siRNA沉默β-Catenin对肝星状细胞工、Ⅲ型胶原表达的影响

目的 研究siRNA干扰β-Catenin表达、阻断Wnt/β-Catenin信号通路对肝星状细胞(HSC)Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响.方法 将化学合成siRNA β-Catenin以Lipofectamine包裹,转染HSC-T6细胞,设阴性对照和空白对照,抽提细胞总RNA及蛋白质,收集培养上清液,应用反转录-聚合酶链反应和Western blot法检测细胞β-Catenin表达;Western blot法检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达情况;细胞免疫荧光法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达与定位;酶联免疫吸附法检测培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量.结果 转染siRNA的HSC-T6细胞β-Catenin基因及蛋白表达水平明显下调,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达显著下调,免疫细胞化学提示转染siRNA β-Catenin后的Ⅰ、Ⅲ型胶原表达均较对照组明显减弱;48 h和72 h时培养上清液中Ⅰ型胶原表达水平显著减少,分别比阴性对照下降(23.68±7.96)％和(38.42±6.58)％(F= 18.26,P＜0.01;F= 26.38,P＜0.01),Ⅲ型胶原含量于72 h时降低(39.68±4.92)％ (F= 37.68,P＜0.0t).结论 siRNAβ-Catenin能高效抑制HSC-T6细胞β-Catenin表达,阻断Wnt/β-Catenin信号通路,从而抑制HSC-T6细胞增殖,显著减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和分泌,具有预防及治疗肝纤维化的潜力.     

siRNA沉默β-Catenin对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的研究siRNA干扰β-Catenin表达,阻断Wnt/β-Catenin信号通路对肝星状细胞（HSC）增殖和凋亡的影响。方法将化学合成的siRNAβ-Catenin以Lipofectamine包裹,转染HSC-T6细胞,设阴性对照和空白对照;采用逆转录-聚合酶链反应和Western blotting检测细胞β-Catenin表达;采用Western blotting法检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达;采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞凋亡。结果以不同浓度的β-Catenin SiRNA转染HSC-T6细胞后,β-Catenin mRNA水平比阴性对照组分别下调了51.3±3.6%、85.7±6.8%和94.5±7.5%（P均〈0.01）,比空白对照组分别下调了50.5±3.4%、86.1±6.2%和93.7±7.2%（P均〈0.01）;β-Catenin蛋白表达被抑制了56.43±2.88%（P〈0.01）;Ⅰ和Ⅲ型胶原表达分别被抑制了46.58±3.46%（P〈0.01）和50.48±3.72%（P〈0.01）;细胞增殖明显被抑制,最大抑制率达到44.8±2.8%（P〈0.01）;细胞凋亡增加达28.6%（P〈0.05）。结论 siRNAβ-Catenin能高效抑制HSC-T6细胞β-Catenin表达,阻断Wnt/β-Catenin信号通路,从而抑制HSC-T6细胞增殖,促进凋亡,显著减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和分泌,具有预防及治疗肝纤维化的潜力。     

Klotho与β-Catenin在食管癌组织中的表达及临床意义

目的:研究Klotho与β-Catenin蛋白在食管癌与癌旁组织中的表达及其与临床病理特征的关系.方法:采用免疫组织化学EnVision二步法,检测Klotho与β-Catenin蛋白在75对食管鳞状细胞癌与其癌旁组织芯片中的表达情况,并结合临床病理资料进行统计分析.结果:Klotho在食管癌中表达的阳性率明显低于癌旁组织(14.9%vs63.4%,P<0.05),Klotho的表达与TNM分期、浸润深度明显相关(均P<0.05).β-Catenin在食管癌中表达的阳性率明显高于癌旁组织(80.0%vs16.4%,P<0.05),β-Catenin的表达与淋巴结转移、TNM分期明显相关(均P<0.05).Klotho与β-Catenin在食管癌中的表达成负向关(r=-0.276,P<0.05).结论:Klotho与β-Catenin在食管鳞状细胞癌与癌旁组织中的表达阳性率不同,差异均具有显著性,联合检测癌组织中Klotho与β-Catenin的表达可为食管癌的进展与预后提供重要的参考依据.     

转化生长因子βⅠ型受体基因的靶向小干扰RNA抑制肝星状细胞合成胶原的体外研究

目的 观察大鼠转化生长因子βⅠ型受体(TβR Ⅰ)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)表达质粒对肝星状细胞(HSC)合成胶原的影响.方法 根据大鼠Tβ R Ⅰ的基因序列,设计并构建3个大鼠TβR Ⅰ基因的靶向siRNA表达质粒,以脂质体作转染试剂,将siRNA表达质粒分别转染至HSC-T6细胞中,RT-PCR和Western印迹技术分析TβRⅠ mRNA及蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,放射免疫法测HA、PCⅢ含量.采用LSD法进行统计学处理.结果 酶切证实siRNA的目的 基因片段已成功克隆入载体中.与空白对照组比较,转染siRNA表达质粒后,3组HSC-T6细胞TβR Ⅰ mRNA表达水平均抑制,其中以psiRNA2组抑制作用最强(psiRNA1组:t=7.354,P＜0.01;psiRNA2组:t=9.214,P＜0.01;psiRNA3组:t=5.967,P＜0.01).3组TβRⅠ蛋白表达水平均降低,以psiRNA2组降低最明显(psiRNA1组:t=6.324,P＜0.01;psiRNA2组:t=8.741,P＜0.01;psiRNA3组:t=4.128,P＜0.01).3组HSC-T6细胞增殖活性均下降,合成胶原均减少,以psiRNA2组最明显;而转染无关siRNA组无明显变化.结论 构建的TβR Ⅰ siRNA表达质粒可抑制HSC-T6细胞合成胶原,为肝纤维化基因治疗提供新的靶点.     

Wnt5 a、β-Catenin 在子宫内膜腺癌中的表达及意义

目的探讨Wnt5a、β连环蛋白(β-Catenin)在增殖期子宫内膜及子宫内膜腺癌中的表达及意义。方法收集刮宫或者手术切除的存档石蜡标本87例,根据组织类型分为增殖期子宫内膜组13例、子宫内膜不典型增生组18例、子宫内膜腺癌组56例。应用免疫组化技术检测各类组织Wnt5a和β-catenin的表达情况。结果 Wnt5a、β-Catenin在三组间阳性表达比较差异有统计学意义(P均<0.05)。Wnt5a、β-Catenin表达与组织学分级有关(P均<0.05),β-Catenin表达与淋巴结转移有关(P<0.05);Wnt5a、β-Catenin表达与年龄、FIGO分期无关。结论Wnt5a、β-Catenin共同参与子宫内膜腺癌的恶性转化过程,联合检测Wnt5a、β-Catenin对早期判断子宫内膜腺癌的发生、发展有一定价值。     

肠三叶因子与Wnt/β-Catenin信号通路在结直肠癌中的表达及其与患者预后的关系

目的研究肠三叶因子(ITF/TFF3)与Wnt/β-Catenin信号转导通路相关基因在结直肠癌中的表达情况及其与患者临床病理及预后的关系。方法采用SP免疫组织化学染色法检测68例结直肠癌、21例结直肠腺瘤及11例正常结直肠黏膜组织中TFF3、Wnt1a、β-Catenin的表达变化;分析TFF3、Wnt1a、β-Catenin与结直肠癌患者临床病理指标的关系;应用Cox单因素及多因素回归分析探讨它们在结肠癌组织中的表达与结肠癌患者预后的关系。结果 1TFF3、Wnt1a、β-Catenin在结直肠癌和腺瘤组织中均有表达,Wnt1a、β-Catenin在正常结直肠黏膜组织中则均呈阴性或弱阳性表达,而TFF3呈阳性表达,各标记物在不同结直肠黏膜组织中的表达差异显著(P均0.05);2Wnt1a、β-Catenin的表达均与患者的TNM分期相关,TNM分期越高的患者Wnt1a、β-Catenin的表达越强;β-Catenin与TFF3的表达则均与患者的淋巴结转移情况相关,伴有淋巴结转移的患者二标记物的阳性率高;Wnt1a、TFF3的表达还与患者的肝转移情况相关,伴有远处转移的患者Wnt1a、TFF3的阳性率高;3Wnt1a、β-Catenin在结直肠癌的表达呈正相关(r=0.308)。β-Catenin在Wnt1a阳性组中的表达(阳性率92.6%)明显高于在Wnt1a阴性组中的表达(阳性率65.9%)(P=0.010);4Cox单因素法分析TFF3、Wnt1a、β-Catenin的表达对患者肿瘤死亡的影响,结果显示,TFF3、Wnt1a可影响患者的肿瘤死亡(P均0.05),阳性患者生存时间短,而β-Catenin的表达对结肠癌患者肿瘤死亡无影响(P0.05)。结论 TFF3与Wnt/β-Catenin信号转导通路与结直肠癌的发生发展及预后相关,可作为较为理想的肿瘤标志物辅助判断患者预后并指导临床治疗。     

乳腺癌组织中FOX03α、β-Catenin、PCNA的表达及临床意义

目的 探讨叉头转录因子(FOX03a),β-连环素(β-Catenin )、增殖细胞核抗原(PCNA)在乳腺癌发生、发展中的作用.方法 选择我院手术切除的乳腺癌组织标本68份(肿瘤组)和乳腺纤维腺瘤组织标本20份(腺瘤组),采用免疫组化Envision两步法检测两组FOX03a、β-Catenin,PCNA蛋白表达;采用Spearman等级相关分析法分析三指标间及与乳腺癌临床病理参数的相关性.结果 肿瘤组、腺瘤组FOX03a阳性表达率分别为60%、90%,β-Catenin异常表达率分别为65%、25%,PCNA阳性表达率分别为69%、35%,两两比较P均＜0.05; FOX03a阳性表达与乳腺癌临床分期、雌激素受体、腋窝淋巴结转移、预后相关,β-Catenin异常表达与乳腺癌组织学分级、腋窝淋巴结转移、临床分期相关,PCNA阳性表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移、临床分期相关;乳腺癌组织中FOX03a阳性表达与β-Catenin异常表达、PCNA阳性表达均呈负相关,β-Catenin异常表达与PCNA阳性表达呈正相关.结论 FOX03a低表达、β-Catenin异常表达、PCNA高表达与乳腺癌的发生、发展相关.     

乳腺癌组织中FOXO3a、β-Catenin、PCNA的表达及临床意义

目的探讨叉头转录因子（FOX03a）、β-连环素（β-Catenin）、增殖细胞核抗原（PCNA）在乳腺癌发生、发展中的作用。方法选择我院手术切除的乳腺癌组织标本68份（肿瘤组）和乳腺纤维腺瘤组织标本20份（腺瘤组）,采用免疫组化Envision两步法检测两组FOXO3a、β-Catenin、PCNA蛋白表达;采用Spearman等级相关分析法分析三指标间及与乳腺癌临床病理参数的相关性。结果肿瘤组、腺瘤组FOXO3a阳性表达率分别为60％、90％,β-Catenin异常表达率分别为65％、25％,PCNA阳性表达率分别为69％、35％,两两比较P均〈0．05;FOXO3a阳性表达与乳腺癌临床分期、雌激素受体、腋窝淋巴结转移、预后相关,β-Catenin异常表达与乳腺癌组织学分级、腋窝淋巴结转移、临床分期相关,PCNA阳性表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移、临床分期相关;乳腺癌组织中FOXO3a阳性表达与β-Catenin异常表达、PCNA阳性表达均呈负相关,β-Catenin异常表达与PCNA阳性表达呈正相关。结论FOX03a低表达、β-Catenin异常表达、PCNA高表达与乳腺癌的发生、发展相关。     

β-Catenin蛋白在散发性结直肠癌中的异常表达和基因突变

目的: 观察β-Catenin蛋白在散发性结直肠癌(SCRC)中胞质胞核异常表达特征和基因突变发生率, 并探讨其与临床病理的相关性.方法: 用免疫组织化学EnVision二步法检测90例SCRC与22例散发性结直肠腺瘤标本的β-Ca t enin蛋白在胞质胞核中的异常表达. 以PCR扩增和直接测序检测上述标本中β-Catenin基因突变.结果: 正常结直肠黏膜中β-Catenin蛋白表达定位于细胞膜上,未见胞质胞核中的异常表达. SCRC中β-Catenin蛋白在胞质与胞核的异常表达率显著高于散发性腺瘤中的异常表达率(88.9% vs 59.1%, 41.1% vs 18.2%, P <0.05).SCRC的β-Catenin异常胞质表达率与肿瘤生长方式, 分化程度相关(P <0.05);胞核异常表达率在溃疡型生长高于在隆起型生长(50.0%vs 26.5%, P <0.05). 胞核异常表达往往出现在肿瘤的浸润前沿. 90例SCRC中仅发现1例β-Catenin基因突变;22例散发性结直肠腺瘤中未检测出突变.结论: β-Catenin蛋白胞质胞核异常表达可能在SCRC的发生发展中起重要作用. 在SCRC中β-Catenin基因突变可能不是β-Catenin蛋白异常表达的主要原因.     

β-Catenin、Skp~2和p~(27)在老年肝细胞癌中的表达及相关性

目的探讨β-连环蛋白(β-Catenin)、S期激酶相关蛋白(Skp2)和p27在老年肝细胞癌(HCC)组织中的表达及相关性。方法采用免疫组化SP法检测56例老年HCC及对应癌旁组织中β-Catenin、Skp2和p27表达情况,分析三者表达与临床病理参数的关系。结果β-Catenin、Skp2和p27在HCC组织中的阳性率分别为55.4%(31/56)、44.6%(25/56)和14.3%(8/56),在对应癌旁组织中的阳性率分别为14.3%(8/56)、10.7%(6/56)和53.6%(30/56),差异均有统计学意义(均P<0.05);β-Catenin阳性表达与肝内转移和Edmonson分级有关(P<0.05),Skp2阳性表达与肝内转移、Edmonson分级和TNM分期有关(P<0.05),p27阳性表达与Edmonson分级和TNM分期有关(P<0.05);β-Catenin和Skp2蛋白表达呈正相关(r=0.571,P=0.002),β-Catenin和p27蛋白表达呈负相关(r=-0.429,P=0.029),Skp2和p27蛋白表达呈负相关(r=-0.667,P=0.001)。结论β-Catenin、Skp2和p27在老年HCC组织中的表达异常且与恶性病理参数有关,且三者异常表达密切相关,提示β-Catenin、Skp2和p27在HCC的发生发展和转移中可能有相互作用。     

应用siRNA抑制由醛固酮诱导的大鼠肥大心肌细胞中钙调神经磷酸酶AβmRNA的表达

目的:本研究通过应用RNA干扰的方法,观察了钙调神经磷酸酶（CaN）在醛固酮（A ld）诱导的大鼠心肌细胞肥大时其AβmRNA表达水平。方法:在A ld诱导心肌细胞肥大模型上同时转染CaN AβmRNA靶标siRNA及其阴性对照进行转染。通过免疫荧光染色及RT-PCR方法检测CaN Aβ蛋白及mRNA的表达,同时测定心肌细胞面积变化。结果:A ld组CaN AβmRNA表达较对照组显著升高,细胞表面积显著增加;CaN AβmRNA靶标siRNA组细胞浆中绿色荧光表达比siRNA阴性对照组少,即CaN蛋白表达量siRNA组较siRNA阴性对照组减少,RT-PCR检测结果显示siRNA组CaN AβmRNA表达较siRNA阴性对照组受到明显抑制,细胞面积siRNA阴性对照组较siR-NA组增加。结论:siRNA可抑制钙调神经磷酸酶AβmRNA的表达,对于心肌细胞中基因功能的研究,RNA干涉可以作为应用工具。     

重组转化生长因子β3基因对大鼠肝星状细胞Ⅰ型胶原表达的影响

目的观察转化生长因子D3基因（TGFβ3）对大鼠肝星状细胞株（HSC—T6）Ⅰ型胶原合成的影响。方法TGFβ3表达质粒[pcDNA3．1（＋）-TGFβ31和TGFβ1表达质粒[pcDNA3．1（＋）-TGFD11的构建。通过脂质体介导方法，将pcDNA3．1（＋）-TGFβ1、pcDNA3．1（＋）-TGFβ3分别及共同转染体外培养的HSC—T6细胞，荧光定量PCR法及Westernblot法分别检测转染后TGFβ1、TGFD3、Ⅰ型胶原mRNA及蛋白质的表达。将pcDNA3．1（＋）-TGFD1转染HSC—T6细胞，经G418筛选建立高表达TGFD1的HSC～T6细胞克隆，pcDNA3．1（＋）-TGFD3转染克隆细胞，荧光定量PCR法检测转染后TGFβ3、TGFβ1及Ⅰ型胶原mRNA的表达，Westernblot法检测TGFβ1、Ⅰ型胶原蛋白的表达情况。结果构建的pcDNA3．1（＋）TGFD3、pcDNA3．1（＋）-TGFD1质粒可转染HSC—T6细胞，转染率28．2％。pcDNA3．1（＋）TGF侈3转染细胞后，Ⅰ型胶原mRNA及蛋白的表达较空白组及对照组增加，以72h增高最为明显（P〈0．05）；共转染组Ⅰ型胶原mRNA及蛋白质的表达较pcDNA3．1（＋）-TGFβ1转染组明显降低（P〈0．05）。TGF侈3转染克隆细胞后，TGFD1mRNA表达较克隆组无明显改变（P〉0．05），而蛋白质表达明显下降（P〈0．05），Ⅰ型胶原mRNA及蛋白质表达均较克隆组明显降低（P〈0．05）。结论TGFD3基因转染正常培养的HSC—T6细胞，增加Ⅰ型胶原的表达；转染高表达TGFβ1的克隆组HSC—T6细胞，Ⅰ型胶原表达明显降低，提示TGFβ3对肝纤维化的发生有抑制作用。     

灵芝多糖对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子-β1和Ⅳ型胶原的影响

目的探讨灵芝多糖对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞表达转化生长因子β1(TGF-β1)和Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的影响。方法用不同浓度的灵芝多糖加入高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)中测不同时间TGF-β1、Col-Ⅳ蛋白的表达。结果高糖可使系膜细胞TGF-β1、Col-Ⅳ的表达明显增加(P<0.01),而灵芝多糖干预后TGF-β1、Col-Ⅳ表达降低,并呈剂量依赖性(P<0.01)。结论灵芝多糖可抑制高糖环境下肾小球系膜细胞的TGF-β1、Col-Ⅳ过度表达,并呈剂量依赖性,这可能是其延缓及减轻糖尿病肾病的初步机制。     

SH-SY5Y神经细胞中α3尼古丁受体基因表达沉默对β分泌酶蛋白表达的影响

目的 研究α3神经型尼古丁受体(nAChR)基因沉默对β分泌酶(BACE)蛋白表达的影响.方法 稳定转染α3 nAChR siRNA表达质粒及空质粒的SH-SY5Y神经细胞与正常对照组细胞用Real time-PCR和Western印迹法检测α3 nAChR mRNA表达和蛋白水平表达,以评价RNA的干扰效率;用蛋白质印迹方法 分别检测细胞中β分泌酶两个亚型(BACE1和BACE2)蛋白表达水平的变化.结果 稳定转染α3 nAChR siRNA表达质粒的细胞克隆株,与空质粒和正常对照组相比BACE1蛋白表达水平增加,BACE2蛋白表达水平减少.结论 α3 nAChR可以通过增加BACE2蛋白表达水平及减少BACE1蛋白表达水平,影响Aβ生成从而减少Aβ的神经毒性作用,发挥神经保护作用.     

环氧化酶2对Wnt信号途径的调节作用

目的 Wnt信号途径对维持胃肠道黏膜上皮的增生至关重要,但其在调节急性胃黏膜损伤修复中的作用及与环氧化酶2(COX-2)的关系尚不明确.方法 COX-2-/-TOPGAL+小鼠及野生型TOPGAL+小鼠经酸化乙醇管喂6 h后采用X-gal染色测定胃黏膜Wnt信号途径的表达情况;用Western blot及RT-PCR法测定损伤后胃黏膜中TCF4和β-Catenin的表达情况;采用TOP/flash质粒进一步研究COX-2对Wnt信号途径的调节作用.结果 酸化乙醇损伤后,LacZ信号、β-Catenin及TCF4仅在野生型小鼠胃黏膜中表达增加,其中β-Catenin和TCF4蛋白水平分别增加(3.52±0.52)倍、(3.02±0.62)倍,β-Catenin和TCF4 mRNA水平分别增加(19.85±3.63)倍、(17.82±4.82)倍.细胞实验显示,无乙醇损伤时,COX-2抑制剂NS398作用3 d后,可抑制80%TOP/flash质粒的表达;而前列腺素E2(PGE2)使该质粒的表达增加约50%;1%乙醇损伤细胞后,NS398进一步降低质粒表达约25%,相反,PGE2则稳定该质粒的表达,并使质粒的表达增加约10%.结论 Wnt信号途径在经酸化乙醇损伤后的胃黏膜上皮中被激活,COX-2可能通过激活Wnt信号途径来调节胃黏膜上皮细胞的增生.     

高糖条件下基质细胞趋化因子1α抑制人肾小管上皮细胞Ⅳ型胶原表达

目的 本文探讨基质细胞趋化因子1α （stromal cell-derived factor-1,SDF-1α）对人肾小管上皮细胞（HK细胞）细胞外基质（Ⅳ型胶原）表达的影响.方法 不同浓度的葡萄糖培养HK细胞,分为正常葡萄糖组（NG组：含5.5 mmol/L葡萄糖）和高糖组（HG组：含25.0 mmol/L葡萄糖）,分别用转化生长因子β1 （TGF-β1）和SDF-1α干预HK细胞12h,再分为空白对照组（NC组）、阴性对照组（DMSO组）、T组（TGF-β1组）、S组（SDF-1α组）、T＋S组（TGF-β1和SDF-1α共同干预组）,采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting分别检测Ⅳ型胶原mRNA和蛋白的表达.两组间比较采用t检验.结果 （1）HK细胞能持续表达SDF-1α和其受体CXCR4 mRNA.高糖条件下SDF-1α和CXCR4mRNA表达呈时间梯度增加,24 h两者表达量达到高峰.24 h CXCR4 mRNA表达量是12h表达量的1.2倍（t=6.08,P＜0.05）,SDF-1αmRNA表达量是12h的1.58倍（t=7.52,P＜0.05）.（2）高糖条件下SDF-1α抑制HK细胞Ⅳ型胶原mRNA和蛋白的表达,并能降低由TGF-β1诱导的Ⅳ型胶原表达.S＋T组Ⅳ型胶原mRNA表达量是T组的0.33倍（t=12.57,P＜0.05）,蛋白表达量是T组的0.47倍（t=14.23,P＜0.05）.但在正常葡萄糖条件下,SDF-1α对由TGF-β1诱导的Ⅳ型胶原表达没有影响.（3）TGF-β1促进HK细胞Ⅳ型胶原mRNA和蛋白表达,高糖条件下其促进作用更为显著.T组Ⅳ型胶原mRNA是正常对照组的6.63倍（t=19.21,P＜0.05）,蛋白表达量是其2.59倍（t=15.71,P＜0.05）.结论 高糖条件下SDF-1α能减轻TGF-β1诱导的HK细胞Ⅳ型胶原表达,可能由此改善肾脏纤维化.TGF-β1促进HK细胞Ⅳ型胶原的表达,促进肾脏纤维化的发生发展.     

RNA干扰抑制雌激素受体α亚基对雌激素诱导人成骨样细胞护骨素表达的影响

目的 探讨RNA干扰抑制人成骨样细胞株MG63中雌激素受体α亚基(estrogen receptor α subunit ERα)后，对17β-雌二醇(E2)诱导护骨素(OPG)表达的影响。方法 利用计算机辅助设计ERα特异性siRNA，体外合成siRNA基因，并将其定向克隆入真核表达载体pSilencer4．1-CMV。以脂质体法转染ERα siRNA载体至人的成骨样细胞株MG63中，鉴定后分别用不同浓度的雌激素或G蛋白抑制剂苏拉明干预经ERα siRNA转染的MG63细胞或未经ERα siRNA转染的MG63细胞，RT-PCR法检测OPG mRNA的表达水平。结果 双酶切法鉴定重组质粒后，RT-PCR法鉴定ERα siRNA载体可特异地抑制MG63细胞中ERα的表达。不同浓度的17β-E2上调MG63细胞OPG mRNA的表达，其中以10^-7mol／L的作用最强。但经ERα siRNA载体抑制MG63细胞ERα亚基后，17β-E2上调MG63细胞OPG mRNA表达的作用消失。结论 17β-E2主要经ERα亚基上调MG63细胞OPG的表达。     

高糖通过转化生长因子依赖途径介导肾小管上皮细胞-肌纤维母细胞转分化及Ⅰ型胶原合成的机制

目的探讨高糖介导肾小管上皮细胞转分化及Ⅰ型胶原（Collagen Ⅰ）合成的分子机制。方法含35mmol／L葡萄糖培养液培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E细胞）,免疫化学方法检测p-Smad2／3核转位,ELISA检测细胞培养上清中TGF-β1浓度,RT-PCR和Western blot方法分别检测α-SMA、E-eadherin、Collagen Ⅰ mRNA和蛋白的表达。观察TGF-β1中和抗体对高糖上述效应的影响。结果高糖促进NRK52E细胞合成和分泌TGF-β1。TGF-β1中和抗体能抑制高糖介导的p-Smad2／3核转位,下调高糖介导的α-SMA和Collagen Ⅰ蛋白表达,上调E-Cadherin蛋白表达（P均〈0．01）。结论高糖介导的肾小管上皮细胞转分化和细胞外基质Collagen Ⅰ的合成依赖于TGF-β1效应。     

转化生长因子β1对大鼠血管平滑肌细胞Smurf2和Ⅰ型胶原表达的影响

目的探讨体外条件下转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)Smad泛素调节因子2(Smurf 2)以及Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达的影响。方法应用RT-PCR法检测Smurf2 mRNA的表达,Western印迹法检测Smurf2蛋白的表达,ELISA检测ColⅠ的表达。结果不同浓度TGF-β1(1、5、10μg/L)作用于VSMCs后,细胞中Smurf2的表达量均低于对照组(P<0.05),且5、10μg/L组同对照组相比差异显著(P<0.01),ColⅠ的浓度高于对照组(P<0.05),且5μg/L组同对照组相比差异显著(P<0.01)。结论 TGF-β1呈浓度依赖性抑制Smurf2的表达,促进ColⅠ的产生。     

β-arrestin 2对急性支气管哮喘小鼠模型脾CD4^＋T细胞T-bet表达的影响

目的探讨β-arrestin 2在急性支气管哮喘（简称哮喘）小鼠模型脾CD4＋T细胞中的表达及对T-bet表达的影响。方法建立急性哮喘小鼠模型,免疫磁珠分离小鼠脾源性CD4＋T细胞,RNA干扰β-arrestin 2的表达后,检测CD4＋T细胞β-arrestin 2、T-bet mRNA和蛋白的表达。结果 siRNA-β-arrestin 2-1123沉默效果最佳,相对于未转染siRNA的哮喘组及其他siRNAβ--arrestin 2转染组,β-arrestin 2 mRNA明显降低（P〈0.01）;哮喘小鼠模型脾CD4＋T细胞β-arrestin 2蛋白的表达明显高于正常组（P〈0.01）;β-arrestin 2沉默后,哮喘小鼠脾CD4＋T细胞T-bet mRNA和蛋白的表达明显升高（P〈0.05）。结论β-arrestin 2可能通过抑制小鼠CD4＋T细胞T-bet的表达参与哮喘的发病。