以该技术检测野外捕捉的 98只按蚊 ,结果均为阴性。 PCR法与解剖镜检法相比较 ,检测结果完全符合 ;相当于 1/ 10个阳性蚊子的模板即可满足 PCR检测。该检测体系灵敏、特异 ,对于蚊体内恶性疟原虫的检测具有一定的应用价值     

伯氏疟原虫子孢子的能量代谢

本文通过对伯氏疟原虫子孢子能动性(能量的消耗和产生的标志)的观察,研究子孢子的能量代谢。材料和方法:解剖人工感染伯氏疟原虫后16～21天的斯氏按蚊涎腺分离子孢子。将摘出的涎腺放在不含氨基酸、谷酰胺和葡萄糖的不完全组织培养基199内研碎,子孢子悬液经4g离心沉淀1分钟,除去较大的蚊     

人工肽(NANP)_(40)ELISA法检测恶性疟原虫子孢子抗体

自然感染或实验室感染恶性疟原虫子孢子后均可产生保护性免疫。由自然感染而产生的抗子孢子抗体可识别位于子孢子表面的环子孢子(CS)蛋白。CS蛋白分子含有4～12个氨基酸组成的片段。这些氨基酸是连续重复10～37次。此重复片段可能是抗体识别的靶位点,并已可能通过基因工程或人工合成等方法加以制备。采用世界卫生组织免疫研究和培训中心Giudice G Del博士惠赠的人工合成恶性疟原虫CS蛋白重复序列肽链(天冬酰胺-丙氨酸-天冬酰胺-脯氨酸)_(40),即(NANP)_(40)作抗原,以酶联免疫吸附试验(ELISA)法对55份恶性疟患者血样进行抗CS蛋白抗体的检测。现将结果简述如下。 试验基本按Giudice(1987)方法。(NANP)_(40)     

对恶性疟原虫裂殖子表面抗原的单克隆抗体的特性研究

在作者系列研究的基础上,本文报告应用单克隆抗体对恶性疟原虫(P.f)裂殖子表面的一种分子量20千道尔顿(Kd)的蛋白质进行了进一步的特性鉴定,并对其入侵红细胞的作用作了探讨。实验采用体外培养的恶性疟原虫冈比亚株(FCR-3),虫体经明胶山梨醇同步化后,根据实验要求标记~(35)(S)甲硫氨酸或~3[H]葡糖胺或~3[H]脯氨酸,然后继续培养至分析取     

抗恶性疟原虫有性期单克隆抗体的制备和鉴定

以培养的恶性疟原虫ＮＦ５４（３Ｄ７）株配子体蛋白抽提液及我国云南现场采集的恶性疟原虫细胞骨架分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，以ＩＦＡ法筛选出８株抗恶性疟原虫有性期ＭｃＡｂ杂交瘤细胞株。经免疫球蛋白类别鉴定，６株为ＩｇＧ１（Ｍ２Ａ１０Ｃ９、Ｍ２Ｃ１Ｂ８、Ｍ４Ｃ７Ｂ１０、Ｍ４Ｇ１２Ｃ１、Ｍ５Ｂ７Ｅ６和Ｍ６Ｅ１Ｇ１１），２株为ＩｇＭ（Ｍ４Ｄ７Ｆ７和Ｍ６Ｆ４Ｄ６）。其中３株ＭｃＡｂｓ（Ｍ４Ｃ７Ｂ１０、Ｍ４Ｄ７Ｆ７和Ｍ６Ｅ１Ｇ１１）的靶抗原定位于配子体以及大滋养体和裂殖体期无性体原虫；其余５株仅定位于配子体。经Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹试验，ＭｃＡｂ所识别的蛋白区带各异（１６－１２０ｋＤ），与已发现的有性期特异性抗原相比较，３２ｋＤ抗原国内外尚未报道。各株ＭｃＡｂ与猴疟（Ｐ．ｃｙｎｏｍｏｌｇｉ）红内期、鸡疟（Ｐ．ｇａｌｉｎａｃｅｕｍ）子孢子和杜氏利什曼原虫前鞭毛体均无交叉反应。     

抗恶性疟原虫有性期单克隆抗体的制备和鉴定

以培养的恶性疟原虫ＮＦ５４（３Ｄ７）株配子体蛋白抽提液及我国云南现场采集的恶性疟原虫细胞骨架分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，以ＩＦＡ法筛选出８株抗恶性疟原虫有性期ＭｃＡｂ杂交瘤细胞株。经免疫球蛋白类别鉴定，６株为ＩｇＧ１（Ｍ２Ａ１０Ｃ９、Ｍ２Ｃ１Ｂ８、Ｍ４Ｃ７Ｂ１０、Ｍ４Ｇ１２Ｃ１、Ｍ５Ｂ７Ｅ６和Ｍ６Ｅ１Ｇ１１），２株为ＩｇＭ（Ｍ４Ｄ７Ｆ７和Ｍ６Ｆ４Ｄ６）。其     

以单克隆抗体鉴定三日疟环子孢子蛋白质及检测巴氏疟原虫子孢子共有的抗原决定簇

本文报道以抗三日疟原虫子孢子单克隆抗体鉴定同种疟原虫的环子孢子蛋白质和研究三日疟原虫与猴巴氏疟原虫两者间的关系。以弗氏按蚊叮咬感染了三日疟的夜猴,吸血后15～21天解剖唾腺获得子孢子,经多次静脉接种免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与浆细胞瘤细胞融合得杂交瘤细胞,从接种杂交瘤小鼠腹水提纯单克隆抗体(MoAB 6BlO)。环子孢子蛋白质鉴定,以低温贮存的IFAT滴度1:≥50,000、活的三日疟子孢子直接放入于含2%SDS、10%甘油、     

在斯氏按蚊唾液中检测恶性疟原虫和伯氏疟原虫子孢子和环子孢子蛋白

唾液是疟原虫子孢子从蚊体进入宿主的载体。由唾液排出的子孢子量可能与唾液总