纳达合剂对胆汁反流性胃炎大鼠胃黏膜TNF-α、IL-8、ICAM-1及MCP-1的影响

  目的：探索中药纳达合剂对胆汁反流性胃炎(BRG)大鼠胃黏膜及相关炎症因子的影响。  方法：采用灌胃牛胆酸钠+胰酶+卵磷脂法制备胆汁反流性胃炎模型。正常组、模型组灌胃生理盐水,纳达合剂低、中、高剂量组及麦滋林组分别予灌胃相应药物干预。实验结束,通过病理切片HE染色观察各组大鼠胃黏膜炎症变化情况,ELISA法检测大鼠胃黏膜白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1),Western blot方法检测大鼠胃黏膜单核细胞趋化因子-1(MCP-1)。  结果：模型组大鼠胃黏膜炎症细胞浸润明显,炎症积分较正常组显著增高(P<0.01);与模型组比较,各药物干预组均可以显著改善大鼠胃黏膜炎症情况(P<0.01),其中纳达合剂组呈剂量依赖性,且与麦滋林组比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组大鼠胃黏膜炎症因子TNF-α、IL-8、ICAM、MCP-1蛋白表达较正常组显著增高(P<0.01);与模型组比较,纳达合剂各剂量组呈剂量依赖性地显著降低TNF-α、IL-8、ICAM、MCP-1蛋白表达(P<0.05或P<0.01),药麦滋林组亦可显著减少胃黏膜TNF-α、IL-8、ICAM、MCP-1蛋白表达(P<0.01),而纳达中、高剂量组在改善TNF-α表达方面优于麦滋林组(P<0.05或P<0.01),纳达高剂量组在改善ICAM-1表达方面优于麦滋林组(P<0.01)。  结论：纳达合剂可显著改善胆汁反流性胃炎大鼠的胃黏膜病理,并对相关炎症因子有明显的抑制作用。     

糖肾1号方含药血清对高糖环境下培养的HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白水平的影响

[目的]观察糖肾1号方含药血清干预高糖环境下培养的人肾小管上皮细胞（HK-2）中转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）mRNA和蛋白水平,初步探索糖肾1号方治疗糖尿病肾病可能的作用机制。[方法]选用HK-2细胞,分为空白组、高糖组、空白血清组、糖肾1号方含药血清低剂量组、糖肾1号方含药血清高剂量组。高糖环境下培养24 h后,进行血清干预24 h,培养48 h后收集细胞,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白表达水平。[结果]1）与空白组相比,高糖组的TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白表达水平明显增多,差异具有统计学意义（P<0.05）。2）与高糖组相比,糖肾1号方低剂量组、糖肾1号方高剂量组TGF-β1、α-SMA、FN mRNA表达水平减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。3）与高糖组相比,糖肾1号方低剂量组FN蛋白表达水平减少,差异具有统计学意义（P<0.05）,糖肾1号方高剂量组α-SMA、FN蛋白表达水平减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。4）与糖肾1号方低剂量组相比,糖肾1号方高剂量组TGF-β1、FN mRNA降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。[结论]糖肾1号方含药血清可抑制TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和α-SMA、FN蛋白表达水平,糖肾1号方高剂量组效果优于糖肾1号方低剂量组。     

益气活血法对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

[目的]观察益气活血法中药方剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、果蝇MAD类似基因2/3(Smad2/3)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的调节,探讨其对肾小管上皮细胞转分化的影响。[方法]采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型。将30只大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组、西药组。术后14d,观察梗阻肾组织病理改变,用免疫组化方法检测肾组织TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达。[结果]益气活血法能减轻肾间质纤维化程度,并能下调TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达。[结论]益气活血法可通过下调TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达,从而抑制大鼠肾小管上皮细胞转分化。     

积雪草苷对平阳霉素诱导的大、小鼠肺纤维化的保护作用

  目的：观察积雪草苷对平阳霉素诱导的大、小鼠肺纤维化的保护作用,并探讨其作用机制。  方法：①小鼠实验:将KM小鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照(醋酸泼尼松,5 mg/kg)组和积雪草苷低剂量(40 mg/kg)、高剂量(80 mg/kg)组,每组10只。除对照组外,其他各组小鼠采用一次性气管注入平阳霉素(5 mg/kg)的方法诱导肺纤维化模型。造模次日,各组灌胃给予相应的药物干预,连续28 d。末次给药后,分离肺组织;测定肺指数;ELISA检测肺组织白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β含量;PCR检测肺组织转化生长因子-β₁(TGF-β₁)mRNA表达。②大鼠实验:将SD大鼠随机分为对照组、模型组、阳性对照(醋酸泼尼松,4 mg/kg)组和积雪草苷低剂量(20 mg/kg)、高剂量(40 mg/kg)组,每组10只。除对照组外,其他各组大鼠采用一次性气管注入平阳霉素(5 mg/kg)的方法诱导肺纤维化模型。造模次日,各组灌胃给予相应的药物干预,连续28 d。末次给药后,分离肺组织;测定肺指数;HE染色后光镜下观察各组大鼠肺组织形态学变化;ELISA检测肺组织IL-6、TNF-α、IL-1β含量;PCR检测肺组织TGF-β₁mRNA表达。  结果：①小鼠实验:模型组小鼠肺指数,肺组织IL-6、TNF-α、IL-1β含量及TGF-β₁ mRNA表达均较对照组显著升高(P<0.01)。与模型组相比,阳性对照组与积雪草苷低、高剂量组小鼠的肺指数及肺组织IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著降低(P<0.05,P<0.01),积雪草苷低、高剂量组小鼠肺组织TGF-β₁ mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。②大鼠实验:模型组大鼠肺指数,肺组织IL-6、TNF-α、IL-1β含量及TGF-β₁ mRNA表达均较对照组显著升高(P<0.01)。与模型组相比,阳性对照组与积雪草苷低、高剂量组大鼠肺指数显著降低(P<0.05,P<0.01),肺组织TGF-β₁ mRNA表达水平显著降低(P<0.01);阳性对照组和积雪草苷高剂量组大鼠肺组织IL-6、TNF-α、IL-1β含量较模型组显著降低(P<0.05,P<0.01),积雪草苷低剂量组TNF-α、IL-1β含量较模型组明显降低(P<0.05)。③HE染色观察显示,模型组大鼠肺泡结构破坏,成纤维细胞增生,伴有大量炎症细胞浸润;积雪草苷低、高剂量组和阳性对照组大鼠上述病变均有改善,炎症细胞浸润和肺泡萎陷减轻。  结论：积雪草苷对平阳霉素诱导的大、小鼠肺纤维化具有保护作用,其机制可能与下调TGF-β₁mRNA表达、抑制炎症细胞因子激活有关。     

复方中药组分对糖尿病大鼠血浆ET-1、AngI、AngⅡ的影响

  目的：观察复方中药组分(黄连生物碱40%、三七总皂苷35%、麦冬多糖25%)对糖尿病模型大鼠血浆内皮素-1(ET-1)、血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的影响。  方法：用链脲菌素制备糖尿病大鼠模型,随机分为5组(模型对照组、二甲双胍组及高、中、低剂量中药组),每组各10只;另取10只作为空白对照组。其中模型对照组和空白对照组用0.9%NaCl溶液10 ml·kg-1·d-1,二甲双胍组用二甲双胍0.05 mg·kg-1·d-1,高、中、低剂量中药组分别用中药组分0.45、0.15、0.05 g·kg-1·d-1,连续灌胃干预4周后断头采血;用酶联免疫吸附法检测血浆中ET-1、AngⅠ、AngⅡ的含量。  结果：模型对照组ET-1、AngⅠ、AngⅡ含量明显高于空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01)。中、高剂量中药组和二甲双胍组ET-1、AngⅠ含量低于模型对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);高剂量中药组与二甲双胍组AngⅡ含量低于模型对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。高剂量中药组AngⅡ含量低于二甲双胍组,差异有统计学意义(P＜0.05)。  结论：复方中药组分可能通过降低ET-1、AngⅠ和AngⅡ的水平减轻血管内皮损伤,起到改善糖尿病血管并发症的作用。     

淫羊藿苷对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞上皮间质转分化的作用及机制

[目的] 观察淫羊藿苷对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮-间质转化的作用以及对Smad信号通路的影响。[方法] 将肾小管上皮细胞(HK-2)分为空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+淫羊藿苷(10、20、40 μmol/L)组。采用CCK-8法检测10、20、40 μmol/L的淫羊藿苷干预10 μg/L TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞的增殖影响; 使用实时定量聚合酶链式反应法检测检测上皮间质转化分管关键因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)mRNA的表达量; 采用Western blot检测α-SMA、E-cadherin、Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达量; 划痕实验和侵袭迁移小室法(Transwell小室)分别检测HK-2细胞的迁移和侵袭能力。[结果] 与空白对照组比较, TGF-β1组的HK-2细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增高(P<0.05), α-SMA、vimentin蛋白和mRNA以及p-Smad2/3蛋白表达量显著增加(P<0.05), 而E-cadherin、Smad2/3蛋白和mRNA表达量显著降低(P<0.05)。与TGF-β1组比较, TGF-β1+淫羊藿苷(10、20、40 μmol/L)组的HK-2细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05), α-SMA、vimentin蛋白和mRNA以及p-Smad2/3蛋白表达量显著降低(P<0.05), 而E-cadherin、Smad2/3蛋白和mRNA表达量显著增加(P<0.05)。淫羊藿苷对TGF-β1诱导HK-2细胞抑制增殖、迁移和侵袭能力以及上皮间质转化无剂量依赖性。[结论] 淫羊藿苷可以抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞的上皮-间质转化的分化, 可能与抑制Smad信号通路有关。     

实验性糖尿病鼠大血管病变TGF-β1和 CTGF的表达及中药的干预作用

[目的] 通过观测实验性糖尿病鼠大血管病变中转化生长因子(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)相关表达,揭示糖尿病大血管病变的发病机制。并通过中药干预的观察,明确中药在预防和治疗糖尿病大血管病变的靶点。[方法] 雄性SD大鼠80只,其中正常对照组10只,70只造糖尿病模型并随机分为5组:模型组(n=14),中药高、中、低剂量组(n=14),二甲双胍组(n=14).6组大鼠均予普通饲料加干预喂养12周后,取股动脉,应用免疫组化法观察糖尿病(DM)大鼠大血管中CTGF、TGF-β1表达的部位及其变化。[结果] TGF-β1主要在胞浆中表达。模型组TGF-β1表达呈强阳性反应,中药干预组TGF-β1表达明显下降 (P<0.01),二甲双胍对TGF-β1表达有影响,但与中药高剂量组比较差异具有统计学意义(P<0.05).CTGF在模型组血管管壁下层细胞浆可见大量棕黄色物质表达呈强阳性反应,各药物干预组血管细胞CTGF表达都明显下降(P<0.01),中药高剂量组与西药对照组表达比较差异有统计学意义。[结论] 1)糖尿病大血管病变可能与纤维化有关。2)中药组方加味桃核承气汤能有效降低致纤维化因子TGF-β1、CTGF在实验性糖尿病鼠大血管病变中的表达。其对DM大血管病变有改善作用,并存在剂量依赖关系。     

羊栖菜多糖对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的影响

目的 研究羊栖菜多糖对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的影响,探讨其抗肺纤维化作用及机制。方法 将实验分成对照组、TGF-β1组、TGF-β1+不同剂量羊栖菜多糖组（25、50、100μg/ml）,采用MTT法检测细胞增殖,RT-PCR法检测Smad 3、Smad 7、α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA的表达,ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白的表达, Western blot法检测α-SMA的表达。结果 TGF-β1能诱导肺成纤维细胞增殖及表达Smad3 mRNA、Smad7 mRNA、Ⅰ型胶原、α-SMA（P < 0.05）。羊栖菜多糖可以不同程度抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞的增殖以及Smad3mRNA、Ⅰ型胶原和α-SMA的表达,且呈剂量依赖性（P < 0.05）,能促进TGF-β1诱导的肺成纤维细胞表达Smad7 mRNA, 呈剂量依赖性（P < 0.05）。结论 在离体细胞,羊栖菜多糖能抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖、分化与表达,其机制可能与其下调Smad3,促进Smad 7表达从而抑制TGF-β/Smads信号通路有关。     

金三莪对实验性肝纤维化大鼠TGF-β1、Smad3、Smad7及CTGF表达的影响

[目的]观察中药金三莪抗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的疗效及作用机制。[方法]将50只Wistar大鼠分为正常对照组、模型对照组、中药治疗1组及2组,于造模第1周及第4周开始用金三莪治疗。免疫组化技术检测转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、Smad7及结缔组织生长因子(CTGF)在肝内表达及其在细胞中的定位,肝组织电镜检查,放射免疫法检测血清透明质酸(HA)含量。[结果]经中药金三莪治疗后肝纤维化大鼠肝组织内TGF-β1、Smad3及CTGF表达降低,而Smad7的表达增加,TGF-β1、Smad3及CTGF的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆,Smad7则主要在肝细胞浆表达。电镜检查中药治疗组大鼠肝细胞结构趋于正常,纤维组织变薄。模型组血清HA含量明显高于正常组(P<0.01),中药治疗1、2组血清HA含量明显低于模型组(P<0.05)。[结论]中药金三莪能有效地减轻四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的损伤及纤维化程度,其机制可能是抑制肝内TGF-β1、Smad3及CTGF并促进Smad7表达。     

肾去交感神经术对心力衰竭大鼠心功能及转化生长因子β1的影响

目的 探讨肾去交感神经术(renal sympathetic denervation, RDN)对心力衰竭大鼠心功能和心肌转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达水平的影响。方法 成年雄性Wistar大鼠随机分为正常组对照组、单纯假手术组、肾去交感神经组(RDN组)、心力衰竭组4组。预处理后用异丙肾上腺素皮下注射法制作大鼠心力衰竭模型。心脏彩超评价大鼠心肌组织结构和功能的变化。Masson染色测算大鼠心肌胶原容积分数(collagen volume fraction, CVF),评价大鼠心肌纤维化程度。RT-PC法检测大鼠心肌TGF-β1mRNA的相对表达水平。免疫组化法测心肌组织TGF-β1蛋白的相对表达。结果 RDN组大鼠左心室射血分数、左心室短轴缩短率高于心力衰竭组,而左心室舒张末期容积(ml)更低(射血分数:72.66%±7.95% vs 64.21%±6.23%, P<0.05;短轴缩短率:37.05%±5.30% vs 31.38%±1.65%,P<0.05;舒张末期容积:0.765±0.003 vs 0.912±0.002ml,P<0.05)。RDN组胶原容积分数低于心力衰竭组(13.96%±8.41% vs 59.69%±24.31%, P<0.05),TGF-β1mRNA的相对表达低于心力衰竭组(0.478±0.012 vs 0.896±0.025,P<0.05),TGF-β1蛋白表达平均吸光度值低于心力衰竭组(5.02±0.5 vs 6.99±0.39,P<0.05)。结论 肾去交感神经术能抑制心力衰竭大鼠心肌纤维化并改善心功能,可能与抑制心肌组织TGF-β1的表达途径有关。     

低剂量超短波治疗对大鼠脊髓损伤后TGF-β1、 HIF-1α和Nogo-NgR通路的影响

目的 探讨低剂量超短波治疗对大鼠脊髓损伤后转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、缺氧诱导因子1-α(hypoxia inducible factors 1-α,HIF-1α)和Nogo-NgR通路相关基因及蛋白表达的影响。方法 将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、超短波(ultrashort wave,USW)组,每组10只。对照组仅暴露脊髓,模型组、USW组采用改良Allen法建立脊髓损伤模型,USW组在造模24h后每日给予低剂量超短波干预,持续4周。采用运动评分量表(Basso-Beattie-Bresnahan,BBB)和斜板评分评价大鼠的后肢运动功能情况,利用Real-time PCR及Western blot法检测脊髓组织中TGF-β1、HIF-1α、Nogo-A、NgR mRNA及蛋白表达水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠BBB评分与斜板评分显著降低(P<0.05),TGF-β1、HIF-1α、Nogo-A、NgR mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,USW组大鼠BBB评分与斜板评分显著升高(P<0.05),TGF-β1、HIF-1α、Nogo-A、NgR mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论 脊髓损伤后进行超短波治疗可以降低TGF-β1、HIF-1α、Nogo-A和NgR的基因和蛋白的表达,促进大鼠神经功能恢复。     

补肾中药对大剂量氢化可的松诱导的Y1细胞皮质酮合成的作用

  目的：探讨常用补肾中药对大剂量氢化可的松诱导的Y1细胞皮质酮合成的作用。  方法：采用水提醇沉法制备淫羊藿、仙茅、巴戟天、肉苁蓉、杜仲、菟丝子、补骨脂、知母、黄柏、生地黄、六味地黄丸和金匮肾气丸等常用补肾中药和复方的提取物。①分别以不同浓度(0、2、4、8、16、31、63、125、250、500、1 000 μg/ml)的补肾中药或复方干预细胞48 h,MTT法检测Y1细胞增殖的情况,筛选各单味中药和复方的适宜浓度。②将细胞分为对照组、模型组和中药(复方)组。除对照组外,其他各组Y1细胞给予10 μmol/L氢化可的松和5 μmol/L H89(促肾上腺皮质激素信号阻断剂)诱导模型;造模同时,各中药(复方)组给予相应提取物。药物干预48 h后,PCR检测类固醇合成急性调节蛋白(Star)、胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1)、21α-羟化酶1(Cyp21a1)、11β-羟化酶1(Cyp11b1)、3β-羟基类固醇脱氢酶1(Hsd3b1)、3β-羟基类固醇脱氢酶2(Hsd3b2)等mRNA表达;Western blot检测StAR、CYP11A1、CYP11B1、3β-HSD1、3β-HSD2的蛋白表达;ELISA检测细胞培养液皮质酮含量。  结果：①MTT检测结果显示,黄柏对Y1细胞增殖具有明显的抑制作用。筛选出的适宜药物浓度分别为黄柏10 μg/ml、知母100 μg/ml、其他中药(复方)200 μg/ml。②各单味中药和复方干预模型细胞48 h后,PCR检测结果显示,淫羊藿、仙茅、黄柏和生地黄对皮质酮合成的相关基因影响较显著。③与对照组相比,模型组Star、Cyp21a1的mRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01),Cyp11a1、Cyp11b1和Hsd3b1的mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,生地黄组Cyp21a1和Hsd3b1的mRNA表达显著降低(P<0.01);仙茅组Cyp21a1、Cyp11a1和Hsd3b1的mRNA表达显著降低(P<0.01);淫羊藿组Star和Hsd3b1的mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01),Cyp21a1 mRNA表达显著降低(P<0.01);黄柏组Cyp21a1、Cyp11a1、Cyp11b1和Hsd3b1的mRNA表达显著降低(P<0.01)。④与模型组相比,仙茅组3β-HSD2蛋白表达显著降低(P<0.01),黄柏组StAR、CYP11A1和3β-HSD2蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),3β-HSD1蛋白表达显著升高(P<0.01)。⑤与模型组相比,仙茅、淫羊藿、黄柏作用后皮质酮含量显著降低(P<0.01)。  结论：大剂量氢化可的松可诱导Y1细胞培养液皮质酮含量显著升高。补肾中药淫羊藿对模型细胞的皮质酮合成具有促进作用,可上调Star和Hsd3b1基因表达;而黄柏则具有抑制作用,可下调StAR、CYP11A1和3β-HSD2蛋白表达,降低皮质酮含量。     

糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及对TGF-β1、HO-1干预作用的研究

[目的]探讨糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及对转化生长因子（TGF）-β1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、血红素氯合酶-1（HO-1）干预作用。[方法]制备小鼠含药血清;培养肾小管上皮细胞分为：空白对照组、高糖组（30 mmol/L葡萄糖）、空白血清组（30 mmol/L葡萄糖+10%空白血清）、糖肾方低剂量血清组（30 mmol/L葡萄糖+10%低剂量含药血清）、糖肾方高剂量血清组（30 mmol/L葡萄糖+10%高剂量含药血清）。使用4-甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖的影响。运用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测肾小管上皮细胞中TGF-β1、HO-1和α-SMA蛋白的表达。[结果]高糖诱导下,肾小管上皮细胞呈成纤维细胞样的长梭形,细胞核呈梭形改变。MTT检测：与空白组比较,高糖组光度值明显增高（P<0.05）;与高糖组比较,高低剂量含药血清组在培养24 h后吸光度值均有下降,吸光度差异有统计学意义（P<0.05）,且高剂量组光度值下降强于低剂量组（P<0.05）。Western blotting及RT-PCR测定实验结果显示：与空白对照组细胞对比,高糖组中TGF-β1、α-SMA含量增加;经过含药血清干预后,高糖诱导的HK-2细胞TGF-β1、α-SMA含量降低,差别有统计学意义（P<0.05）;糖肾方高、低剂量组血清比较,在降低TGF-β1方面,高剂量组效果较好（P<0.05）,在降低α-SMA方面没有统计学差异（P>0.05）。HO-1在高糖诱导后含量稍升高,与空白对照组对比,差异有统计学意义（P<0.05）;在经过糖肾方含药血清干预后,含量升高,与高糖组对比,差异有统计学意义（P<0.05）,糖肾方高低剂量组血清比较,升高HO-1含量方面没有统计学差异（P>0.05）。[结论]糖肾方通过抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖和干预TGF-β1、α-SMA、HO-1相关分子的表达,可以抑制细胞外基质成分沉积,减少氧化应激反应,减轻细胞损伤,逆转上皮-间质转分化,从而抑制肾间质纤维化,延缓糖尿病肾病病情进展。     

慢性肾病大鼠血清Bcl-3、Gal-3、TGF-β1与肾间质纤维化的关系

目的 探讨腺嘌呤诱导的慢性肾病大鼠血清Bcl-3、Gal-3、TGF-β1与肾间质纤维化的关系。方法 将20只SPF级雄性大鼠随机分为对照组(n=10)和模型组(CKD组,n=10),模型组给予腺嘌呤灌胃,对照组给予等体积生理盐水灌胃,分别于第3、6周处死大鼠,留取血检测尿素氮、肌酐及Bcl-3、Gal-3、TGF-β1水平,HE染色观察肾脏病理改变,Masson染色观察肾间质纤维化情况及严重程度,免疫组化染色观察肾组织中α-SMA蛋白的表达情况。结果 与对照组相比,CKD组各时间点的血尿素氮、肌酐、Bcl-3、Gal-3和TGF-β1水平均明显升高(P<0.05)。CKD组大鼠肾组织HE染色可见肾小管上皮细胞变性坏死、肾间质纤维化等病理改变;Masson染色可见蓝色胶原沉积明显增多,同时α-SMA蛋白表达也明显升高(P<0.05)。CKD组肾间质胶原纤维相对面积评分明显高于对照组(P<0.05)。相关性分析显示血Bcl-3、Gal-3、TGF-β1水平与肾间质纤维化相对面积呈正相关(r_s=0.776,P<0.001;r_s     

益气活血中药对心力衰竭大鼠MMP-1、TIMP-1影响的实验研究

[目的]观察益气活血复方对慢性心力衰竭大鼠心肌组织基质金属蛋白酶1(MMP-1)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响。[方法]选用雄性SD大鼠,采用冠状动脉结扎术配合饥饿、游泳等方法造成慢性心力衰竭的动物模型。将造模成功的大鼠随机分为3组:模型组、中药组和西药对照组;中药干预6周后,将动物处死,取其心肌组织,利用实时定量荧光聚合酶链反应(PCR)技术和蛋白印迹分析法(Western blot)分别检测心肌组织中MMP-1、TIMP-1基因表达和蛋白表达。[结果]与对照组比较,大鼠模型组MMP-1的表达高于正常组(P<0.01),而TIMP-1的表达明显低于正常组(P<0.01);中药组和西药组MMP-1的表达均低于模型组(P<0.01),TIMP-1的表达明显高于模型组(P<0.01)。[结论]益气活血中药可以下调MMP-1的表达,增加TIMP-1的表达,从而阻止MMP-1对心肌细胞外基质结构的破坏作用,延缓心肌重塑,改善心脏功能,从而阻止CHF的发展。     

Lefty-2蛋白对转化生长因子β1诱导的大鼠肾成纤维细胞NRK-49F转分化的逆转作用及其机制

目的观察Lefty-2蛋白对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾成纤维细胞(NRK-49F)转分化的逆转作用,并探讨其机制。方法对照组:NRK-49F不做处理;刺激组:加入TGF-β1(10ng/ml);低剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(10ng/ml);中剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(20ng/ml);高剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(50ng/ml)。通过细胞免疫荧光法观察各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平,通过Western blot法检测各组α-SMA、FN、Vimentin、p-Smad3蛋白、Smad7蛋白的表达水平。结果细胞免疫荧光结果显示,刺激组α-SMA、FN、Vimentin表达量均显著增加,治疗组较刺激组表达量均明显减少。Western blot法结果显示,治疗组α-SMA、FN、Vimentin的表达量较刺激组均下降(P<0.01),而且呈现剂量效应。刺激组p-Smad3蛋白表达上调,治疗组p-Smad3蛋白的表达量较刺激组明显下调(P<0.01);刺激组Smad7蛋白表达下调,治疗组Smad7蛋白的表达量较刺激组明显上调(P<0.01)。结论 Lefty-2蛋白可逆转TGF-β1诱导的NRK-49F的转分化,可降低α-SMA、FN、Vimentin的表达,可能是通过活化Smad7信号通路,抑制Smad3的磷酸化,从而抑制Smad3信号通路来实现的。     

阿魏酸钠减轻大鼠肾间质纤维化机制的研究

目的探讨阿魏酸钠对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠。肾间质纤维化的保护作用及机制。方法将45只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阿魏酸钠治疗组。分别于UUO术后3、7、14 d处死动物并取梗阻肾组织,比较病理改变;用SP法检测TGF-β1、p-p38MAPK、α-SMA的表达,并比较分析。结果与假手术组相比,模型组TGF-β1、p-p38MAPK、α-SMA的表达显著升高(P<0.05)且随时间延长,升高更显著;与模型组相比,治疗组TGF-β1、P-p38MAPK、α-SMA的表达显著降低(P<0.05);且TGF-β1、p-p38MAPK、α-SMA的表达呈现正相关性:TGF-β1与P-p38MAPK(r=0.745,P<0.05);p-p38MAPK与d-SMA(r:0.659,P<0.05);TGF-β1与α-SMA(r=0.770,P<0.05)。结论阿魏酸钠可能通过TGF-β1/p-p38 MAPK通路,下调α-SMA的表达,从而减轻大鼠肾间质纤维化。     

鱼腥草对糖尿病大鼠肾脏组织中BMP-7和TGF-β1表达的影响

[目的]探讨鱼腥草对糖尿病肾脏组织中转化生长因子β1(TGF-β1)和骨形成蛋白-7(BMP-7)表达的影响。[方法]建立链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病模型,随机分为模型组、鱼腥草组和洛汀新组,另设正常组;观察8周后肾质量/体质量比值、肾小球面积及24h尿β₂微球蛋白、24h尿白蛋白和肌酐清除率,并应用免疫组化检测肾脏组织中TGF-β1、BMP-7的蛋白表达。[结果]鱼腥草给药可明显抑制糖尿病模型大鼠肾小球的肥大,降低24h尿β₂微球蛋白、24h尿白蛋白排泄率和肌酐清除率(P<0.05);免疫组化半定量显示,与模型组比较,鱼腥草组TGF-β1表达明显减少(P<0.05),BMP-7表达增多(P<0.05),而与洛汀新组比较无显著差异(P>0.05)。[结论]鱼腥草对糖尿病肾脏组织有明显的保护作用,其机制可能与其降低肾脏中TGF-β1表达,增加BMP-7的表达有关。     

灸药结合对慢性肾功能衰竭大鼠肾纤维化的影响

  目的：观察灸法结合中药方(健脾清化方)对慢性肾衰竭大鼠的干预疗效,从炎症角度探讨其对肾脏纤维化影响的作用机制。  方法：采用Platt法切除大鼠5/6肾组织+阿霉素注射造模,将造模大鼠随机分为模型组、缬沙坦对照组、健脾清化方组、灸法组、灸药结合组,给予高脂饮食喂养。缬沙坦对照组和健脾清化方组分别予缬沙坦、健脾清化方灌胃;灸法组隔日温和灸大鼠肾俞、足三里;灸药结合组予健脾清化方灌胃,隔日温和灸脾俞、足三里;假手术组、模型组以蒸馏水替代灌胃,隔日作与灸法组相同的固定,干预8周。检测血肌酐、尿素氮、IL-12、TNF-α及24 h尿蛋白定量,肾组织IL-12、TNF-α、TGF-β、Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原,观察大鼠肾组织病理变化。  结果：模型组大鼠血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量较假手术组显著升高(P<0.01);健脾清化方组血肌酐较模型组降低(P<0.05);灸药结合组大鼠的血肌酐、尿素氮、尿蛋白均显著降低(P<0.05,P<0.01),其疗效优于缬沙坦对照组、健脾清化方组和灸法组,且血清IL-12、TNF-α水平(P<0.01)和肾组织中TNF-α、TGF-β、Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原的阳性表达(P<0.01)均明显下降。  结论：灸药结合可以通过下调炎症因子、抑制机体炎症状态,从而改善肾功能,延缓慢性肾功能衰竭肾纤维化的进展。     

益气、化瘀、化痰中药制剂及其合剂对肾间质纤维化大鼠TGF-β1/Smad通路及TRB3的影响

目的：观察益气、化瘀、化痰中药制剂及其合剂———益气化瘀化痰制剂对单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruc－tion,UUO）模型大鼠肾间质纤维化的影响及其可能机制。方法：42只雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、替米沙坦组、益气组、化瘀组、化痰组及益气化瘀化痰组,每组6只。除假手术组外,其余各组采用UUO法建立肾间质纤维化模型。UUO术后3周,模型组及假手术组以等量生理盐水灌胃,其余各组以相应制剂灌胃治疗,每日1次,连续用药12周后处死大鼠。检测大鼠血清尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、肌酐（serum creatinine,Scr）水平。取大鼠术侧肾组织,HE染色观察组织形态学改变,Masson染色观察胶原纤维沉积情况,Western blot检测转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）蛋白表达水平;qRT-PCR 检测TGF-β1、Smad3、Smad7、TRB3、α-SMA、E-cadherin mRNA 表达水平。结果：与假手术组比较,模型组肾间质纤维化明显,BUN、Scr水平明显升高（P<0.01）,而各药物干预组肾间质纤维化程度及BUN、Scr水平均较模型组明显改善,其中益气化瘀化痰组、替米沙坦组及益气组改善较明显（P<0.05）。与模型组相比,益气化瘀化痰组、替米沙坦组及益气组TGF-β1、Smad3、TRB3、α-SMA mRNA表达明显降低（P<0.05）,E-cadherin mRNA表达明显升高（P<0.05）。各组间Smad7 mRNA表达无显著差异。TGF-β1、α-SMA、E-cadherin的蛋白表达与其mRNA表达趋势一致。结论：益气、化瘀、化痰及益气化瘀化痰中药制剂和替米沙坦均能改善UUO大鼠肾间质纤维化,且以益气化瘀化痰制剂、替米沙坦及益气制剂的改善作用较为明显,其机制可能是通过调控TRB3、TGF-β1/Smad信号通路,进而抑制肾小管上皮细胞向间充质细胞转化。