肝细胞肝癌中肝脏干细胞标志物的研究

目的：检测人肝细胞肝癌中是否存在肝内干细胞（又称为肝前体细胞）以及分化状态如何,并探讨骨髓干细胞在肝细胞肝癌的病理过程中是否发挥作用。方法：用免疫组织化学法检测40例肝癌组织及癌旁组织中的HepParl（肝细胞标志物）、CK7和CK19（胆管细胞分化标志物）以及CD90（骨髓干细胞标志物）的表达情况。结果：在肿瘤结节边缘及肝硬化的门脉区可发现肝前体细胞的存在,并且HepParl、CK7和CK19表达阳性,而CD90表达阴性。结论：肝细胞肝癌可能是在肝前体细胞长期突变积累的基础上发展而成。     

p53及KAI1/CD82在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨p53及KAI1在肝细胞癌中的表达及临床意义.方法 使用免疫组织化学技术检测p53及KAI1在肝癌及癌旁组织中的表达情况,统计分析肝癌中p53及KAI1的表达与临床病理参数之间的关系.结果 肝癌组织中p53及KAI1的阳性表达率分别为52.50%、20.00%,对应的癌旁组织中p53及KAI1的阳性表达率分别为2.50%、75.00%;p53表达与病理分级、TNM分期和淋巴结/腹膜转移有关(P＜0.05);KAI1表达与肝内转移和淋巴结/腹膜转移有关(P＜0.05).结论 p53在肝癌中表达显著高于相应的癌旁组织,而KAI1在肝癌中表达显著低于相应的癌旁组织.p53表达与病理分期、TNM分期和淋巴结/腹膜转移有关;KAI1表达与肝内转移和淋巴结/腹膜转移有关;肝癌组织中p53的表达与KAI1呈负相关关系.     

原发性肝细胞癌癌组织中p33ING1b与p53基因的表达

目的研究p33ING1b与p53蛋白在原发性肝细胞癌中表达的相关性及ING1b基因在原发性肝细胞癌中的突变率.方法应用免疫组织化学SP方法检测了57例原发性肝细胞癌癌组织、51例癌旁肝组织及12例正常肝组织中p33ING1b和p53蛋白的表达,并分析了原发性肝细胞癌癌组织中乙肝病毒(HBV)的感染率;应用聚合酶链式反应(PCR)联合单链构象多态性(SSCP)方法检测了28例配对癌及癌旁肝组织中ING1b基因两个外显子的突变情况,对有异常泳动条带的DNA片段分别克隆测序.结果在57例原发性肝细胞癌癌组织中,p33ING1b、p53蛋白的阳性率分别为42.1%和57.9%,p33ING1b、p53表达均呈阳性者有19例(33.3%),且两者在癌组织中阳性分布区域相同;p33ING1b蛋白表达与p53蛋白表达在癌组织中呈显著正相关(r=0.783, P<0.01);配对癌旁肝组织及正常肝组织中p53蛋白表达均为阴性,p33ING1b蛋白在13例癌旁肝组织及2例正常肝组织中呈弱阳性表达;在57例原发性肝癌组织中有35例(61.4%)HBV X蛋白呈阳性,其病理类型均为肝细胞肝癌,在51例癌旁肝组织中检出HBV X蛋白阳性者39例(76.47%),癌组织中HBV感染与p33ING1b、p53蛋白表达均有关(P<0.01);PCR-SSCP结果表明,ING1b基因在原发性肝细胞癌中突变率较低为7.1%(2/28).结论 p33ING1b、p53蛋白在原发性肝细胞癌中的表达呈显著正相关,p33ING1b的存在可能还有其他不依赖p53蛋白的途径;HBV感染与p33ING1b、p53蛋白表达均有关;基因突变不是p33ING1b丧失抑癌功能的主要因素.     

肝细胞肝癌组织中survivin基因的表达及与p53、Bcl-2表达的关系

目的 探讨survivin基因在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达、定位及临床意义,以及与p53和Bcl-2表达的关系.方法 应用SABC免疫组织化学染色技术对87例HCC组织及其50例癌旁组织、4种肝癌细胞系和27例非肝癌肝组织进行survivin蛋白检测,对其中的30例HCC组织进行突变型p53和Bcl-2蛋白检测;应用Western blot和real time-PCR等技术对8例HCC组织及其癌旁组织、4种肝癌细胞系进行survivin蛋白和mRNA进行检测;对74例HCC患者的临床分期、病理分级、瘤块大小等与survivin蛋白表达情况进行相关性分析.结果 ①HCC组织、癌旁组织和非肝癌肝组织中,survivin蛋白阳性表达率分别为59.77%(52/87),26.00%(13/50)和0(0/27),HCC组织中survivin蛋白表达与癌旁组织和非肝癌肝组织比较差异均有统计学意义(P<0.01),且与患者年龄、性别、瘤块大小、有否转移、临床分期和病理分级等均无相关关系(P>0.05).②survivin mRNA在HCC组织、癌旁组织中阳性表达率分别为37.5%(3/8)和0(0/8);survivin蛋白和mRNA在4种肝癌细胞系(SMMC-7721,HHCC,HCC-9724 和HepG2)中,除HepG2外均呈高表达.③survivin蛋白表达与突变型p53表达存在明显正相关(χ2=4.693,P=0.030),与Bcl-2表达无明显相关(χ2=0.25,P=0.617).结论 survivin基因可能成为肿瘤基因治疗的靶点;survivin基因与p53基因在抑制肿瘤细胞凋亡方面可能具有某种协同作用;检测survivin表达水平对判断HCC恶性程度和预后可能无临床价值.     

鼠双微粒体-2基因和突变型p53基因表达与肝癌细胞增殖和凋亡关系的研究

目的　探讨鼠双微粒体 2 (murine double minute 2, MDM2) 基因和突变型 p53 基因表达及其与肝癌细胞增殖和凋亡的相关关系。方法　应用免疫组织化学、原位分子杂交和 TUNEL 方法检测原发性肝细胞癌组织中MDM2基因和突变型 p53基因表达与肝细胞癌组织中癌细胞增殖和凋亡情况, 并分析 MDM2 基因和 p53 基因表达与肝细胞癌组织学分级、类型、增殖和凋亡的相关关系。结果　①MDM2蛋白和mRNA 、p53蛋白和mRNA 在肝细胞癌组织中阳性表达率明显高于癌旁肝组织和正常肝组织 (均P<0 .05); MDM2 mRNA阳性表达与肝细胞癌组织学分级和类型无相关关系 (均P>0 05); p53 mRNA阳性表达与肝细胞癌组织学分级具有相关关系 (P<0 .05)。②肝细胞癌组织中癌细胞增殖和凋亡的阳性率分别为 100%和 50%, 两者相比差异有极显著性意义 (P< 0 .01); MDM2mRNA 和 p53 mRNA阳性表达与肝癌细胞增殖均具有相关关系 (均P<0. 05), 但与肝癌细胞凋亡均无相关关系 (均P>0. 05)。结论　MDM2 和 p53的蛋白和mRNA在肝细胞癌组织中呈过表达状态, MDM2 基因和 p53基因过表达在肝细胞癌发生、增殖和分化中起重要作用。     

肝细胞性肝癌中p28GANK基因的表达与凋亡基因bax、bcl-2表达的关系

目的探讨p28GANK基因在肝细胞性肝癌组织中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法收集肝细胞性肝癌组织68例、正常肝组织30例,采用免疫组化法检测标本中p28GANK基因、凋亡基因Bcl-2和Bax的表达情况。结果 p28GANK在肝细胞性肝癌和正常肝组织中的阳性表达率分别为73.5%和6.7%,肝细胞性肝癌中p28GANK基因的表达高于正常肝组织(P0.01)。肝细胞性肝癌组织Bax的表达明显低于正常肝组织(P0.05),而Bcl-2的表达明显高于正常肝组织(P0.05)。肝细胞性肝癌组织p28GANK的表达与Bcl-2的表达呈正相关(P0.05),但与Bax的表达无明显相关性(P0.05)。结论 p28GANK蛋白表达与肝细胞性肝癌的发生发展可能相关,p28GANK和凋亡抑制基因Bcl2的共同表达可能在肝细胞性肝癌中起协同作用。     

肝细胞肝癌VEGF与p53的表达及其意义

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)和p53蛋白表达与原发性肝细胞肝癌(HCC)的关系。方法用免疫组织化学SP法,检测49例HCC组织、21例癌旁组织、10例正常肝组织VEGF及p53蛋白的表达情况,并与临床病理指标比较分析。结果49例HCC中VEGF、p53蛋白阳性表达分别为63.2%和53.1%;VEGF和p53蛋白表达有相关性(P<0.05)。21例癌旁组织中VEGF和p53蛋白阳性表达分别为19.0%和9.5%。肝癌组织和癌旁组织VEGF和p53蛋白表达差异有显著性(P<0.01)。10例正常肝组织无VEGF和p53蛋白表达。HCC组织中VEGF、p53蛋白阳性表达与血管侵犯和转移倾向明显相关(P<0.05)。结论HCC组织中VEGF、p53蛋白过表达,通过促进HCC肿瘤血管的生成而促进HCC的生长和浸润转移,p53和VEGF可作为反应HCC生物学行为的重要指标。     

肝癌组织survivin的表达与凋亡,增殖和p53的关系

目的：研究肝癌survivin的表达与细胞增殖、凋亡以及053表达的关系．方法：应用免疫组化法检测原发性肝癌组织42例、癌旁肝硬化组织34例、正常肝组织10例中survivin,p53,增殖细胞核抗原（PCNA）的表达．应用TUNEL法检测细胞凋亡．结果：在42例肝癌组织中survivin阳性30例（71．4％）,显著高于癌旁肝硬化组织（11．8％）和正常肝组织（0％,P〈0．001）．肝癌中survivin蛋白的高表达与病理分级（P=0．003）,p53蛋白水平（P=0．008）、细胞增殖凋亡比（P=0．001）及患者生存时间（P=0．002）存在显著相关性,而与年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、门脉癌栓（局部转移）无显著相关（P〉0．05）．结论：肝癌组织survivin高表达在打破肝癌细胞的增生和凋亡之间的平衡中起着重要作用．Survivin可能抑制p53阴性肝癌细胞的凋亡,在肿瘤细胞的进一步恶性转化中发挥作用．     

Oncol2012: Dusp6 在肝细胞肝癌肿瘤组织较癌旁组织高表达与肿瘤复发相关

背景 探讨dusp-6在肝细胞肝癌中的表达与MAPK、临床病理学特征及预后相关性。方法 305例肝细胞肝癌组织芯片,免疫组化EnVision法检测dusp-6、p-ERK、p-JNK和p-p38α表达,同临床病理学特征及术后随访资料进行统计学相关性及预后生存分析。结果 肝细胞肝癌肿瘤组织较癌旁组织和肝血管瘤旁正常肝组织dusp-6显著高表达（P＜0.001）。 相对癌旁肿瘤细胞dusp-6表达与无瘤生存率具有显著相关性（P = 0.013）。相对癌旁肿瘤细胞dusp-6表达为无瘤生存率的独立预后风险因素（HR= 1.635, P = 0.006）。结论 Dusp-6在HCC中肿瘤组织较癌旁组织和正常肝组织过表达。相对癌旁dusp-6高表达HCC患者术后更易复发。相对癌旁肿瘤细胞dusp-6表达可以作为HCC术后复发风险预测指标。     

原发性肝癌组织中PTEN、p27的表达

目的探讨病理抑癌基因PTEN、p27在原发性肝细胞性肝癌（HCC）组织中的表达与病理学特征、预后的关系及两者的相关性。方法用免疫组织化学SP法检测5例正常肝组织、10例肝硬化组织、45例原发性肝细胞性肝癌组织中PTEN、p27的表达状况。结果45例HCC中PTEN、p27蛋白的阳性表达率（51．1％和40．0％）和阳性强度明显低于肝硬化组织（90．0％和100．0％）和正常肝组织（100．0％和100．0％）,PTEN、p27蛋白的阳性表达率与组织分化、癌肿直径、有无癌栓密切相关。双变量相关分析,PTEN在肝癌组织中的表达与p27在肝癌组织中的表达呈显著的正相关。结论PTEN、p27在肝癌组织中的表达与其组织分化等病理学特征密切相关。     

肝癌患者P53蛋白表达及其临床病理意义

通过免疫组织化学ＳＰ法检测原发性肝癌患者癌及癌基因Ｐ５３蛋白的表达，揭示其与患者的临床病理改变之间的联系。结果Ｐ５３蛋白在肝癌及癌旁组织中的检出率分别为３０．４％和７．９％，定位于肝细胞的胞浆内，肝癌细胞的胞核内；Ｐ５３蛋白表达与癌细胞的分化存在着明显联系；而与癌块大小、肝内外转移和播散及患者的预后无关。本文提示抑癌基因的Ｐ５３的失活可能参与了肝癌的发生，但与其生物学行之间的联系不大。     

Ras和p16基因在肝癌组织中的表达与临床意义

目的：观察基因ras和p16在肝癌组织中的表达，探讨其在肝癌术后复发及预后中的作用。方法：应用免疫组化S－P法，检测53例手术切除肝癌组织和12例正常肝组织的ras和p16表达及与肝癌临床病理指标、术后复发及预后的关系。结果：（1）ras在肝癌和正常肝组织中的阳性表达率分别为66．0％和34．0％，ras表达与肿瘤大小、有无肝内转移密切相关（P均＜0．05）。ras阳性、阴性表达病例3年复发率分别为68．8％、38．9％，3年生存率分别为37．1％、66．7％（P＜0．05）。（2）p16在肝癌和正常肝组织中的阳性表达率各为47．2％、100．0％，p16表达与有无肝内转移、组织分化密切相关（P均＜0．05）。p16阳性、阴性表达病例3年复发率分别为48．0％、67．9％，其3年生存率分别为64．0％、32．1％（P均＜0．05）。（3）ras和p16在肝癌中的表达密切相关（P＜0．01），p16阳性ras阴性与p16阴性ras阳性表达病 列3年复发率分别为35．7％、79．2％，3年生存率分别为71．4％、29．2％，差异有极显著性（P＜0．01）。结论：联合检测p16和ras的表达可作为判断肝癌术后复发及预后的有效指标，多基因分析比单基因分析更有价值。     

原发性肝细胞癌中p53、p16和p21WAF1蛋白表达及临床意义

目的:研究p5 3、p16和p2 1WAF 1蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学S- P法检测原发性肝细胞癌4 1例,癌旁组织30例中p5 3、p16和p2 1WAF1 蛋白的表达。结果:p5 3蛋白的表达在PHC中显著高于癌旁(P<0 .0 1) ,其表达与病理学分级、有无肝内或门静脉转移有显著相关性(P<0 .0 5 )。p16蛋白的表达在PHC中显著低于癌旁(P<0 .0 1) ,其表达与病理学分级显著相关(P<0 .0 5 )。p2 1WAF 1 蛋白的表达在PHC中显著高于癌旁(P<0 .0 1) ,而在不同临床病理特征间差异无显著性。结论:p5 3、p16和p2 1WAF 1蛋白的表达情况与原发性肝细胞癌的发生、发展及恶性程度有关。     

奥沙利铂通过p53信号通路抑制肝癌细胞增殖的机制研究

目的:研究奥沙利铂（L-OHP）对突变型肝癌细胞HuH-7、野生型肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响,探讨p53信号通路相关蛋白在其中的作用。方法:MTT法检测L-OHP对HuH-7、HepG2细胞增殖的抑制效应;倒置显微镜观察L-OHP作用后2种细胞株形态的变化;流式细胞术检测L-OHP作用后细胞周期分布;Western blot法检测p53信号通路相关蛋白表达变化。结果:L-OHP能抑制HuH-7、HepG2细胞增殖,具有时间浓度依赖性（P<0.01）;L-OHP作用后,可观察到细胞形态发生改变,细胞变圆、脱壁;L-OHP能够诱导HuH-7、HepG2细胞阻滞在细胞周期的S期,S期细胞的比例随L-OHP作用浓度增加而明显增加（P<0.01）;L-OHP可激活p53信号通路,L-OHP改变2种细胞中p21、Bax、Bcl-2、p53、磷酸化p53（p-p53）蛋白表达（P<0.05）,但对HuH-7细胞p-p53的表达无明显影响。结论:L-OHP可通过激活p53信号通路诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能与调控p53通路相关蛋白p53、p-p53、p21、Bax、Bcl-2的表达有关。     

肝癌患者血清高迁移率族蛋白B1的表达及与p53和临床病理的相关性

[目的] 探讨肝癌血清HMGB-1的表达及与p53的相关性和临床病理的联系。[方法] 酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)检测20例肝细胞癌、20例肝内胆管细胞癌和20例健康志愿者血清HMGB-1和p53表达。 [结果] 血清HMGB-1在肝细胞癌组(83.8±17.4ng/ml)和胆管细胞癌组(95.9±21.4ng/ml)表达都高于健康对照组(8.4±2.6ng/ml),差异均有统计学意义(p<0.05);血清p53在肝细胞癌组(251.0±45.6pg/ml)和胆管细胞癌组(267.8±47.4pg/ml)表达都高于健康对照组(160.0±28.4pg/ml),差异均有统计学意义(p<0.05);血清HMGB-1和p53水平与患者年龄、性别、肿瘤大小和数目没有明显相关性,差异无统计学意义（p>0.05）,与肿瘤TNM分期、分化程度、淋巴转移情况相关,差异有统计学意义（p<0.05）;HMGB-1和p53的表达在肝细胞癌组和肝内胆管细胞癌组血清中均呈正相关(r=0.6603,p<0.05;r=0.6142,p<0.05)。[结论] 肝癌血清HMGB-1的表达与p53具有相关性,二者共同影响肝癌临床病理。     

增强CT瘤内动脉鉴别肝内胆管细胞癌和低分化肝细胞癌的价值

目的分析增强CT瘤内动脉鉴别肝内胆管细胞癌与低分化肝细胞癌的临床价值。方法回顾性分析2013年6月-2015年6月于我院经病理证实为肝内胆管癌(n=40)、低分化肝细胞癌患者(n=50)的临床资料,所有患者均已接受动态增强CT扫描且影像学资料完整,分析增强CT扫描在鉴别肝内胆管细胞癌与低分化肝细胞癌中的应用价值。结果ICC患者CT平扫及增强扫描以分叶征(77.5%)、肝内胆管扩张(72.5%)、动脉期肿瘤内肝动脉(47.5%)、环形强化(57.5%)、延迟强化(60.0%)等征象多见,所占比例均高于p-HCC患者,对比差异有统计学意义(P0.05)。结论肿瘤内肝动脉、对比剂迅速廓清、分叶征、肝内胆管扩张、动脉期环形强化、延迟强化等征象均为鉴别肝内胆管细胞癌与低分化肝细胞癌的重要CT征象,是两者鉴别诊断的重要依据。     

肝细胞癌p53及c-myc mRNA的表达

目的探讨p53及cmycmRNA表达在原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)发生发展过程中的作用。方法应用原位杂交方法检测63例HCC癌及其癌周组织中p53和cmyc基因mRNA的表达状况。结果p53基因mRNA在HCC中阳性表达率显著高于癌周组织(P<0.05),癌周组织中p53基因表达仅见于癌周增生结节,癌周肝硬化及正常肝组织内未见p53mRNA阳性表达;cmyc基因mRNA的阳性表达率在HCC与癌周增生结节中相近(P>0.05),且两者均显著高于癌周肝硬化和正常肝组织(分别为P<0.05,P<0.01);p53及cmyc基因mRNA表达均与HCC分化程度呈显著正相关,低分化组p53及cmyc基因的mRNA阳性表达率均显著高于高分化组(P均<0.05)。结论p53及cmyc基因mRNA过度表达可能参与了人肝细胞癌的发生发展过程。     

A novel diagnostic marker, p28(GANK) distinguishes hepatocellular carcinoma from potential mimics

PURPOSE. To investigate the sensitivity, specificity, and spatial distribution of the product of p28 gene (p28(GANK) protein) in human hepatocellular carcinoma (HCC) and nonhepatocellular carcinomas in relation to immunostaining with Cytokeratin 18 (CK18), alpha-fetoprotein (AFP), and Hepatocyte paraffin 1 (HepPar1). METHOD. In this retrospective study, formalin-fixed paraffin-embedded tissues from 24 HCCs, five intrahepatic cholangiocarcinomas (ICC), five combined hepatocellular cholangiocarcinomas (C-HCC-CC) and mine metastatic hepatic carcinomas (MHC) were immunostained for p28(GANK) as well as CK18, AFP and HepPar1. Only cases with more intensified staining in carcinoma contrast to the adjacent liver tissues were accepted as positive. RESULT. In HCC, p28(GANK) was expressed restrictively in hepatocytes of both para-lesion and carcinoma liver tissues, while absent in the bile duct epithelial cells, Kupffer cells, and other interstitial cells. The positive staining of p28(GANK) was noted in 16 (66.7％) specimens of HCC and three (60.0％) specimens of C-HCC-CC, and no specific lesion staining was found in all tested specimens of ICC and MHC. Sensitivity and specificity for hepatocyte-originated carcinoma were, respectively, 65.5％ and 100％ for p28(GANK), 79.3％ and 85.2％ for CK18, 20.7％ and 100％ for AFP, 79.3％ and 92.0％ for HepPar1. CONCLUSION. The hepatocytic staining for p28(GANK) is clearly useful in differentiating hepatocyte-originated carcinoma from non-HCC. p28(GANK) may be used as an ancillary marker for the diagnosis of HCC.     

p21、p53基因表达及其单核苷酸多态性与肝细胞肝癌的关系

目的探讨肝细胞肝癌患者p21和p53基因的表达及其单核苷酸的多态性，分析其与肝细胞肝癌的关系。方法选择50例肝细胞肝癌患者和50名健康志愿者，采用PCR技术检测两组外周血白细胞中的p21和p53基因的表达情况，采用PCR—RFLP方法检测p213’UTR位点以及p53intron6位点的基因多态性。结果肝癌组p21和p53mRNA表达显著高于对照组（P〈0．01）。饮酒能够增加p53mRNA的表达。p21基因3’UTRC／T位点C／T＋T／T型与60岁以上人群肝癌患病率升高有关。结论p21基因以及p53基因的高表达可能与肝细胞肝癌有一定的相关性，饮酒能够使肝癌患者1353基因的表达升高。