IQGAP2在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的:认识肝细胞肝癌中含IQ模体的GTP酶活化蛋白2(IQ motif containing GTPase activating protein 2,IQGAP2)的亚细胞定位和表达,及其在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的作用.方法:分别通过Western blot、免疫荧光和免疫组织化学染色分析IQGAP2在7种人肝癌细胞与正常肝细胞系中的表达、定位,及其在HCC组织样本中的表达与分布.结果:IOGAP2在Bel-7402、Bel-7404、SMMC-7721、SK-HEP-1、HLE和HL-7702等肝癌和正常成人肝细胞系中不表达,仅在HepG2和Hep3B等2种甲胎蛋白(AFP)表达阳性的人肝癌细胞系中表达,IQGAP2主要分布于细胞质,此外,在HepG2细胞中还具有明显的核膜和核仁定位,IQGAP2在HCC组织中表达降低(56.9%,29/51).其中,19例配对HCC组织的IQGAP2表达与肿瘤大小,AJCC分期和血清AFP水平相关(P=0.020,P=0.017,P=0.002);38例配对组织IQGAP2在肿瘤和癌旁正常肝组织中主要定位于胞质,部分细胞伴有胞核和胞膜定位,但是,IQGAP2的表达与肿瘤大小、分化程度、AJCC分期以及血清AFP表达水平无相关性.结论:IQGAP2蛋白可能参与细胞黏附、信号转导等过程,在肝癌的发生发展中发挥重要作用,是一种潜在的抑癌基因.     

原发性肝癌中LncRNA OSER1-AS1与miR-612表达的相关性及生物学意义

目的 研究原发性肝细胞癌（HCC）中LncRNA OSER1-AS1与miR-612表达的相关性及生物学意义。方法 收集2017年3月-2020年3月华北理工大学附属医院手术切除并保存的HCC组织及对应的癌旁组织,培养HCC细胞株SMMC-7721、HepG2、BEL-7402及正常肝细胞株HL-7702,检测LncRNA OSER1-AS1、miR-612的表达水平。HepG2细胞分组并转染阴性对照（NC） siRNA、LncRNA OSER1-AS1 siRNA、NC miR、miR-612模拟物、miR-612抑制物,检测存活率、凋亡率及LncRNA OSER1-AS1、miR-612、叉头框转录因子M1(FOXM1)表达水平。结果 HCC组织中LncRNA OSER1-AS1的表达水平高于癌旁组织、miR-612的表达水平低于癌旁组织且LncRNA OSER1-AS1与miR-612呈负相关;肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2、BEL-7402中LncRNA OSER1-AS1的表达水平高于正常肝细胞株HL-7702、miR-612的表达水平低于正常肝细胞株HL-7702...     

肝癌细胞系DcR3的表达及意义

目的 探讨肝癌细胞系诱捕受体3(DcR3)的表达变化及意义. 方法 分别取人肝癌细胞HepG2、HepB3、SMMC-7721、bel-7402、bel-7405及癌旁肝细胞QSG-7701和正常肝细胞HL-7702,RT-PCR和EnVision法分别检测其DcR3 mRNA和蛋白;MTT法检测加入DcR3中和性抗体后的肝癌细胞存活率. 结果 DcR3在5种肝癌细胞中均有mRNA和蛋白的表达,QSG-7701及HL-7702均无表达.加入DcR3中和性抗体后肝癌细胞存活率下降. 结论 肝癌细胞高表达DcR3,DcR3中和性抗体可抑制肝癌细胞的生长.     

Nek2对肝癌细胞凋亡的影响及其分子机制的研究

目的研究Nek2(nima-related kinase2)在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达,并通过沉默肝癌细胞中的Nek2基因,研究Nek2对肝癌细胞凋亡的影响,并初步探索其机制。方法使用Western blotting对27对肝癌及非癌组织和正常肝细胞株HL-77026及人肝癌细胞株HepG2、PLC/PRF/5、Hep3B、BEL-7402、SMMC-7721、QGY-7701中Nek2的蛋白表达情况进行分析。筛选HepG2细胞系进行下一步实验。沉默肝癌细胞HepG2中的Nek2因子,通过流式细胞仪(FACS)分析,采用Western blotting技术检测转染前后肝癌细胞中P53、Bcl-2、Bad、Caspase-3蛋白表达的变化。结果 Nek2在肝癌组织和6个肝癌细胞株中均表达升高。沉默肝癌细胞系HepG2中的Nek2后可使细胞的凋亡增强,P53、Caspase3和Bad的蛋白表达升高,抗凋亡因子Bcl-2的蛋白表达下降。结论抑制Nek2表达可以明显促进肝癌HepG2细胞的凋亡,并通过影响凋亡信号传导通路中的重要因子来促进细胞的凋亡。     

ku80蛋白表达水平与肝癌细胞侵袭迁移能力的相关性

目的观察ku80蛋白表达水平与肝癌细胞侵袭迁移能力的相关性。方法使用肝癌细胞系MHCC97-H、 MHCC97-L、HepG2及正常人肝细胞HL-7702为研究对象,分别采用RT-PCR、Western印迹方法检测ku80 mRNA及蛋白水平;体外划痕实验、Transwell侵袭实验观察4株细胞迁移、侵袭能力;免疫荧光检测ku80亚细胞定位;线性相关分析ku80及其mRNA与肝癌细胞系迁移、侵袭能力的相关性。结果 ku80 mRNA及蛋白在4株细胞系中均有表达,且在3株肝癌细胞中的表达明显高于正常肝细胞系HL-7702(均P0.05),其中MHCC97-H细胞表达水平最高(P0.01);体外划痕实验、Transwell侵袭实验显示3株肝癌细胞系的迁移、侵袭能力明显高于HL-7702细胞系(均PO.05),其中MHCC97-H的迁移侵袭能力最强(P0.01)。ku80蛋白定位于细胞核。线性相关性分析显示ku80蛋白及mRNA的表达水平与肝癌细胞系的迁移、侵袭能力呈正相关。结论 ku80蛋白主要在细胞核表达,其表达水平与肝癌细胞系的迁移、侵袭能力呈正相关。     

细胞周期激酶亚单位1对肝细胞癌细胞增殖能力的影响

目的观察细胞周期激酶亚单位1(CKS1)在肝细胞癌及正常肝组织中的表达以及其对人肝细胞癌细胞BEL-7405的增殖能力的影响。方法应用免疫组织化学检测65对手术肝细胞癌组织及癌旁正常组织CKS1的表达水平。应用Western印迹检测肝癌细胞系与正常肝脏细胞中CKS1表达量的差异。应用小干扰RNA(siRNA)技术转染肝细胞癌BEL-7405细胞,Western印迹检测CKS1 siRNA对CKS1蛋白的干扰效果,同时应用细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆增殖实验检测CKS1对BEL-7405细胞增殖能力的影响。结果免疫组织化学染色结果显示,CKS1在正常肝组织中表达量较肝细胞癌组织中表达量低,且差异有统计学意义(P0.05)。Western印迹检测表明CKS1在7种肝细胞癌细胞系表达量显著高于正常肝细胞株,且CKS1的表达量在肝细胞癌BEL-7405细胞株显著高于其他肝癌细胞株。CCK-8法检测CKS1的siRNA转染BEL-7405细胞与阴性对照组和空白对照组相比明显抑制细胞增殖,在48、72和96 h A值分别降低了0.376、0.566、0.972(P0.05);平板克隆增殖形成实验表明,CKS1的siRNA转染BEL-7405细胞后肿瘤细胞形成的克隆增殖集落明显少于阴性对照组和空白组,干扰组与空白、阴性对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 CKS1在肝细胞癌组织中表达量显著高于正常肝组织,在肝癌细胞中表达量显著高于正常肝细胞,CKS1在肝细胞癌细胞BEL-7405的增殖中扮演了重要的角色,CKS1可能成为针对肝细胞癌基因治疗的新兴靶点。     

KLF6在肝细胞癌中的表达及在肝癌细胞系中对增殖和凋亡的影响

目的 检测抑癌基因KLF6在人肝细胞癌中的表达情况,探讨KLF6在肝癌细胞系中对细胞增殖及凋亡的影响.方法 分别用荧光定量PCR、RT-PCR 和Western blot 、免疫组织化学方法检测肝细胞癌、癌旁组织及正常肝组织中KL F6 基因mRNA 及蛋白水平的表达情况.构建KLF-6基因的真核表达质粒,用MTT法检...     

极性蛋白AF-6mRNA在肝细胞肝癌中的表达及其对侵袭的影响

目的:检测肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)癌组织、癌旁组织(adjacent normal liver tissue,ANLT)及不同侵袭能力细胞系中极性蛋白AF-6 m RNA的表达情况,分析其在不同组织及不同细胞系中的表达差异及意义.方法:利用实时定量PCR检测(real-time quantitative,q RT-PCR)检测AF-6 m RNA在3 0对癌组织、A N LT和4种细胞系(L 0 2、Hep G2、MHCC97-H和HCCLM3)中的表达情况.结果:AF-6 m RNA在93.3%(28/30)的HCC中呈低表达;正常肝细胞株L02中AF-6 m RNA含量明显高于肝癌细胞株(P0.05);高侵袭转移能力的细胞系MHCC97-H及HCCLM3只有极低的AF-6 m RNA表达,且明显低于低侵袭转移能力的细胞系Hep G2(P0.05).结论:AF-6 m RNA在肝癌中的低表达可能与高侵袭能力相关,提示AF-6 m RNA在将来可能会成为治疗侵袭性HCC的潜在靶点.     

HERG1 K+通道在肝癌细胞系BEL-7402中的表达及其意义

[目的]观察HERG1 K 通道在肝癌细胞系BEL-7402的表达,探索其在肝癌发生与发展中的作用。[方法]RT-PCR方法检测hepg1在肝癌细胞系BEL-7402细胞和正常肝细胞系L-02细胞中表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)研究HERG1 K 通道对BEL-7402细胞和L-02细胞增殖作用;以流式细胞仪检测该通道对肝癌细胞系BEL-7402细胞周期的影响。[结果]HERG1 K 通道在肝癌细胞中表达,而在正常肝细胞中不表达,该通道特异性抑制剂E-4031可以显著抑制BEL-7402细胞的增殖,而对不表达herg1基因的L-02细胞增殖不起作用;E-4031抑制BEL-7402细胞HERG1 K 通道后可导致G1期细胞显著上升。[结论]HERG1 K 通道可能是一个潜在的癌基因,可促进肝癌细胞的增殖;参与调控BEL-7402细胞周期的G1期进程。通过抑制该通道的功能,或下调其表达抑制该肿瘤的发生与发展;HERG1 K 通道可能是肝癌治疗的一个潜在的药物靶点和诊断性生物标志。     

真核起始因子3e亚基与原发性肝细胞癌的发生与发展正相关

背景真核起始因子3 (eukaryotic initiation factor 3, e IF3)是哺乳动物细胞中最复杂的翻译起始因子,真核起始因子3e亚基(eukaryotic initiation factor 3e subunit,e IF3e)是e IF313个亚基中的一个,其表达水平的失调与癌症的发生和发展密切相关.然而, e IF3e在不同类型的恶性肿瘤中的报道相互矛盾.迄今为止, e IF3e在原发性肝细胞癌(primary hepatocellular carcinoma,HCC)中的作用不明.目的研究e IF3e在HCC发生和发展中的作用.方法从临床上随机获取5例HCC病人手术后的新鲜肝癌组织及癌旁组织标本,用q RT-PCR和Western Blot分别定量检测肝癌组织和癌旁组织内e IF3e的m RNA转录水平和蛋白表达水平.通过转染e IF3e过表达质粒或e IF3e干扰质粒进入Hep G2,用q RT-PCR及Western Blot分别定量检测细胞内e IF3e转录和翻译表达水平,证实e IF3E过表达上调和干扰后的下调.用Kit-8细胞计数法(Cell Counting Kit-8, CCK-8)评价细胞增殖行为;用划痕实验观察细胞迁移行为;用流氏分析法调查细胞凋亡行为;运用裸鼠成瘤实验评价e IF3e对肿瘤生长的影响.结果和癌旁组织比较,发现肝癌组织中e IF3e上调.细胞实验证实,肝癌细胞系Hep G2及Huh7中e IF3e m RNA转录水平均高于正常肝细胞系HL7702.过表达质粒和干扰质粒分别瞬时转染Hep G2,发现e IF3e上调后增强了Hep G2增殖和迁移行为,但对细胞凋亡无影响;而e IF3e下调后,减弱了Hep G2增殖和迁移行为,促进凋亡;裸鼠实验结果证实e IF3e促进肿瘤生长.结论e IF3e的过表达与原发性肝细胞癌的发生和发展正相关,有潜力成为HCC治疗新靶点.     

乙型肝炎病毒蛋白及环氧合酶在乙肝相关性肝细胞癌发展与转移中的作用

目的探讨乙型肝炎病毒蛋白及环氧合酶(COX)-2在乙肝相关性肝细胞癌发展与转移中的作用及机制。方法选取53例手术切除的人肝细胞癌组织,采用免疫组化法检测乙型肝炎病毒X蛋白、COX-2、CD34的表达水平,Werdner法计算微血管密度;分析上述因子与乙肝相关性肝细胞癌组织微血管生成的相关性。RT-PCR和Western印迹检测人肝癌细胞系Hep G2和稳定转染乙型肝炎病毒X蛋白的Hep G2-X细胞中COX-2 mRNA和蛋白表达情况;酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中PGE2表达水平和不同浓度COX-2抑制剂西乐葆作用后PGE2水平。结果乙型肝炎病毒X蛋白阳性表达组织中COX-2阳性率明显高于乙型肝炎病毒X蛋白阴性表达组织和非乙型肝炎相关性肝癌组织(P0.01)。乙型肝炎病毒X蛋白阳性表达组织中早期肝癌组织中微血管密度明显低于进展期肝癌组织,乙型肝炎病毒X蛋白阴性表达组织中微血管密度明显低于阳性表达组织(P0.01);COX-2阳性表达组织中微血管密度明显高于COX-2阴性表达组织(P0.01);非乙型肝炎相关性肝癌组织中微血管密度明显低于乙型肝炎病毒X蛋白、COX-2阳性表达组织(P0.01),乙型肝炎病毒X蛋白阴性表达组织和COX-2阴性表达组织差异无统计学意义(P0.05);乙型肝炎病毒X蛋白、COX-2在乙型肝炎相关性人肝细胞癌组织微血管生成呈正相关。Hep G2-X细胞中COX-2 mRNA和蛋白表达水平明显高于空载体对照Hep G2细胞,并且细胞培养上清液中PGE2水平明显增加;与Hep G2细胞相比,西乐葆对Hep G2-X细胞分泌PGE2具有更强的抑制作用。结论乙型肝炎病毒X蛋白、COX-2在乙肝相关性肝细胞癌组织中高表达,促进癌组织微血管生成;乙型肝炎病毒X蛋白可通过COX-2/PEG2信号通路促进肝癌的发生和发展。     

microRNA-149-5p过表达对肝癌细胞HepG2和Bel-7402增殖及迁移的抑制作用

目的明确microRNA-149-5p(miR-149-5p)在肝癌组织中的表达,并探讨其在肝癌细胞中的分子生物学作用。方法收集2010年1月-2014年1月内蒙古医科大学附属医院通过肝切除术获得的65例肝癌组织及相应癌旁组织,采用荧光定量PCR检测65例肝癌组织及相应癌旁组织中miR-149-5p的表达情况。细胞实验分2组,实验组转染miR-149-5p模拟物,对照组转染模拟物阴性对照,采用噻唑蓝比色法和创伤愈合试验检测miR-149-5p对Hep G2和Bel-7402细胞增殖及迁移能力的影响。计量资料组间比较采用t检验或单因素方差分析。结果 miR-149-5p在肝癌组织的表达量(0.14±0.06)明显低于配对的癌旁组织(2.56±0.42),两者差异有统计学意义(t=7.79,P0.05);miR-149-5p在肝癌细胞Hep G2、Bel-7402和正常肝上皮细胞L02中的表达量分别为(1.43±0.25)、(1.77±0.32)和(5.68±0.74),3组间比较差异有统计学意义(F=11.27,P0.05)。体外功能实验发现,miR-149-5p模拟物可显著抑制Hep G2和Bel-7402细胞24、48、72 h时的增殖(Hep G2:t值分别为4.98、5.17、7.78,P值均0.05;Bel-7402:t值分别为6.83、7.09、15.67,P值均0.05),并降低Hep G2和Bel-7402细胞的迁移(t值分别为23.11、17.42,P值均0.05)。结论 miR-149-5p在肝癌组织中表达下调,过表达miR-149-5p可抑制肝癌细胞的增殖及迁移能力,提示miR-149-5p可作为肝癌基因治疗的一个新的有效的分子靶标。     

稳定表达HBx的人肝细胞系7702的建立

目的 构建HBx表达载体,筛选可稳定表达HBx的人肝细胞(HL)-7702细胞系。 方法 采用RT-PCR法扩增HBx 基因片段,并将其连接至pIRES载体,经酶切和测序鉴定pIRES-HBx重组质粒序列。然后,分别采用Real-time PCR和Western blot技术检测验证重组质粒的正确性。最后,应用G418抗生素筛选稳定表达HBx的HL-7702细胞系。结果 经PCR扩增得到正确的HBx片段,成功构建pIRES-HBx质粒,将重组质粒转染HEK 293 细胞和HL-7702细胞均实现了HBx过量表达;经免疫荧光法鉴定,我们获得了稳定大量表达HBx的HL-7702细胞系。结论 成功构建的pIRES-HBx表达载体能在HL-7702细胞稳定表达HBx,为后续研究提供了基础实验工具。     

NCEH1基因在肝癌组织与细胞系中的表达及生物学作用

目的了解中性胆固醇酯水解酶1(neutral cholesterol ester hydrolase 1,NCEH1)基因在肝癌组织及人肝癌细胞系中表达水平,观察NCEH1基因敲减对SMMC-7721人肝癌细胞系增殖、凋亡、侵袭及转移能力的影响。方法选取2013年1月—2019年6月在暨南大学附属广州红十字会医院手术治疗的32例肝癌患者标本及对应的癌旁组织,采用实时荧光定量PCR方法检测NCEH1基因的相对表达量。从ICGC数据库下载截至2020年9月份的肝癌样本基因表达数据,应用R软件整理数据,筛选出每个样本中NCEH1基因表达量,分别采用配对Wilcoxon符号秩检验和Wilcoxon秩和检验分析肝癌与癌旁组织间的差异。采用实时荧光定量PCR方法检测NCEH1基因在SMMC-7721、Bel-7402、HepG2、Hep3B人肝癌细胞系和HL7702正常人肝细胞系中的表达水平。通过慢病毒介导的小干扰RNA(siRNA)技术构建NCEH1基因敲减的SMMC-7721人肝癌细胞系,分为NCEH1敲减组(KD组)和阴性对照组(NC组),以实时荧光定量PCR法检测NCEH1基因的敲减效率,再以MTT检测实验、Annexin V-APC单染法流式细胞仪检测、划痕愈合实验、Transwell实验和Transwell侵袭小室实验检测2组SMMC-7721肝癌细胞的增殖、凋亡、转移和侵袭能力,采用t检验对两组间数据进行统计学分析。结果 NCEH1基因在肝癌组织中的平均表达量高于癌旁组织(本院标本Z=2263,P=0.024,ICGC数据库U=18 768,P 0.001)。NCEH1基因在中等侵袭转移潜能的SMMC-7721细胞系中的表达量最高;在低侵袭转移潜能的Bel-7402和HepG2细胞系中的表达水平次之,在无侵袭转移潜能的Hep3B细胞系中的表达水平最低。KD组SMMC-7721细胞中NCEH1基因的表达水平明显低于NC组(t=11.578,P=0.000 3),NCEH1基因的敲减效率高达740%。较之NC组,KD组细胞生长速度明显减缓(t=32.10,P 0.001);细胞凋亡率明显升高(t=27.303,P 0.001);迁移率、转移和侵袭细胞数均明显降低(t值分别为9.51、38.123、22.331,P值均0.001)。结论 NCEH1基因在肝癌组织及细胞系中的表达明显升高,且可促进肝癌细胞的生长增殖及侵袭转移并抑制凋亡,提示其可能是一个潜在的肝癌治疗靶点。     

沉默诱骗受体3的表达对肝癌细胞生物学特性的影响

目的了解诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)在肝癌细胞中的表达水平,探讨其对肝癌细胞增殖、凋亡的影响并探讨其分子机制.方法采用real-time PCR、Western blot以及ELISA等方法检测肝癌细胞Hep G2和Huh-7与正常肝细胞HL-7702和Chang liver中DcR3 mRNA和蛋白的表达以及分泌水平.设计和构建DcR3小干扰RNA重组慢病毒(LV-shDcR3),感染Hep G2和Huh-7细胞,同时以空病毒载体作为对照,Western blot验证沉默效果.感染后通过CCK-8和平板克隆形成实验观察细胞增殖情况;通过流式细胞术观察细胞凋亡情况;通过Western blot检测凋亡相关蛋白如剪切型多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶的表达情况.通过Western blot方法检测转染前后Fas L、LIGHT和TRAIL等死亡配体的表达情况.组间比较采用单因素方差分析.结果肝癌细胞Hep G2和Huh-7中DcR3的mRNA和蛋白表达水平与正常肝细胞相比明显升高,差异具有统计学意义.细胞上清中DcR3的分泌水平也明显升高.与空白组和感染对照组相比,感染LV-shDcR3组,肝癌细胞中DcR3的表达显著降低,细胞生存率明显降低,早期凋亡细胞比例明显升高,凋亡相关蛋白表达水平明显升高.与感染前相比,肝癌细胞感染LV-shDcR3后,TRAIL和Fas L的表达水平明显升高.结论 DcR3在肝癌细胞中高表达,下调肝癌细胞中DcR3的表达可以抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与TRAIL和Fas L凋亡通路有关.     

B7-H1在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨B7-H1在人肝癌组织中的表达情况及其对肝癌Hep G2细胞增殖能力和凋亡水平的影响。方法采用组织化学染色方法观察肝癌组织和癌旁正常组织中B7-H1的表达情况。采用Lonza电转染的方法转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2进入肝癌Hep G2细胞,并通过RTPCR和Weatern印迹方法检测肝癌Hep G2细胞中B7-H1的表达情况。敲低肝癌Hep G2细胞中B7-H1的表达后,采用MTT方法检测肝癌Hep G2细胞的增殖情况,并采用Annexin V/7-AAD双染的方法检测肝癌Hep G2细胞的凋亡水平。结果与癌旁正常组织相比,肝癌组织中B7-H1的表达水平显著升高。采用Lonza电转染的方法转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2进入肝癌Hep G2细胞后,肝癌Hep G2细胞中-B7-H1的表达水平均显著降低。转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2敲低肝癌Hep G2细胞中B7-H1表达后,肝癌Hep G2细胞的增殖能力均显著降低,与对照组相比差异显著(P0.01)。转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2敲低肝癌Hep G2细胞中B7-H1表达后,肝癌Hep G2细胞的凋亡均显著升高,与对照组相比差异显著(P0.01)。结论肝癌组织中B7-H1的表达水平显著升高,且B7-H1可促进肝癌Hep G2细胞的增殖能力,并抑制肝癌Hep G2细胞的凋亡水平,提示肝癌组织中高表达的B7-H1与肝癌的发生和发展密切相关。     

Hedgehog信号通路在人肝细胞癌细胞系及肝癌组织中的表达与意义

目的探讨Hedgehog信号通路在人肝细胞癌细胞系及Shh基因在肝癌组织中的表达及意义。方法采用半定量RT-PCR法检测Hep3B和HCC-LM3细胞中Shh、Ihh、Ptch、Smo、Gli mRNA及21例肝细胞癌癌组织和癌旁肝组织中Shh mRNA的表达状况。结果Shh、Ihh、Ptch、Smo、Gli mRNA在两个肝癌细胞系中均有表达。其中,Shh、Gli1 mRNA在Hep3B细胞中的表达强度显著高于HCC-LM3细胞,而Gli2和Gli3的表达强度正相反;Ihh、Smo mRNA在Hep3B细胞中的表达强度高于HCC-LM3细胞,但两者间无显著性差异;Ptch mRNA在两个细胞系细胞中的表达无显著性差异;Shh mRNA在肝细胞癌癌组织中的阳性检出率为57.1%（12/21）,在癌旁组织中为4.8%（1/21）,两者间有显著性差异（P〈0.05）。其中,6例高分化、8例中分化和7例低分化肝细胞癌中Shh mRNA的阳性检出率分别为83.3%（5/6）、62.5%（5/8）和28.6%（2/7）,表现为随肝细胞癌由高到低的分化而呈显著性下降的趋势（P〈0.05）;Shh mRNA的表达强度在肝细胞癌癌组织之间、癌与癌旁组织之间无显著性差异。结论Hedgehog信号通路的异常激活参与了肝细胞癌的发生发展过程,Shh mRNA在部分高中分化肝细胞癌中表达上调,这或许为探讨肝癌的发生机制、早期诊断及治疗提供了新的依据。     

siRNA沉默Cyclin E基因对肝癌HepG2、SMMC-7721和BEL-7402细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:观察siRNA沉默Cyclin E基因表达对肝癌HepG2、SMMC-7721和BEL-7402细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:构建2个靶向Cyclin E基因siRNA载体,转染人肝癌HepG2、SMMC-7721和BEL-7402细胞.RT-PCR、Western blot检测转染后HepG2、SMMC-7721和BEL-7402细胞Cyclin E基因mRNA和蛋白表达水平.CCK-8试验、软琼脂克隆形成实验检测HepG2、SMMC-7721和BEL-7402细胞增殖、克隆形成能力.流式细胞术、transwell试验分别检测HepG2、SMMC-7721和BEL-7402细胞周期和侵袭能力.结果:构建的2个Cyclin E基因siRNA载体插入序列与所设计序列均一致;转染HepG2、SMMC-7721和BEL-7402细胞后,干扰1组、干扰2组与空白对照组和阴性对照组比较,C y c l i n E m R N A和蛋白表达量均显著降低(P<0.05),细胞生长速度延缓,软琼脂细胞集落形成数、穿透细胞数均显著降低(P<0.05),S和G2/M期细胞比例减少,G0/G1期细胞比例增加.结论:沉默肝癌细胞Cyclin E表达水平,可有效抑制细胞生长、增殖和侵袭能力.     

TRB3对人肝癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:探讨假性蛋白激酶毛球族同源蛋白3（TRB3）在肝癌（HCC）细胞增殖、凋亡和迁移中的调控作用及机制。方法:免疫组织化学及蛋白质印迹法（Western blot）检测HCC患者癌组织及癌旁组织TRB3的表达;体外检测肝癌细胞系HepG2和Huh7细胞中TRB3的表达,同时设计小干扰RNA靶向抑制TRB3后：CCK8...     

CD68和CD11c在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:检测C D68和C D11c在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)和癌旁组织巨噬细胞中的表达情况,探讨并比较其与CD68在HCC中的相关临床病理特征的关系及其意义.方法:采用免疫组织化学方法检测60例HCC患者肝癌组织和癌旁组织CD68和CD11c的表达,分析并比较CD68和CD11c在巨噬细胞中的表达情况以及与HCC临床病理特征的关系;免疫荧光双染HCC石蜡切片肝癌组织的CD68和CD11c,采用倒置荧光显微镜观察,并采集图像分析CD68和CD11c的表达意义.结果:免疫组织化学染色结果显示CD68、C D11c主要在肝癌和癌旁组织巨噬细胞中表达.癌旁组织中的CD68和CD11c表达水平明显高于肝癌组织(P0.01),肝癌和癌旁组织中的CD68和CD11c存在一定的相关性(r=0.601,P0.01;r=0.626,P0.01);肝癌组织和癌旁组织中CD68的表达水平明显高于CD11c的表达(分别为P0.01和P0.01);免疫荧光双染结果显示在肝癌组织CD68的表达明显高于CD11c,与免疫组织化学结果一致.结论:CD68巨噬细胞在癌旁组织中表达明显高于肝癌组织,CD11c巨噬细胞在癌旁组织中表达也明显高于肝癌组织,并且与CD68相比,CD11c标记的巨噬细胞与HCC的发生、进展关系更为密切;可以帮助我们为诊断及治疗HCC提供一些新的思路和理论基础.