INK4a基因与胃癌关系的研究

肿瘤分子生物学研究已经证实 ,细胞周期调控异常与肿瘤发生密切相关 ,其中癌基因或抑癌基因对细胞周期正负调节的失控是细胞恶变的最重要事件之一。细胞周期素依赖性激酶 4抑制因子 (Cyclin- dependent kinase4 inhibitor a,INK4 a)是新近发现的抑癌基因 ,其 INK4 a/ ARF位点编码两种不同的蛋白产物 p1 6 INK4 a和 p1 9ARF,两种蛋白都可与细胞周期素依赖性激酶 4 / 6 (Cyclin- dependent kinase4 / 6 )结合并抑制它们的磷酸化酶活性 ,且分别通过 PRb和 P5 3途径抑制细胞癌变 [1、2 ] ,我们主要对 INK4 a位点 p1 6 INK4 a和 p1 9A…     

HPV L1壳蛋白与p16INK4A联合检测在宫颈癌前病变诊断中的应用

目的探讨HPV L1壳蛋白与p16INK4A联合检测在宫颈上皮内瘤变(CIN)中的表达及临床意义。方法选择经薄层液基细胞学(TCT)及宫颈活检检查患者226例,根据宫颈活检病理诊断分为炎症组、CIN组、鳞形细胞癌(SCC)组。TCT标本检测HPV L1壳蛋白的表达,宫颈活检标本检测p16INK4A的表达,将检测结果行相关分析。结果病理分级与HPV L1壳蛋白阳性率呈负相关(P<0.01),与p16INK4A阳性率呈正相关(P<0.01)。与SCC组比较,CIN组HPV L1壳蛋白阳性率明显升高,而p16INK4A阳性率明显降低(P<0.01,P<0.05)。结论 HPV L1壳蛋白与p16INK4A均可作为CIN辅助诊断的生物标志物。联合检测时,HPV L1(+)/p16INK4A(-)提示宫颈病变无进展或有消退的可能。     

宫颈鳞癌中高危人乳头状瘤病毒和P53 MDM2 P16~(INK4A)表达的关系

目的探讨浸润性宫颈鳞癌(ISCC)中人乳头状瘤病毒(HPV)16/18、31/33感染及P53、MDM2、P16INK4A蛋白的表达,研究各指标的相关性及在宫颈鳞癌发生、发展中的作用。方法利用组织芯片、原位杂交和免疫组织化学SP法对照检测106例ISCC、10例宫颈上皮内瘤变(CIN),10名正常宫颈鳞状上皮(NCE)中HPV16/18、31/33和P53、MDM2、P16INK4A的表达,应用SPSS12.5统计软件分析结果。结果HPV16/18、31/33和P53、P16INK4A蛋白在ISCC的表达高于CIN和NCE组,差异有统计学意义,HPV31/33表达与淋巴结转移相关(P<0.05);P53蛋白与组织学分级、淋巴结转移相关(P<0.05);P16INK4A表达与组织学分级呈正相关(P<0.05);MDM2蛋白与临床各参数均无相关性(P>0.05)。结论宫颈鳞癌的发生发展中高危HPV和突变型P53起重要作用,p53的下游基因MDM2是作为癌基因在宫颈鳞癌恶性进展过程中起作用,而p16INK4A可能不是单纯作为抑癌基因在起作用。     

p16INK4A蛋白在子宫颈癌及癌前病变中表达的意义

目的 探讨p16INK4A蛋白在子宫颈癌及癌前病变中表达的意义.方法 采用免疫组织化学技术S-P法检测45例子宫颈鳞癌组织、25例子宫颈上皮内瘤变(CIN)组织、20例宫颈正常组织或反应性增生组织中的p16INK4A表达情况.结果 p16INK4A在宫颈鳞癌组织中阳性表达率为100%,宫颈上皮内瘤病变组织中阳性表达率为88%(22/25),正常子宫颈鳞状上皮及反应性增生的鳞状上皮组织中阳性表达率为0(0/20).结论 p16INK4A蛋白的过度表达可以作为宫颈癌及其CIN的病理诊断指标之一.     

五味子乙素抑制视网膜母细胞瘤细胞生物学行为的分子机制研究

摘要：目的:研究五味子乙素对人视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响,及其对共济失调毛细血管扩张突变基因（ATM）/转录因子E2F1信号通路的作用。方法:体外培养Y79细胞,ATM inhibitor质粒和ATM mimics质粒转染Y79细胞进行ATM沉默或过表达,细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法测定细胞活力和增殖情况,流式细胞仪分析Y79细胞凋亡及周期分布,划痕实验检测Y79细胞迁移,Transwell实验分析细胞侵袭,Western Blotting实验检测Y79细胞中细胞周期蛋白（cyclin D1、cyclin B1和CDK2）、抑癌基因周期蛋白依赖性激酶抑制4b（INK4b）、INK4a、肿瘤抑制蛋白ARF、人体抑癌基因p53、人视网膜母细胞抑制蛋白pRB、ATM及E2F1蛋白表达。结果:五味子乙素呈浓度依赖性抑制Y79细胞活力、克隆、迁移及侵袭,将Y79细胞阻滞在G0/G1期,诱导其凋亡;另外,五味子乙素显著诱导INK4b、INK4a、ARF、p53、pRB、ATM及E2F1蛋白表达,显著抑制cyclin D1、cyclin B1及CDK2蛋白水平（P<0.05）; ATM沉默能部分降低五味子乙素对Y79细胞生物学行为的抑制作用。结论:五味子乙素通过激活ATM/E2F1信号传导,进而抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖,提示ATM/E2F1信号通路可能是视网膜母细胞瘤治疗的新靶标。     

p16INK4A与p14ARF在宫颈脱落细胞中的表达和意义

目的探讨宫颈脱落细胞中p16INK4A、p14ARF的高度表达对宫颈癌高危人群筛查的意义。方法采用免疫组织化学法对78例宫颈脱落细胞标本进行p16INK4A、p14ARF检测。结果随着宫颈上皮细胞损伤程度加重,p16INK4A、p14ARF表达呈上升趋势,浸润癌阳性率达到最高(分别为100%和91%)。p16INK4A的灵敏度和特异度均为100%;p14ARF的灵敏度和特异度分别为91%和92%。结论p16INK4A、p14ARF可作为诊断指标应用于宫颈癌高危人群筛查。     

宫颈液基细胞中p16INK4A及p57KIP2蛋白表达与CIN1病人预后关系的初步探讨

目的探讨P16INK4A及P57蛋白表达对CIN1病人病程预测的可行性。方法将组织学确定为CIN1病人的剩余TCT标本进行P16INK4A及P57KIP2蛋白免疫细胞化学染色,同时,对病人进行1～1．5年的随访,观察其表达与病人病程转化的关系。结果67例病人P16INK4A阴性表达者21例,2O例治愈（95．2％）,1例未愈（4．8％）,未见1例恶化;p16INK4A阳性表达共46例,22例治愈（47．8％）,16例未愈（34．8％）,8例恶化（17．4％）,其中表达（＋＋）及（＋＋＋）者恶化比例最高,达30．4％;两者比较有显著性差异（X2=25．777,P〈0．001）,提示P16INK4A阳性表达的病例预后较差,对p16INK4A阳性表达者可作LEEP术或活检后进一步评估诊断的正确性以进一步治疗。而P16INK4A（-）者无1例病变进展,提示相对无危险的妇女就可能不须实行过度治疗或频繁随访。P57KIP2阳性表达者59例,40例CIN病变治愈（67．8％）;14例未愈（23．7％）,5例恶化（8．5％）;而p57KIP2表达阴性者2例治愈（25％）;3例未愈（37．5％）;3例病变进展（37．5％）,两者比较有显著性差异（X2=20．980,P=-0．002）。提示P57H阻阳性表达的病例预后较好,可能不须实行过度治疗或频繁随访。结论将P16INK4A和P57KIP2进行联合检测对判断宫颈CIN1的生物学行为可能具有更重要的意义。     

P16~(INK4A)在宫颈液基细胞学涂片中的表达及意义

目的观察P16INK4A蛋白在宫颈液基细胞学涂片中的表达,探讨其在宫颈癌及宫颈上皮内肿瘤早期诊断中的意义。方法用免疫细胞化学法检测50例非典型鳞状上皮细胞(ASC-US),50例低度鳞状上皮内病变(LSIL),50例高度鳞状上皮内病变(HSIL),40例鳞状细胞癌(SCC)以及20例未见恶性细胞和上皮内病变细胞(NILM)的Thin Prep(TCT)涂片上P16INK4A蛋白、人乳头瘤病毒(HPV)16/18-E6蛋白及HPV16,18 DNA的表达情况。结果 1NILM、ASC-US、LSIL、HSIL及宫颈癌液基薄层细胞(TCT)涂片中P16INK4A蛋白阳性率分别为无表达、48%、64%、84%、95%。2NILM、ASC-US、LSIL、HSIL及宫颈癌TCT涂片中HPV16/18-E6蛋白表达阳性率现在增高。3P16INK4A与HPV16,18 DNA及蛋白表达呈正相关。结论 P16INK4A在HSIL以及SCC中表达显著增高,并与HPV16,18感染密切相关,可以作为宫颈癌及宫颈上皮内瘤变早期诊断的辅助诊断指标。     

甲状腺癌中p16和Rb蛋白表达及其意义

目的 探讨甲状腺癌中p16和Rb蛋白的表达、相互关系及其意义。方法 应用免疫组织化学SP法检测80例甲状腺癌患者组织中p16和Rb蛋白的表达情况。结果 p16和Rb总异常表达率，甲状腺腺瘤为12．5％；80例甲状腺癌中，低度恶性组为66．7％，高度恶性组为87．O％。p16阳性率，低度恶性组为64．9％(37／57)；高度恶性组为34．8％(8／23)。Rb阳性率，低度恶性组为68．4％(39／57)；高度恶性组39．1％(9／23)；癌组织分化越差，p16及Rb阳性率越低。P16和Rb蛋白均阳性的肿瘤术后复发转移率低。结论 甲状腺癌的发生发展与p16和Rb蛋白缺失有关：瘤组织分化程度越差，p16和Rb蛋白丢失越多；p16和Rb蛋白均阳性的肿瘤术后复发率转移率低p16和Rb蛋白的表达具有负相关关系，二者共同作用才能阻止瘤细胞的增殖。     

蛋氨酸脑啡肽对神经母细胞瘤细胞生长周期的影响及其机制研究

目的：研究蛋氨酸脑啡肽（Met．ENK）对神经母细胞瘤细胞SH．SY5Y的生长抑制作用及细胞周期的抑制机制。方法：采用MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术检测Met．ENK作用后肿瘤细胞周期变化;Real．timePCR法检测Met．ENK作用后细胞内P21,P53基因转录量变化;Westernblot法检测细胞内P21,P16。磷酸Rb蛋白表达量的变化情况。结果：MTT法结果显示,Met．ENK对SH．SY5Y细胞有生长抑制作用,在Met．ENK浓度为10-mol·L。时抑制率为40％;流式细胞术证实Met—ENK作用后大多数细胞被抑制于细胞周期的G0／G1期,该期细胞数由63．97％变为87．73％;JP21的基因转录量是用药前的3倍,P53基因转录量是用药前的5倍;咒1,P16蛋白表达量明显增加,磷酸Rb蛋白表达量明显降低。结论：Met．ENK可以通过上调细胞周期蛋白依靠性激酶抑制因子虎1及抑癌基因P53的转录和蛋白表达量,下调Rb蛋白的磷酸化水平将SH—SY5Y细胞的增殖抑制于生长周期的G0／G1期,表明Met．ENK的G0／G1期特异性周期抑瘤作用可以通过调节该途径产生。     

宫颈鳞癌中高危人乳头状瘤病毒和P53 MDM2 P16INK4A表达的关系

目的探讨浸润性宫颈鳞癌（ISCC）中人乳头状瘤病毒（HPV）16/18、31/33感染及P53、MDM2、P16INK4A蛋白的表达,研究各指标的相关性及在宫颈鳞癌发生、发展中的作用.方法利用组织芯片、原位杂交和免疫组织化学SP法对照检测106例ISCC、10例宫颈上皮内瘤变（CIN）,10名正常宫颈鳞状上皮（NCE）中HPV16/18、31/33和P53、MDM2、P16^INK4A的表达,应用SPSS12.5统计软件分析结果.结果 HPV16/18、31/33和P53、P16INK4A蛋白在ISCC的表达高于CIN和NCE组,差异有统计学意义,HPV31/33表达与淋巴结转移相关（P＜0.05）;P53蛋白与组织学分级、淋巴结转移相关（P＜0.05）;P16^INK4A表达与组织学分级呈正相关（P＜0.05）;MDM2蛋白与临床各参数均无相关性（P＞0.05）.结论宫颈鳞癌的发生发展中高危HPV和突变型P53起重要作用,p53的下游基因MDM2是作为癌基因在宫颈鳞癌恶性进展过程中起作用,而p16^INK4A可能不是单纯作为抑癌基因在起作用.     

P15~(INK4B)和P16~(INK4A)基因在鼻咽癌组织中异常甲基化

目的通过检测P15INK4B和P16INK4A基因启动子区甲基化情况,分析其与鼻咽癌发生发展及临床病理特征关系,探讨其可能在鼻咽癌临床早期分子生物学诊断和治疗中的作用。方法运用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)对54例鼻咽癌组织和20例正常鼻咽上皮组织的P15INK4B和P16INK4A基因启动子区甲基化状态进行检测。结果鼻咽癌组织中P15INK4B和P16INK4A基因启动子区甲基化阳性率分别为22%(12/54)和46%(25/54),二者总检出率为48%(26/54),26例甲基化的癌组织同时出现二者甲基化为11例;而在正常鼻咽上皮组织中未检测到P15INK4B和P16INK4A基因启动子区甲基化。结论P15INK4B和P16INK4A基因启动子区甲基化与患者临床病理特征无明显相关关系,为鼻咽癌早期事件,有望成为早期分子生物学诊断的标志物,将来还可能作为去甲基化基因治疗的靶点。二者在鼻咽癌发生发展中可能存在协同作用。     

p16蛋白在甲状腺肿瘤细胞中的表达及与p63的关系

目的研究甲状腺肿瘤组织中抑癌基因产物p16蛋白的表达,探讨p16、p63蛋白在甲状腺良恶性肿瘤中的相关性。方法 采用免疫组织化学Envision法检测60例甲状腺肿瘤标本细胞中p16蛋白的表达。结果 60例甲状腺肿瘤中p16蛋白阳性表达率为46.7％(28/60)。其中30例腺瘤中p16蛋白阳性表达率为60.0％(18/30),其中30例腺癌中为33.3％(10/30),腺瘤和腺癌组间比较差异有显著性(P<0.05);此外,甲状腺肿瘤中p63蛋白的表达与p16蛋白的表达在腺瘤和腺癌组均呈正相关(P<0.001)。结论 p16蛋白表达的缺失参与了甲状腺肿瘤的发生,抑癌基因p16、p63共同参与了甲状腺肿瘤的发生、发展,其发生过程可能存在p16、p63蛋白的协同作用,其异常表达对诊断甲状腺恶性肿瘤有一定的参考意义。     

肺癌细胞株抑癌基因启动子甲基化与转录的关系

目的 通过测定3例非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株中7个抑癌基因启动子甲基化与mRNA转录之间的关系,探讨启动子甲基化在NSCLC发生中的作用.方法 应用甲基化特异性的多聚酶链反应(MSP)和RT-PCR分别检测甲基化状态和mRNA的转录水平.结果 肺癌细胞株A549发生甲基化的基因包括p16INK4a、RASSF1α、CDH1、MGMT和CDH13,而DAPK和RAR-β为去甲基化状态;SH-77发生甲基化的基因包括p16INK4a、RASSF1α、CDH1和MGMT,而DAPK、CDH13和RAR-β为去甲基化状态;SPC-A1发生甲基化的基因包括p16INK4a、CDH1、 CDH13和RAR-β,而RASSF1α、MGMT和DAPK为去甲基化状态.RASSF1α、MGMT和RAR-β等3个基因发生甲基化的细胞株其mRNA转录失活,而去甲基化状态的细胞株则存在转录活性.结论 NSCLC细胞株中抑癌基因经常发生启动子CpG岛的甲基化,并且甲基化可能与抑癌基因mRNA转录失活相关.     

周期素D1与p16蛋白及Rb基因在大肠癌中的表达及意义

目的研究cyclinD1（周期素D1），p16及Rb基因表达的蛋白产物在大肠癌组织中的变化及其意义。方法应用免疫组化S-P法，在55例原发性大肠癌中检测cyclinD1，p16及Rb基因蛋白产物的表达。结果cyclinD1蛋白表达阳性率为43．64％（24／55），p16蛋白阳性表达率为47．27％，Rb蛋白阳性表达率为76．36％；cyclinD1，p16及Rb阳性表达与正常结肠直肠黏膜组织之间有非常显著性差异（P〈0．01）；Rb失活与p16表达之间呈负相关关系（P〈0．01）；Rb蛋白表达与肿瘤分化呈反比（P〈0．01）；p16蛋白表达与大肠癌淋巴结转移有关（P〈0．01）；cyclinD1，p16及Rb蛋白阳性表达率在死亡组与生存组之间有显著性差异（P〈0．05）。结论大肠癌发生过程中，存在cyclinD1，p16及Rb蛋白表达的异常，p16、Rb及cyclinD1过度表达与患者的预后密切相关，对肿瘤预后评估有重要意义。     

普鲁卡因对鼻咽癌细胞p16蛋白表达的影响

目的探讨普鲁卡因(procaine,PCA)对人鼻咽癌细胞CNE-2Zp16蛋白表达的影响。方法应用MTT法检测不同浓度PCA对人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖的影响,应用免疫组化法测定鼻咽癌细胞p16蛋白的表达。结果PCA能显著抑制CNE-2Z细胞增殖,该作用呈剂量-效应和时间依赖关系。PCA组CNE-2Z细胞p16蛋白表达明显高于对照组。结论PCA对CNE-2Z细胞增殖有抑制作用,它能上调CNE-2Z细胞p16蛋白的表达,推测这可能是PCA抑制CNE-2Z细胞增殖的重要分子机制之一。     

抑癌基因p16在胃黏膜异型增生及胃癌中的表达

p16基因蛋白作用于CDK4、CyclinD1和Rb的反馈回路，通过调节Rb的蛋白活性，防止细胞过度增殖。笔者采用免疫组化技术，对胃癌组织蛋白的表达进行了研究，重点探讨p16与胃癌临床病理特征的关系。     

宫颈病变中HPV16/18、p16~(INK4)及CK17的表达研究

目的探讨AIM组与CIN组(LSIL组+HSIL组)宫颈病变中HPV16/18、p16INK4及CK17表达情况。方法收集120例2007至2010年经病理诊断为AIM、LSIL及HSIL的患者的病理蜡块,采用免疫组织化学及原位杂交方法检查p16INK4A及CK17蛋白表达情况及采用核酸分子快速杂交仪检测HPV16/18的感染情况,经统计学分析比较AIM组与CIN组(LSIL组+HSIL组)的情况。结果 AIM组CK17表达阳性率(100%)明显高于CIN病变组(LSIL组+HSIL组)(13.1%)(χ2=17.9,P<0.01),且LSIL组(11.4%)和HSIL组(15%)阳性率无明显差异(χ2=1.9,P>0.05);AIM组p16INK4A表达阳性率(11.1%)明显低于CIN病变组(LSIL组+HSIL组)(100%)(χ2=18.3,P<0.01);AIM组HPV16/18检出率(22.2%)明显低于CIN病变组(LSIL组+HSIL组)(80.8%)(χ2=12.6,P<0.01),且LSIL组(79.5%)和HSIL组(82.5%)检出率无明显差异(χ2=1.3,P>0.05)。结论在宫颈病变的连续过程中,可借助CKl7、p16INK4A的表达和HPV16/18的检出率来认识AlM和CIN的细胞分子特征,同时进行二者的鉴别诊断。     

组织芯片技术研究P16INK4A和Ki67在宫颈鳞状上皮病变中的表达

目的:利用组织芯片技术及免疫组化技术检测在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞状细胞癌中P16INK4A和Ki67的表达情况及其意义.方法:应用免疫组化技术检测53例宫颈组织(正常宫颈9例,宫颈上皮内瘤变32例,宫颈鳞状细胞癌12例)制成的组织芯片中P 16INK4A和Ki67的表达,并比较3组的表达情况及其相互关系.结果:P16INK4A和Ki67在正常组中阳性率分别为0.00％ (0/9)和11.11％(1/9);CIN组中阳性率分别为78.13％(25/32)和68.75％ (22/32);鳞状细胞癌组中阳性率均为91.67％(11/12).其中正常组与CIN组、正常组与癌组、正常组与CIN组和癌组比较差异极有统计学意义(P＜0.01).此外,P16INK4A和Ki67的表达密切相关(P＜0.05).结论:P16INK4A和Ki67表达与宫颈鳞状上皮病变的发生发展密切相关,两者表达相关性提示可能共同参与肿瘤的发生发展.     

p 16 基因对人肝癌细胞的生长抑制作用的初步研究

目的探讨抑癌基因p16对肝癌细胞生长的抑制作用。方法将p16 cDNA亚克隆至pcDNA3.1真核表达载体上,并经脂质体介导转染至人肝癌细胞株SMMC-7721。用MTT法和Western blot分析转染细胞的生长情况。结果成功构建重组表达质粒pcDNA3.1-p16,转染pcDNA3.1-p16的SMMC-7721细胞生长速度受到明显抑制;经Western blot证实,转染后有外源p16蛋白的表达,且伴随Bax上调,Bcl-2和cIAP2的下调。结论重组pcDNA3.1-p16质粒能在人肝癌细胞SMMC-7721内表达,且能抑制SMMC-7721的生长,其机理与诱导肿瘤细胞凋亡相关。