系统性红斑狼疮患者CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞中Foxp3的表达及免疫抑制功能研究

目的 研究系统性红斑狼疮(SEE)外周血中调节性T细胞不同标志以及调节性T细胞在SLE发病中的作用;探讨CD127与Foxp3的相关性,明确CD127定义调节性T细胞的特异性;鉴定CD4~+CD25~+CD127~(low/-)T淋巴细胞免疫抑制功能.方法 ①采用四色直接荧光素标记法和多参数流式细胞术检测40例SLE患者(19例初发和21例缓解)及15名健康对照外周血CD4~+CD25~+T淋巴细胞、CD4~+CD25~+CD127~(low-)T淋巴细胞、CD4~+CD25~+Foxp3~+T淋巴细胞、CD4~+CD25~(high)T淋巴细胞、CD4~+CD25~(high)CD127~(low/-)T淋巴细胞、CD4~+CD25~(high)Foxp3~+T淋巴细胞以及CD4~+CD127~(low/-)Foxp3~+T淋巴细胞占CD4~+T淋巴细胞的比率,并且将7种调节性T细胞比率与外周血抗双链DNA(dsDNA)等抗体及SLE疾病活动指数(SLEDA1)评分等进行相关性分析.②以流式细胞分选术结合细胞培养技术,检测和分析3例SLE患者和4名健康人外周血中CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞对CD4~+CD25~-效应性T细胞增殖的抑制作用.采用两样本均数的t检验,重复测量的方差分析,Pearson相关与Spearman相关分析进行统计学处理.结果 ①SLE患者组7种调节性T细胞比率分别为(6.1±1.7)%,(3.1±1.3)%,(2.1±1.0)%,(1.6±0.3)%,(0.97±0.28)%,(0.69±0.23)%和(0.71±0.35)%.与健康对照组比较:SLE患者组前6种调节性T细胞比率均低于健康对照组(P<0.05).②SLE患者组:CD4~+CD25~+Foxp3~+、CD4~+CD25~(high)Foxp3~+T淋巴细胞比率与IgA呈正相关;CD4~+CD25~(high)CD127~(low/-)T淋巴细胞比率与抗SSB抗体呈正相关.③SLE患者初发组和缓解组比较:SLE患者初发组7种调节性T细胞中除CD4~+CD127~(low/-)Foxp3~+T淋巴细胞比率外,其余均低于缓解组(P<0.05).④SLE患者初发组治疗前后比较:激素治疗前6种调节性T细胞比率均低于激素治疗后(P<0.05).⑤SLE患者初发组、缓解组和对照组中,CD4~+CD25~+T淋巴细胞及CD4~+CD25~(high)T淋巴细胞中Foxp3的表达与CD127低表达均呈正相关.⑥SLE患者、健康人CD4+CD25-效应性T细胞的体外增殖都可以被自身CD4~+CD25~+CD127~(low/-)调节性T细胞所抑制,但SLE患者的抑制率明显低于健康对照.结论 SLE的免疫异常可能与调节性T细胞的数量和功能缺陷有关;CD127可能代替Foxp3作为调节性T细胞特异性的表面标记物.     

CD4~+ CD25~(high) CD127~(low/-)调节性T细胞在多发性骨髓瘤患者外周血的表达

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者外周血CD4+CD25highCD127low/-调节性T(Tregs)细胞表达水平及临床意义。方法采用流式细胞术(FCM)检测30例MM患者和20例健康对照者外周静脉血CD4+CD25highCD127low/-Tregs细胞水平。结果 1 MM组CD4+CD25high CD127low/-Tregs细胞表达明显高于正常对照组(P<0.05)。2MM组不同国际分期系统(ISS)分期CD4+CD25highCD127low/-Treg细胞水平均高于正常对照组,随着疾病进展,Ⅲ期明显高于Ⅱ期(P<0.05)。3MM组化疗后外周血CD4+CD25highCD127low/-Tregs细胞水平较化疗前显著下降(P<0.05)。结论 MM患者外周血CD4+CD25highCD127low/-Treg细胞比例明显升高,可能是MM免疫逃逸的一个重要机制;进展期Tregs的变化为MM患者及时进行临床干预提供实验依据。     

CD4+CD25+CD127low/-T淋巴细胞在类风湿关节炎患者外周血中的表达及意义

目的 检测调节性T淋巴细胞新旧标志在活动性类风湿关节炎(RA)患者外周血中的表达,探讨用CD127代替FOXP3对调节性T淋巴细胞进行研究的可能性.方法 选取活动性RA患者32例,其中未经缓解病情抗风湿药(DMARDs)治疗者20例,经DMARDs治疗效果不佳者12例,以25例原发性干燥综合征(pSS)患者和24名健康人作为对照,采用流式细胞术检测外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+CD127low/-及CD4*CD25+FOXP3+T淋巴细胞的比例,同时检测外周血C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、免疫球蛋白、补体等水平并进行相关性分析.结果 RA患者CD4+CD25highT淋巴细胞百分率与健康对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).其CD4+CD25+FOXP3+T淋巴细胞与CD+CD25+CD127low/-T淋巴细胞的百分率均低于健康对照组(P<0.05),但CD4+D25+FOXP3+、CD4+CD25+CD127low/-T淋巴细胞在RA患者与pSS患者中的表达差异无统计学意义(P>0.05);这三群细胞的表达水平在RA未经治疗组和治疗效果不佳组之间差异均无统计学意义(P>0.05). RA患者CD4+CD25+FOXP3+T淋巴细胞与CD4+CD25+CD127low/-T淋巴细胞之间呈明显正相关(r=0.698,P=0.001),但这两群细胞与患者的CRP、ESR等水平及抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、类风湿因子(RF)均无相关性(P>0.05).结论 活动性RA患者外周血中,CD4+CD25+CD127low/-T淋巴细胞的百分率降低,并且与CD4+CD25+FOXP3+T淋巴细胞呈显著正相关性,提示CD127可能被作为Treg细胞中FOXP3的替代标记.     

胸腺肽α1对慢性乙型肝炎CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)调节性T淋巴细胞功能的影响

目的观察胸腺肽α1对慢性乙型肝炎CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)调节性T淋巴细胞(Treg)功能的影响。方法选取2016年12月-2017年7月陕西省人民医院感染性疾病科收治的慢性乙型肝炎患者67例,其中38例接受恩替卡韦抗病毒治疗(对照组),29例接受恩替卡韦联合注射用胸腺肽α1治疗(治疗组),分别于治疗前后分离外周血单个核细胞,流式细胞术检测CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg水平,纯化CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg,与自体CD4+CD25-T淋巴细胞共培养,CCK-8法检测细胞增殖,ELISA法检测细胞因子分泌水平。计量资料2组间比较采用t检验,计数资料组间比较采用χ2检验。结果对照组、治疗组患者经治12周CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg均较基线水平明显下降,差异均有统计学意义(8.85±2.18)%vs(12.32±1.22)%、(9.26±2.30)%vs(13.71±2.32)%,t值分别为4.579、4.803,P值分别为0.0005、0.0003]。选取17例对照组患者和21例治疗组患者检测细胞因子分泌水平。经治12周对照组患者治疗12周后Treg与CD4+CD25-T淋巴细胞共培养系统中细胞增殖和分泌细胞因子水平均无明显变化;治疗组共培养系统中细胞计数较基线水平明显升高,差异有统计学意义[(3.66±0.95)×106个vs(2.07±0.51)×106个,t=5.709,P0.0001];治疗组共培养细胞分泌抑制性细胞因子IL-10、IL-35水平明显降低,差异均有统计学意义[(41.40±11.89)pg/ml vs(56.53±27.85)pg/ml、(122.9±9.98)pg/ml vs(130.0±15.98)pg/ml,t值分别为2.639、2.459,P值分别为0.019、0.028)],分泌抗病毒细胞因子IFNα、IFNγ水平明显升高,差异均有统计学意义[(297.5±83.56)pg/ml vs(235.6±67.72)pg/ml、(5.83±0.85)pg/ml vs(4.39±0.95)pg/ml,t值分别为2.603、4.659,P值分别0.017、0.0004]。结论胸腺肽α1能够抑制慢性乙型肝炎CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg水平及免疫抑制功能,提高患者免疫功能。     

CD4~+CD25~+Treg细胞比例与老年动脉粥样硬化性脑梗死的相关性

目的探讨CD4~+CD25~+Treg细胞比例与老年动脉粥样硬化性脑梗死的相关性分析。方法老年动脉粥样硬化性脑梗死患者48例作为观察组,并将其根据颈动脉硬化程度分为轻度组(颈动脉内膜增厚),中度组(颈动脉斑块),重度组(颈动脉狭窄)三个亚组各16例。另取同期参加体检的健康老年志愿者48例作为对照组。通过流式细胞仪检测梗死7 d内观察组与对照组以及脑梗死不同亚组之间外周血CD4~+CD25~+Treg细胞比例,探究外周血CD4~+CD25~+Treg与颈动脉内-中膜厚度(IMT)的相关性。结果脑梗死后第1天和第2天观察组CD4~+CD25~+Treg细胞百分比均低于对照组,第5天至第7天高于对照组(均P<0.05),其余2 d差异无统计学意义(P>0.05)。脑梗死后第1~7天,三个亚组间CD4~+CD25~+Treg细胞百分比比较差异均有统计学意义(P<0.05),两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组患者外周血CD4~+CD25~+Treg细胞百分比与IMT呈显著负相关(r=-0.543,P<0.05)。结论老年动脉粥样硬化性脑梗死患者急性期外周血CD4~+CD25~+Treg细胞百分比可作为评估脑缺血及血管内皮功能的非侵入性指标。     

胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的数量及其功能

目的 了解胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血CD4 +CD25+调节性T细胞(Treg)数量和功能的变化.方法 筛选40例HLA-A2+慢性丙型肝炎患者(其中20例合并胰岛素抵抗),流式细胞仪检测患者CD4+CD25+Treg细胞占外周血中CD4+T细胞的频率,液闪计数仪检测对HCV特异性CD8+T细胞增殖的抑制作用,ELISA法检测IFN-y水平.统计学处理采用t检验.结果 胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血CD4 +CD25+ Treg细胞占CD4+T细胞的(9.5±1.9)％,明显低于慢性丙型肝炎患者的(11.2±2.2)％(t=2.615,P＜0.05).胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)≥4患者的CD4+CD25+ Treg细胞比例为(9.0±1.8)％,明显低于HOMA-IR＜4患者的(10.8±2.3)％(t=2.413,P＜0.05).胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者CD4+CD25+ Treg细胞和去除Treg的外周血单个核细胞(PBMC)共培养上清液中IFN-y为(4 050±580) pg/mL,明显高于慢性丙型肝炎患者的(2 005±330)pg/mL(t=13.705,P＜0.01).HOMA-IR≥4患者IFN-y为(5 682±986)pg/mL,明显高于HOMA-IR＜4患者的(2 819±660) pg/mL(t=7.630,P＜0.01).结论 随着胰岛素抵抗程度加重,慢性丙型肝炎患者外周血CD4+ CD25+ Treg细胞频率减低,对HCV特异性CD8+T细胞增殖的抑制作用减弱.     

干扰素治疗慢性乙型肝炎患者HBeAg转阴率和CD4~+CD25~+调节性T淋巴细胞水平的关系

目的 观察干扰素抗病毒治疗前后慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)表达水平的变化和HBeAg转阴的关系.方法 选择用干扰素α-2b治疗的HBeAg阳性慢性乙型肝炎56例,分别于治疗前、48周时检测外周静脉血CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞的比例,同时检测HBeAg、ALT和HBVdNA载量.结果 抗病毒治疗48周后HBeAg转阴组CD4+CD25+rreg水平[(9.12±2.45)％]较治疗前[(11.99±3.25)％]明显下降(P＜0.01);而HBeAg未转阴组较治疗前无明显下降(P＞0.05).结论 慢性乙型肝炎患者经干扰素α-2b抗病毒治疗,HBeAg血清转换者CD4+CD25+Treg水平降低,而未转阴者Treg下降不明显.     

慢性HBV感染者外周血CXCR5~+CD4~+Tfh细胞的测定及其与FoxP3~+Treg细胞的相关性

目的:探讨慢性乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)感染不同阶段患者外周血CD4+T淋巴细胞中CD4+CXCR5+Tfh细胞及CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的百分比及其意义.方法:应用流式细胞术检测15例慢性无症状HBV携带者(chronic asymptomatic HBV carriers,AsC)、42例慢性乙型肝炎(chronic hepatitisB,CHB)患者(HBeAg阳性25例、HBeAg阴性17例)、11例非活动性HBsAg携带者(inactive HBsAg carriers,InC)外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞及CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比,并与15例健康对照(healthycontrol,HC)进行比较.结果:AsC、HBeAg(+)CHB、HBeAg(-)CHB组外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞占CD4+T淋巴细胞的比例分别为17.66(15.34%-20.56%),21.95(19.60%-26.32%),22.33(17.58%-24.85%),显著高于HC组的13.67(9.80%-15.32%),差异具有统计学意义(P<0.001).与AsC及InC组的16.11(12.33%-19.73%)相比,HBeAg(+)、HBeAg(-)CHB组外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞占CD4+T淋巴细胞的比例显著升高(P<0.05).此外,AsC组外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的比例为7.70(6.35%-9.13%),显著高于HC组的6.53(5.54%-7.35%),P<0.05.HBeAg(+)CHB组外周血CD4+T淋巴细胞中CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的频率为7.52(6.09%-8.49%),与AsC组相比呈降低的趋势.外周血CD4+CXCR5+Tfh细胞占CD4+T淋巴细胞的比例与HBVDNA载量呈负性相关(r=-0.275,P<0.05);而与血清ALT水平、HBsAg滴度无相关性.结论:CD4+CXCR5+Tfh细胞可能参与了慢性HBV感染所介导的免疫反应,外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞及CD4+CXCR5+Tfh细胞的消长可能与疾病的活动性相关.     

重症肌无力患者外周血CD4+T细胞功能的变化及相关机制

目的探讨重症肌无力(MG)患者外周血CD4~+T细胞功能的变化对其机制。方法抽取初治及治疗病情稳定的MG患者及同期入院进行健康体检者各20例的静脉血10 ml。流式细胞术(FCM)测定其外周血白细胞介素(IL)-17~+CD4~+T细胞、干扰素(IFN)-γ~+CD4~+T细胞、肿瘤坏死因子(TNF)-α~+CD4~+T细胞、IL-2~+CD4~+T细胞和CD4~+CD25high CD127~-Treg细胞比例。CD4~+T细胞与CD4~+CD25high CD127~- Treg细胞共孵育后,FCM术测定CD4 T细胞分泌IL-17、IFN-γ、TNF-α及IL-2变化情况。结果与对照组及治疗病情稳定的MG患者相比,初治MG患者外周血IL-17~+CD4~+T细胞、IFN-γ+CD4~+T细胞、TNF-α~+CD4~+T细胞、IL-2~+CD4~+T细胞比例均显著升高(P<0.05)。MG患者与HC外周血CD4~+Foxp3~+Treg细胞比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组外周血CD4~+CD25high CD127~-Treg细胞可显著抑制CD4 T细胞分泌IL-17、IFN-γ、TNF-α和IL-2,而MG患者外周血CD4~+CD25high CD127~-Treg细胞抑制CD4+TT细胞分分泌细胞因子的能力显著降低。结论 MG患者外周血CD4~+Foxp3~+Treg细胞功能的丧失,致使外周血CD4~+T细胞细胞因子分泌能力增强,从而导致MG的发生和发展。     

慢性心力衰竭患者外周血CD4+CD25+CDlow127调节性T细胞的变化

目的 探讨外周血CD4+CD25+CDlow127调节性T细胞(Treg)在慢性心力衰竭(CHF)患者中的变化及其意义.方法 采用流式细胞仪检测53例CHF患者和17例健康者(对照组)外周血Treg细胞占CD4+细胞的百分比(CD4+CD25+CDlow127细胞/CD4+T细胞),比较CHF不同心功能分级患者及对照组Treg细胞占CD4+细胞的百分比的变化.结果 心功能NYHA分级Ⅲ～Ⅳ级患者Treg细胞占CD4+细胞的百分比[(2.47±0.36)％]低于心功能NYHA分级Ⅰ～Ⅱ级患者[(3.24±0.61)％],且两者与对照组[(5.23±0.94)％]相比,Treg细胞占CD4+细胞的百分比均降低,差异有统计学意义(P均＜0.05).相关性分析显示Treg细胞占CD4+细胞的百分比与脑钠肽呈负相关(r=-0.407,P＜0.05).结论 慢性心力衰竭患者外周血Treg细胞比例降低;与慢性心力衰竭的严重程度有关;心力衰竭程度越重,Treg细胞比例越低;免疫激活以及炎症可能参与了其发生发展.     

慢性丙型肝炎患者外周血CD4~+调节性T淋巴细胞水平的变化及其与抗病毒疗效的关系

目的探讨慢性丙型肝炎(CHC)患者的外周血CD4~+调节性T淋巴细胞(Treg)的变化及其与抗病毒疗效间的关系。方法收集2013年1月-2016年1月于本院完成标准化抗病毒治疗与随访的85例CHC患者作为CHC组,选取40例同期健康志愿者为对照组。于治疗前,治疗12、48周,以及随访24周时采用流式细胞测定患者的外周血CD4~+Treg,并测定血清HCV RNA、AST、ALT水平。计量资料组间比较采用t检验。结果治疗前,CHC组的HCV RNA、AST、ALT及CD4~+Treg水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P值均0.001)。治疗12周时,CHC组85例患者中36例(42.35%)获得早期病毒学应答(EVR)(EVR组),另49例(57.65%)未获得EVR(no-EVR组),EVR组患者的HCV RNA和CD4~+Treg水平较治疗前均显著降低(t分别为39.241、8.763,P值均0.001),2组间HCV RNA、CD4~+Treg水平比较差异有统计学意义(t值分别为76.520、8.227,P值均0.001)。治疗48周时,CHC组85例患者中49例(57.65%)获得结束时病毒学应答(ETR)(ETR组),另36例(42.35%)未获得ETR(no-ETR组),ETR组患者治疗48周时的AST、ALT、CD4~+Treg及HCV RNA水平显著低于治疗前(t值分别为46.197、11.806、15.368、9.694,P值均0.001)和no-ETR组(t值分别为72.612、9.274、9.682、7.729,P值均0.001)。随访24周时,CHC组85例患者中39例(45.88%)获得持续病毒学应答(SVR)(SVR组),其中30例为获得EVR患者,32例为获得ETR患者,另46例(54.12%)未获得SVR(no-SVR组),SVR组治疗48周、随访24周的HCV RNA、AST、ALT及CD4~+Treg水平均显著低于no-SVR组(治疗48周:t值分别为117.564、17.113、10.564、4.452,P值均为0.001;随访24周:t值分别为11.196、20.997、13.384、7.900,P值均0.001)。结论 CHC患者存在外周血CD4~+Treg表达升高,抗病毒治疗可有效下调CD4~+Treg水平,减轻肝损伤。外周血CD4~+Treg检测可作为CHC发病及抗病毒疗效的评价指标。     

CD4~+ CD25~+调节性T细胞对慢性淋巴细胞白血病预后的影响

目的:探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)表达及其与预后的相关性。方法:采用流式细胞仪检测50例健康者(对照组)及30例CLL患者(CLL组)治疗前后CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+Foxp3+Treg水平。结果:初诊CLL组患者外周血T淋巴细胞数量、CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+Foxp3+Treg水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。治疗后,CLL组患者外周血T淋巴细胞数量、CD4+CD25+Foxp3+Treg水平显著降低,与初诊时比较差异有统计学意义(P0.05),但仍高于对照组(P0.05)。CLL患者中,Binet临床分期A期患者CD4+CD25+Foxp3+Treg水平显著低于B/C期患者,差异有统计学意义(P0.05)。Spearman相关分析结果显示,Binet临床分期与CD4+CD25+Foxp3+Treg水平呈正相关(r=0.511,P0.05)。结论:CD4+CD25+Foxp3+Treg水平可能是评估CLL患者预后的有效指标。     

CD8~+CD25~+FoxP3~+调节T细胞在新诊断2型糖尿病患者外周血中的变化及其临床意义

目的探讨外周血CD8~+CD25~+FoxP3~+调节T细胞(CD8~+Treg)在新诊断T2DM发病过程中的比例变化及意义。方法选取2018年7～12月于我院内分泌科就诊的新诊断T2DM患者62例,其中肥胖患者30例(OB组,BMI≥28 kg/m~2),非肥胖患者32例(T2DM组,BMI28 kg/m~2)。选取同期于我院健康体检人群32名为正常对照组(NC)。采用流式细胞仪分析外周血CD8~+Treg比例;实时定量PCR检测外周血单个核细胞(PBMCs)FoxP3 mRNA水平。结果与NC组比较,OB组外周血CD8~+Treg细胞比例及PBMCs FoxP3 mRNA均降低(P0. 05)。OB组外周血CD8~+Treg细胞比例与PBMCs FoxP3 mRNA水平(r=0. 382,P=0. 037)呈正相关,与胰岛素抵抗指数、FIns水平呈负相关(r=―0. 421、―0. 393,P=0. 020、0. 032)。Logistic回归分析显示,CD8~+Treg可能是T2DM伴IR的保护因素(OR=0. 637,95%CI 0. 432～0. 938)。结论新诊断T2DM患者外周血CD8~+Treg细胞比例降低可能在T2DM发病过程中起重要作用。     

强直性脊柱炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的研究

目的 观察强直性脊柱炎(AS)患者外周血CD4+CD25调节性T细胞(Treg)的数量、功能及肿瘤坏死因子(TNF)-a 抑制剂治疗的影响.方法 活动性AS患者25例,10例给予etanercept治疗12周,健康对照21名,分离外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞术检测CD4+CD25high T细胞比例;实时定量聚合酶链反应检测FOXP3 mRNA表达;免疫磁珠法去除CD25+细胞,可溶性噻唑盐(WST-1)法检测T细胞增殖.结果 活动性AS组CD4+CD25high T细胞比例与对照组差异尤统计学意义,但FOXP3 mRNA表达明显低于对照组(P＜0.01),并与C反应蛋白(CRP)呈负相关(P＜0.01).两组的CD4+CD25+细胞体外均能抑制T细胞增殖(P均＜0.01). Etanercept治疗明显增加CD4+CD25highT细胞比例和FOXP3 mRNA表达(P均＜0.01),与CRP降低呈负相关(P＜0.05;P＜0.01).结论 AS患者外周血表达FOXP3的CD4+CD25+Treg细胞异常,可能参与AS发生和发展;Etanercept治疗上调Treg细胞,可能是抗TNF-α治疗的一个机制.     

慢性丙型肝炎患者CD4+CD25+调节性T细胞表达增加

目的:探讨CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞在慢性丙型肝炎患者免疫下调中的意义.方法:流式细胞仪检测慢性丙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞的数量;与CD4+CD25-T细胞共同培养,检测其抑制功能;流式细胞仪检测其对CD4+CD25-T细胞合成IFN-γ和IL-4的影响;RT-PCR检测CD4+CD25+Treg细胞中Foxp3的mRNA表达.结果:CD4+CD25+Treg细胞约占慢性丙型肝炎患者外周血中CD4+T细胞的14.1±1.6%,显著高于正常对照5.3±0.8%(P＜0.01),显著抑制CD4+T细胞的增殖(P=0.002),以及合成IFN-γ.CD4+CD25+Treg 细胞高表达Foxp3.结论:持续性HCV感染患者CD4+CD25+Treg细胞表达增加,特异性抑制Th1细胞反应.     

小剂量氨茶碱对支气管哮喘患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞凋亡的影响

目的 观察小剂量氨茶碱对分离培养的健康人和支气管哮喘(简称哮喘)患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(T regulatory cells,Treg)凋亡的影响.方法 经密度梯度离心法、尼龙棉柱法、磁珠分离法分离出健康人和哮喘患者外周血CD4+CD25+Treg,分小剂量氨茶碱(1.13 mg/L)、及空白组培养72 h后,用流式细胞仪检测凋亡率变化.结果 ①健康人外周血CD4+CD25+Treg的纯度为77.4%～92.3%,哮喘患者CD4+CD25+Treg的纯度为75.2%～93.8%.②CD4+CD25+Treg占外周血CD4+T细胞的比例在健康组为4.12%～7.98%,在哮喘组为4.51%～8.68%.两者差异无统计学意义.③小剂量氨茶碱均可以诱导健康组及哮喘组外周血CD4+CD25+Treg凋亡率增加(P<0.05).结论 小剂量氨茶碱(1.13 mg/L)可能通过促进CD4+CD25+Treg凋亡来发挥免疫调节作用.     

肝动脉化疗栓塞术对老年原发性肝细胞癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的 观察肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗过程中老年原发性肝细胞癌(HCC)患者外周血CD4+ CD25+ foxp3+调节性T细胞(Tregs)和CD4+ CD25+ CD127low/-调节性T细胞(Tregs)的频数变化,探讨TACE治疗对老年HCC患者的免疫调节机制.方法 分别在治疗前及治疗4w后,采集37例HCC患者外周血,应用Ficoll淋巴细胞分离液分离单个核细胞(PBMC),应用流式分析法分别对PBMC中CD4+ CD25+ Tregs占CD4+百分比进行分析.结果 患者CD4+ CD25+ CD127low/-Tregs和CD4+ CD25+ foxp3+占CD4+T细胞百分比在TACE治疗前和治疗4w后相比较,均较治疗前有所降低[(4.16％±1.83％ vs 2.56％±1.05％,P＜0.01),(6.78％±2.82％vs4.94％±0.56％,P＜0.01)].结论 TACE治疗后老年HCC患者的CD4+ CD25+ Tregs占CD4+T细胞百分比下降.TACE治疗可能对HCC患者的免疫状态起到一定调理作用,CD127可以作为监测Treg的常规标志.     

NK细胞及调节性T细胞在多发性骨髓瘤中的表达水平及其意义

目的:初步探讨多发性骨髓瘤(MM)中NK细胞、Treg细胞表达水平与疾病进展及预后的关系。方法:收集48例初诊MM患者治疗前及3～4个疗程治疗后外周血标本,采用流式细胞仪测定CD16~+CD56~+NK细胞、CD4~+CD25~(high/+)CD127~(low/-) Treg细胞百分比,并收集初诊MM患者年龄,性别,血红蛋白(Hb),白细胞计数(WBC),血小板计数(PLT),β_2-微球蛋白(β_2-MG),血清白蛋白(Alb),血肌酐(Cr),血钙(Ca~(2+)),乳酸脱氢酶(LDH),骨髓浆细胞比例、免疫球蛋白、M蛋白、染色体荧光原位杂交(FISH)检测等临床资料。结果:治疗有效组CD16~+CD56~+NK细胞百分比治疗后[(21.38±8.76)%]较治疗前[(16.00±7.11)%]升高,CD4~+CD25~(high/+)CD127~(low/-) Treg细胞治疗后[(1.90±0.92)%]较治疗前[(2.29±0.99)%]降低,差异有统计学意义(P0.05),而治疗无效组MM患者治疗前后NK细胞百分比[(15.63±3.50)%∶(18.13±5.30)%]及Treg细胞百分比[(2.93±1.43)%∶(2.81±0.94)%]无明显变化(均P0.05);不同ISS分期的MM患者外周血NK细胞百分比Ⅲ期低于Ⅰ期、Ⅱ期,Treg细胞百分比Ⅲ期Ⅱ期Ⅰ期,差异有统计学意义(P0.05);与临床指标的相关性分析研究发现,NK细胞百分比与β_2-MG、LDH呈负相关,Treg细胞百分比与患者年龄、β_2-MG呈正相关,与Hb水平呈负相关(均P0.05);核型有异常组CD16~+CD56~+NK细胞百分比显著低于核型无异常组[(14.81±7.22)%∶(20.27±4.98)%],差异有统计学意义(P0.05);核型有异常组较核型无异常组CD4~+CD25~(high/+)CD127~(low/-) Treg细胞百分比稍升高[(2.45±1.16)%∶(2.33±1.04)%],差异无统计学意义(P0.05)。结论:外周血CD16~+CD56~+NK细胞、CD4~+CD25~(high/+)CD127~(low/-) Treg细胞可作为判断MM疾病进展及预后的重要指标。     

肺癌患者外周血Treg细胞与IL-10、TGF-β检测及其临床意义

目的测定肺癌患者外周血中CD_4~+CD_(25)~+FoxP3~+Treg细胞、CD_4~+CD_(25)~(hi)CD_(127)~(low)Treg细胞、IL-10及TGF-β的表达水平,并分析它们之间的相关性。方法采用流式细胞术检测73例肺癌患者外周血CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞及CD_4~+CD_(25)~(hi)CD_(127)~(low)Treg细胞表达水平,采用酶联免疫吸附反应检测IL-10及TGF-β值,并与19例健康人进行比较。结果肺癌患者外周血CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞、CD_4~+CD_(25)~(hi)CD_(127)~(low)Treg细胞、IL-10及TGF-β表达水平较正常对照组显著升高(P0.05)。CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞及CD_4~+CD_(25)~(hi)CD_(127)~(low)Treg细胞成正相关(P0.05)。CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞与IL-10、TGF-β成正相关(P0.05)。CD_4~+CD_(25)~(hi)CD_(127)~(low)Treg细胞与IL-10、TGF-β成正相关(P0.05)。结论CD_4~+CD_(25)~+FoxP3~+Treg、CD_4~+CD_(25)~(hi)CD_(127)~(low)这两种标记方法都是检测Treg细胞的可靠方式,Treg细胞、IL-10、TGF-β参与了肺癌患者肿瘤微环境的构成,是导致肺癌免疫功能抑制的原因之一,检测其水平变化可作为评估肺癌患者免疫功能的可靠指标。     

脓毒症患者外周血微小RNA-155和CD4~+CD25~+Treg细胞表达水平及意义

目的探讨脓毒症患者外周血微小RNA-155和CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg)表达水平及意义。方法选择脓毒症患者80例作为研究对象,根据患者病情程度分为脓毒症组62例,脓毒症休克组18例。另选择同期健康体检者60例作为对照组。采用RT-PCR检测微小RNA-155表达水平,采用流式细胞仪测定CD4~+CD25~+Treg细胞表达水平。比较两组氧合指数和血乳酸水平,急性生理学及慢性健康状况评分系统(APACHEⅡ评分)和序贯器官功能障碍评分(SOFA),外周血微小RNA-155及外周血CD4~+CD25~+Treg细胞表达水平。结果脓毒症组和脓毒症休克组氧合指数明显低于对照组而血乳酸水平明显高于对照组,差异有统计学意义(均P0.05);脓毒症休克组氧合指数明显低于脓毒症组而血乳酸水平明显高于脓毒症组,差异有统计学意义(均P0.05)。脓毒症组和脓毒症休克组APACHEⅡ评分和SOFA评分明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);脓毒症休克组APACHEⅡ评分和SOFA评分明显高于脓毒症组,差异有统计学意义(P0.05)。脓毒症组和脓毒症休克组微小RNA-155相对表达量明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);脓毒症休克组微小RNA-155相对表达量明显高于脓毒症组,差异有统计学意义(P0.05)。脓毒症组和脓毒症休克组CD4~+CD25~+Treg细胞表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);脓毒症休克组CD4~+CD25~+Treg细胞表达水平明显高于脓毒症组,差异有统计学意义(P0.05)。结论脓毒症患者外周血微小RNA-155和CD4~+CD25~+Treg细胞呈高表达,且与病情进展密切相关,有助于诊断和指导治疗。