白藜芦醇通过沉默信息调节因子1/核因子κB通路改善大鼠急性心肌梗死后炎症反应的研究

目的探讨白藜芦醇(RES)是否通过沉默信息调节因子1/核因子κB(SIRT-1/NF-κB)通路改善大鼠急性心肌梗死(AMI)后炎症反应。方法 30只成年SD大鼠随机分成3组:假手术组(Sham组)、AMI组和RES组;观察4周后,采用qRT-PCR和Western blot检测心脏梗死交界区组织白细胞介素(IL)-1β、IL-6及SIRT-1的mRNA含量及蛋白质表达情况。Western blot检测心脏梗死交界区组织IKK、p-IKK、p65及p-p65蛋白质表达情况。结果与Sham组相比,AMI组的IL-1β、IL-6在mRNA及蛋白水平表达显著升高(均为P<0.01),p-IKK/IKK和p-p65/p65比值明显升高(均为P<0.001),SIRT-1在mRNA及蛋白水平表达显著降低(均为P<0.001); RES组IL-1β、IL-6在mRNA及蛋白水平表达显著降低(均为P<0.01),p-IKK/IKK和p-p65/p65比值均显著减低(均为P<0.01),SIRT-1 mRNA及蛋白表达水平显著升高(均为P<0.001)。结论 RES可通过SIRT-1/NF-κB通路改善大鼠AMI后炎症反应,其作用机制可能与RES激动SIRT-1表达、抑制IKK及p-65磷酸化、阻止NF-κB信号通路的启动有关。     

RhoA/ROCK通路在缺氧复氧诱导的人心肌AC16细胞损伤中的作用机制

目的 探讨Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)通路在缺氧复氧(H/R)诱导的人心肌AC16细胞损伤中的作用及其机制。方法 将体外培养的AC16细胞分为对照组(正常培养)、H/R组(构建H/R模型)、H/R＋NC-siRNA组(转染NC-siRNA后构建H/R模型)和H/R＋RhoA-siRNA组(转染RhoA-siRNA后构建H/R模型),采用MTT法检测AC16细胞存活率,流式细胞术检测AC16细胞凋亡率,比色法检测AC16细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性和Caspase-3活性,ELISA检测AC16细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,试剂盒检测AC16细胞超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,实时荧光定量PCR检测AC16细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、核因子κB(NF-κB)p65及IkB激酶(IKK)的mRNA表达水平,Western blot检测AC16细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、NF-κB p65、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)p65及IKK的蛋白表达水平。结果 与对照组比较,H/R组细胞存活率、SOD水平显著降低,细胞凋亡率、LDH活性、Caspase-3活性、MDA水平和细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α水平以及细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKK mRNA与蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05);H/R＋NC-siRNA组和H/R组之间上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05);与H/R＋NC-siRNA组比较,H/R＋RhoA-siRNA组细胞存活率、SOD水平显著升高,细胞凋亡率、LDH活性、Caspase-3活性、MDA水平和细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α水平以及细胞中RhoA、ROCK1、ROCK2、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKK mRNA与蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05)。结论 靶向抑制RhoA/ROCK通路可通过降低炎症反应、氧化应激和细胞凋亡减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。     

早期胃癌患者H. pylori感染与活检组织PTEN、SOX2和NF-κB p65蛋白的关系

目的探讨早期胃癌患者幽门螺杆菌(H. pylori)感染与活检组织人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、性别决定相关基因簇2(SOX2)和核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达的关系。方法选取2015年1月至2018年2月湖南省脑科医院收治的确诊为早期胃癌并接受手术的患者128例,其中H. pylori阴性者43例(阴性组),H. pylori阳性者85例(阳性组)。取存档的胃癌组织及癌旁组织石蜡标本,采用免疫组化法检测H. pylori阴性及阳性胃癌组织与癌旁组织中PTEN、SOX2和NF-κB p65蛋白的阳性表达情况,采用Logistic回归分析法分析其与H. pylori感染的关系。结果 H. pylori阳性胃癌组织及癌旁组织中PTEN及SOX2阳性率明显低于H. pylori阴性组织(P0.05),H. pylori阳性胃癌组织及癌旁组织中NF-κB p65阳性率明显高于H. pylori阴性组织(P0.05);胃癌组织PTEN、SOX2阳性率明显低于癌旁组织(P0.05),胃癌组织NF-κB p65阳性率明显高于癌旁组织(P0.05);经Logistic回归分析,胃癌组织PTEN、SOX2蛋白阳性表达降低H. pylori感染风险(OR=0.483、0.562,P0.05),NF-κB p65蛋白阳性表达增加H. pylori感染风险(OR=3.871,P0.05)。结论 H. pylori感染可导致早期胃癌组织中PTEN、SOX2蛋白表达降低,NF-κB p65蛋白表达升高,推测H. pylori可能通过影响PTEN、SOX2及NF-κB p65蛋白的表达而参与胃癌的发生、发展过程。     

幽门螺杆菌相关性十二指肠球溃疡与胃癌中NF-κB、VEGF、Bcl-2、IL-1β的表达及意义

目的 探讨H.pylori相关性十二指肠溃疡与胃癌病例中NF-κB、Bcl-2、VEGF、IL-1β表达的差异及相互关系,进一步了解H.pylori致胃癌与十二指肠溃疡的发病机制.方法 选取胃镜检查的胃黏膜活检标本,十二指肠溃疡患者33例,胃癌患者63例,通过免疫组化SP法测定NF-κB、Bcl-2、VEGF、IL-1β在H.pylori感染与非感染的胃癌及十二指肠溃疡患者胃黏膜中的表达情况.结果 十二指肠溃疡组和胃癌组中,H.pylori感染者NF-κB、VEGF与IL-1β的表达水平高于H.pylori阴性者(P＜0.01或0.05),Bcl-2的表达无显著差异(P＞0.05);H.pylori感染病例中,NF-κB、Bcl-2、VEGF在胃癌组的表达水平高于十二指肠溃疡组(P＜0.01或0.05),IL-1β的表达无显著差异(P＞0.05);胃癌组与球溃疡组中,NF-κB的表达水平与VEGF均呈正相关(P＜0.05);胃癌组中,NF-κB和VEGF的表达水平与Bcl-2呈正相关(P＜0.05),与IL-1β表达水平无明显相关性(P＞0.05);球溃疡组中,NF-κB和VEGF的表达水平与IL-1β表达水平呈正相关(P＜0.05),与Bcl-2表达水平无明显相关性(P＞0.05).结论 幽门螺杆菌感染可上调宿主胃黏膜上皮NF-κB、VEGF及IL-1β的表达,三者表达水平具有协同性,其中NF-κB、VEGF表达的差异与十二指肠溃疡与胃癌两种不同的疾病转归相关.     

硫化氢对自发性高血压大鼠血管炎症反应的调节作用

目的 探讨新型气体信号分子硫化氢(H2S)对自发性高血压大鼠(SHR)血管炎症反应的调节作用.方法 4周龄Wistar-Kyoto(WKY)雄性大鼠和SHR雄性大鼠分为4组:WKY大鼠对照组、SHR对照组、SHR+硫氢化钠(NaHS,H2S供体)组及SHR+炔丙基甘氨酸(PPG,H2S生成关键酶抑制剂)组,饲养至9周.尾容积法测清醒时大鼠血压,免疫组织化学方法检测主动脉内皮细胞膜细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)和核转录因子抑制因子-α(IκB-α)的蛋白表达,原位杂交分析检测主动脉内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达.结果 SHR对照组血压显著高于WKY对照组(P<0.05),主动脉内皮细胞ICAM-1、ICAM-1 mRNA、胞核NF-κB p65明显高(P均<0.01),胞浆IκB-α蛋白表达明显低(P<0.01).SHR+NaHS组血压显著低于SHR对照组,主动脉内皮细胞ICAM-1、ICAM-1 mRNA、胞核NF-κB p65蛋白表达明显低(P<0.05),胞浆IκB-α蛋白表达明显增高(P<0.05),SHR+PPG组主动脉内皮细胞ICAM-1、ICAM-1mRNA、胞核NF-κB p65蛋白表达更高(P<0.05),胞浆IκB-α蛋白表达显著低(P<0.05).结论 H2S可通过抑制SHR血管炎症发挥抗高血压效应.H2S的抗血管炎症效应可能通过上调IκB-α的表达,降低NF-κB p65的表达,抑制ICAM-1 mRNA的转录和蛋白表达实现.     

依达拉奉对Aβ1-40诱导PC12细胞NF-κB、Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响

目的 探讨依达拉奉对β淀粉样蛋白(Aβ1-40)诱导PC12细胞NF-κB、Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响.方法 采用Western印迹法,RT-PCR等检测NF-κB、Bcl-2mRNA和蛋白的表达,观察MCI-186对其保护作用.结果 模型组中NF-κB P65 mRNA和蛋白表达水平明显升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显降低,与对照组比较有显著差异(P＜0.01).保护组中NF-κB P65 mRNA和蛋白及Bcl-2 mRNA和蛋白表达与模型组组间比较有统计学意义(均P＜0.05),而与对照组比较无统计学意义(P＞0.05).结论 Aβ1-40可以活化神经细胞内NF-κB,减少Bcl-2的表达,发生细胞凋亡.依达拉奉可以抑制NF-κB激活,增加Bcl-2的表达发挥抗凋亡作用,最终达到保护神经细胞的目的 .     

麦冬多糖对转化生长因子-β1诱导心肌细胞凋亡的影响

目的探讨麦冬多糖(MDG-1)对转化生长因子(TGF)-β1诱导的心肌细胞活力、凋亡的影响及机制。方法大鼠H9c2心肌细胞分为对照组(不经特殊处理)、TGF-β1组(20 ng/ml TGF-β1处理细胞)和MDG-1组(100 mg/L MDG-1及20 ng/ml TGF-β1处理细胞),噻唑蓝(MTT)及流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡率;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)探针检测活性氧(ROS)水平;Western印迹检测增殖细胞抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、p53、核因子(NF)-κB p65、KB抑制蛋白激酶(IKK)α和β-catenin的蛋白表达。结果与对照组比较,TGF-β1组细胞活力显著降低,PCNA和Bcl-2蛋白表达显著降低,细胞凋亡率显著升高,ROS水平显著升高,p53、NF-κB p65、IKKα和β-catenin蛋白表达显著升高(P0.05)。与TGF-β1组比较,MDG-1组细胞活力显著升高,PCNA和Bcl-2蛋白表达显著升高,细胞凋亡率显著降低,ROS水平显著降低,p53、NF-κB p65、IKKα和β-catenin蛋白表达显著降低(P0.05)。结论 MDG-1可增强心肌细胞活力,抑制心肌细胞凋亡,其机制可能与降低细胞内ROS水平及抑制Wnt/β-catenin信号和NF-κB信号有关。     

核因子相关因子-2在慢性阻塞性肺疾病大鼠模型中的作用及其与I-κB激酶的关系

目的 探讨核因子相关因子-2(Nrf2)在COPD发病中的作用及与核因子-κB和Ⅰ-κB激酶(IKKs)之间的关系.方法 将大鼠按照完全随机方法分为对照组、模型组和干预组,每组12只,检测大鼠的肺功能和抗氧化能力.免疫组织化学SABC法和逆转录PCR法检测Nrf2、核因子-κB p65和IKKα/β的蛋白水平及mRNA表达.统计学方法采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验.结果 模型组大鼠FEV_(0.3)/FVC为(58.8±2.6)%,动态肺顺应性为(0.14±0.02)ml/cm H_2O(1 cm H_2O=0.098 kPa),总抗氧化能力为(0.20±0.03)U/ml,SOD抗氧化能力为(19.6±2.4)U/ml,均明显低于对照组[(86.3±2.5)%、(0.38±0.02)ml/cm H_2O、(3.16±0.31)U/ml及(56.1±2.2)U/ml];模型组大鼠的气道阻力为(0.69±0.17)cm H_2O·ml_(-1)·s~(-1),明显高于对照组的(0.34±0.06)cm H_2O·ml~(-1)·s~(-1);干预组介于两组之间.模型组大鼠Nrf2、IKKα/β和核因子-κB p65的阳性系数依次为3.23±0.31、3.80±0.16和3.85±0.18,明显高于对照组的0.91±0.45、1.17±0.42和1.30±0.34,干预组IKKα/β和核因子-κB p65的阳性系数(2.10±0.46和2.53±0.36)介于两者之间,而Nrf2的阳件系数(3.78±0.22)明显高于模型组.模型组大鼠Nff2、IKKβ和核因子-KB p65的mRNA表达分别为0.61±0.08、0.89士0.05和0.91±0.02,明显高于对照组的0.29±0.07、0.30±0.07和0.30±0.07,干预组IKKB和核因子-κB p65的mRNA表达(0.67±0.04和0.69±0.04)介于两者之间,而Nrf2的mRNA表达(0.90±0.05)明显高于模型组.结论 15d-PGJ2在COPD模型中有抗氧化应激和抗炎症作用,这可能与Nrf2增加有关.Nrf2可能通过抑制IKKβ表达从而抑制核因子.κB p65的表达水平.     

幽门螺杆菌相关性胃溃疡与胃癌中NF-κB、TFF3的表达及意义

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)和三叶因子3(TFF3)在胃溃疡和胃癌中表达的意义,以及与幽门螺杆菌(H.pylori)感染的关系。方法胃溃疡组(GU)60例,胃癌组(GC)70例,应用免疫组化方法测定TFF3和NF-κBp65的表达,同时检测H.pylori感染情况。结果 GC中NF-κBp65和TFF3表达水平均高于GU(P<0.01)。GC中NF-κBp65表达与TFF3表达呈显著正相关(r=0.350,P=0.003)。GU中H.pylori阳性病例中NF-κBp65、TFF3表达显著高于H.pylori阴性病例(P均<0.05)。H.pylori感染病例中,GC组的NF-κBp65、TFF3表达水平均比GU组高(P均<0.05);H.pylori阴性病例中,GC组的NF-κBp65、TFF3表达水平亦均比GU组高(P均<0.01)。结论 NF-κBp65和TFF3的高表达与胃癌的发生发展有着密切的关系,二者可能存在协同作用。H.pylori感染可以上调宿主胃黏膜NF-κBp65和TFF3的表达,表达的差异与胃溃疡和胃癌两种不同疾病转归相关。     

眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织IKKβ/NF-κB表达的影响

目的 观察眼针对脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠脑皮层组织中IκB激酶β(IKKβ)及核因子-κB (NF-κB)表达,探讨眼针治疗脑损伤的作用机制.方法 健康雄性SPF级Wistar雄性大鼠60只,随机分为正常组、假手术组、CIRI模型组和眼针组.CIRI模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MACO)再灌注动物模型.Western blot检测大鼠缺血侧脑皮层IKKβ、NF-κB蛋白表达的变化.结果 与正常组及假手术组比较,模型组大鼠缺血侧脑皮层组织IKKβ及NF-κB蛋白水平均显示出高表达(P＜0.01),眼针组同模型组相比,IKKβ及NF-κB蛋白表达则下调(P＜0.01).结论 眼针抑制脑皮层组织中IKKβ及NF-κB的表达,可能是眼针治疗CIRI的主要作用机制之一.     

CD137信号通过核因子κB影响小鼠主动脉平滑肌细胞活化T细胞核因子c1表达

目的 探讨CD137信号是否通过核因子-κB(NF-κB)调控小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)表达.方法 采用组织块贴壁法对正常C57BL/6J小鼠的VSMC进行原代培养.以每孔2×105个VSMC接种于6孔板中培养,待其贴壁后,饥饿24 h,用含10％ FBS+肿瘤坏死因子(TNF-α,终浓度10 ng/ml)的DMEM培养基分别培养细胞0、4、8、12、24、36、48 h后,收获细胞用于CD137 mRNA和蛋白的检测,选取CD137表达最多的时间点进行下一步实验.细胞实验分为3组,即对照组[含10％ FBS、TNF-α(终浓度10 ng/ml)、DMEM培养基共同干预]、刺激组[对照组干预基础上加CD137 mAb激动剂(终浓度10 μg/ml)]和抑制组[对照组干预基础上加PDTC(终浓度30 μmol/L),然后加CD137 mAb激动剂(终浓度10 μg/ml)].加入不同干预因素后继续培养,分别于90 min时收集核内外磷酸化(p)-NF-κB p65、核因子κB抑制蛋白(IKB-α),24 h收集细胞总RNA和NFATc1蛋白备检.逆转录定量聚合酶链反应检测CD137和NFATc1 mRNA表达水平.流式细胞术检测CD137膜蛋白表达水平.蛋白印迹法检测IκB-α、NF-κB p65、p-NF-κB p65和NFATc1蛋白表达水平.结果 (1)TNF-α诱导VSMC表达CD137的结果:TNF-α刺激VSMC 4、8、12、24、36、48 h后,细胞CD137 mRNA表达均上调.RT-PCR结果示,以24 h组CD137 mRNA升高最为显著,以未刺激(即0h)组的细胞为对照进行比较,差异有统计学意义(40.00±2.83比1,P＜0.05).流式细胞术检测亦显示24 h组CD137膜蛋白升高最为显著.(2)各组VSMC中p-NF-κB p65蛋白表达水平的检测结果:刺激组VSMC胞浆中p-NF-κB p65蛋白表达水平高于对照组(8.34±0.28比1,P＜0.05),而IkB-α蛋白表达水平低于对照组(1比2.70±0.28,P＜0.05).抑制组VSMC胞浆中p-NF-κB p65蛋白表达水平低于刺激组(1.15 ±0.14比8.34±0.28,P＜0.05),而IkB-α蛋白表达水平则高于刺激组(1.78±0.74比1,P＜0.05).刺激组VMSC细胞核内p-NF-KB p65蛋白表达水平高于对照组(2.64±0.42比1,P＜0.05),而抑制组表达水平则低于刺激组(2.09±0.12比2.64±0.42,P＜0.05).(3)各组VSMC中NFATc1 mRNA和蛋白表达水平的检测结果:干预24 h后,刺激组VSMC中NFATc1 mRNA表达水平高于对照组(2.07±0.09比1,P＜0.05),NFATc1蛋白表达水平亦高于对照组(1.75±0.07比1,P＜0.05).而抑制组VSMC中NFATc1 mRNA表达水平低于刺激组(1.15±0.07比2.07±0.09,P＜0.05),蛋白表达水平亦低于刺激组(0.90±0.11比1.75±0.07,P＜0.05).结论 CD137信号通过NF-κB p65影响小鼠VSMC中NFATc1的表达.     

RNA干扰TAGLN2基因对TGF-β1诱导心肌细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰TAGLN2基因对转化生长因子(TGF)-β1诱导心肌细胞凋亡的影响及机制。方法 H9c2心肌细胞分为空白对照组、NC组、TGF-β1组和TGF-β1+si-TAGLN2组,其中siRNA的转染参照Lipofectamine~(TM)2000说明,Western印迹检测TAGLN2、p53、裂解的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved caspase)3、B细胞淋巴瘤因子(Bcl)-2、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、核因子(NF)-κB p65和IκB-α的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)水平。结果转染si-TAGLN2的H9c2心肌细胞TAGLN2蛋白表达显著低于空白对照组(P0.05)。与NC组比较,TGF-β1组细胞凋亡率、ROS水平及p53、 Cleaved caspase3和NF-κB p65蛋白表达均显著升高,Bcl-2、PI3K、 p-AKT、和IκB-α蛋白表达均显著降低(P0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+si-TAGLN2组细胞凋亡率、ROS水平及p53、 Cleaved caspase3和NF-κB p65蛋白表达均显著降低,Bcl-2、PI3K、 p-AKT、和IκB-α的蛋白表达均显著升高(P0.05)。结论 TAGLN2基因表达抑制可降低由TGF-β1诱导的心肌细胞凋亡,机制可能与降低细胞内ROS水平、激活PI3K/AKT信号和抑制NF-κB信号有关。     

核因子κB和缺氧诱导因子1在慢性阻塞性肺疾病患者外周血单个核细胞中的表达

目的 探讨核因子κB (NF-κB)和缺氧诱导因子1(HIF-1)在老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达,明确NF-κB和HIF-1在COPD发病机制中的作用.方法 通过Western blotting法、实时荧光定量PCR法分别测定稳定期COPD患者(中度以上,30例)、对照组(30例)PBMC的NF-κB、HIF-1蛋白水平和NF-κB、HIF-1 mRNA水平.结果 COPD组PBMC细胞中NF-κB mRNA、HIF-1 mRNA水平均显著高于对照组(0.013±0.010比0.005±0.003,P＜0.01;0.030±0.025比0.008±0.006,P＜0.01).COPD组PBMC细胞核中NF-κB、HIF-1蛋白表达均高于对照组,差异有统计学意义(1.08±0.12比0.87±0.09,P＜0.01;1.12±0.09比0.97±0.17,P=0.002).NF-κB蛋白在各COPD组差异有统计学意义(P＜0.01),与FEV1％ pred呈显著负相关(r=-0.657,P ＜0.01).NF-κB mRNA、HIF-1 mRNA、HIF-1蛋白在各COPD组差异均无统计学意义,与FEV1％pred均无相关性(P值均＞0.05).NF-κB mRNA与HIF-1 mRNA呈正相关(r=0.673,P＜0.01),NF-κB、HIF-1蛋白表达呈正相关(r=0.56,P=0.001).结论 COPD患者PBMC中NF-κB、HIF-1mRNA水平及蛋白水平表达均增加,且HIF-1在各严重程度的COPD中稳定表达,NF-κB蛋白表达与疾病严重程度相关.表明中度以上COPD患者在慢性持续性缺氧的情况下既启动了全身的炎症反应同时也启动了适应性保护机制.     

银杏苦内脂B对急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织NF-κB p65、IκBα mRNA表达的影响

目的 观察NF-κB p65、IκBα mRNA在急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠胰腺组织中的表达以及银杏苦内脂B(BN52021)对其表达的影响.方法 180只Wistar大鼠随机分为对照组(NC组)、ANP模型组(ANP组)、BN52021治疗组(BN组),每组大鼠分别在术后1 h、2 h、3 h、6 h、12 h和24 h 6个时间点处死,抽血测定血淀粉酶含量,取胰腺组织行病理学检查,RT-PCR法检测NF-κB p65、IκBα mRNA表达.结果 血清淀粉酶和病理学改变符合ANP.BN52021能降低ANP大鼠的血清淀粉酶含量和改善胰腺的病理损害.ANP组和BN组NF-κB p65 mRNA均呈双峰改变,第1峰在1 h,第2峰分别在24 h和12 h,6 h时降至最低.ANP组NF-κB p65 mRNA表达在2 h、3 h、12 h和24 h较NC组显著增加(P ＜ 0.05或0.001),仅在1 h时较BN组有显著差异(P ＜ 0.041),其他时间点无显著差异;但较NC组各时点显著升高(P ＜ 0.05或0.001).ANP组IκBα mRNA表达仅在24 h点较NC组明显增加(P = 0.000),BN组在1 h、6 h和12 h较ANP组显著增加(P ＜ 0.01),在1 h、12 h和24 h也较NC组显著增加(P ＜ 0.01).结论 NF-κB p65 mRNA在ANP大鼠胰腺组织表达上调,IκBα mRNA仅在造模后24 h时表达上调.BN52021可能通过上调IκBα mRNA的表达,破坏NF-κBp65 mRNA和IκBα mRNA的平衡,从而发挥其治疗作用.     

TWEAK/Fn14及NF-κB通路的关键因子mRNA及蛋白表达差异与老年人肥胖的相关性研究?

目的 研究老年人外周血PBMC中TWEAK/Fn14及激活下游NF-κB通路的关键因子mRNA及蛋白表达差异与老年人中心性肥胖的相关性。方法 在新疆农牧区常住居民横断面流行病学调查数据库中随机抽取80例研究对象（对照组40例，肥胖组40例），提取空腹外周血中PBMC，采用qRT-PCR、Western blot方法检测TWEAK、Fn14、IKKα、IKKβ、NF-κBp65的mRNA表达、蛋白表达。结果 肥胖组人外周血PBMC中的Fn14、IKKα、IKKβ的mRNA表达高于对照组(P<0．05)；TWEAK、NF-κBp65的mRNA表达也高于对照组，但差异无统计学意义(P>0．05)。肥胖组的Fn14、IKKα、IKKβ蛋白表达水平高于对照组(P<0．05)，两组间TWEAK、NF-κBp65蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0．05)。双变量Pearson相关性分析显示，上述因子的mRNA表达水平，TWEAK与Fn14呈正相关（r=0.472，P<0．01），Fn14与IKKα、IKKβ均呈正相关（r=0.262、0.275，P<0．05）； IKKα、IKKβ与NF-κBp65均呈正相关（r=0.747、0.692，P<0．01）。结论 新疆农牧区常驻老年人中心性肥胖与外周血PBMC中Fn14、IKKα、IKKβ的蛋白、mRNA的高表达相关，TWEAK/Fn14可能通过调节IKK激活NF-κB炎症通路，参与人类肥胖的发生、发展。     

核因子κB在类风湿关节炎滑膜组织中的表达与意义

目的检测核因子κB(NF-κB)及白细胞介素(IL)-1β、基质金属蛋白酶(MMP)-9在类风湿关节炎(RA)、骨关节炎(OA)及正常滑膜组织中的表达差异。方法反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测46例滑膜组织(RA17例,OA24例,正常5例)中p65、p50、NF-κB抑制因子(IκB)及IL-1β、MMP-9的mRNA水平。免疫组织化学检测39例滑膜组织(RA14例,OA21例,正常4例)中p65的表达情况。对8例RA、6例OA滑膜组织进行滑膜细胞培养,提取核蛋白进行免疫印迹,检测p65含量。结果RA组p65、IL-1β、MMP-9的mRNA水平显著高于正常对照组(分别为P<0.05、P<0.01、P<0.05),与OA组比较差异无显著性。RA、OA与正常组之间p50、IκB的mRNA水平差异无显著性。NF-κBp65免疫组织化学染色组显示RA滑膜衬里层细胞、衬里下层浸润的炎症细胞、血管内皮细胞均有着色。RA组NF-κB活性系数显著高于OA组、正常对照组(P<0.001)。免疫印迹发现RA滑膜细胞核蛋白中p65含量显著高于OA组(P<0.05)。结论RA滑膜组织中NF-κB的表达与活化水平显著高于OA及正常滑膜组织。RA组IL-1β与MMP-9的mRNA水平显著高于正常对照。     

依达拉奉对Aβ25-35诱导分化PC12细胞NF-κB p65基因表达的影响

目的 探讨依达拉奉(MCI-186)对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的PC12细胞NF-κB p65基因表达的影响.方法 实验对象分为3组:MCI-186保护组(MCI-186 20 μmol/L,Aβ25-35 30 μmol/L)、Aβ25-35干预组(Aβ25-35 30 μmol/L)和正常对照组.采用MTT法测定细胞生存率;RT-PCR检测NF-κB p65 mRNA表达变化,Western印迹法检测NF-κB p65蛋白表达的变化.结果 Aβ25-35能增加NF-κB p65 mRNA及其蛋白的表达,促进细胞凋亡;MCI-186能抑制NF-κB p65 mRNA及其蛋白的表达,抑制细胞凋亡.结论 MCI-186具有神经细胞保护作用,可能的机制与其抑制NF-κB p65 mRNA及其蛋白表达有关.     

下调肌细胞增强因子2C基因对动脉粥样硬化血管内皮细胞增殖凋亡及核因子-κB信号通路的影响

目的探讨下调肌细胞增强因子(MEF) 2C基因对动脉粥样硬化(AS)血管内皮细胞增殖凋亡及核因子(NF)-κB信号通路的影响及机制。方法 Western印迹检测AS患者斑块组织和正常对照组MEF2C的蛋白表达;将MEF2C的特异性siRNA(si-MEF2C)及阴性对照siRNA(NC)转染人脐静脉血管内皮(ECV)-304细胞,Western印迹检测转染效果。ECV-304细胞经H_2O_2处理后转染si-MEF2C,细胞分为NC组、H_2O_2组、H_2O_2+si-MEF2C组和正常对照组,噻唑蓝(MTT)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)水平; Western印迹检测核因子(NF)-κB p65、NFkappa B激酶抑制剂(IKK)α、增殖细胞核抗原(PCNA)和Bcl-2的蛋白表达。结果 AS患者斑块组织MEF2C蛋白表达显著高于正常对照组(P<0. 05); MEF2C的特异性siRNA转染ECV-304细胞后MEF2C蛋白表达显著低于空白对照组(P<0. 05)。H_2O_2组细胞活力及PCNA和Bcl-2的蛋白表达均显著低于NC组,细胞凋亡率、ROS水平及NF-κB p65和IKKα的蛋白表达均显著高于NC组(P<0. 05),而H_2O_2+si-MEF2C组细胞活力及PCNA和Bcl-2的蛋白表达均显著高于H_2O_2组,细胞凋亡率、ROS水平及NF-κB p65和IKKα的蛋白表达均显著低于H_2O_2组(P<0. 05)。结论下调AS血管内皮细胞MEF2C基因表达可提高细胞活力,抑制细胞凋亡,机制可能是细胞内ROS水平降低及NF-κB信号通路的下调。     

RNA干扰FLOT2基因表达下调NF-κB信号对胃癌细胞凋亡诱导作用研究

目的 探讨RNA干扰FLOT2基因表达对胃癌细胞凋亡及NF-κB信号的影响。方法 Western blotting检测人胃癌BGC823、SGC7901和MKN28细胞中FLOT2蛋白表达。BGC823细胞分为空白组、阴性组和si-FLOT2组,参照脂质体Lipofectamine~(TM)2000将siRNA转染细胞,细胞转染48 h,Western blotting检测FLOT2、NF-κB p65、IKK-β、p-IKK-β和Bax的蛋白表达。流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 BGC823、SGC7901和MKN28胃癌细胞中FLOT2蛋白表达均显著高于人正常胃黏膜上皮细胞GES1(P0.05)。转染si-FLOT2的BGC823细胞FLOT2蛋白表达显著低于空白组(P0.05)。与空白组比较,si-FLOT2组细胞凋亡率显著升高,NF-κB p65、IKK-β和p-IKK-β蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P0.05)。结论 RNA干扰FLOT2基因表达可诱导胃癌细胞凋亡,机制可能与下调NF-κB信号通路有关。     

胃幽门螺杆菌感染与抑癌基因失活的关系

目的探讨胃癌及癌前病变组织中幽门螺杆菌(H.pylori)感染与抑癌基因失活间的相互关系.方法运用DNA-PCR技术检测H.Pylori感染,采用PCR-RFLP,PCR-SSCP,RT-PCR及免疫组化技术分析182例胃癌及癌前病变及正常胃粘膜中抑癌基因APC,MCC,DCC,YNZ22及p53基因的杂合缺失、突变、mRNA及蛋白异常表达.结果胃癌及癌前病变组织中H.pylori的感染率(IM61.7%,Dys 63.3%,GC 42.3%)显著高于正常胃粘膜(17.5%,P＜0.05).但胃癌及癌前病变间H.pylori感染率无显著差别(P＞0.05),胃肠两型胃癌中H.pylori感染率分别为47.1%及42.2%,两者无显著差别(P＞0.05).胃癌及癌前病变组织中存在多种抑癌基因失活.H.pylori感染与癌前病变-肠化生中APC基因异常蛋白表达有关(Hp+43.2%vsHp-13.0%,P＜0.05).胃癌组织H.pylori感染阳性组中APC基因突变(50.0%)及蛋白表达(63.6%)、p53基因蛋白表达率(59.1%)显著高于阴性组(vs16.7%,P＜0.05;vs30.0%,P＜0.01;vs20.0%,P＜0.01).结论幽门螺杆菌感染及多种抑癌基因失活可能与胃癌的发生发展相关,H.pylori感染与APC,p53基因失活可能相关.