纤维连接蛋白促进牙周组织再生的细胞学研究

本实验利用体外细胞培养技术和ＭＴＴ比色性观察了纤维连接蛋白（ＦＮ）对牙周韧带细胞（ＰＤＬＣ）和牙龈成纤维细胞（ＧＦ）作用的不同生物学效应。结果显示，ＦＮ对两种细胞均有促进增殖的作用；ＦＮ在浓度为０．０４４μｍｏｌ／Ｌ时．对ＰＤＬＣ作用非常显著（Ｐ＜０．０１）．而在浓度为０．０８９～０．１７８μｍｏｌ／Ｌ时，对ＧＦ才有明显促进增殖的作用（Ｐ＜０．０１）。提示ＰＤＬＣ比ＧＦ对ＦＮ的刺激反应更敏感，因此，在牙周再生初期，若局部ＦＮ适量，可促使ＰＤＬＣ优先占据根面并增殖、分化，进而形成新附     

烟草对人牙龈成纤维细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的:探讨烟草浸提液(smokeless tobacco,ST)对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)在纯钛片上附着及增殖的影响及机制.方法:原代HGFs与不同浓度ST共同培养2h和2、4、6、8d;采用CCK-8法测定细胞黏附及增殖;采用双抗夹心酶联免疫吸附法检测不同时间培养上清液中纤维连接蛋白(fibroneetin,FN)的含量.采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析.结果:HGFs在钛片上的黏附率随ST浓度升高呈下降趋势,5.0 g/L和10g/L的ST组黏附率分别为(34.316±7.725)％和(25.478±10.651)％,显著低于对照组(100％,P＜0.01).细胞在钛片上增殖至第2天和第4天,对照组显著大于2.5、5.0、10g/L ST组(P＜0.05);第6天和第8天时,对照组均显著大于0.625～10 g/L各ST组(P＜0.05).ST与HGFs培养到第8天,0.625、1.25、2.5 g/L的ST组FN浓度分别为(69.352±31.640)、(23.595±8.625)和(7.292±2.865) ng/mL,显著低于对照组(142.188±28.126)ng/mL (P＜0.05).结论:ST能显著抑制HGFs在钛片上的黏附和增殖,其机制可能与细胞产生FN减少有关.     

生物压电复合陶瓷TCPLNK对大鼠成骨细胞生物相容性的体外研究

目的将生物陶瓷β- 磷酸三钙（β- TCP）与无铅压电陶瓷铌酸锂钠钾（LNK）复合制备具有压电效应的生物材料,研究其与大鼠来源成骨细胞的生物相容性。方法TCP与LNK分别以质量百分比5/5和1/10复合后制备成新型生物压电陶瓷TCPLNK5/5、TCPLNK1/10,极化处理后,标记好正负极。分别在其正负极表面接种大鼠来源的成骨细胞,用扫描电镜、成骨细胞免疫荧光染色观察细胞形态和生长,并用MTT法检测成骨细胞的增殖情况。结果TCPLNK正负极表面接种的成骨细胞早期就表达了良好的黏附性,形态正常,增殖旺盛,呈复层生长。说明了生物压电陶瓷TCPLNK具有优良的生物相容性,其中TCPLNK1/10负极面组成骨细胞的增殖活性高于其他组。结论生物压电复合陶瓷通过模拟天然骨的压电效应可提高骨替代材料的生物相容性。     

利用器官培养方法观察磷酸钙骨水泥浸提液对成骨细胞的影响

目的 通过利用新生小鼠颅盖骨体外器官培养模型,观察磷酸钙骨水泥(calcium phosphate cement,CPC)浸提液对成骨细胞的作用,为研究磷酸钙骨水泥的降解成骨机制提供依据.方法 剪取74只新生乳鼠两侧颅顶骨,分别培养于BGJb培养液(空白对照组)、BGJb培养液+浸提6h的磷酸钙骨水泥浸提液(实验1组)、BGJb培养液+浸提14 d的磷酸钙骨水泥浸提液(实验2组),通过甲基噻唑基四唑法、碱性磷酸酶活性检测和实时PCR检测钙、磷离子对细胞的体外增殖、碱性磷酸酶活性和骨钙蛋白表达的影响.结果 与空白对照组相应时间点相比,实验1组颅盖骨培养3、5、7、9d的细胞增殖能力持续增强(P＜0.05)(A值分别为0.563±0.047、0.932±0.065、1.325±0.139、1.395 ±0.108),培养3、7、10 d碱性磷酸酶活性[分别为(5.111 ±0.440)、(8.380±0.505)、(10.124±0.625) U/g prot]、骨钙蛋白表达(2-ΔΔCt值分别为4.41 ±0.52、21.24±2.17、31.84±3.51)持续增强(P＜0.05);实验2组培养5、7、9d的细胞增殖能力降低(P＜0.05),培养7、10 d碱性磷酸酶活性、骨钙蛋白表达降低(P＜0.05).结论 颅盖骨器官培养方法可作为磷酸钙骨水泥降解成骨机制的研究模型.     

牛血浆纤维粘连蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖的影响

目的研究外源性牛血浆纤维粘连蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖的影响。方法采用体外培养技术,原代培养大鼠成骨细胞,用AlamarBlueTM摄入法,检测不同浓度的牛血浆纤维粘连蛋白对大鼠成骨细胞增殖的影响。结果体外培养的成骨细胞呈梭形、三角形或多角形,多角形细胞有多个矢状突起;核卵圆形,常居一侧;胞质内碱性磷酸酶染色呈阳性反应,Ⅰ型胶原免疫组化染色呈阳性。牛血浆纤维粘连蛋白能够促进大鼠成骨细胞的增殖,当浓度为40μg/ml时,AlamarBlueTM还原率明显升高,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);当浓度为50μg/ml时,差异极显著(P<0.01)。结论一定浓度的牛血浆纤维粘连蛋白具有促进大鼠成骨细胞增殖的作用。     

大孔孔径对磷酸钙陶瓷骨诱导性的影响

目的:研究不同孔径大小对磷酸钙陶瓷骨诱导性的影响.方法:经过工艺改良制备出大孔孔径可控的骨诱导性磷酸钙陶瓷.对不同孔径的磷酸钙陶瓷诱导异位骨形成的时间分布和骨量进行了确切的比较和分析.结果:在本实验条件下,200～400 μm相对于600～800 μm和1000～1200 μm的孔径,最有利于骨诱导现象的发生,600～...     

牛血浆纤维粘连蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的 :研究外源性牛血浆纤维粘连蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖分化的影响。方法 :采用体外培养技术原代培养大鼠成骨细胞 ,用AlamarBlue摄入法检测不同浓度的牛血浆纤维粘连蛋白对大鼠成骨细胞增殖的影响 ,ELISA方法测定碱性磷酸酶活性的改变。结果 :AlamarBlue摄入法结果显示牛血浆纤维粘连蛋白能够促进大鼠成骨细胞的增殖 ,当浓度为 40 μg/ml时 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,当浓度为 5 0μg/ml时作用差异极显著 (P <0 .0 1) ,ELISA方法结果显示牛血浆纤维粘连蛋白能够增加大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性 ,各组与对照组相比均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,并有明显的剂量依赖性。结论 :一定浓度的牛血浆纤维粘连蛋白有促进大鼠成骨细胞增殖分化的作用     

碱性成纤维细胞生长因子和纤维连接蛋白在大鼠组织工程复合皮肤愈合中的表达

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和纤维连接蛋白(FN)在组织工程皮肤愈合过程中的作用。方法　以新生SD大鼠皮肤为原材料培养组织工程复合皮肤并将其移植到15只成年SD大鼠,第7、10、14、20、30天取标本,通过HE染色、免疫组织化学方法对移植后不同时间的组织工程复合皮肤进行检测,观察创面愈合过程中bFGF、 FN的表达变化及其与组织修复的关系。以做自体皮肤移植和正常Wistar大鼠做对照。结果　术后第10天时bFGF、 FN表达明显,术后第10天以前和第14天以后表达较弱。bFGF、FN在组织工程皮肤愈合过程中的变化与自体皮肤移植愈合过程相似。结论　在组织工程皮肤移植修复大鼠皮肤缺损中bFGF、FN有表达,促进了创伤愈合。     

两种沟槽钛片上纤维连接蛋白修饰方法的效果比较

目的:比较三氟代乙烷磺酰氯与硅烷化两种钛片上修饰纤维粘结蛋白(Fibronectin,Fn)方法的效果。方法:通过三氟代乙烷磺酰氯与硅烷化将Fn修饰于微沟槽钛表面,XPS分析不同材料表面元素组成;荧光染色观察接种不同材料表面的蛋白数量及分布。DAPI染色检测HGF接种在不同材料表面2、4、6 h后早期附着细胞数。用cck8比较HGF接种不同材料表面6 h、12 h、1 d、3 d、5 d、7 d后细胞增值率。结果:XPS结果提示硅烷化组材料表面的纤维蛋白含量高于三氟组及空白组(P<0.05)。免疫荧光观察提示硅烷化组材料表面的纤维连接蛋白含量高于三氟组及空白组(P<0.05)。DAPI染色提示2 h时3组材料细胞附着数相当,4、6 h时硅烷化组材料表面上细胞数明显多于其他组材料(P<0.05)。CCK8结果提示硅烷化材料在6个观察时间段硅烷化组材料细胞增值率高于三氟组及空白组(P<0.05)。结论:硅烷化法在钛片上修饰纤维蛋白的效果优于三氟代乙烷磺酰氯的方法。     

牛血浆纤维黏连蛋白抑制大鼠成骨细胞凋亡的实验研究

目的研究外源性牛血浆纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)对体外培养的大鼠成骨细胞凋亡的影响。方法采用体外培养技术原代培养大鼠成骨细胞,Western blotting法检测FN作用后成骨细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax的蛋白表达变化。结果体外培养的成骨细胞呈梭形、三角形或多角形,多角形细胞有多个矢状突起,核卵圆形常居一侧,Ⅰ型胶原免疫组化染色呈阳性。FN作用后细胞凋亡相关基因Bcl-2的蛋白表达增强;Bax基因的蛋白表达减弱。结论一定浓度的牛血浆FN能够抑制成骨细胞凋亡,其机制之一是增强大鼠成骨细胞胞浆内Bcl-2基因所表达的蛋白,同时减弱Bax基因的蛋白表达。     

纤维连接蛋白模拟多肽改进碳磷酸钙骨水泥反应性的体外研究

目的:寻找改进羟基磷灰石类骨修复材料生物活性的方法.方法:用固相法合成了多肽P19和P18,测定了P19与羟基磷灰石的结合特性,测定了P19对于成骨细胞附着的影响以及在P18与P19存在的条件下,成骨细胞的增殖特性,并用扫描电镜观察了附着在碳磷酸钙骨水泥(calcium carbonated phosphate cement,CPCC)材料表面的成骨细胞形态,并用DNA测量法测定了细胞在材料表面增殖特性.结果:P19铺板后能增强P18促进细胞增殖的作用.多肽分子P19对于成骨细胞的作用与纤维连接蛋白类似,多肽和CPCC结合后仍然保持其各自的生物活性,吸附在材料表面的P19能够促进成骨细胞在材料表面的附着,经过P19多肽修饰的CPCC表面能够明显增加成骨细胞吸附的数量,并能够促进成骨细胞的增殖.P18和P19之间存在一定的协同作用.结论:合成的P19融合肽可以作为HA类骨损伤修复材料的生物活性添加成分以及种植体涂层的修饰,这一方法和技术在HA骨修复材料的改进以及种植体涂层修饰方面有着潜在的临床应用前景.     

两种钙磷材料表面壳聚糖修饰对人牙髓干细胞黏附和增殖的影响

目的探讨羟基磷灰石-磷酸三钙(HA-TCP)和煅烧骨(CBB)两种材料表面壳聚糖(CS)修饰,对人牙髓干细胞黏附和增殖力的影响。方法采用壳聚糖通过物理化学方法修饰两种钙磷材料表面,然后随机分CBB、CBB+CS、HA-TCP、HA-TCP+CS四组接种人牙髓干细胞,通过细胞计数检测其黏附率和增殖量;MTT法检测不同接种时间细胞增殖力变化;扫描电镜观察材料表面形态、细胞黏附、增殖和基质分泌状况。结果细胞接种5d,细胞计数、增殖力检测和扫描电镜均显示壳聚糖修饰组材料表面的细胞黏附率、增殖活力和细胞数量、状况、基质分泌均显著高于未修饰组(P<0.01)。未修饰组细胞黏附率和增殖力检测,HA-TCP组均高于CBB组(P<0.05或P<0.01)。两种材料壳聚糖修饰后细胞黏附率CBB+CS组较高,而5d增殖力HA-TCP+CS组较高,细胞生长状态和基质分泌两组无显著差异。结论两种钙磷材料表面壳聚糖修饰均能显著促进人牙髓干细胞的黏附和增殖,均可作为人牙髓干细胞良好的支架材料用于组织工程化牙本质牙髓复合体的构建。     

钙离子对人成骨细胞迁移与成骨分化的影响

目的 研究不同浓度Ca ²⁺对人成骨细胞迁移与成骨分化的影响,探讨促进迁移与成骨合适的Ca ²⁺浓度及相关机制。 方法 设置Ca ²⁺浓度,Transwell检测成骨细胞迁移;CCK-8法评估成骨细胞增殖;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞成骨分化相关基因的表达;茜素红染色检测成骨分化生成的矿化结节。钙敏感受体（CaSR）拮抗剂拮抗后,观察Ca ²⁺对人成骨细胞迁移与成骨分化的影响。 结果 在迁移实验中,2、4、6 mmol·L ^-1的Ca ²⁺在3个时间点（8、16、24 h）都能明显地促进人成骨细胞的迁移,10 mmol·L ^-1的Ca ²⁺在8 h时明显抑制迁移。2~10 mmol·L ^-1 Ca ²⁺能促进人成骨细胞的增殖、成骨分化与矿化,8、10 mmol·L ^-1的Ca ²⁺诱导的矿化作用更明显。CaSR拮抗降低Ca ²⁺诱导的人成骨细胞迁移与成骨分化作用。 结论 低浓度Ca ²⁺有利于人成骨细胞迁移,高浓度Ca ²⁺有利于人成骨细胞分化,4、6 mmol·L ^-1的Ca ²⁺能较明显地同时诱导人成骨细胞迁移与成骨分化,Ca ²⁺-CaSR通路参与相应的信号传导。     

酪蛋白磷酸肽-无定形磷酸钙促进牙再矿化的机制

牙体在正常生理状态下处于脱矿和再矿化的动力平衡之中,当环境改变后,平衡被打破,脱矿和再矿化会向某一方向持续进行.脱矿不仅导致牙体形态学发生改变,也是龋病的开端,所以应该采取有力措施阻断这一过程,使其平衡向再矿化方向发展.以往以氟化物防龋并取得了较好的效果,却因不良反应使其应用受到了一定的限制.研究显示,牛奶和奶酪等奶制...     

Calcium ion release from calcium hydroxide stimulated fibronectin gene expression in dental pulp cells and the differentiation of dental pulp cells to mineralized tissue forming cells by fibronectin

Aim The effect of calcium ions on dental pulp cells was examined and the mechanism of dentine bridge formation by calcium hydroxide was investigated. Methodology Human dental pulp cells were treated with high concentration of calcium or magnesium ions for 24 h and fibronectin gene expression was measured by the quantitative PCR method. Human dental pulp cells were then cultured on fibronecin‐coated dishes for 24 h, and osteocalcin and osteopontin gene expression, which are typical phenotypes of mineralized tissue forming cells, were measured by the quantitative PCR method. Results Fibronectin gene expression was stimulated by calcium ions dose‐dependently. On the other hand, magnesium ions did not influence fibronectin gene expression. Furthermore, pulp cells cultured on fibronectin‐coated dishes enhanced the expression of phenotypes of mineralized tissue forming cells. Conclusions Calcium ions released from calcium hydroxide stimulates fibronectin synthesis in dental pulp cells. Fibronectin might induce the differentiation of dental pulp cells to mineralized tissue forming cells that are the main cells to form dentine bridges, via contact with cells.     

Effect of surface roughness and calcium phosphate coating on the implant/bone response

The influence of surface roughness and calcium phosphate (Ca-P) coating on the bone response of titanium implants was investigated. Four types of titanium implants, i.e. as-machined, grit blasted, as-machined with Ca-P sputter coating, and grit blasted with Ca-P sputter coating, were prepared. The Ca-P sputter-coating, produced by using the RF magnetron sputter technique, was rapid heat-treated with infrared radiation at 600 degrees C. These implants were inserted into the left and right femoral condyles and the left and right tibial diaphyses of the rabbits. After implantation periods of 2 and 12 weeks, the bone-implant interface was evaluated histologically and histomorphometrically. Histological evaluation revealed no new bone formation around different implant materials after 2 weeks of implantation. After 12 weeks, bone healing was almost completed. For both tibial and femoral implants, Ca-P coated implants always showed a higher amount of bone contact than either of the non-coated implants. On the other hand, surface roughness improved only the response to implants inserted into the tibial diaphysis. On the basis of these findings, we concluded that 1) deposition of a sputtered Ca-P coating on an implant has a beneficial effect on the bone response to this implant during the healing phase, and 2) besides implant surface conditions the bone response is also determined by local implant site conditions.     

Influence of environmental calcium/phosphate and pH on glass ionomers

This study investigated the effects of environmental calcium/phosphate and pH on the hardness and elastic modulus of two glass-ionomer cements (GICs) [Fuji IX Fast (FN) and KetacMolar (KM)]. Specimens were randomly subjected to storage media of pH 3, 5, and 7. The calcium and phosphate levels of the storage solutions ranged from 0 to 2.4 mM. After 4 wk of conditioning, hardness and elastic modulus were determined using a depth-sensing microindentation test. Sectioned surfaces were observed with scanning electron microscopy. For both FN and KM, no significant change in hardness, elastic modulus, or surface structure were observed at pH 7 and 5, regardless of the concentration of calcium and phosphate. FN and KM specimens conditioned at pH 3 had lower hardness and modulus in comparison to those conditioned at pH 7. An increased level of environmental phosphate led to higher hardness and elastic modulus of FN and KM at pH 3. In general, a microscopic surface reaction layer was observed in specimens conditioned at pH 3. The thickness and structure of the reaction layer varied depending on environmental phosphate levels. The results suggest that the influence of environmental calcium and phosphate on GICs was pH dependent.     

酪蛋白磷酸肽钙磷复合体在牙菌斑中的作用

酪蛋白磷酸肽钙磷复合体是由一种含成簇磷酸丝氨酸的生物活性肽———酪蛋白磷酸肽与无定形磷酸钙经生物结合而形成,具有重要的生物活性,是一种新型的生物防龋制剂。本文就其结构特征、在牙菌斑中对主要致龋菌的影响、抑制脱矿及促进早期龋再矿化作用,以及研究展望等方面作一综述。