三氧化二砷联合TRAIL抑制肺癌A549细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)抑制肺癌A549细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法采用不同浓度的As2O3与TRAIL联合作用于体外培养的肺癌A549细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和Hoechest染色观察检测其对A549细胞的抑制作用。以流式细胞术检测其对A549细胞的凋亡诱导作用和细胞周期。结果不同浓度的As2O3与TRAIL联用对A549细胞增殖的抑制作用均比单药组强。联合用药组从形态学观察及流式细胞术结果显示联合用药组可检测到大量凋亡A549细胞,明显多于单药组;并将A549细胞阻滞在G2/M期。结论 As2O3与TRAIL联用于人肺癌A549细胞可协同抑制其增殖,机制可能是将细胞阻滞在G2/M期;并可诱导细胞凋亡。     

马齿苋提取物抑制肺癌A549细胞增殖的实验研究

目的:观察马齿苋提取物对肺癌A549细胞增殖的影响。方法:采用MTT比色法观察马齿苋提取物抑制肺癌A549细胞增殖;采用流式细胞仪检测马齿苋对肺癌A549细胞周期分布的影响。结果:马齿苋提取物可抑制肺癌A549细胞增殖,其作用具有时间和浓度依赖性;马齿苋提取物可诱导细胞凋亡;同时改变细胞周期分布,多数细胞阻滞于G2/M期,与对照组比较,细胞凋亡率差异有显著性(P<0.01)。结论:马齿苋提取物可诱导肺癌A549细胞凋亡,改变细胞周期分布,从而抑制细胞增殖。     

加味当归补血汤含药血清对人肺癌细胞株A549增殖的影响

目的:探讨加味当归补血汤荷瘤鼠含药血清对人肺癌细胞A549增殖的影响.方法:应用加味当归补血汤灌胃荷瘤Wistar大鼠,10日后采集含药血清体外培养A549,MTT测细胞活性,流式细胞法测细胞周期、调亡.结果:加味当归补血汤荷瘤鼠含药血清能够显著抑制A549细胞增殖,且呈剂量时间依赖性,可阻滞A549细胞的细胞周期,使G2/M期细胞增多,S期细胞减少,同时诱导A549细胞的凋亡.结论:加味当归补血汤含药血清体外具有抑制A549细胞生长,其抑制作用可能是通过使细胞周期抑制于G2/M期和诱导细胞凋亡而实现.     

木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549 凋亡和G2 周期阻滞

目的:研究木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549细胞凋亡和抑制其细胞周期(G2期)的分子机制。方法:MTT法分析木犀草素对A549细胞的生长抑制作用和半数抑制率IC50。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot分析木犀草素引起的周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的变化。Western blot和免疫细胞化学推测可能存在的分子机制。结果:木犀草素对A549细胞有显著的生长抑制作用,48 h的IC50为45.2μmol.L-1,流式细胞术检测细胞周期发现A549细胞经木犀草素处理后主要阻滞在G2期,周期蛋白cyclin A,p-CDC2和p-Rb都呈低表达。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染发现木犀草素处理组细胞凋亡率明显高于未处理组。Western blot发现木犀草素可上调JNK的磷酸化,下调NF-κB(p65)的磷酸化水平。免疫细胞化学显示木犀草素可抑制TNF-α刺激的p65入核,抑制其入核发挥转录因子的作用,促进细胞凋亡。结论:木犀草素能显著诱导人非小细胞肺癌细胞A549细胞凋亡和细胞周期阻滞,其可能的分子机制是通过上调JNK磷酸化继而激活线粒体凋亡途径,同时抑制NF-κB入核使其不能发挥转录活性。     

扶正解毒方基于凋亡的抗肺癌作用研究

目的:明确扶正解毒方体内外对肺癌的抑制作用并探明其可能的作用机制。方法:体内实验:建立Lewis小鼠肺癌皮下移植瘤模型,不同浓度扶正解毒方灌胃干预,评价其对移植瘤增殖的影响;免疫组化检测Cleaved-caspase3的表达。体外实验:不同浓度扶正解毒方干预A549和H1299细胞,CCK8检测细胞活性,流式细胞仪检测凋亡情况。结果:扶正解毒方抑制Lewis小鼠肺癌皮下移植瘤增殖,促进移植瘤组织Cleaved-caspase3表达。CCK8结果显示扶正解毒方体外可明显抑制A549和H1299细胞株增殖活性,流式细胞仪检测提示扶正解毒方可促进肺癌细胞凋亡。结论:扶正解毒方体内、外有明确的抑制增殖和促凋亡作用,可能通过促进细胞凋亡发挥抑制肺癌增殖的作用。     

蜈蚣多糖对Hela细胞的增殖抑制作用研究

目的 研究蜈蚣多糖对人宫颈癌细胞Hela细胞的抑制作用及作用机制.方法 用MTT法检测蜈蚣多糖对Hela细胞生长的抑制作用;流式细胞仪和Annexin V-FITC/PI双荧光染色分别检测蜈蚣多糖对Hela细胞周期及凋亡情况的影响.结果 在一定浓度范围内蜈蚣多糖可显著抑制Hela细胞的增殖,改变Hela细胞的细胞周期,使细胞阻滞于G2/M期,并能诱导细胞凋亡.结论 蜈蚣多糖可能通过改变Hela细胞的细胞周期,诱导细胞凋亡,从而对Hela细胞的增殖有一定的抑制作用.     

当归补血口服液含药血清对人肺癌细胞株A549增殖的影响

目的：探讨当归补血口服液荷瘤鼠含药血清对人肺癌细胞A549增殖的影响。方法：应用当归补血口服液灌胃荷瘤WiStar大鼠,10日后采集含药血清体外培养A549,MTT测细胞活性,流式细胞法测细胞周期、凋亡。结果：当归补血口服液荷瘤鼠含药血清能够显著抑制A549细胞增殖,且呈剂量、时间依赖性,可阻滞A549细胞的细胞周期,使G2／M期细胞增多,S期细胞减少,同时诱导A549细胞的凋亡。结论：当归补血口服液含药血清体外具有抑制A549细胞生长,其抑制作用可能是通过使细胞周期抑制于G2／M期和诱导细胞凋亡而实现。     

南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞增殖抑制作用的研究

目的:研究南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用和机制。方法:采用MTT法检测南方红豆杉水提物对A549细胞增殖的抑制作用;生长曲线法观察其抑制A549细胞的时间-效应曲线;流式细胞仪检测其对A549细胞周期及凋亡的影响;倒置显微镜及电镜观察其对A549细胞形态的影响。结果:南方红豆杉水提物对A549细胞的增殖有抑制作用;其抑制作用机制为使A549细胞周期出现明显的G0/G1期阻滞,诱导细胞凋亡。结论:南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞的增殖有抑制作用。     

桔梗皂苷-D诱导肺腺癌A549和A549/DDP细胞凋亡和周期阻滞

目的:探究桔梗皂苷-D(Platycodin-D,PD)诱导肺腺癌细胞(A549)和A549顺铂耐药细胞(A549/DDP)凋亡和周期抑制的作用机制,为PD治疗非小细胞肺癌和产生顺铂耐药的非小细胞肺癌提供实验基础。方法:采用MTT法检测细胞的增殖抑制率和耐药指数;流式细胞术检测细胞周期阻滞和凋亡作用;Hoechst-33258荧光染色观察细胞核形态的变化;Western-blot蛋白印迹法分析凋亡通路和细胞周期相关蛋白表达水平的变化。结果:MTT检测结果显示,PD对A549和A549/DDP细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性。Hoechst 33258荧光染色发现,随着PD浓度增加,两种细胞核形态都有明显的改变。进一步流式细胞术结果表明,PD诱导A549和A549/DDP细胞凋亡和周期阻滞。Westernblot检测结果表明,PD通过上调Bax、Caspase-9、cleaved-Caspase-3和PARP的表达,下调Bcl-2和Caspase-3的表达诱导A549和A549/DDP细胞凋亡。此外,PD通过下调Cyclin-D1、Cyclin-D3、CDK4、CDK6、E2F1和p-Rb及上调P18的蛋白水平诱导A549细胞周期G0/G1阻滞。同时,PD通过下调Cyclin-B1、p-Cdc2、E2F1和p-Rb及上调P27的蛋白表达诱导A549/DDP细胞周期G2/M阻滞。结论:PD通过线粒体途径诱导A549和A549/DDP细胞凋亡诱导,并且引发A549细胞G0/G1周期阻滞和A549/DDP细胞G2/M阻滞周期阻滞。     

槐米提取物对小鼠Lewis肺癌移植瘤细胞周期和PCNA表达的影响

目的研究槐米提取物对小鼠 Lewis肺癌移植瘤细胞周期和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨槐米提取物对肺癌细胞增殖的抑制作用及其机制.方法建立 Lewis肺癌的小鼠模型,以不同剂量的槐米提取物在移植前后连续灌胃,顺铂治疗采取腹腔注射给药方式.给药结束后,测定各组小鼠瘤重,计算抑瘤率;用流式细胞仪分析细胞周期分布;用免疫组化方法测定 PCNA表达水平.结果与模型对照组比较,槐米提取物高剂量组、中剂量组能显著性抑制小鼠 Lewis肺癌移植瘤生长,槐米提取物中剂量 顺铂治疗组的作用更加显著.小鼠 Lewis肺癌移植瘤的 G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少;PCNA指数明显降低.结论槐米提取物对小鼠 Lewis肺癌移植瘤生长有明显的抑制作用,其机制可能与槐米提取物对肿瘤细胞周期和 PCNA表达水平的调控有关.槐米提取物与顺铂联合使用,对肿瘤抑制作用明显增强.     

七叶皂苷对肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用

目的 研究七叶皂苷(aescine)对肺腺癌细胞A549的增殖抑制作用,及对细胞周期分布和细胞凋亡的影响.方法 采用MTT方法观察药物对A549的增殖抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期的变化;Annexin-FITC/PI双标记检测细胞凋亡.结果 七叶皂苷能明显抑制A549的生长,且呈时间剂量依赖性;流式细胞仪结果表明,七叶皂苷能明显的将细胞周期阻滞在G0/G1期,并诱导细胞凋亡.结论 七叶皂苷对A549细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导A549细胞凋亡.     

柳珊瑚Euplexaura rhipidalis丙酮提取物的抗肿瘤活性研究

目的研究南海海域Euplexaura rhipidalis种属柳珊瑚的丙酮提取物及其不同溶剂萃取部位的抗肿瘤活性,探讨最强活性部位可能的作用机制。方法丙酮提取物及其萃取部位作用于人肺癌细胞A549和人肝癌细胞Hep G2,采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测细胞增殖抑制率;甲醇重溶部位(EM)以低、中、高浓度作用于A549和Hep G2细胞,采用流式细胞仪检测细胞凋亡比率和细胞周期分布。结果 EM的体外抗肿瘤活性最强,对A549和Hep G2细胞的IC50值均小于10μg·ml-1,优于或接近阳性对照5-FU;EM能显著诱导细胞凋亡并呈现良好的浓度依赖性,中高浓度时对细胞G2/M或S期有周期阻滞作用。结论甲醇重溶部位是柳珊瑚Euplexaura rhipidalis主要的抗肿瘤活性部位,能抑制A549和Hep G2细胞的增殖,具有诱导凋亡、阻滞周期的作用。     

天佛参口服液对A549细胞体内外增殖的影响及机制研究

目的 探究天佛参口服液对人非小细胞肺癌A549细胞与裸鼠移植瘤增殖的作用以及相关作用机制。方法 采用Cell Titer-Glo发光法检测天佛参口服液对9种不同基因突变表型的肺癌细胞系增殖的抑制作用;采用流式细胞术检测天佛参口服液对A549细胞周期及凋亡的影响;采用Western blotting法考察天佛参口服液对A549细胞增殖相关蛋白表达的影响。裸鼠sc A549细胞建立裸鼠移植瘤模型,考察天佛参口服液对小鼠皮下移植瘤生长的影响。结果 天佛参口服液抑制A549细胞增殖,呈剂量相关性;天佛参口服液阻滞A549细胞周期于G₀/G₁期和G₂/M期（P<0.05、0.01）,并且1%天佛参口服液可以显著诱导A549细胞凋亡（P<0.01）;天佛参口服液显著抑制表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）、Raf、丝裂原细胞外信号调节激酶（mitogen extracellular signal-regulated kinase,MEK）以及细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinase,ERK）蛋白的磷酸化水平（P<0.05、0.01）,呈剂量相关性。体内实验结果显示,2.25 mL/kg天佛参口服液对裸鼠移植瘤模型的肿瘤体内生长具有显著抑制作用（P<0.05）。结论 天佛参口服液对A549细胞的体内外生长具有显著抑制作用,其作用机制可能与抑制EGFR活性和下调Ras/Raf/MEK/ERK信号通路表达有关。     

蛴螬提取物诱导人肺癌A549细胞凋亡的机制研究

目的:观察蛴螬提取物对人肺癌A549细胞增殖的影响及其机制。方法:采用MTT法检测蛴螬提取物对人肺癌A549细胞的生长抑制率;用HE染色方法观测凋亡细胞的形态学变化;运用免疫组织化学SP法检测用药前后细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的表达改变。结果:用蛴螬提取物处理的人肺癌A549细胞生长抑制率明显高于对照组;施药早期细胞出现凋亡形态学变化;A549细胞经蛴螬提取物处理后CyclinD1表达均下降。结论:蛴螬提取物在体外对人肺癌A549细胞株有显著的增殖抑制作用,其机制与下调CyclinD1的表达有关。     

山茱萸提取物对人肺癌A549细胞凋亡作用的实验研究

目的：探讨山茱萸水、醇提取物对人肺癌A549细胞的体外增殖的影响。方法：采用M1Tr法检测山茱萸水、醇提取物对A549细胞增殖的抑制作用,观察细胞形态变化。结果：同浓度的山茱萸水提取物对A549细胞抑制作用较醇提取物强,形态学观察到细胞凋亡。结论：山茱萸水、醇提取物均可抑制A549的细胞增殖,且能诱导细胞凋亡。     

玉竹高异黄酮抑制人肺癌细胞A549增殖的作用及机制

目的:以人肺癌A549细胞为研究对象,探讨玉竹中提取的高异黄酮对A549细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法:从玉竹中提取高异黄酮,作用于肺癌细胞A549;噻唑蓝(MTT)比色法观察高异黄酮12.5,25,50,100 mg·L~(-1)作用于A549细胞6,12,24 h对细胞存活率的影响。通过流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化,并通过蛋白免疫印迹法(Western blot)分析与细胞凋亡相关半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤(白血病)-2(Bcl-2),Bcl-2对抗杀伤性蛋白(Bak)和与细胞周期相关的磷酸化周期素依赖激酶2(p-Cdc 2),细胞周期蛋白依赖性激酶2(Cdc 2)及p38蛋白表达。结果:与空白组比较,高异黄酮呈剂量和时间依赖性抑制A549细胞的增殖(P0.05,P0.01),高异黄酮对A549细胞处理12 h后,细胞周期阻滞于G2/M期(P0.05);与空白组比较,25,50,100 mg·L~(-1)高异黄酮可显著促进凋亡蛋白Caspase-3和Bak表达,抑制Bcl-2表达(P0.01),可显著促进细胞周期蛋白p-Cdc 2和p38表达,抑制Cdc 2表达(P0.01)。结论:玉竹中提取的高异黄酮对A549细胞增殖具有抑制作用,能使A549细胞阻滞于细胞周期G2/M期,其机制与线粒体介导的细胞凋亡和p38 MAPK通路相关。     

白花蛇舌草乙醇提取物对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨白花蛇舌草乙醇提取物在体外对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法测定不同浓度白花蛇舌草乙醇提取物对A549细胞增殖的影响;Hoechst 33258检测白花蛇舌草乙醇提取物作用后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用后的细胞周期和凋亡率;Western Blot 检测药物作用后的Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果 白花蛇舌草乙醇提取物抑制A549细胞增殖呈时-效和量-效关系;Hoechst 33258检测白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞后可见凋亡细胞;40 mg/ml白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞12,24,36,48h,药物组G1～G0期细胞百分比分别为(42.82±3.95)%,(51.84±6.37)%,(54.76±8.85)%和(64.94±7.56)%,药物组细胞凋亡率分别为(5.72±0.98)%,(7.10±2.08)%,(19.89±4.25)%,(32.55±6.51)%,均高于对照组(P均﹤0.05),且G1～G0期细胞百分比和凋亡率随药物作用时间增加而增加;Western Blot显示,白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞,Bax的表达随作用时间增加而增加,Bcl-2的表达随作用时间增加而减低.结论 白花蛇舌草乙醇提取物随着药物浓度和作用时间的增加对肺腺癌A549细胞的体外抑制效应增加;其抑制作用可能通过将细胞周期阻滞于G1～G0期和通过上调Bax和下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的.     

海洋真菌多糖YCP对荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响

目的研究海洋真菌多糖(YCP)对荷瘤小鼠的抑瘤作用及对其免疫功能的影响。方法采用小鼠L ew is肺癌移植瘤和裸小鼠人肺癌A-549移植瘤模型,检测YCP对荷瘤小鼠的瘤质量、体重的影响及其相对肿瘤增殖率T/C。以M TT法检测YCP对L ew is肺癌细胞体外增殖的影响。以荷瘤小鼠的吞噬指数(k)及吞噬系数(α)值、自然杀伤细胞(NK)活性和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性为指标,观察YCP对免疫功能的影响。结果YCP(9、3 m g/kg)iv给药可显著抑制小鼠L ew is肺癌移植瘤的生长(P<0.01),但对裸小鼠人肺癌A-549移植瘤生长无抑制作用。YCP对L ew is肺癌细胞体外增殖无抑制作用。YCP(9、3 m g/kg)iv给药可显著提高S180荷瘤小鼠的k值(P<0.01、0.05)。YCP(9、3 m g/kg)iv给药可明显提高L ew is肺癌小鼠NK细胞和CTL细胞的杀伤活性(P<0.01、0.05)。结论YCP可显著提高荷瘤小鼠的免疫功能,对小鼠L ew is肺癌移植瘤的生长有显著抑制作用。     

榄香烯对人NSCLC细胞系A549细胞的作用机制探析

目的:探究榄香烯对人NSCLC细胞系A549细胞增殖、周期和凋亡的影响,确定其最佳用药浓度以及时间。方法:将人NSCLC细胞系A549细胞进行体外培养,分析榄香烯作用;采用Cell Counting Kit-8法检测榄香烯对细胞的增殖作用;采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果:细胞增殖抑制率随榄香烯浓度的升高,呈增高趋势。细胞周期检测及分析结果显示,经榄香烯作用48h和72h后,进入G2/M期的细胞明显减少,而sub-G1期细胞显著增多。随药物浓度增长,细胞凋亡率显著提升。结论:β-榄香烯可明显抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖,阻断细胞周期,促进细胞凋亡。     

姜黄素与博来霉素联用对A549细胞增殖抑制及细胞周期和凋亡的影响

目的:研究姜黄素和博来霉素联合应用对人肺泡Ⅱ型样细胞A549细胞增殖和细胞周期及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素抗博来霉素诱导的肺纤维化机制。方法:采用MTT法观察姜黄素和博来霉素对A549细胞的增殖抑制作用,并用流式检测细胞周期分布,凋亡试剂盒检测细胞凋亡。结果:姜黄素及博来霉素能抑制A549细胞的增殖,并呈浓度及时间依赖性。姜黄素(Cur)浓度为60μmol/L与博来霉素(BLM)2、4、6、8μg/mL联合24h的抑制率显著高于单用博来霉素组;姜黄素可引起体外培养的A549细胞G0/G1期阻滞;而且对G0/G1期阻滞随作用时间延长而增强。单用博来霉素刺激细胞,培养24h和48h,对细胞周期各个时期的影响没有统计学意义;姜黄素联合博来霉素诱导A549细胞凋亡,细胞核变的不规则皱缩,可见凋亡小体。结论:姜黄素联合博来霉素在体外对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,对细胞周期G0/G1期有显著阻滞作用,并可改变细胞凋亡;姜黄素和博来霉素联合应用可能通过改变肺泡上皮细胞细胞周期分布,并通过影响肺泡细胞凋亡从而起到抑制博来霉素治疗过程中肺纤维化的发生发展。