脾虚证候、肾虚证候唾液生化指标变化研究

目的探讨脾虚证候、肾虚证候状态下唾液生化指标的变化。方法 30只6周龄SD大鼠,随机分为正常对照组、脾虚证候模型组和肾虚证候模型组,每组10只,均为雌雄各半。脾虚证候模型组每只每天皮下注射利血平0.5 mg/kg体重,肾虚证候模型组每只每天肌肉注射氢化可的松25mg/kg体重,正常对照组注射等量的生理盐水,连续10 d,观察各组大鼠唾液生化指标变化。结果与正常对照组相比,脾虚证候组、肾虚证候组大鼠体重增长缓慢,唾液p H值明显升高,差异具有统计学意义(P0.01),脾虚证候组Na、CK、ALT、LDH等降低,K、TP、AMY等升高,差异具有统计学意义(P0.05或P0.01),肾虚证候组大鼠CL、CK、ALT、AST、ALP、LDH等降低,K、P、TP、AMY等升高,差异具有统计学意义(P0.05或P0.01)。与脾虚证候组比较,肾虚证候组唾液P的浓度明显升高,AST活性降低,具有显著性差异(P0.01),其余指标均无统计学意义。结论伴随着脾虚和肾虚状态的出现,唾液的p H值及相应的生化物质确实发生了变化,说明了中医学"脾在液为涎""肾在液为唾"理论的科学性。但肾虚证候组和脾虚证候组相比较,二者除P、AST含量有显著性差异外,其余指标上并无差异,说明涎唾都分泌于口,确实由脾肾共同所主。     

左、右归丸对复合型肾虚体质大鼠神经行为干预的实验研究

目的探讨补肾中药左、右归丸对肾虚体质大鼠神经行为障碍的调节机制。方法 8周龄SD大鼠雌、雄2∶1比例合笼交配,"猫吓鼠"造模法恐吓孕鼠至生产,所产仔鼠4周龄时继续恐吓,造成先天不足、后天失养复合型仔鼠,分为模型组、左、右归丸组,空白组产自正常孕鼠。对仔鼠恐吓同时开始灌胃,药物组给予左、右归丸混悬剂,空白和模型组给予等量生理盐水,1次/d,连续2月。Morris水迷宫检测仔鼠学习记忆能力;免疫组化法检测海马PSD-95表达水平。结果Morris水迷宫:模型组逃避潜伏期、游泳距离、第1次穿越目标区时间较空白组增长(P﹤0.05),游泳速度、穿越次数较空白组降低(P﹤0.05);左、右归丸组学习记忆能力较模型组改善(P﹤0.05)。PSD-95表达:模型组较空白组表达降低(P﹤0.05);左、右归丸组较模型组表达上调(P﹤0.05)。结论补肾中药左、右归丸可治疗肾虚质为特征的神经行为障碍。     

复合型肾虚体质大鼠神经行为及递质变化的实验研究

目的:探讨肾虚体质大鼠神经行为学和神经递质含量的变化。方法:8周龄SD大鼠雌、雄2:1比例合笼交配,采用"猫吓鼠"造模法恐吓孕鼠至生产,对4周龄所产仔鼠继续恐吓,造成先天不足、后天失养复合型肾虚体质仔鼠,随机分为模型组、左、右归丸组,空白组产自正常孕鼠。对仔鼠恐吓同时开始灌胃,药物组分别给予制备好的左、右归丸混悬剂,空白组和模型组给予等量生理盐水,每日1次,连续2个月。旷场实验、Y迷宫实验探讨神经行为学功能变化;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定脑海马单胺类神经递质多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)含量。结果:旷场实验:肾虚质大鼠中央格停留时间较空白组增长,穿格、站立、修饰次数较空白组减少(P0.05);左、右归丸组较模型组中央格停留时间减少且穿格、站立、修饰次数增多具有统计学意义(P0.05),但组间差异不显著(P0.05)。Y迷宫实验:模型组较空白组正确次数降低、错误率增高(P0.05);治疗后与模型组比较正确次数增高、错误率减低(P0.05),但左、右归丸组间差异不显著(P0.05)。神经递质含量:模型组DA、NE、5-HT较空白组降低(P0.05);较模型组,左归丸组NE、5-HT升高(P0.05);右归丸组DA、NE、5-HT均升高(P0.05)。结论:肾虚体质大鼠神经行为学功能退化,神经递质含量减少;补肾中药左、右归丸可通过改善肾虚体质从而提高脑神经递质含量、改善脑功能。     

基于细胞自噬探讨左归丸对肾虚仔鼠皮肤发育的影响

目的:研究左归丸对先天肾虚仔鼠发育过程中皮肤内细胞自噬的影响及其机制,探索补肾填精法在生长发育异常中的应用价值.方法:36只雌雄比例为2∶1的大鼠进行配对,复合应激法刺激孕鼠构建先天肾虚仔鼠模型,根据将孕鼠处理方式不同,分为正常组,肾虚组,左归丸低、高剂量组(2,8 g·kg-1).正常组不造模给予生理盐水灌胃,肾虚组...     

恐伤孕鼠对其仔鼠脑皮质神经元早期发育影响的实验研究

目的根据肾藏精主髓,髓充于脑,肾主脑发育理论,研究先天肾虚影响脑皮质神经元早期发育的情况及补肾法的作用。方法 SD大鼠(雌雄2∶1)合笼,制备孕鼠,分为模型组、空白组、补肾组。模型组、补肾组采用梅花针叩击孕鼠头部和模拟地震平台两种方法复合不定时恐吓刺激孕鼠整个孕期直至生仔,补肾组在造模过程中同时给予左归丸灌胃治疗,空白组自然喂养至生产;检测出生当日仔鼠脑湿重体质比;血清FT3、FT4含量;光镜及电镜观察脑皮质神经元结构。结果与空白组比较,模型组仔鼠脑湿重体质比下降(P0.01),血清FT3、FT4含量显著性升高(P0.01),光镜下脑皮质神经元细胞个数明显减少,脑神经元超微结构残缺,轮廓凹凸不平,核形不规整,核膜塌陷;补肾组仔鼠脑湿重体质比下降(P0.01),血清FT3、FT4含量显著性升高(P0.01),脑皮质神经元细胞个数增多,脑神经元超微结构接近正常。结论复合法恐吓刺激孕鼠可引起胎产数下降,仔鼠脑湿重体质比、血清FT3、FT4变化,脑皮质层神经元发育异常;中药补肾法治疗后,可有效改善先天肾虚仔鼠脑早期不良发育。     

肾虚体质大鼠细胞因子的实验研究

目的:研究肾虚质大鼠细胞因子IL-2、IL-6外周血含量变化情况。方法:以猫吓孕鼠方法造成肾虚动物模型研究子代"先天不足"造成的肾虚质大鼠与空白组、药物组免疫水平的差异。结果:肾虚质大鼠在外周血的IL-2水平低于空白对照组(P<0.05);IL-6水平高于空白对照组(P<0.05),结论:大鼠的外周血IL-2水平降低和IL-6水平升高是形成肾虚体质的免疫学基础之一。     

补肾中药对肾虚质大鼠生长发育及脑组织胆碱乙酰化酶含量的影响

目的探讨补肾中药对肾虚体质大鼠生长发育及脑组织胆碱乙酰化酶(CHAc)含量的调节作用。方法采用"猫吓鼠"方法制作先天不足加后天失养复合型肾虚模型。造模大鼠随机分为模型组、左归丸组和右归丸组,空白组大鼠产自正常孕鼠。对仔鼠恐吓同时开始灌胃给药,药物组给予左归丸和右归丸混悬液,空白组和模型组予等量生理盐水,每日1次,连续3个月。观察大鼠生长发育一般状况,记录5~8周龄各组大鼠体质量和平均食物利用率,ELISA检测大鼠脑组织CHAc含量。结果仔鼠5~8周龄时,模型组较空白组体质量明显减少(P0.01),左归丸组和右归丸组体质量较模型组明显增加(P0.05,P0.01),平均食物利用率与体质量呈正相关;模型组脑组织CHAc含量较空白组明显降低(P0.01),左归丸组、右归丸组较模型组明显升高(P0.01)。结论补肾中药可改善肾虚质大鼠生长发育落后状态并调节脑内CHAc含量,从而提高肾虚质大鼠学习记忆能力。     

肾虚质大鼠IL-2水平变化对CD4~+T细胞和CD8~+T细胞的影响

目的:观察肾虚质大鼠IL-2水平的变化对CD4+T细胞和CD8+T细胞的影响。方法:采用"猫吓鼠"的方法造成肾虚质孕鼠,将肾虚质孕鼠所产雄性子鼠16只随机分为模型组及药物组,每组8只,随机选取正常组孕鼠所产雄性子鼠8只作为空白组,模型组和药物组的16只子代鼠于每日定时进行恐吓,空白组不予恐吓,持续1个月;同时药物组给予桂附地黄丸混悬液,空白组和模型组给予等量生理盐水。采用ELISA法检测大鼠血清IL-2含量的变化,运用流式细胞仪检测脾脏T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+百分率的变化。结果:与空白组相比,模型组IL-2的含量降低(P<0.05),CD4+百分率下降(P<0.05),CD8+百分率升高(P>0.05);与模型组比,药物组IL-2的含量、CD4+百分率升高,CD8+百分率降低,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:肾虚质大鼠IL-2的水平与T细胞免疫功能具有相关性。     

大鼠肾虚模型的唾液免疫学研究

从免疫学角度研究大鼠肾虚模型唾液指标的变化,探讨涎唾与肾的免疫相关性,并拟通过免疫指标的检测,寻找疾病微观辨证的量化指标和检测方法,以丰富中医藏象理论.采用大鼠肾虚模型,观察大鼠唾液腺白细胞介素-6(IL-6)、分泌型免疫球蛋白A(SIgA)和唾液溶菌酶的含量变化,并与空白对照组、肾虚模型 右归饮治疗组相对照,实验发现,大鼠肾虚证的IL-6、唾液溶菌酶增高,SIgA降低,说明大鼠肾虚证存在着免疫功能紊乱的现象,初步表明大鼠肾虚与唾液免疫有一定的关系;大鼠肾虚模型经过右归饮治疗后,紊乱的免疫功能恢复正常,萎缩及破坏的唾液腺有所恢复,说明右归饮具有调节唾液免疫功能的作用.结果显示:大鼠肾虚模型唾液腺白细胞介素-6(IL-6)、分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、唾液溶菌酶值发生了各自不同的变化,提示大鼠肾虚证与唾液免疫具有一定的关系.     

大鼠肾虚模型的唾液免疫学研究

从免疫学角度研究大鼠肾虚模型唾液指标的变化，探讨涎唾与肾的免疫相关性，并拟通过免疫指标的检测，寻找疾病微观辨证的量化指标和检测方法，以丰富中医藏象理论。采用大鼠肾虚模型，观察大鼠唾液腺白细胞介素-6(IL-6)、分泌型免疫球蛋白A(SIgA)和唾液溶菌酶的含量变化，并与空白对照组、肾虚模型 右归饮治疗组相对照，实验发现，大鼠肾虚证的IL-6、唾液溶菌酶增高，SIgA降低，说明大鼠肾虚证存在着免疫功能紊乱的现象，初步表明大鼠肾虚与唾液免疫有一定的关系；大鼠肾虚模型经过右归饮治疗后，紊乱的免疫功能恢复正常，萎缩及破坏的唾液腺有所恢复，说明右归饮具有调节唾液免疫功能的作用。结果显示：大鼠肾虚模型唾液腺白细胞介素-6(IL-6)、分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、唾液溶菌酶值发生了各自不同的变化，提示大鼠肾虚证与唾液免疫具有一定的关系。     

肾虚质大鼠血清白介素水平的实验研究

目的:研究肾虚质大鼠血清IL-2、IL-10外周血含量变化情况。方法:以猫恐吓孕鼠方法造成大鼠肾虚质模型,研究其血清IL-2、IL-10水平。结果:肾虚质大鼠外周血的IL-2水平低于空白对照组(P<0.01),IL-10水平高于空白对照组(P<0.05)。提示:肾虚质大鼠的外周血白介素水平的变化是形成肾虚质大鼠免疫功能紊乱的基础之一,而经典补肾方金匮肾气丸对其免疫功能的紊乱有一定的调节作用。     

肾虚质大鼠学习记忆能力与海马NMDA受体表达的实验研究

目的观察肾虚质大鼠学习记忆能力与海马N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid,NMDA)受体表达变化,探讨"肾藏志"中医学理论的物质基础与神经生物学机制。方法将40只SD大鼠随机分为模型组、左归丸、右归丸组及空白组(产自正常孕鼠),每组10只,采用"猫吓鼠"经典造模法制备先天不足加后天失养复合型肾虚质仔鼠模型。对仔鼠恐吓同时开始给药,左归丸、右归丸组分别给予左归丸混悬液0.1875 g/mL、右归丸混悬液0.0938 g/mL灌胃,空白组及模型组给予等量生理盐水灌胃,每日1次,每周用药5天,连续2个月。通过Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,采用免疫组化法检测海马组织NMDA受体亚基NR2A、RN2B蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组Morris水迷宫实验潜伏期及总路程增加(P0.05);与模型组比较,左归丸及右归丸组上述指标均降低(P0.05)。与空白组比较,模型组海马组织NMDA受体亚基NR2A、NR2B蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,左归丸、右归丸组NR2A及NR2B蛋白表达明显升高(P0.05)。结论肾虚质大鼠学习记忆能力退化且海马NMDA受体表达低下,补肾药物左归丸、右归丸可上调NMDA受体表达,提高其学习记忆能力,从而改善肾虚质脑功能退化状态。     

莪术对正常和血瘀证孕大鼠子代学习记忆能力损伤的差异

目的:观察并比较莪术对正常和血瘀证孕大鼠子代学习记忆能力影响的差异.方法:Wistar雌性大鼠随机平均分为正常组和血瘀证模型组,采用0.1 mg/只sc盐酸肾上腺素与冰水浴相结合的方法制备大鼠血瘀证模型.造模结束后,按2∶1雌雄合笼,受孕后正常组和血瘀证组孕鼠分别随机分为1.4,2.8,5.6g·kg-1莪术组和对照组,共8个亚组.孕鼠于妊娠第6d～19d连续ig给予不同剂量的莪术水煎液,共给药14 d,于仔鼠生后28 d进行Morris水迷宫测试.结果:正常大鼠和血瘀证大鼠给予莪术暴露后两者仔鼠学习记忆能力存在差异.在莪术高剂量组,第2,3,4天正常大鼠组仔鼠逃避潜伏期(44.87±10.99)s,(33.95±4.29)s,(23.29 ±3.56)s较血瘀组(38.11±5.40)s,(29.11±5.40)s,(19.59 ±2.58)s明显延长,过台次数(6.30±1.71)次,(5.15±1.18)次,明显减少(均P＜0.05),而血瘀证模型大鼠组仔鼠的逃避潜伏期和过台次数与对照组比较均无显著性差异.结论:莪术对正常大鼠和血瘀证模型大鼠的仔鼠学习记忆能力损伤的影响具有差异,对正常大鼠的毒性效应更明显.     

胆胰康对慢性胰腺炎大鼠血清超氧化物歧化酶活性、羟脯氨酸含量及胰腺病理的影响

目的:通过观察中药胆胰康(DYK)对慢性胰腺炎(CP)大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、羟脯氨酸(HYP)含量的影响及胰腺病理改变,进而探讨该方药治疗CP的机理。方法:从70只SD大鼠(雌雄各半)中随机抽取20只(雌雄各半)作为正常组大鼠,其余50只大鼠采取腹腔注射L-精氨酸(L-Arg)的方法制造慢性胰腺炎动物模型。3周后抽取正常大鼠10只(雌雄各半)、模型大鼠10只(雌雄各半),分别检测血清SOD活性及HYP含量,镜下观察胰腺组织改变。验证造模成功后,将剩余的40只模型大鼠随机分为4组:模型组(b)、小柴胡汤丸组(c)、胆胰康低剂量组(d)、胆胰康高剂量组(e)。剩余的10只正常大鼠作为空白组(a)。从第4周起给药治疗,治疗4周后,处死全部大鼠,提取血清检测SOD活性及HYP含量,观察胰腺组织病理改变。进行实验数据统计。结果:b血清SOD活性明显低于a(P0.01),HYP含量高于a(P0.01),c、d、e血清SOD活性均明显高于b(P0.01),HYP含量明显低于b(P0.05)。所有治疗组胰腺组织均有不同程度病理改变。结论:采取腹腔注射L-Arg的方法能够成功地复制大鼠CP模型,DYK能够有效地提高CP大鼠血清SOD活性,降低其血清HYP含量,能够有效地对抗CP形成过程中的胰腺组织损伤,从而对CP具有显著的防治作用。     

心肌缺血型冠心病肾虚血瘀病证结合模型研究

目的探讨手术方法建立心肌缺血型冠心病与肾虚血瘀病证结合模型的可行性。方法采取惊吓、置于寒冷环境并皮下注射氢化可的松的方法制备非疾病肾虚血瘀证候模型,结扎冠状动脉前降支并注射氢化可的松建立心肌缺血型冠心病肾虚血瘀病证结合模型。实验大鼠分为肾虚血瘀组、病证结合组和正常组,每组5只。观察大鼠造模前后体温、体质量、呼吸频率、心率、全血黏度、卡松黏度。依据中医临床肾虚血瘀证诊断标准,对2种模型中医证候进行比较。结果与正常组和本组造模前比较,肾虚血瘀组、病证结合组大鼠造模后均出现体温下降、呼吸频率增快(P0.05);与正常组比较,病证结合组、肾虚血瘀组体质量减轻或者增长缓慢、全血黏度及卡松黏度升高(P0.05,P0.01);造模两组间全血黏度、心电图比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 2种模型在中医证候方面无明显差异,符合中医临床肾虚血瘀证的诊断标准。     

基于恐伤肾的阿尔茨海默病肾虚证大鼠模型的建立与评价

目的构建和评价D-半乳糖和三氯化铝结合夹尾(恐吓)建立阿尔茨海默病肾虚证病证结合大鼠模型。方法随机将48只SD大鼠分为对照组、模型组、夹尾组和肾气丸组,每组12只。对照组给予0.9%NaCl溶液灌胃,其余组均采用D-半乳糖及三氯化铝造模,持续8周;夹尾组和肾气丸组从第5周开始,在造模的同时用夹尾(恐吓)法建立肾虚证病证结合模型,肾气丸组同时给予金匮肾气丸10 g/kg灌胃。每2周观察记录1次大鼠的症状、体征变化,第8周末进行水迷宫测试。测试结束后,腹主动脉采血,离心收集血清检测下丘脑-垂体系统生化指标。取大鼠大脑,用HE染色和免疫荧光组化法对大脑的海马组织进行检测。结果夹尾组表现为精神亢奋、躁动,大便色黑干硬,毛色发暗枯槁等,造模第6周和第8周症状、体征量化评分均明显高于其他组(P均0.05);对照组、模型组症状、体征相似,实验过程中各时间点量化评分比较差异均无统计学意义(P均0.05)。水迷宫测试显示模型组、夹尾组、肾气丸组与对照组相比潜伏期均明显延长(P均0.05),穿越平台次数明显减少(P均0.05),而夹尾组比模型组出现较早。海马组织HE染色和免疫荧光组化显示模型组、夹尾组比对照组出现较多神经元细胞死亡和CHAT阳性神经元减少,而夹尾组较为严重,肾气丸组则有改善。下丘脑-垂体-肾上腺轴生化指标血清皮质醇水平模型组明显高于对照组、夹尾组、肾气丸组(P均0.05),夹尾组明显低于肾气丸组和对照组(P均0.05),肾气丸组与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论大鼠经D-半乳糖和三氯化铝结合夹尾(恐吓)建立阿尔茨海默病肾虚证是比较理想病证结合模型,可能皮质醇下降是阿尔茨海默病肾虚证证候客观化评价指标之一。     

复合型肾虚质大鼠神经行为障碍与NMDA受体表达研究

目的探讨肾虚质与脑功能衰退的相关性及肾藏志理论的物质基础与神经生物学机制。方法采用"猫吓鼠"造模法造成先天不足加后天失养复合型肾虚模型,随机分为模型组、左归丸组和右归丸组;空白组产自正常孕鼠。对仔鼠恐吓同时开始灌胃,左归丸组、右归丸组分别给予左归丸、右归丸混悬液,空白组和模型组给予等量生理盐水,1次/d,连续2个月。悬吊试验和Y迷宫实验观测大鼠运动和空间学习记忆能力,免疫组化法检测N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚基NR2A、NR2B蛋白表达。结果悬吊试验:模型组持续时间低于空白组(P0.05),左归丸组和右归丸组高于模型组(P0.05);Y迷宫实验:模型组跑至安全区正确次数低于空白组(P0.05),左归丸组和右归丸组高于模型组(P0.05);模型组NR2A、NR2B光密度值较空白组降低(P0.05),左归丸组和右归丸组光密度值较模型组升高(P0.05)。结论肾虚质大鼠神经行为学异常且海马NMDA受体亚基表达降低;左归丸、右归丸可上调NMDA受体表达且改善大鼠脑功能,揭示了肾虚质与脑功能衰退的相关性及肾藏志理论的物质基础与神经生物学机制。     

先天肾虚证造模种鼠子代行为的遗传实验研究

采用猫吓孕鼠(恐伤肾),得到子代先天肾虚模型,测试子代初生鼠翻身率、子代少年鼠空地活动范围、子代成年饥鼠取食芝麻数量,与对照组比较,差异显著。而恐吓后又予补肾的反证组,4种测试结果均接近对照组(P>0.05),即先天肾虚本能行为失常者,肾气丸有助于康复,而未恐吓非肾虚的对照组,补肾药基本无作用。     

基于SNAP-25表达的肾虚质大鼠突触可塑性实验研究

目的:通过大鼠海马突触相关蛋白-25(SNAP-25)的表达,揭示肾虚质致突触可塑性降低的分子生物学机制。方法:通过"猫吓鼠"造模法恐吓受孕母鼠,待产子后继续恐吓仔鼠,从而建立先天不足、后天失养复合型肾虚质仔鼠模型。补肾药物左、右归丸治疗3个月后,Morris水迷宫检测仔鼠学习记忆能力,ELISA法测定海马单胺类神经递质去甲肾上腺素(NE)含量,免疫组化法检测SNAP-25蛋白表达。结果:Morris水迷宫:模型组潜伏期、总路程、首次穿越目标区时间较空白组长,左、右归丸组较模型组改善;NE含量:模型组较空白组降低,左、右归丸组较模型组升高;SNAP-25表达,模型组较空白组降低,左、右归丸组较模型组上调。结论:肾虚质仔鼠突触可塑性能力减退与SNAP-25表达相关,补肾药物左、右归丸具有改善和提高作用。     

子宫腺肌病痛经患者肾虚证型及体质类型分布特点研究

目的:探讨子宫腺肌病痛经患者肾虚证型及体质类型分布特点。方法:选择92例子宫腺肌病患者作为病例组,同时期来院体检的正常无子宫腺肌病者85例作为对照组,对两组进行问卷调查。结果:肾阳虚和血瘀为病例组单证型分布出现频率最高的证型,而肾虚(阳、气)气滞血瘀和气滞(阴、阳)肾虚为复合证型所占比例较高。病例组的体质类型中气郁质、瘀血质、平和质的比例与对照组比较,有显著性差异(P<0.05)。肾虚(阳、气)气滞血瘀、气滞(阴、阳)肾虚、肾虚(阳)寒凝气滞患者的体质分别以瘀血质、气郁质、气虚质为主。结论:肾虚(阳、气)气滞血瘀和气滞(阴、阳)肾虚是子宫腺肌病痛经患者的主要肾虚证型,瘀血质是该病的易感体质。