鲫鱼、牛蛙、鸡和大鼠视网膜锌离子分布的光镜观察

本文应用neo-Timm染色技术研究了鲫鱼、牛蛙、鸡和大鼠视网膜内锌离子的分布状况。结果发现上述动物视网膜内均存在锌离子。锌离子位于视网膜光感受器的内段、外网层、双极细胞、无长突细胞和神经节细胞等处。鲟鱼视网膜的部分光感受器胞体锌离子染色阳性。此外，牛蛙、鸡和大鼠等动物视网膜内同层锌离子亦呈弥漫性着色。提示在较高等动物作为神经调质的锌离子对视网膜神经无视觉信号的传导与调制可能具有更为广泛的意义。     

Rhodopsin和S-opsin在MNU诱导的大鼠视网膜损伤过程中的表达变化

目的:观察在N-甲基-N亚硝酸脲(MNU)诱导的大鼠视网膜外核层细胞损伤过程中视紫质(rhodopsin)和蓝光视蛋白(blue-sensitive opsin/S-opsin)在视网膜中的表达变化,分析其与MNU诱导的视网膜损伤的关系。方法:将30只SPF级50 d龄雌性SD大鼠随机分为正常对照组和MNU模型1、3、7、10 d组,每组各6只大鼠。模型组以腹腔注射MNU(40 mg/kg)建立MNU模型;正常对照组大鼠腹腔注射生理盐水(5 mL/kg)。右眼冰冻切片行苏木素-伊红(HE)染色判断视网膜损伤程度。通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光检测各组视网膜中rhodopsin和S-opsin的mRNA及蛋白表达情况。结果:病理检测确定造模结果与以往实验一致,各组病理分级之间的差异显著(2=16.838,P0.01)。RT-PCR检测结果表明,与正常对照组相比,各MNU模型组rhodopsin和S-opsin的mRNA表达水平随MNU作用时间增加而逐渐降低且差异均显著(rhodopsin 1 d组P0.05;S-opsin 1 d组P0.01;3、7、10 d组rhodopsin和S-opsin均P0.01)。免疫荧光检测结果显示,在正常大鼠视网膜rhodopsin主要在光感受器细胞外段表达,MNU作用后rhodopsin主要在外核层表达,少量在内核层表达,并随MNU作用时间增加而逐渐表达降低。S-opsin在正常视网膜各层均有表达,在各模型组随MNU作用时间增加S-opsin的表达逐渐降低,在外核层和光感受器细胞内、外段尤为明显。结论:MNU诱导的视网膜外核层细胞损伤可降低rhodopsin和S-opsin的表达,并与MNU选择性引起光感受器细胞丧失有关。     

Müller细胞反应性胶质化在急性高眼压致大鼠视网膜损伤中作用

 目的 观察Müller细胞反应性胶质化在急性高眼压(AOH)大鼠视网膜中变化及其抑制对视网膜损伤的影响。方法 建立大鼠AOH青光眼模型,分为正常对照(Ctrl)、AOH和AOH+玻璃体内注射胶质毒素α-氨基己二酸(AAA)后再灌注1、3和5d组,以及单纯AAA和AOH+PBS对照组。TUNEL染色检测细胞凋亡,GFAP免疫荧光染色反应Müller细胞反应性胶质化程度,Thy-1染色标记视网膜神经节细胞(RGCs)。结果 AOH可致大鼠视网膜内丛状层和内核层明显变薄、神经节细胞层内细胞排列紊乱和数量减少,并诱发Müller细胞反应性胶质化(GFAP表达增加)。同时,AAA抑制Müller细胞反应性胶质化可明显缓解AOH所致RGCs丢失和凋亡发生。结论 Müller细胞反应性胶质化参与AOH所致视网膜损伤,抑制其反应性胶质化可能是改善高眼压性青光眼视网膜病变的一种有效治疗方法。     

脑红蛋白在绵羊视网膜中的分布

目的:探讨脑红蛋白在绵羊视网膜的分布特征。方法:利用免疫组织化学显色SP法,观察脑红蛋白在健康成年绵羊视网膜中的分布情况。结果:脑红蛋白在绵羊视网膜的视神经纤维层、内网状层、外网状层和光感受器内节段中有强阳性表达,在视网膜的内核层和节细胞层有弱阳性表达,在视网膜外核层、光感受器外节段和色素上皮层中未见有阳性表达,内界膜、外界膜和视神经中亦有脑红蛋白阳性表达。绵羊视网膜脑红蛋白阳性表达的细胞类型主要有节细胞、双极细胞和光感受器细胞,其中节细胞的阳性表达定位于细胞质,胞核中未见表达。结论;除外核层、光感受器外节段和色素上皮层外,脑红蛋白在绵羊视网膜其他各层中均有表达,提示脑红蛋白在维持视网膜中氧平衡状态时发挥重要作用。     

杞菊地黄汤防治MNU诱导大鼠视网膜变性的早期效应

目的:观察杞菊地黄汤在N-甲基-N-亚硝脲(MNU)诱导的SD大鼠视网膜变性早期的拮抗效应。 方法:生后46 d的雌性SD大鼠30只随机分为3组(n=10)：药物组以杞菊地黄汤灌胃，正常组和模型组以等量蒸馏水灌胃，每日1次，连续4 d。用药后第5 d，药物组和模型组大鼠皮下注射MNU 40 mg/kg，正常组皮下注射等量生理盐水做对照。注射后12 h，处死大鼠，每组大鼠的左眼（10眼）用于透射电镜观察；右眼（10眼）用于苏木素-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色观察并测量分析视网膜全层及外核层厚度，部分眼球行TUNEL法染色并计算细胞凋亡百分率。 结果:光镜下各组大鼠视网膜组织学未见明显改变，视网膜全层及外核层厚度组间比较均无显著差异（P>0.05）。TUNEL法染色见模型组和药物组外核层存在细胞凋亡，正常组未见。电镜下正常组和药物组光感受器细胞大小和核染色质分布均匀；模型组光感受器细胞开始变小，核染色质开始浓缩, 外节膜盘疏松，膜型不完整。 结论:杞菊地黄汤通过抑制细胞凋亡等选择性拮抗MNU对大鼠视网膜光感受器细胞的早期损伤。     

锌转运体ZNT7在小鼠视网膜的定位分布

目的研究锌转运体-7(zinc transporter 7,ZNT7)在小鼠视网膜的定位和分布。方法应用免疫组织化学技术检测CD-1小鼠视网膜内的ZNT7免疫反应产物的表达。结果ZNT7在小鼠视网膜内分布广泛,在神经节细胞和色素上皮细胞内ZNT7免疫阳性反应产物的表达最丰富,在无长突细胞和视神经纤维层中ZNT7免疫阳性反应产物为中等程度的表达,在内网层、外网层和光感受器外节中ZNT7免疫阳性染色较淡,在外核层和光感受器内节中ZNT7几乎没有表达。结论ZNT7可能在维持视网膜锌稳态过程中起到重要的作用。     

人源性抗HBc单链抗体真核表达载体的构建及其细胞内表达

目的：构建人源性抗HBc单链抗体的真核表达载体并在细胞内表达。方法： 采用DNA重组技术将特异性人源性抗HBc单链抗体基因插入真核表达载体pEGFP-c1；转染HepG2细胞，经G418筛选细胞，荧光倒置显微镜观察细胞内抗HBc单链抗体与绿色荧光蛋白融合表达情况，并用ELISA法检测HBc单链抗体基因的细胞内表达。结果： 成功地构建了人源性抗HBc单链抗体的真核表达载体。转染HepG2细胞并筛选后，经荧光倒置显微镜观察，细胞内有绿色荧光蛋白表达；ELISA检测细胞内表达的单链抗体片段具有HBcAg结合活性。结论： 人源性抗HBc单链抗体的真核表达载体的构建并在细胞内成功表达，为胞内抗HBc单链抗体的进一步研究奠定了基础。     

NgR/NR2B信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响

目的:探讨Nogo受体(NgR)在糖尿病视网膜病变中的作用及下游分子机制。方法:雄性SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型,糖尿病大鼠玻璃体腔内注射病毒包装的NgR反义核苷酸序列(siNgR组)、阴性核苷酸序列(scRNA对照组)或空白病毒液(糖尿病组),玻璃体腔内注射空白病毒液的正常SD大鼠为正常对照组。3个月视网膜HE染色,观察视网膜神经层厚度及节细胞密度的变化,免疫荧光组化检测NgR及其下游分子N-甲基-D-天门冬氨酸2B受体(NR2B)在视网膜神经节细胞内的共存情况,Western Blot检测NgR及NR2B在视网膜内的表达。结果:与正常对照组相比糖尿病组及scRNA对照组视网膜明显变薄、神经节细胞密度降低,siNgR组无明显变化。NgR与NR2B均表达于视网膜节细胞层,二者在视网膜神经节细胞内大量共存。与正常对照组相比,糖尿病组、scRNA对照组视网膜NgR及NR2B表达均明显增加(P0.01),而siNgR组NgR及NR2B表达均无明显变化。结论:NgR/NR2B信号通路激活可能是糖尿病大鼠RGC数量减少的重要原因之一。     

6-羟基多巴胺诱导的帕金森病大鼠眼内褪黑素受体的变化

目的:观察6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的偏侧帕金森病(PD)模型大鼠毁损同侧及对侧眼褪黑素受体MT1和MT2的变化及其与视网膜酪氨酸羟化酶(TH)的关系。方法:将6-OHDA注射至大鼠右侧黑质致密部和前脑内侧束两点,制备偏侧PD模型。大鼠分为溶剂对照和PD模型组,于建模后6周取双侧眼球。采用RTPCR和Western-Blot检测大鼠两侧眼组织褪黑素受体MT1和MT2的表达水平,采用免疫荧光组织化学检测MT1和MT2受体,以及TH在大鼠视网膜内的分布及表达情况。结果:与对照相比,PD大鼠毁损对侧眼组织MT1和MT2的mRNA水平分别降低了84.06%和81.66%(P0.01),蛋白水平分别降低了59.06%和41.06%(P0.01),而PD大鼠毁损同侧眼组织MT1和MT2的mRNA、蛋白水平无显著变化(P0.05)。MT1和MT2受体在视网膜全层均有分布,且主要分布在感光细胞层内段、内丛状层、外丛状层和神经节细胞层,TH分布于内核层与内丛状层之间;与对照组相比,PD大鼠毁损对侧视网膜MT1和MT2以及TH荧光强度分别减少了61.6%、51.2%和43.0%(P0.01),TH和MT1或TH和MT2存在共定位,且毁损对侧视网膜共定位细胞数减少52.3%,而PD大鼠毁损同侧视网膜无显著变化(P0.05)。结论:6-OHDA诱导的偏侧PD大鼠毁损对侧眼褪黑素受体表达下调可能与PD有关。     

β淀粉样蛋白诱导大鼠视网膜神经节细胞凋亡

目的考察β淀粉样蛋白(Aβ)对大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的影响,并探讨p38 MAPK信号通路在此过程中的作用。方法将大鼠随机分为对照组(玻璃体腔注射5μL PBS溶液)、实验组[玻璃体腔注射5μL Aβ溶液(1. 4 g/L)]和干预组[玻璃体腔注射5μL SB203580(10μmol/L),24 h后注射5μL Aβ溶液(1. 4 g/L)]。7 d后,免疫荧光染色检测视网膜Aβ的分布;免疫荧光染色计数视网膜铺片RGC细胞; TUNEL法原位标记凋亡细胞;荧光免疫组织化学法检测视网膜神经节细胞层caspase-3蛋白表达;透射电镜观察RGC细胞形态;蛋白印迹法检测大鼠视网膜p38 MAPK磷酸化。结果实验组7 d后,视网膜各层中均检测到Aβ荧光信号分布,但主要分布在视网膜神经上皮层和视网膜感光细胞层中。与对照组相比,实验组RGC细胞数量明显减少(P0. 05),TUNEL和caspase-3阳性细胞数量均明显增多(P0. 05),透射电镜可见RGC细胞的凋亡征象,且视网膜中p38 MAPK磷酸化水平增加。而SB203580干预组可抑制Aβ诱导的上述变化。结论 Aβ可诱导RGC细胞凋亡,p38 MAPK信号通路可能参与此过程。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.