非综合征型耳聋线粒体基因A1555G突变分析

目的通过分析内蒙古鄂尔多斯市特殊教育学校中非综合征型耳聋患者群体中线粒体基因12S rRNAA1555G突变,以探讨该群体与线粒体突变的关系。方法对鄂尔多斯市特殊教育学校102名非综合征型耳聋患者进行耳聋病因问卷调查、纯音听阈测试、声导抗测试及线粒体A1555G基因突变检测。结果102名非综合征型耳聋患者全部为感音神经性耳聋,54例有明确的氨基糖甙类抗生素用药史,7例(6.9%)存在线粒体基因A1555G位点突变。结论mtDNA 12S rRNA A1555G在该研究群体中有较高的发生频率,携带有该突变的个体对氨基糖甙类抗生素的耳毒作用有高度易感性。     

中国福建线粒体耳聋患者线粒体DNA A1555G突变检测及其与耳聋严重程度的关系

背景 已知突变型与野生型线粒体DNA的比例与耳聋的临床表型有关。本研究建立高灵敏度的RT-ARMS-qPCR（real time-amplification refractory mutation system-quantitative PCR）系统定量测定含A1555G位点突变的线粒体DNA（mitochondrial DNA, mtDNA）,探讨突变型mtDNA的比例变化与中国福建线粒体耳聋（mitochondrial deafness, MD）患者耳聋严重程度的关系。 方法 以PCR扩增含mtDNA 1555位点的片段,并将其克隆到pGEMT Easy载体上,构建质粒标准品,建立RT-ARMS-qPCR系统定量检测126个中国福建MD患者含突变型和野生型mtDNA 1555位点的片段的拷贝数。结合患者的临床资料,分析耳聋严重程度与突变型mtDNA所占比例的关系。 结果　RT-ARMS-qPCR系统在检测1个含野生型mtDNA 1555的重组质粒DNA模板时,其批内变异系数（CV）为1.21%,批间CV为1.78%,线性范围为102～108拷贝数/μl;突变型或野生型引物只特异扩增相对应的序列,特异性好;散发组mtDNA A1555G同质性突变的患者中,突变拷贝数与耳聋轻重程度无关（R=0.007,P=0.989）;散发组mtDNA A1555G异质性突变的患者中,突变型与野生型的比例与耳聋轻重程度相关（R=0.811,P=0.003）;家系组mtDNA A1555G同质性突变的拷贝数与耳聋轻重程度相关（R=0.352,P=0.023）;家系组mtDNA A1555G异质性突变的拷贝数与耳聋轻重程度相关（R=0.90,P=0.012）。 结论　RT-ARMS-qPCR系统适合于定量检测mtDNA A1555G点突变的线粒体DNA片段,结果特异、稳定、准确。线粒体耳聋的严重程度与突变型mtDNA 1555所占比例有关。     

一母系遗传非综合征型感音神经性耳聋线粒体基因突变分析

目的:通过对一个母系遗传非综合征型耳聋家系进行线粒体DNA(mitochondric DNA,mtDNA)12SrRNA及tRNASer(UCN)基因突变分析,mtDNA突变与遗传性耳聋相关性。方法:临床听力测试以明确诊断,收集非综合征型遗传性耳聋家系中6人的外周静脉血样本,从白细胞中提取DNA,聚合酶链反应扩增mtDNA目的片段,对扩增片段进行DNA测序,对发现的基因突变进行计算机辅助的二级结构模拟分析。结果:测序结果表明,此家系mtDNA12SrRNA基因中存在着mtDNA A1555G、G1007A、A1313G点突变,tRNASer(UCN)基因无突变。结论:在该非综合征型遗传性耳聋家系中,mtDNA12SrRNA基因区域A1555G和G1007A、A1313G突变可能共同参与了听力损害的过程。     

云南省部分聋生线粒体DNA 12S rRNA A1555G和C1494T的突变

目的探讨云南省部分特教学校聋生携带氨基糖甙类抗生素致聋相关基因线粒体DNA(mitochondri-al DNA,mtDNA)12S rRNA A1555G和C1494T的突变率.方法采集413名耳聋学生及232名健康人群的外周静脉血,提取基因组DNA,PCR扩增含mtDNA 12S rRNA A1555G和C1494T的基因片段,扩增产物经直接测序进行基因突变位点的鉴定.结果在413名耳聋学生中有10例携带mtDNA 12S rRNA A1555G均质突变,携带率为2.42%.对照组中未检测到该位点的突变.2组人群中均未检测到mtDNA 12S rRNA C1494T突变.结论云南省部分特教学校聋生携带mtDNA 12S rRNA A1555G的突变率与全国平均水平一致,本研究为明确该地区耳聋的病因、防治及干预提供科学依据.     

非综合征性耳聋一家系分子病因学分析

目的 从分子病因学角度分析一具有母系遗传特性的非综合征性耳聋家系耳聋原因.方法 对该家系成员进行线粒体基因全序列及缝隙连接蛋白26编码基因(GJB2)全序列分析.结果 接受检测的该家系先证者(Ⅲ-5)及另一母系成员(Ⅲ-1)均携带线粒体DNA 12SrRNA C1494T突变;先证者聋前有氨基糖苷类抗生素应用史,表现为双侧重度感音神经性耳聋,携带线粒体DNA12SrRNA C1494T突变的另一母系成员(Ⅲ-1)聋前无氨基糖苷类抗生素应用史,表现为双侧中度感音神经性耳聋.GJB2基因检测未发现致病突变.结论 线粒体DNA 12SrRNA C1494T突变是氨基糖苷类抗生素致聋的原因之一,该突变致聋程度的不一致性可能与个体遗传背景不同有关.     

氨基糖甙类抗生素致聋家系线粒体基因突变的分析

目的：探讨线粒体DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)突变与非综合征性遗传性耳聋的关系，并且建立相应的基因诊断方法。方法：调查并收集2个非综合征性耳聋家系、6个散发病例及25例正常个体的外周静脉血样本．从白细胞中提取DNA，聚合酶链反应扩增mtDNA目的片段，分别用BsmAⅠ、ApaⅠ及XbaⅠ限制性内切酶检测1555^G、3243^G、7445^G和del961Cn点突变，对相关的扩增片段进行基因测序。结果：酶切检测，两家系中全部12例的耳聋患者均为1555^G点突变阳性。家系中的其他成员、6例散发病例及25例正常人均为阴性，调查的所有个体(包括患者)3243^G、7445^G和del961Cn点突变均为阴性。mtDNA测序：酶切显示，1555G突变阳性病例均发现(nt)1555A→G转换，3243^G、7445^G及del961Cn点突变阴性。结论：1555^G点突变呈母系遗传；1555^G点突变在母系遗传非综合征型耳聋家系中有较高的发生率，在散发型病例中发生率较低：提示1555^G点突变是该类耳聋分子诊断的有用指标。     

非综合征性耳聋线粒体DNA 12S rRNA A1555G突变分析

目的研究非综合征性耳聋患者线粒体DNA 12S rRNA A1555G突变情况,并分析该基因突变患者的家系情况,为患者提供分子病因学诊断和遗传咨询。方法收集95例非综合征性耳聋患者家系的相关临床资料,抽取外周静脉血5～10 ml,用聚合酶链反应扩增技术对血样线粒体DNA 12S rRNA基因扩增、纯化及测序。对突变阳性患者家系进行系谱分析,为其家系提供耳聋的病因学分析、生育指导及遗传咨询。结果 95个非综合征性耳聋家系中线粒体DNA 12S rRNA A1555G突变的检出率为8.4%（8/95）。结论线粒体DNA 12S rRNA基因突变是引起遗传性耳聋的重要因素,本地区线粒体DNA 12S rRNA A1555G突变率在国内处于相对较高水平。     

含1555位点的线粒体DNA拷贝数与非综合征型耳聋临床表型的关系

目的 定量检测非综合征型耳聋患者mtDNA A1555G突变型/野生型的拷贝数,探讨mtDNA A1555G突变型的拷贝数与临床表型之间的关系.方法 建立RT-ARMS-qPCR系统对含突变型和野生型mtDNA 1555位点的拷贝数进行定量检测并计算其突变的比例.结合散发组和家系组耳聋患者的临床资料,分析mtDNA A1555G突变型的拷贝数与耳聋严重程度的关系.结果 散发组mtDNA A1555G同质性突变的患者中,突变拷贝数与耳聋轻重程度无关(R=0.001,P=0.997);散发组mtDNA A1555G异质性突变的患者中,突变型与野生型的拷贝数比例与耳聋轻重程度相关(R=0.771,P=0.003);家系组mtDNA A1555G同质性突变的拷贝数与耳聋轻重程度相关(R=0.341,P=0.022);家系组mtDNA A1555G异质性突变的拷贝数与耳聋轻重程度相关(R=0.85,P=0.015).结论 含mtDNA A1555G点突变的拷贝数与非综合征性耳聋的严重程度密切相关,为揭示非综合征耳聋临床表型多样性奠定了基础.     

186例耳聋患者线粒体DNA12SrRNA基因筛查及家系分析

目的探讨耳聋患者线粒体DNA（mtDNA）12SrRNA基因突变频率以及相关突变位点对药物性耳聋表型表达的影响。方法选取2016至2018年温州特殊教育学校186例非综合征耳聋患者作为研究对象,应用Sanger测序法对mtDNA12SrRNA进行测序,并进行临床资料分析和家系评估。结果186例耳聋患者中37例明确有使用氨基糖甙类药物史,占19.9%。通过mtDNA12SrRNA检测,筛选出变异类型16种,其中保守指数（CI）＞75%的变异位点包括827A＞G、1095T＞C、1107T＞C、1382A＞C、1431G＞A、1541T＞C、1555A＞G。其中明确与药物性耳聋相关的1555A＞G位点突变10例,突变率为5.4%,家系评估显示平均耳聋外显率为26.8%。结论通过对非综合征耳聋患者mtDNA12SrRNA筛查,并运用遗传手段预判药物耳毒性风险,明确部分药物性耳聋患者的病因,可提高患者用药安全性,通过遗传咨询可为下一代防聋治聋提供依据。     

新疆维吾尔族肾虚血瘀型耳聋患者线粒体mtDNA12srRNA基因突变与中医遗传学的相关性探讨

【目的】了解新疆维吾尔族肾虚血瘀型耳聋患者线粒体mtDNA12srRNA基因突变的情况并探讨其与中医遗传学的关系。【方法】采用PCR直接测序法对新疆维吾尔族肾虚血瘀型耳聋患者(耳聋组)105例和健康对照组93例进行线粒体mtDNA12srRNA基因突变的检测。【结果】耳聋组线粒体mtDNA12srRNA基因A1555G突变4例,对照组未发现A1555G突变。【结论】新疆维吾尔族肾虚血瘀型感音神经性耳聋患者mtDNA12srRNA基因突变率为3.81%,提示从中医遗传学角度防治耳聋可能是一种新的途径。     

非综合征型耳聋GJB2基因和mtDNA 12SrRNA A1555G位点的突变分析

目的:分析南京聋校散发性耳聋患者GJB2基因突变率和线粒体DNA(mtDNA)12SrRNA A1555G基因突变率.方法:收集聋校学生135名和健康对照人群162名外周血样本,PCR扩增GJB2和mtDNA 12SrRNA基因,通过限制性内切酶酶切鉴定突变热点,对PCR产物直接测序进行突变确定.结果:对GJB2检测结果显示:散发性耳聋患者样本中发现9种碱基改变(V27I、E114G、I203T V37I、176-191del16、235delC、299-300delAT、T123N和504insGCAA),其中235delC为主要突变方式,携带率为27.41%,其中纯合突变18例,杂合突变19例;162例正常对照中发现了15种碱基改变,其中4种为常见多态.散发聋135例和正常对照162例共计297例样本中未发现有mtDNA 12SrRNA A1555G位点突变存在;结论:GJB2基因突变是引起散发性非综合征耳聋患者听力损失发生的重要原因,不同人种GJB2基因的突变热点存在差异,235delC是GJB2基因在中国人中的主要致病突变位点;GJB2基因在人群中存在较多类型的突变和较多形式的多态性;在散发性耳聋中mtDNA 12SrRNA A1555G位点的突变率明显低于全国平均水平.     

皖北地区常见耳聋基因突变位点检测与分析

目的:检测皖北地区耳聋病人常见的基因突变位点,阐明该地区耳聋的遗传病因学。方法:采集189例耳聋病人临床信息及外周静脉血2 mL,对GJB2、SLC26A4、线粒体（mt）DNA12SrRNA及GJB3 4种常见基因的9个突变位点进行检测,结合临床资料进行相关性分析。结果:189例病人中,其他疾病引起的耳聋27例,突发性耳聋29例,均未检测到突变位点;非综合征性耳聋（NSHL）病人133例,其中检测到基因突变55例（41.35%）。常见的突变基因依次为:GJB2（24.81%）、SLC26A4（12.03%）和mtDNA12SrRNA（6.02%）。常见的突变位点为235delC、IVS7-2A>G和1555A>G,其等位基因的突变率分别为35.45%、20.00%和11.82%。结论:皖北地区NSHL病人中GJB2突变比例最高,为最常见的突变基因,其最常见的突变位点为235delC。     

线粒体DNA A1555G突变大规模筛查及其预防意义探讨

目的探讨在高危人群和特定人群中进行线粒体DNAA1555G突变基因筛查在预防药物性耳聋中的必要性.方法应用自主研制的线粒体DNA A1555G突变检测试剂盒对来自全国不同省市的1836例散发的非综合征性耳聋患者进行线粒体DNAA1555G突变基因筛查,筛出阳性个体,进一步了解阳性病例所有母系家庭成员状况,绘制详细家庭系谱图,对母系成员中未发病者进行防聋宣教.结果1836例中,63例存在线粒体DNAA1555G突变,突变率3.43%;在63个母系遗传家系中,8例失随访,3例不愿提供家系资料;52个有完整随访资料的家系中,存活母系家庭成员737人,耳聋发病201人（含先证者）,未发病536人.结论在高危人群和特定人群中进行线粒体DNAA1555G突变基因筛查发现氨基糖甙类抗生素致聋敏感个体,进而对其未发病母系家庭成员进行防聋宣教是预防药物性耳聋、减少药物性耳聋发生率的有效措施.     

11个携带线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变的中国汉族非综合征型耳聋家系分析评估

目的：通过对11个携带线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变的中国汉族非综合征型耳聋家系进行临床和分子遗传学特征等分析评估,探讨线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变在母系遗传非综合征型耳聋发生发展中的作用。方法：PCR扩增2 650例中国汉族非综合征型耳聋样本的线粒体12S rRNA、线粒体tRNASer(UCN)基因以及GJB2基因。对11个携带线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变的中国汉族非综合征型耳聋家系进行听力学检测、耳聋相关热点基因突变检测以及家系资料等综合分析。结果：在2 650例中国汉族非综合征型耳聋患者中,14例携带线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变,突变率为0.53%。在这11个携带线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变的家系中,同时携带线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变和线粒体12S rRNA A1555G、12S rRNA C1494T或GJB2 c.235delC的家系分别为3、1和2个。临床资料分析表明,这11个中国汉族非综合征型耳聋家系母系成员在听力损失严重程度、发病年龄以及耳聋外显率方面存在较大差异。同时携带线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变和线粒体12S rRNA A1555G、C1494T或GJB2 c.235delC突变家系的耳聋平均外显率分别为29.4%、42.9%和19.0%。前两者的外显率明显高于只携带线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变家系的耳聋平均外显率（为14.0%）。结论：线粒体tRNASer(UCN) G7444A突变可能与线粒体12S rRNA A1555G和C1494T原发突变存在协同作用,共同影响非综合征型耳聋的表型。     

山东省聋哑学校485例耳聋患者易感基因突变检测分析

目的 探讨耳聋易感基因流行病学筛查过程中合理选择样本量的方法和重要性;揭示山东省聋哑学校耳聋患者线粒体DNA12sRNA A1555G突变、GJB2和SLC26A4基因突变特征,为耳聋基因诊断方法和筛查策略提供数据基础.方法 通过统计学方法确定样本量;应用聚合酶链反应对山东省485例聋哑学校耳聋患者的线粒体12SrRNA基因、GJB2和SLC26A4外显子8,10,17,19基因编码区进行扩增;限制性内切酶Alw26I检测线粒体DNA A1555G突变.对酶切提示A1555G突变的病例、全部GJB2和SLC26A4基因扩增产物进行DNA测序.结果 在485例患者中,27例携带A1555G突变(5.57%);167例具有GJB2已知致病突变(34.34%),其中致病突变频率为24.12%;60例携带SLC26A4已知致病突变(12.37%),致病突变率为6.60%;235delC和IVST-2A>G分别是GJB2和SLC26A4的突变热点;山东省聋哑患者中约有36.29%由这3种基因突变导致耳聋.结论 样本量的合理选择在耳聋易感基因流行病学调查中至关重要;山东省有约2.4万聋哑患者是由这3种基因突变所导致耳聋;在新生儿中开展耳聋易感基因的筛查工作刻不容缓.     

11个携带线粒体tRNASer（UCN）G7444A突变的中国汉族非综合征型耳聋家系分析评估

目的：通过对11个携带线粒体tRNASer（UCN）G7444A突变的中国汉族非综合征型耳聋家系进行临床和分子遗传学特征等分析评估,探讨线粒体tRNASer（UCN）G7444A突变在母系遗传非综合征型耳聋发生发展中的作用。方法：PCR扩增2650例中国汉族非综合征型耳聋样本的线粒体12SrRNA、线粒体tRNASer（UCN）基因以及GJB2基因。对11个携带线粒体tRNASer（UCN）G7444A突变的中国汉族非综合征型耳聋家系进行听力学检测、耳聋相关热点基因突变检测以及家系资料等综合分析。结果：在2650例中国汉族非综合征型耳聋患者中,14例携带线粒体tRNASer（UCN）G7444A突变,突变率为0.53%。在这11个携带线粒体tRNASer（UCN）G7444A突变的家系中,同时携带线粒体tRNASer（UCN）G7444A突变和线粒体12SrRNAA1555G、12SrRNAC1494T或GJB2c.235delC的家系分别为3、1和2个。临床资料分析表明,这11个中国汉族非综合征型耳聋家系母系成员在听力损失严重程度、发病年龄以及耳聋外显率方面存在较大差异。同时携带线粒体tRNASer（UCN）G7444A突变和线粒体12SrRNAA1555G、C1494T或GJB2c.235delC突变家系的耳聋平均外显率分别为29.4%、42.9%和19.0%。前两者的外显率明显高于只携带线粒体tRNASer（UCN）G7444A突变家系的耳聋平均外显率（为14.0%）。结论：线粒体tRNASer（UCN）G7444A突变可能与线粒体12SrRNAA1555G和C1494T原发突变存在协同作用,共同影响非综合征型耳聋的表型。     

非综合征型耳聋的不同听力学表型与常见致聋基因的相关性

目的：探讨非综合征型耳聋（NSHL）患者的发病年龄、听力学特征等与核基因GJB2、GJB6 和线粒体DNA（mtDNA）A1555G 、C1494T 突变的相关性。方法：按不同的听力学表型对269 例NSHL患者进行分组及GJB2、GJB6 和mtDNA A1555G、C1494T 基因检测。结果：269例NSHL患者GJB2 和GJB6 的检出率分别为16.73%和0.37%，mtDNA A1555G 和C1494T 检出率分别为23.79%和0.37%；按患者听力损失程度分为轻度、中度、重度、极重度，其构成比分别为9.67%、27.88%、23.42%和39.03%，GJB2 和GJB6 在4组间的总检出率分别为7.69%、8.00%、25.40%和20.95%，组间差异有统计学意义（χ2=10.163，P =0.017）；mtDNA A1555G 和C1494T 总突变率分别为38.46%、34.67%、30.16%和9.52%，组间差异有统计学意义（χ2=20.932，P ＜0.001）；在语前聋组（0～3岁）、学龄前组（3～6岁）、学龄组（6～18岁）及成年组中，GJB2 和GJB6 总突变率分别为26.57、13.51%、5.56%、1.89%， mtDNA A1555G 和C1494T 总突变率分别为14.69%、24.32%、41.67%、37.74%，组间差异有统计学意义（χ2=21.199、18.357，均P ＜0.001）。结论：核基因GJB2 和GJB6 致病突变主要在重度和极重度耳聋中检出，mtDNA基因突变在各个程度的耳聋中均有检出，听力损失越严重，检出率越低；语前聋中核基因GJB2 和GJB6致病突变多于mtDNA A1555G 和C1494T，语后聋中主要为mtDNA A1555G 和C1494T 突变。     

青海省非综合征型耳聋患者线粒体DNA12SrRNAA1555G和GJB2基因突变检测分析

目的 检测和分析青海省非综合征型耳聋患者线粒体DNA12SrRNA A1555G突变和GJB2突变流行病学特征,为耳聋基因诊断方法和筛查策略提供数据基础.方法 应用聚合酶链反应对青海省261例耳聋患者的线粒体12SrRNA基因和GJB2第2外显子基因编码区进行扩增;限制性内切酶Alw261检测线粒体DNA A1555G...     

一个非氨基糖甙类抗生素致聋家系mtDNA突变研究

目的：对１ 个有明确母系遗传的非氨基糖甙类抗生素致聋“线粒体耳聋”家系致病的分子生物学机制进行探索。方法：应用 Ｐ Ｃ Ｒ、 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ 和 Ｄ Ｎ Ａ 序列分析等分子生物学技术对其线粒体 Ｄ Ｎ Ａ突变进行研究。结果：家系中全部患者和１ 个母系亲属存在线粒体 Ｄ Ｎ Ａ１２ Ｓｒ Ｒ Ｎ Ａ 基因１５５５ 位点 Ａ Ｇ 的突变,家系中的正常后代和２０ 个正常对照个体未发现突变。结论：线粒体 Ｄ Ｎ Ａ Ａ１５５５ Ｇ 点突变是导致该家系耳聋的主要因素之一。