多发性骨髓瘤患者外周血T细胞亚群及细胞免疫功能研究

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者外周血T细胞亚群和CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞的表达特点,分析MM与健康者之间的细胞免疫功能差异。方法检测28例初诊的MM患者及22例健康志愿者外周血淋巴细胞中总T细胞(CD3+)、辅助/诱导T细胞(CD3+CD4+)、抑制/细胞毒T细胞(CD3+CD8+)的比例、(CD3+CD4+)/(CD3+CD8+)、CD4+CD25+/CD4+、CD4+CD25+FoxP3+/CD4+CD25+比值,并比较MM患者与健康者之间细胞免疫指标(Th1/Th2比值、AgNOR比值、TGF-β)的差异。结果初诊MM患者与对照组相比,外周血淋巴细胞中总T细胞(CD3+)比例、辅助/诱导T细胞(CD3+CD4+)比例差异无统计学意义(P>0.05);抑制/细胞毒T细胞(CD3+CD8+)比例增加(P<0.05);CD4+CD25+/CD4+、CD4+CD25+FoxP3+/CD4+CD25+比值明显高于健康组(P<0.05);血清中Th1/Th2比值、AgNOR比值均明显低于健康组(P<0.05);血清TGF-β含量较健康组上升(P<0.01)。结论 MM患者外周血T细胞亚群的异常、Treg表达增加及细胞免疫功能低下可能与疾病的发生、发展相关,对判断MM疗效及预后有一定的指导价值。     

卵巢癌患者CD8+ T细胞中调节性T细胞相关分子标志物的表达率及临床意义

目的 :检测卵巢癌患者组织及外周血CD8~+T细胞中调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)相关分子标志物的表达率,探讨其在卵巢癌发生发展中的临床意义。方法:用流式细胞术检测31例卵巢癌患者、31例卵巢良性肿瘤患者和31例健康对照者的外周血,以及14例卵巢癌组织和12例卵巢良性肿瘤组织CD8~+T细胞中Foxp3、CD25、CD28、CTLA-4及GITR的表达率。结果:Foxp3和CTLA-4在卵巢癌组织CD8~+T细胞中的表达率显著高于卵巢良性肿瘤组织(P<0.05);CD28在卵巢癌组织CD8~+T细胞中的表达率显著低于卵巢良性肿瘤组织(P<0.05)。卵巢癌患者外周血CD8+T细胞中Foxp3、CD25、CTLA-4的表达率显著高于卵巢良性肿瘤患者和健康对照者(P<0.05),CD28的表达率显著低于卵巢良性肿瘤患者和健康对照者(P<0.05)。结论:卵巢癌组织及外周血CD8~+Treg所占的比例显著高于卵巢良性肿瘤组及健康对照组,且CD8~+T细胞中Foxp3的表达率可能对了解卵巢癌进展状况有一定帮助。     

CTLA-4与CD28在FⅧ抑制物阳性的血友病A患儿中的表达分析

目的 探讨细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4）与CD28在FⅧ抑制物阳性的血友病A患儿中表达百分比。方法 收集自2016年12月1日至2018年1月1日就诊于首都医科大学附属北京儿童医院血友病专业门诊的血友病A患儿,共计入组患儿58例,其中FⅧ抑制物阳性者28例,阴性者30例。应用改良Nijmegen法检测FⅧ抑制物滴度,流式细胞术检测外周血T细胞上的CD3、CD4、CTLA-4和CD28的表达,分析比较两组CTLA-4+Th细胞、CD28+Th细胞的百分比和CTLA-4/CD28轴的平衡情况。结果 FⅧ抑制物阳性组患儿外周血CTLA-4+Th细胞百分比为2.95%（1.41%,5.50%）,阴性组患儿表达百分比为4.95%（2.20%,7.80%）,阳性组显著低于阴性组（P=0.038）;阳性组患儿外周血CTLA-4/CD28细胞比值为0.03（0.01,0.06）,阴性组患儿表达比值为0.05（0.02,0.08）,阳性组显著低于阴性组（P=0.042）;而CD28+Th细胞表达差异无统计学意义（P=0.065）。对低滴度组和高滴度组进行比较,上述检测细胞在两组间差异无统计学意义。结论 CTLA-4/CD28细胞百分比比值在FⅧ抑制物阳性与阴性的血友病A患儿存在差异,抑制物阳性组显著低于阴性组,并且这种差异主要由CTLA-4+Th细胞表达百分比差异引起。CTLA-4的低表达可能是抑制物产生的原因之一。     

子痫前期患者外周血淋巴细胞CD28/CTLA-4的表达水平及意义

目的:探讨子痫前期外周血淋巴细胞CD28/CTLA-4的表达水平与子痫前期发病的相关性。方法:选择住院确诊的子痫前期孕妇35例为实验组,以30例正常妊娠晚期孕妇为对照组,应用流式细胞术检测两组外周血CD28和CTLA-4在CD3+T细胞上的表达水平并比较。结果:实验组孕妇外周血CD28的表达水平较对照组差异无统计学意义(P>0.05);CTLA-4表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组中外周血CD28/CTLA-4值较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:子痫前期患者外周血CD28/CTLA-4表达异常,从而使T细胞亚群分类异常,免疫调节功能紊乱,免疫耐受失衡,导致子痫前期的发生。     

29例免疫性血小板减少性紫癜中调节性T细胞/Th17细胞的改变

目的探讨调节性T细胞/Th17细胞在免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者中的表达及意义。方法应用流式细胞术检测29例ITP患者和28例正常人外周血中的CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25highT细胞(Treg)、CD4+IL-17A+T细胞(Th17)占总CD4+T细胞的比例,并评价其与血小板计数的相关性;酶联免疫吸附(ELISA)法测定血浆中IL-10I、L-17水平;RT-PCR法检测外周血Foxp3 mRNA、RORc mRNA的表达水平。结果与正常对照组比较,ITP患者组外周血CD4+CD25+T/CD4+T细胞比例升高(P<0.05)、Treg/CD4+T细胞比例明显下降(P<0.05),Th17/CD4+T细胞比例组间比较差异无统计学意义(P>0.05),Treg/Th17细胞比值明显降低(P<0.05)。ITP患者血浆中IL-10水平明显低于正常对照组(P<0.05),而IL-17水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ITP患者组较正常对照组外周血中转录因子Foxp3 mRNA水平明显降低(P<0.05),而RORc mRNA表达则较对照组明显升高(P<0.05)。Treg/CD4+T细胞比例及Treg/Th17细胞比值在效佳组显著高于效差组(P<0.05),Th17/CD4+T细胞比例效佳组显著低于效差组(P<0.05)。治疗前血小板计数与Treg/CD4+T细胞比例、Treg/Th17细胞比值成正相关(P<0.05),而与Th17/CD4+T细胞比例则无显著相关性(P>0.05)。结论 ITP患者存在Treg/Th17细胞平衡紊乱,T细胞亚群的功能失调可能与ITP免疫发病机制有关,并与糖皮质激素治疗效果有关。     

卵巢癌患者外周血Th1/Th2及Treg/Th17细胞平衡关系

目的 探讨卵巢癌患者外周血中CD4+T细胞亚群:辅助T细胞(Th,包括Th1、Th2、Th17)及调节性T淋巴细胞(Treg)表达、平衡关系的变化,以及在卵巢癌发病机制中的作用.方法 流式细胞术检测30例卵巢癌疾病组及20例健康对照组外周血中Thl、Th2、Thl7、Treg表达占CD4+T细胞的百分率,并计算Th1/Th2、Th17/Treg的比值.结果 卵巢癌患者外周血中Th2、Th17及Treg亚群占CD4+T细胞的百分率明显高于健康对照组(P<0.05),而Th1百分率低于健康对照组(P<0.05),各亚群变化与临床分期相关,但与组织类型及细胞分化无关(P>0.05).卵巢癌组Th1/Th2比值降低,与对照组比较有统计学意义(P<0.05),卵巢癌患者存在Th2方向极化;卵巢癌组Treg/Th17比值升高,与对照组比较有统计学意义(P<0.05).结论 卵巢癌患者外周血中存在CD4+细胞亚群表达异常,存在Th1/Th2、Treg/Th17比值失衡,为卵巢癌临床免疫治疗提供理论支持.     

胶质瘤患者T淋巴细胞表面CTLA-4的表达及其临床意义

目的: 探讨胶质瘤患者外周血中CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达与胶质瘤WHO分级及手术的关系,阐明CTLA-4的临床意义。方法: 选择本院胶质瘤患者60例作为胶质瘤组,健康志愿者46名作为健康对照组。流式细胞术检测胶质瘤组和健康对照组研究对象外周血中CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4的表达,分析其与胶质瘤WHO分级及手术的关系。结果: 胶质瘤组患者外周血CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4的表达水平明显高于对照组(P<0.01);Ⅳ级胶质瘤患者CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达水平最高,Ⅳ级胶质瘤患者CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达水平高于Ⅲ级胶质瘤(P<0.01),Ⅲ级胶质瘤患者CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达水平高于Ⅱ级胶质瘤(P<0.01);术后胶质瘤患者CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达水平低于术前(P<0.01)。结论: 胶质瘤患者外周血CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4的表达水平随着胶质瘤恶性程度的升高而升高,并在胶质瘤发生发展过程中发挥促进作用。     

强直性脊柱炎患者外周血T细胞亚群的分析

目的:探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血中T细胞亚群的变化及其意义。方法:采用三色流式细胞分析法检测32例AS患者及30例健康对照者的外周血T细胞亚群水平。结果:(1)AS患者外周血Th1细胞(CD3+CD4+IFN-γ+)百分率及Th1/Th2值高于对照组(P<0.05),Th细胞(CD3+CD4+)、Th2细胞(CD3+CD4+IL-4)的百分率与对照组差异无统计学意义(P>0.05);(2)与对照组比较,患者Tc细胞(CD3+CD8+)百分率显著升高(P<0.05),Tc1细胞(CD3+CD8+IFN-γ+)百分率显著降低(P<0.05),Tc2细胞(CD3+CD8+IL-4)百分率无显著变化(P>0.05)。结论:AS患者外周血Th1/Th2、Tc1/Tc2失衡,AS患者存在细胞免疫功能紊乱。     

2型糖尿病患者循环CD4+T细胞亚群与肾脏损伤的相关性研究

目的 探讨2型糖尿病（type 2 diabetes milletus,T2DM）和糖尿病肾脏病（diabetic kidney disease,DKD）患者外周血CD4+T细胞亚群比例的变化及其意义。 方法 纳入113例新诊断T2DM患者,根据是否合并DKD,分为T2DM组63例和DKD组50例,另选择30例健康志愿者作为对照组,比较三组组受试者外周血Th1、Th2、Tregs等CD4+T细胞亚群的差异。Spearman相关分析估算肾小球滤过率（estimated glomerular filtration rate,eGFR）与CD4+T细胞亚群之间的相关性,多元线性回归分析探讨eGFR变化的影响因素。 结果 三组间外周血Th1比例、Th1/Th2比值和Tregs比例差异有统计学意义,T2DM组和DKD组患者外周血Th1比例和Th1/Th2比值高于对照组,Tregs比例低于对照着。而且,DKD组外周血Th1比例和Th1/Th2比值高于T2DM组,Tregs比例低于T2DM组。T2DM患者外周血Th1/Th2比值与eGFR呈负相关关系,外周血Tregs比例与eGFR呈正相关关系。通过多元线性回归分析显示,SBP、Tregs、Th1/Th2比值和总胆固醇是影响T2DM患者eGFR的危险因素。 结论 DKD患者体内存在CD4+T细胞稳态失衡,且与eGFR水平下降密切相关。     

健脾、补肾与健脾补肾三法对慢性乙型肝炎患者外周血T细胞功能的影响

目的比较健脾法、补肾法和健脾补肾法对慢性乙型肝炎患者外周血T细胞功能的影响。方法收集24例慢性乙型肝炎患者和10例健康人的抗凝外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),进一步分离提取培养T细胞,采用大鼠健脾、补肾和健脾补肾药物血浆进行干预。检测T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD28+分子的表达。结果3组药物血浆干预后CD4+分子表达率升高(P<0.05),CD8+分子表达率降低(P<0.05),补肾组药物血浆干预后CD3+表达率升高(P<0.05),补肾组和健脾补肾组药物血浆干预后CD28+分子表达率升高(P<0.05)。结论健脾法、补肾法和健脾补肾法均能调节慢性乙型肝炎患者T细胞免疫功能,补肾法对慢乙肝患者T细胞功能的影响更为显著。     

系统性红斑狼疮患者外周血T细胞CTLA-4表达及其临床意义的研究#

目的：研究系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus, SLE）T细胞中CTLA-4的表达及临床意义。 方法：分离正常人和SLE患者的外周血单个核细胞（PBMCs）,以抗-CD3、抗-CD28刺激培养48h,刺激培养前后收取细胞,以流式细胞术（FCM）检测CD4+和CD8+T细胞中CTLA-4+细胞比例,并分析其与SLE疾病活动性指数（SLE Disease Activity Index,SLEDAI）和肾损害的关系。再以ELISA法检测培养上清中游离的CTLA-4水平。 结果：SLE患者刺激前的CD4+和CD8+T细胞中、主要是CD25+T细胞中CTLA-4+细胞的比例较正常人显著增高,且与SLEDAI呈正相关;而其CD8+CD28- T细胞中CTLA-4+细胞比例也显著高于正常人,但与SLEDAI之间无显著相关性;经抗-CD3、抗-CD28抗体刺激后,其CD4+CD25+T细胞、CD8+CD25+T细胞或CD8+CD28- T细胞中CTLA-4+细胞的比例却显著低于正常人,但与SLEDAI之间无显著相关性,仅在活动性SLE患者中有肾损组的CD8+CD28- T细胞中CTLA-4+细胞的比例显著低于非肾损组;而且经刺激培养后SLE患者PBMC上清中游离的CTLA-4水平也显著低于正常人。结论：SLE患者新鲜分离的T细胞（CD4+及CD8+）中CTLA-4表达异常增高,反映T细胞异常活化和疾病活动;另一方面,SLE患者T细胞又存在CTLA-4诱导性表达障碍,可能与SLE T细胞体外再活化的能力减弱有关。     

糖皮质激素对重症肌无力患者外周血调节性T细胞中Foxp3及其胞内CTLA-4表达的影响

目的 研究糖皮质激素治疗重症肌无力( MG)患者外周血CD4 +CD25 +调节性 T 细胞( Treg )中 Foxp3 和胞内CTLA-4的表达水平的变化. 方法 收集MG患者34例,分为非治疗组8例和糖皮质激素治疗组26 例. 另将20 例健康者设为对照组. 采用流式细胞仪检测分析患者和健康者外周血CD4 +CD25 +Treg细胞Foxp3和胞内CTLA-4的变化.结果 ① MG非治疗组患者外周血 CD4 +CD25 +Treg细胞Foxp3和胞内CTLA-4水平较对照组显著下降( P<0. 05 );②糖皮质激素治疗能显著提升CD4 +CD25 +Treg细胞Foxp3和胞内CTLA-4表达比例( P <0. 05 ) ,但仍低于对照组( P <0. 05);③ CD4 +CD25 +Treg细胞Foxp3和胞内CTLA-4表达呈正相关性(r=0. 870,P<0. 001). 结论 MG患者外周血CD4 +CD25 +Treg Foxp3和胞内CTLA-4呈低表达,糖皮质激素治疗能显著提升Foxp3和胞内CTLA-4表达水平,但尚未达正常者免疫状态.     

外周血调节性T细胞在儿童与成人重症肌无力发病机制中的作用

目的 初步探讨外周血CD4+CD25+调节性T细胞在重症肌无力(MG)发病中的作用.方法 用流式细胞术分别检测儿童和成人MG外周血CD4+CD25+调节性T细胞的数最及其表达Foxp3和CTLA-4的情况.结果 儿童MG外周血CD4+CD25+调节性T细胞的数量明显高于正常儿童对照组,但其表达Foxp3水平反而大大低于对照组,成人MG比较差异无统计学意义.所有MG患者外周血CD4+CIY25+调节性T细胞表达的表面分子CTLA-4与正常对照比较,差异无统计学意义.结论 儿童MG患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞存在着数量改变和功能缺失.提示儿童MG发病可能与外周血调节性T细胞免疫耐受功能受损有关.     

调节性T细胞治疗实验性小鼠多发性肌炎及机制研究

目的探讨CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞对于实验性自身免疫性肌炎（EAM）小鼠的治疗价值及机制。方法免疫磁珠分
选技术从BALC/c小鼠脾脏中分选出足量CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞以备回输,观察干预组及未干预组EAM小鼠肌肉组织
病理学变化,流式细胞仪检测两组小鼠脾脏CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞表面PD-1及CTLA-4的表达变化,双抗体夹心ELISA
法检测外周血IL-10、TGF-β的变化。结果干预组小鼠较未干预组肌肉病理炎性细胞浸润明显减轻,其外周血IL-10、TGF-β含
量较未干预组明显升高（P<0.05）,脾脏CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞表面PD-1及CTLA-4表达明显升高（P<0.05）。结论CD4+
CD25+ Foxp3+ Treg细胞回输对于EAM小鼠的治疗效果是通过增加外周血IL-10及TGF-β水平和增高脾脏CD4+ CD25+ Foxp3+
Treg细胞表面PD-1及CTLA-4的表达发挥作用。
     

共刺激分子CD28/CTLA-4:B7在强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞中的表达

目的 探讨CD28、CTLA-4（CD152）、B7—1（CD80）及B7—2（CD86）共刺激分子在强直性脊柱炎（AS）患者的外周血淋巴细胞上的表达异常与免疫功能紊乱的关系。方法 采用流式细胞仪检测69例AS患者和50例健康对照者CD28和CTLA-4在外周血CD3^＋、CD4^＋T和CD3^＋、CD8^＋T细胞上的表达及CD80和CD86在CD19^＋B细胞上的表达。用ELISA法测定血清中免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的水平。结果 AS患者CD3^＋、CD4^＋T和CD3^＋、CD8^＋T细胞上的CD28和CTLA-4，CD19^＋B细胞上CD80和CD86的表达较正常对照组显著增高（P〈0．05）；AS患者血清中2种免疫球蛋白IgG、IgA的水平较正常对照组显著增高（P〈0．01）。结论 AS患者T细胞上表达过量的CD28，与B细胞的B7结合，激活T、B细胞，产生大量免疫球蛋白，同时刺激激活的T细胞表达CTLA-4，使T细胞不能充分表现效应功能。     

多发性硬化患者外周血CD8+记忆性T细胞亚群效应细胞因子的表达及其与病情严重程度的相关性

目的 探讨多发性硬化患者外周血CD8+记忆性T细胞亚群效应细胞因子穿孔素和颗粒酶-B的表达及其与病情严重程度的相关性.方法 采用扩展的残疾状况量表(EDSS)对19例多发性硬化患者的病情进行评估,采用流式细胞仪和直接免疫荧光法检测其CD8+记忆性T细胞亚群的数量,同时选择20例健康体检者作为对照.结果 多发性硬化患者组CD8+效应记忆性T细胞和终末效应记忆性T细胞的数量均明显少于健康对照组,差异有显著性(P＜0.05).CD8+效应记忆性T细胞的数量与病情的严重程度呈负相关.结论 CD8+效应记忆性T细胞和终末效应记忆性T细胞的数量可作为一项评估多发性硬化病情严重程度的指标.     

共信号分子CD28、ICOS在慢性乙型肝炎病人外周血T淋巴细胞表面的表达及意义

目的:观察慢性乙型病毒性肝炎病人外周血T淋巴细胞表面共信号分子CD28、ICOS的表达水平,探讨CD28、ICOS在乙型肝炎病毒慢性感染中的意义.方法:选取慢性乙型病毒性肝炎病人56例作为观察组,纳入同期20名健康体检者作为对照组.流式细胞术检测受试者外周血T淋巴细胞表面CD28、ICOS的表达水平.结果:2组外周血C...