47例原发性乳腺癌多药耐药MDR1基因表达及其临床意义

[目的]探讨原发性乳腺癌多药耐药MDR1基因的表达及其临床意义.[方法]采用荧光定量RT-PCR法检测47例乳腺癌组织及15例正常对照(包括5例乳腺纤维腺瘤、10例癌旁组织)MDR1基因的表达.[结果]乳腺癌MDR1基因表达阳性率为46.8%,与病人年龄、肿瘤大小、淋巴结转移与否、ER、PR状况、绝经与否无关.对照组中无MDR1基因表达.[结论]乳腺癌MDR1基因的表达可作为乳腺癌化疗耐药的评价指标,能否作为判断预后的独立指标尚需进一步研究.     

Cox-2在乳腺癌多药耐药中的作用及其与P-gp、MRP1的关系

目的通过检测环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,Cox-2）抑制剂尼美舒利（nimesulide）对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的对化疗药物敏感性及其对P-gp、MRP1表达的影响,探讨Cox-2在乳腺癌细胞肿瘤多药耐药（multidrug resistance,MDR）中的作用及其作用机制。方法 （1）MTT法检测丝裂霉素（MMC）及其与不同浓度Cox-2抑制剂nimesulide联合作用对MDA-MB-231的抑制作用（IC50）;（2）流式细胞术检测不同浓度nimesulide作用后,细胞凋亡率的变化及Cox-2、P-gp、MRP1的表达情况。结果 （1）以25、50μmol/L的nimesulide与MMC联合作用,MDA-MB-231细胞的IC50值（5.89±0.66、3.31±0.30）小于MMC单独作用的IC50值（8.59±1.16）且呈剂量依赖性,差异有统计学意义;（2）nimesulide可诱导细胞凋亡,且随着浓度的增加,凋亡率也随之增加（0.13±0.15至29.2±0.95）,差异有统计学意义;（3）25、50μmol/L nimesulide作用于MDA-MB-231细胞后,Cox-2、P-gp、MRP1的表达值均下降。结论 nimesulide能增加乳腺癌细胞株MDA-MB-231对化疗的敏感性,诱导细胞凋亡;Cox-2参与肿瘤多药耐药（MDR）,且可能通过影响P-gp、MRP1的表达来实现。     

乳腺癌组织COX-2表达及其与肿瘤多药耐药关系的研究

目的:通过观测环氧合酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利(Nimesulide)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的化疗药物敏感性及其对P-糖蛋白(P-gp)表达的影响,探讨COX-2对乳腺癌细胞多药耐药(MDR)的调节作用。方法:以乳腺癌细胞株MDA-MB-231为研究对象,用MTT法研究COX-2抑制剂Nimesulide单独及联合不同浓度的丝裂霉素(MMC)对MDA-MB-231的抑制作用(IC50),流式细胞技术检测细胞凋亡率及COX-2和P-gp的表达变化。结果:MMC单独作用于乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MMC对细胞的IC50为8.59±1.16,25μmol/L的Nimesulide与MMC联合作用,IC50减少5.89±0.66,差异有统计学意义,P=0.002;50μmol/L的Nimesulide与MMC联合作用,IC50进一步减少3.31±0.30,与25μmol/L比较,差异有统计学意义,P=0.003。说明Nimesulide能增加MMC对MDA-MB-231的化疗敏感性,这种作用与Nime-sulide呈剂量依赖性。流式细胞仪分析发现,Nimesulide可诱导细胞凋亡,且随着浓度的增加,凋亡率也随之增加(由0.13±0.15增加到29.2±0.95),差异有统计学意义,F=44.84,P=0.000。Nimesulide作用于MDA-MB-231细胞后,COX-2和P-gp的表达同时下降,COX-2的表达由70.37±1.98降低为9.60±2.11,P-gp的表达由14.13±2.63降低为0.43±0.15,差异均有统计学意义,P值均<0.05。结论:Nimesulide能明显增加MMC对乳腺癌细胞株MDA-MB-231的化疗敏感性,COX-2与肿瘤MDR密切相关,且可能通过P-gp来实现。     

乳腺癌耐药蛋白在乳腺癌组织中的表达及与预后关系

目的研究乳腺癌耐药蛋白（Breast cancer resistance protein,BCRP）在乳腺癌组织中的表达,评估其在乳腺癌预后中的作用。方法采用免疫组织化学方法（Immunohistochemistry,IHC）检测47例手术切除的乳腺癌组织中BCRP的表达,并分析其与临床、病理特征的关系及对预后的影响。结果（1）BCRP在乳腺癌组织中的阳性表达率为55．3％（26／47例）,其中高表达者13例（27．7％）;（2）激素受体阳性者BCRP表达水平明显高于激素受体阴性者（P〈0．05）,BCRP表达与月经状况、肿瘤大小、腋淋巴结转移和组织分级均无关（P〉0．05）;（3）Kaplan—Meier生存分析结果表明BCRP和无病生存期相关（P〈0．05）,但和总生存期无关（P〉0．05）;（4）Cox单因素分析显示肿瘤大小和BCRP表达与无病生存期明显相关（P〈0．05）,而肿瘤大小和总生存期也明显相关（P〈0．05）;在多因素分析中BCRP表达仅和无病生存期明显相关,此外腋淋巴结转移与无病生存期和总生存期均明显相关（P〈0．05）。结论BCRP在乳腺癌组织中具有较高的表达水平,但与乳腺癌患者预后无关。     

多药耐药性相关蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与预后关系

目的:研究多药耐药相关蛋白（Multidrug　resistance-associated　protein　1,MRP1）在乳腺癌组织中的表达,评估其在乳腺癌预后中的作用。方法:采用免疫组织化学方法（IHC）检测47例手术切除的乳腺癌组织中MRP1的表达,并分析其与临床、病理特征的关系及对预后的影响。结果:（1）MRP1在乳腺癌组织中的阳性表达率为85.1％（40/47例）,其中高表达者占53.2％（25/47例）;（2）腋淋巴结阳性者MRP1表达水平明显高于腋淋巴结阴性者（P<0.05）,MRP1表达与月经状况、肿瘤大小、组织分级和激素受体状况均无关（P>0.05）;（3）Kaplan-Meier生存分析结果表明MRP1表达与无病生存期明显相关（P<0.05）,但和总生存期无关（P>0.05）;（4）Cox单因素分析显示肿瘤大小和MRP1表达与无病生存期明显相关（P<0.05）,但仅有肿瘤大小和总生存期明显相关（P<0.05）;而多因素分析却显示只有腋淋巴结转移和无病生存期（P<0.01）和总生存期（P<0.05）明显相关。结论:MRP1在乳腺癌组织中具有较高的表达水平,与乳腺癌患者的无病生存期有关,而与总生存期无关。     

乳腺癌患者血浆多药耐药基因相关蛋白P-gp活性分析及其临床应用

目的探讨乳腺癌患者治疗过程中血浆样本中多药耐药基因（mdr-1）相关的磷-糖蛋白（P—gp）的变化,为临床治疗提供参考依据。方法采用生化反应方法,将血浆样本与化学试剂混匀,根据反应前后透光率的不同,计算每个样本P—gp活性的改变以及对长春新碱的相对活性,相对活性大于30％即判定为P—gp阳性。结果治疗前P—gp阳性率为16．2％,化疗3个周期后P—gp阳性率为43．2％,二者差异有统计学意义（P〈0．05）。治疗前和化疗后P—gp阳性有淋巴结转移的分别为5／6和9／16,无淋巴结转移的分别为1／6和7／16。结论乳腺癌患者血浆P—gp活性测定,对乳腺癌化疗用药选择及其预后判断具有参考价值。     

乳腺癌患者肿瘤组织及外周血多药耐药基因表达的临床意义

目的:检测多药耐药基因在乳腺癌患者肿瘤组织及外周血中的表达,探讨其临床意义。方法:荧光定量RT-PCR法检测40例原发性乳腺癌患者肿瘤组织及外周血、13例辅助化疗后乳腺癌患者外周血及10例乳腺良性疾病组织与外周血中mdr1的表达情况。结果:40例原发性乳腺癌患者肿瘤组织mdr1阳性表达率为67.5%(27/40),与对照组组织(无阳性表达)相比差异有统计学意义,χ2=14.380,P=0.001;乳腺癌患者外周血mdr1阳性表达率为22.5%(9/40),高于对照组(无阳性表达),χ2=4.486,P=0.034;化疗后乳腺癌患者外周血中mdr1的表达率为53.8%(7/13),高于化疗前外周血mdr1的表达,二者差异有统计学意义,χ2=12.345,P=0.001。结论:乳腺癌患者存在先天性和获得性耐药性,检测肿瘤组织和外周血mdr1表达对制定个体化化疗方案有指导意义。     

肿瘤标志物Bcl-2和c-erbB-2在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨肿瘤标志物Bcl-2和c-erb B-2在乳腺癌中的表达和两者的相关性.方法 应用免疫组化方法对70例乳腺恶性肿瘤标本和24例纤维腺瘤标本进行Bcl-2和c-erbB-2癌基因蛋白检测. 结果 Bcl-2和c-erbB-2在乳腺癌中的阳性率分别为68.1%和67.1%;在纤维腺瘤中的阳性率分别为87.5%和0%.Bcl-2和c-erbB-2的阳性表达与有无淋巴结转移呈显著相关.乳腺癌中Bcl-2和c-erbB-2的阳性表达呈负相关(r=-0.28).结论 乳腺癌中Bcl-2的高表达提示患者的预后较好,c-erbB-2 的高表达提示患者预后较差.     

乳腺癌患者血浆多药耐药基因相关蛋白P-gp活性分析及其临床应用

目的 探讨乳腺癌患者治疗过程中血浆样本中多药耐药基因(mdr-1)相关的磷-精蛋白(P-gp)的变化,为临床治疗提供参考依据.方法 采用生化反应方法.将血浆样本与化学试剂混匀,根据反应前后透光率的不同,计算每个样本P-gp活性的改变以及对长春新碱的相对活性,相对活性大于30%即判定为P-gp阳性.结果 治疗前P-gp阳性率为16.2%.化疗3个周期后P-gp阳性率为43.2%,二者差异有统计学意义(P<0.05).治疗前和化疗后P-gp阳性有淋巴结转移的分别为5/6和9/16,无淋巴结转移的分别为1/6和7/16.结论 乳腺癌患者血浆P-gp活性测定,对乳腺癌化疗用药选择及其预后判断具有参考价值.     

乳腺癌患者血浆多药耐药基因相关蛋白P-gp活性分析及其临床应用

目的 探讨乳腺癌患者治疗过程中血浆样本中多药耐药基因(mdr-1)相关的磷-精蛋白(P-gp)的变化,为临床治疗提供参考依据.方法 采用生化反应方法.将血浆样本与化学试剂混匀,根据反应前后透光率的不同,计算每个样本P-gp活性的改变以及对长春新碱的相对活性,相对活性大于30%即判定为P-gp阳性.结果 治疗前P-gp阳性率为16.2%.化疗3个周期后P-gp阳性率为43.2%,二者差异有统计学意义(P<0.05).治疗前和化疗后P-gp阳性有淋巴结转移的分别为5/6和9/16,无淋巴结转移的分别为1/6和7/16.结论 乳腺癌患者血浆P-gp活性测定,对乳腺癌化疗用药选择及其预后判断具有参考价值.     

肺癌的化疗与多药耐药的研究

目的：检测各种类型肺癌化疗前及化疗后复发病例P－gp蛋白的表达情况,探讨其与肺癌多药耐药及患者预后的关系。方法：采用免疫组化染色方法对66例化疗后复发病例及131例未经化疗的肺癌病例进行耐药基因MDR1表达蛋白P－gp检测,结果：化疗后复发病例P－gp阳性表达率明显高于未经化疗的病例（P＜0．05）,其中,癌,小细胞癌化疗后P－gp阳性表达率均明显高于化疗前（P＜0．05）,而肺腺癌则无明显差异（P＞0．05）,未经化疗组不同病理类型的肺癌P-g[蛋白阳性表达有显著性差异,从高到低依次为腺癌,鳞癌和小细胞癌（P＜0．05）,化疗后复发组各病理类型肺癌中P－gp蛋白阳性表达率无显著性差异（P＞0．1）,P－gp表达阳性的患者3年生存率明显低于阴性者（P＞0．05）。结论;化疗可能诱导各种病理类型肺癌P-gp蛋白表达增加,肺鳞癌和小细胞肺癌可能为获得性MDR1耐药,肺腺癌是原发性MDR1耐药,肺癌患者P－gp表达程度可作为指导化疗用药及预测预后的指标。     

卵巢癌多药耐药基因的表达及其逆转

目的　探讨特异性靶向ＭＤＲ１基因的ｓｉＲＮＡ逆转耐药型卵巢癌细胞株多药耐药的可行性。方法　设计靶向于ＭＤＲ１基因的３条ｓｉＲＮＡ,用脂质体转染试剂分别转染Ｐ ｇｐ阳性表达的卵巢癌ＳＫＯＶ３／ＡＲ细胞,ＲＴ ＰＣＲ检测转染后４８小时ＭＤＲ１ｍＲＮＡ的变化,流式细胞技术检测转染后７２小时Ｐ ｇｐ的表达情况;ＭＴＴ法检测转染前及转染后４８小时ＳＫＯＶ３／ＡＲ细胞对阿霉素、紫杉醇的敏感性。结果　与空白对照组相比,含靶向ＭＤＲ１基因的ｓｉＲＮＡ-１组、ｓｉＲＮＡ-２组、ｓｉＲＮＡ-３组的ＭＤＲ１ｍＲＮＡ表达水平均有显著下降（Ｐ＜０.０５）,对ＭＤＲ１ｍＲＮＡ的抑制率分别为４３.３％、４1.３％和５８.５％,其中ｓｉＲＮＡ-３组对靶基因的抑制作用较强,而空白对照组、脂质体组和阴性对照ｓｉＲＮＡ组靶基因表达水平则无明显变化。将ｓｉＲＮＡ／ＭＤＲ１-３转染细胞７２小时后可观察到Ｐ-ｇｐ阳性表达率显著降低（Ｐ＜０.０５）,其抑制率为３７.９５％,而空白对照组、脂质体组及阴性对照ｓｉＲＮＡ组Ｐ-ｇｐ表达无明显降低（Ｐ＞０.０５）。ｓｉＲＮＡ ３干扰ＳＫＯＶ３／ＡＲ细胞后,阿霉素和紫杉醇的ＩＣ５０分别下降为干扰前的１／３.５６和１／３。结论　ＲＮＡｉ在体外实验能有效逆转卵巢癌细胞的耐药,为其在实体瘤耐药逆转的运用提供了实验依据,值得进一步研究。     

乳腺癌耐药蛋白--肿瘤多药耐药研究新进展

乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein,BCRP)是近年发现的与肿瘤多药耐药有关的新的药物排出泵。BCRP是含655个氨基酸残基的跨膜蛋白,属于ABC转运蛋白超家族的成员,BCRP仅有6个跨膜区和1个ATP的结合位点,故被称为不完整转运分子,推测BCRP通过组成同二聚体或异二聚体构成跨膜通道而发挥功能,过表达BCRP的肿瘤细胞株对米托蒽醌,阿霉素,柔红霉素,鬼臼乙叉甙,拓扑替康,CPT－11等产生交叉耐药,而对长春新碱,紫杉醇无交叉耐药,GF120918和Fumitremorgin C能有效逆转过表达BCRP的肿瘤细胞株的耐药性,并与细胞内药物蓄积量呈正相关,人体正常组织中胎盘合体滋养层细胞,小肠和结肠粘膜上皮细胞,胆小管膜,乳腺小叶及血管内皮细胞和干细胞均能检测到BCRP的表达,推测BCRP具有抑制消化道吸收某些外源性物质（包括抗癌药和有毒物质）,参与形成胎盘屏障等生理功能,BCRP与急性髓性白血病,非小细胞肺癌,乳腺癌等多种肿瘤的临床化疗敏感性有关。     

cerbB-2、Bcl-2、Ki-67在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨cerbB-2、Bcl-2、Ki-67在乳腺癌中的表达及意义以及与临床指标之间的关系。方法:采用免疫组化SP法对31例乳腺癌及其癌旁组织测定cerbB-2、Bcl-2、Ki-67的蛋白表达。并且对一些临床病理因素进行相关性分析。结果:cerbB-2、Bcl-2、Ki-67的表达在癌组织和癌旁组织有显著差异性(P<0.05),cerbB-2、Bcl-2、Ki-67的表达和患者年龄无相关性(P>0.05),cerbB-2、Ki-67的表达和组织学分级呈正相关(P<0.05),Bcl-2和组织学分级呈负相关(P<0.05)。并且Bcl-2和Ki-67的表达与腋窝淋巴结转移有相关性(P<0.05)。结论:cerbB-2、Bcl-2、Ki-67的表达与乳腺癌的发生发展有关,对判断乳腺癌的组织学分级以及对预后的评估起到一定的作用。     

Prognostic value of Bcl‐2 in breast cancer patients treated with neoadjuvant anthracycline based chemotherapy

We have analyzed the predictive/prognostic value of Bcl‐2 protein in breast cancer patients treated with neoadjuvant chemotherapy. One hundred and ten patients were submitted to two different chemotherapeutic regimens: a) 5‐fluorouracil, adriamycin or epirubicin, and cyclophosphamide (FAC/FEC) during 2–6 cycles before surgery and 3 or 4 additional cycles of FAC/FEC after surgery (n=40) and b) doxorubicin (D) 75mg/m2 or epirubicin (E) 120mg/m2 during 4 cycles before surgery, and 6 cycles of cyclophosphamide, methotrexate, and 5‐fluorouracil (CMF) after surgery (n=70). Bcl‐2 expression, evaluated by immunohistochemistry, did not change significantly after chemotherapy and was not related to clinical/pathological response. In FAC/FEC group, Bcl‐2 positive expression after chemotherapy correlated with better disease free survival (DFS) and overall survival (OS) (P=0.008 and P=0.001). In D/E group, Bcl‐2 also correlated with better DFS and OS (P=0.03 and P=0.054) in the post‐chemotherapy biopsies. An unusual nuclear localization of Bax was observed in some biopsies, but this localization did not correlate with the tumor response or outcome of the patients. We found that a high Bcl‐2 expression had no predictive value but had prognostic value in breast cancer patients treated with neoadjuvant anthracycline based chemotherapy.     

Diagnostics of multidrug resistance in cancer

Multidrug resistance (MDR), caused by the overexpression of two membrane proteins, MDR1-Pgp and/or MRP, is a major obstacle in the chemotherapy of cancer. The proper laboratory diagnosis of clinical multidrug resistance is still an unresolved question, and this uncertainty, in a vicious cycle, does not allow the correct evaluation of the clinical relevance of the MDR phenomenon. Moreover, inefficient MDR diagnostics hinders the de velopment of effective resistance-modulation strategies. In this review, after describing the basic features of the MDR drug pump proteins, the currently employed diagnostic methods are discussed. We suggest that a quantitative, functional method developed in our laboratory may provide a major help in the laboratory assessment of cancer MDR.     

乳腺癌C-erbB-2、P16基因蛋白表达与多药耐药的相关分析

目的 探讨乳腺癌中c—erhB-2、P16与GST-Pi、TOPOⅡ、PgP耐药基因表达的相关性。方法 采用即用型微波加热免疫组化法，对57例乳腺癌C—erbB-2、P16、GST-Pi、TOPOⅡ、PgP进行检测分析。结果 57例乳腺癌中c—erbB-2、P16、GST—Pi、TOPOⅡ、PgP阳性表达率分别为61．40％、36．84％、52．63％、24．56％、15．79％。浸润性导管癌对3种耐药基因有不同程度的阳性表达，较其它组织学类型的乳腺癌的耐药基因更为广基。乳腺癌C—erbB-2、P16、GST-Pi、TOPOⅡ、PgP阳性表达与年龄、临床分期、腋下淋巴结转移无明显关系。结论 乳腺癌产生多药耐药性可能与c—erbB-2、P16异常表达相关。C—erbB-2、P16异常表达可能是乳腺癌产生多药耐药的因素之。部分乳腺癌患者体内存在多项耐药基因或癌细胞内原发存在对GST-Pi、TOPOⅡ、PgP介导的抗癌药物已产生耐药性。     

RUNX3、Bcl-2和Bax蛋白在乳腺癌中的表达及其意义

目的：检测乳腺癌组织中RUNX3、Bcl-2和Bax基因的表达,探讨它们的相关性及其临床意义。方法：采用免疫组织化学S-P法检测上述基因的表达。结果：RUNX3在乳腺癌中的阳性表达率为35.23%,明显低于在乳腺纤维腺瘤（85%）及乳腺增生病（87.5%）组织中的表达率,差别具有统计学意义（P〈0.05）。Bcl-2和Bax蛋白在良恶性乳腺病组织中的表达差别无统计学意义。RUNX3和Bcl-2蛋白表达与乳腺癌的临床分期、淋巴结转移呈负相关,Bcl-2蛋白表达与病理分级呈负相关。Bax蛋白的表达与临床分期、病理分级及淋巴结转移呈正相关。乳腺癌中RUNX3与Bcl-2蛋白的表达呈正相关（P〈0.05）,与Bax的表达无相关性（P〉0.05）。结论：三种蛋白对乳腺癌的发生发展起重要作用,在乳腺癌发展中RUNX3与Bcl-2起协同作用,检测乳腺癌组织中RUNX3、Bcl-2和Bax基因的表达对于评价患者的预后有一定价值。