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1.
Using Anti Mouse Lymphocytic Serum as an immunosuppressor instead of steroid hormones, bone induction was obtained in mice grafted with K xenogenic-established epithelial cell line. The results suggest that bone induction in this experimental system is not dependent upon steroid hormones.
Zusammenfassung Mit dem als Immunosuppressor wirkenden Anti-Mäuse-Lymphocyten-Serum, welches anstelle von Steroidhormonen verwendet wurde, konnte bei Mäusen, die ein Transplantat von K-xenogenen, festgesetzten Epithelzellen erhalten hatten, das Einsetzen von Knochenwachstum hervorgerufen werden. Diese Resultate zeigen, daß in diesem Modell das Einsetzen des Knochenwachstums nicht von Steroidhormonen abhängig ist.

Résumé En utilisant du sérum antilymphocytaire de souris, utilisé comme immuno-dépresseur à la place d'hormones stéroides, une induction de tissu osseux est obtenue chez la souris chez laquelle des cellules épithéliales souches K xénogéniques sont greffées. L'induction osseuse dans ce système expérimental n'est donc pas liée aux hormones stéroides.
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2.
目的 观察兔羊膜上皮细胞(AECs)向兔软骨细胞诱导分化的特性.方法 获得兔新鲜羊膜组织,去除外膜组织,并剪碎,胶原酶消化法进行原代培养.经传代培养、细胞形态观察后,用软骨细胞诱导培养液使AECs向软骨细胞分化,并以组织化学和免疫组织化学染色进行鉴定,电镜观察细胞形态检测软骨细胞特征性表现、细胞活性噻唑蓝(MTT)比色法检测.结果 兔羊膜上皮细胞具有前期胚胎干细胞的多向分化潜能,采用酶消化法可快速分离培养原代细胞.MTT比色法显示第3代传代细胞活性、增殖能力较高,未进行软骨细胞诱导的细胞未显示出软骨细胞的特征性表现,经软骨细胞诱导分化后,组织化学和免疫组织化学检测表明其能较好的表现软骨细胞特征.结论 兔AECs无伦理学限制,且具有前期胚胎干细胞的多向分化潜能,有望成为软骨细胞组织工程学新型的种子细胞.  相似文献   

3.
目的:观察狗骨髓基质细胞的生长特点及诱导条件下的成骨能力。方法:采用成年狗双侧髂骨取材进行骨髓基质细胞培养,应用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法观察细胞增殖;以对硝基苯磷酸盐法及骨钙素含量放免测定法测定碱性磷酸酶活性及骨钙素含量;用Von Kossa染色法观察矿化结节;用间接免疫荧光染色法测定Ⅰ型胶原。观察在培养液中添加地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠条件下骨髓基质细胞生长及成骨分化情况。结果:骨髓基质细胞呈成纤维样表现,增殖力强。诱导条件下的细胞碱性磷酸酶活性及骨钙素含量明显增高,Ⅰ型胶原表达增多,10~12d达到高峰,并出现矿化结节。结论:狗骨髓基质细胞在本实验条件下,成骨能力肯定,增殖能力强,可作为骨组织工程的种子细胞。  相似文献   

4.
骨髓源性肝干细胞定向分化及脾内移植研究   总被引:14,自引:1,他引:13  
目的 寻找骨髓源性肝干细胞的表面标记 ,进行定向分化及脾内移植研究。方法 流式细胞仪检测淤胆大鼠骨髓中干细胞群体的数量变化 ,寻找肝干细胞标记 ,免疫磁珠分离 ,进行体外诱导分化和肝再生模型的脾内移植 ,观察细胞形态的变化 ,免疫组织化学和免疫荧光技术检测白蛋白、AFP、CK8/18等肝细胞标记的表达。结果 淤胆鼠 β2微球蛋白阴性 (β2 m-)细胞数量较对照组数量明显增高 ,分别为 (6.17± 2 .70 ) %和 (0 .79± 0 .61) % (P <0 .0 1) ,β2 m-细胞体外培养及脾内移植均可出现肝细胞样细胞 ,白蛋白、AFP、CK8/18表达阳性。结论 β2m 细胞在体内外具有向肝细胞分化的能力 ,脾内移植是肝干细胞移植可供选择的部位之一。  相似文献   

5.
目的对比不同诱导阶段的骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)对兔骨折损伤的疗效,并找到适宜移植的最佳诱导时间。方法体外分离培养BMSCs,表型鉴定。绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)转基因标记后,定向诱导。将实验兔40只随机分为5组:未诱导组5只;诱导3 d组10只;诱导7 d组10只;诱导21 d组10只;对照组5只。建立兔尺骨骨折动物模型,造模24 h后,将GFP标记的不同诱导阶段细胞按3×106cells/Kg于骨折处局部注射,移植后行X线检查并评分。结果骨折处X线评分,BMSCs未诱导组、诱导7 d、诱导21 d组评分比较无明显差异(P>0.05),且均显著高于对照组(P<0.01),3 d组评分高于7 d和21 d组(P<0.05),且显著高于对照组(P<0.01)。结论BMSCs成骨诱导3 d可能是最适宜移植的。  相似文献   

6.
目的 观察骨髓问充质细胞(BMCs)移植能否提高严重肝功能损害合并再生障碍的同种先天性无白蛋白大鼠(F344alb)肝再生和修复能力.方法 F344大鼠为供体,F344alb受体鼠接受Retrorsine(RS)1次/2周腹腔注射2次后4周行2/3肝切除(PH).正常F344alb为组Ⅰ(n=5);BMCs移植为组Ⅱ(n=8);RS/PH预处理为组Ⅲ(n=8);RS/PH预处理后BMCs移植为组Ⅳ(n=8);RS/PH预处理后肝实质细胞移植为组V(n=8).4周后行各组大鼠肝脏形态学和组化染色研究,检测肝功能,及肝组织和骨髓基因检测.结果 (1)生存率:组Ⅳ75%,组Ⅴ 50%,组Ⅲ37.5%,组Ⅰ和组Ⅱ 100%.(2)4周后组肝再生率(67.38±8.66)%显著高于组Ⅳ、Ⅲ[(55.31±8.69)%,(44.27±6.51)%].(3)PH后1 d,组Ⅲ、Ⅳ、V血清TB、ALT显著升高;PH后2 d,组Ⅳ血清,rB、ALT显著下降.(4)组Ⅳ、Ⅴ肝组织切片白蛋白免疫组织化学染色显示白蛋白染色阳性肝细胞呈簇状分布.(5)F344来源白蛋白基因片段出现在组Ⅳ、Ⅴ大鼠肝组织内.(6)PH后2、4周,组Ⅳ、Ⅴ血清白蛋白显著升高.结论 BMCs移植可提高严重肝损合并再生障碍受体鼠肝再生能力,保护肝功能,促进肝修复.  相似文献   

7.
Cartilage and bone induction evoked by xenogenic grafts of WISH cells possesses neither generic nor species specificity. No induction was obtained in mice when WISH cells were grafted subcutaneously. Human fibroblasts transformed into CLV-J3 epithelioid cells acquire inductive properties. Hydrocortisone used as an immunosupressive in large doses enables WISH cells grafted into mice to survive, but in contrast to cortisone treated animals, small amounts of hyaline cartilage only were obtained and only in half the animals.
Zusammenfassung Die Bildung von Knochen- und Knorpelgewebe, die durch xenogene intramuskuläre Transplantate von WISH-Zellen veranlaßt wird, wurde bei drei verschiedenen Tierarten (Maus, Ratte und Hamster) beobachtet. Subcutane Implantierung von WISH-Zellen in Mäuse führt zu keiner Knorpel- oder Knochenbildung. Menschliche Fibroblasten, die durch Vakzine-Virus zu epithelialen Zellen (CLV-J3) umgewandelt wurden, können nach Transplantation zum Entstehen von Knorpel- und Knochengewebe führen.Größere Dosen von Hydrocortison, als immundepressives Mittel angewandt, ermöglicht den in die Mäuse implantierten WISH-Zellen ein Überleben. Die Bildung von jungem Knorpel wurde jedoch nur in 50% der Fälle erreicht, im Gegensatz zu Cortison, das in allen Fällen die Knorpel- und Knochenbildung verursachte.

Résumé L'induction de cartilage et d'os provoquée par la greffe xenogénique de cellules WISH ne possède aucune spécificité générique ou di'espèce. Chez la souris, la greffe sous cutanée de cellules WISH ne provoque aucune induction. Les fibroblastes humains transformés en cellules épithélioides (CLV-J3) par le virus de la vaccine ont acquis des prapriétés inductives.L'hydrocortisone á forte dose permet, en tant qu agent immunodepresseur, la survie des cellules WISH greffées chez la souris, mais, contrairement á ce que l'on observe chezl'animal traité par la cortisone, du cartilage hyalin est obtenu dans la moitié des cas seulement et en petites quantités.
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8.
兔骨髓基质干细胞促进珊瑚骨成骨的实验研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的探讨运用组织工程技术合成自体骨移植的替代物的可行性。方法从兔骨髓中分离基质干细胞进行体外培养扩增后,载人明胶海绵或珊瑚骨制成复合物。取24只6~9个月龄雌性新西兰白兔,随机分成四组,每组6只。第1组桡骨干中段15mm的骨缺损内植入明胶海绵,第2组植入明胶海绵+骨髓基质干细胞(BMSCs),第3组植入珊瑚骨,第4期植入珊瑚骨+BMSCs,对各组动物进行影像学、p,CT和组织学比较。结果仅植入明胶海绵的骨缺损全部形成典型的骨折不愈合表现;植入明胶海绵+BMSCs后,骨缺损内的新骨形成明显增多,但仅有1只动物完全愈合;植入珊瑚骨后,骨缺损内有部分新骨形成,但术后16周无一例完全愈合;植入珊瑚骨+BMSCs后,骨缺损内的载体支架被逐渐吸收的同时有大量的新骨形成,其中4只动物完全愈合。结论由体外分离和培养的BMSCs与珊瑚骨合成的组织工程骨具有可吸收性强、成骨能力好等特点,是一种具有发展前景的自体骨移植材料替代物。  相似文献   

9.
目的 探讨人类免疫缺陷病毒tat蛋白转导域交连超顺磁氧化铁纳米颗粒(HIV-Tat-CLIO)标记、磁共振成像(MRI)无创体内示踪移植大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的可行性和有效性.方法 SD人鼠28只,分为4组,每组7只,建立右后肢缺亦模型.A组移植HIV-Tat-CLIO标记的BMSC;B组移植HIV-Tat-CLIO与BrdU复合标记的BMSC;C组移植未标记的BMSC;D组注射无菌磷酸盐缓冲液(PBS).术后MRI示踪移植细胞,评估缺血改善程度,以及组织学检查.结果 B、C组分别死亡2只和1只.A、B组MRI结果相似:术后第3天,注射部位圆形低信号影,1周低信号灶离心性扩散成颗粒状,第2周低密度影进一步扩散,信号强度减弱,第4周信号强度进一步减弱,低密度颗粒扩散范围局限于原部位7 mm处.C、D组MRI阴性.缺血后肢平均皮肤温度、血管造影评分以及毛细血管密度A、B、C组间差异无统计学意义(P>0.05),均显著高于D组(P<0.05).D组的损伤评分明显高于其他3组,其他3组间差异无统计学意义.组织学检查与MRI结果一致.结论 HIV-Tat-CLIO标记、MRI可以有效地体内示踪植入大鼠缺血后肢的BMSC.对BM-SC改善缺血的效果无明显影响.  相似文献   

10.
目的 观察骨髓基质细胞(BMSCs)经CM-Dil荧光染料标记后的生物活性及移植后在损伤脊髓中的迁移和分布.方法 取Wistar大鼠的第3代BMSCs消化后分两组,实验组和对照组,实验组以CM.DiI标记,另一组正常细胞不标记,测定生长曲线.以改良Allen法制备脊髓损伤模型,将CM.DiI标记的BMSCs通过蛛网膜下腔注射移植,分别于移植后24 h、1、2、3、4周取损伤脊髓段作冰冻切片,倒置荧光显微镜下观测移植的BMSCs在损伤脊髓中的迁移和分布规律.结果 BMSCs经CM-Dil荧光染料标记成功率100%,实验组和对照组的生长曲线基本吻合;移植后24 h,脊髓损伤区未见标记细胞,移植后1周,标记的BMSCs开始迁移到损伤区硬脊膜下,移植后2~3周.BMSCs迁移、聚集在损伤脊髓的中心,移植后4周,仍有标记细胞聚集在脊髓损伤中心.结论 (1)BMSCs经CM-Dil荧光染料标记后的生物活性保持正常;(2)CM-Dil标记的BMSCs移植后能迁移聚集在损伤脊髓的中心,CM-Dil在活体内至少能维持4周  相似文献   

11.
Introduction  Bone transport is based on the principle of distraction osteogenesis described by Ilizarov and is a consecrated method for the treatment of segmental bone defects. One of its most problematic and, paradoxically, least studied aspects is the consolidation of the docking site. We studied histologically the ossification of the docking site and regenerate to determine any difference between them. Materials and methods  Nine adult sheep were submitted to correction of a 1-cm tibial diaphyseal defect using a system of plate-fixed bone transport, with latency period of 1 week and 0.2 mm distraction of the transported segment four times a day. The sheep were divided into three groups of three animals each, according to the observation period of 3, 6 or 12 weeks between the fixation of the transported fragment and the euthanasia. The docking site and the regenerate were studied histologically on sections stained with Masson trichrome. Results  The main mode of docking site ossification was the endochondral one and although intramembranous ossification was also observed simultaneously, it was limited to rare and small foci. In contrast, intramembranous ossification played the major role in the regenerate, with bone formation evolving from the base segment to the target segment. Conclusion  The experimental bone transport model proposed in the present study permits us to conclude that there is a clear difference between the ossification of the docking site and of the regenerate. No fundings or grants have been received for this study. The experiments comply with the current Brazilian laws for animal experimentation.  相似文献   

12.
目的 观察外源性骨髓细胞能否在体诱导形成皮肤的上皮细胞.方法 获取转增强型绿色荧光蛋白基因的C57BL/6J小鼠原代骨髓细胞和野生型C57BL/6J小鼠原代表皮干细胞,植入野生型C57BL/6J小鼠背部创面并打包.分A、B两组各10只,A组每只植入1.0×107个单纯骨髓细胞,B组每只植入混合骨髓细胞、表皮干细胞各1.0×107个.创面痊愈后应用荧光法和免疫组织化学技术检测新生皮肤内EGFP的表达.结果 两组动物3个月后创面痊愈并有完整的毛发生长.A组新生皮肤内未见EGFP的表达;B组所有新生皮肤(100%)均可见EGFP阳性细胞群,多分布在毛囊内.结论 创伤后小鼠毛囊的再生过程中,骨髓细胞-表皮干细胞接触诱导对骨髓来源细胞向毛囊上皮细胞转化至关重要.  相似文献   

13.
大鼠骨髓基质干细胞体外诱导分化为类许旺细胞   总被引:4,自引:4,他引:4  
目的 研究大鼠骨髓基质干细胞在体外分化为类许旺细胞的方法。方法 采用β—巯基乙醇、全反式视黄酸、Forskolin、碱性成纤维细胞生长因子等依次按顺序诱导。神经胶质纤维酸性蛋白、S—100免疫细胞化学染色鉴定、计数诱导前后不同时间的细胞阳性表达率。结果 诱导后骨髓基质干细胞形态改变,胞体呈椭圆形,有2—3个纤细的细胞突起,成纵形栅栏状排列,免疫细胞化学染色神经胶质纤维酸性蛋白表达率为42.5%-68.7%、S—100表达率为39.6%-60.2%。结论 采用β—巯基乙醇、全反式视黄酸、Forskolin、碱性成纤维细胞生长因子、血小板源生长因子、HRG可以诱导大鼠骨髓基质干细胞在体外分化为类许旺细胞。  相似文献   

14.
目的 探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)与支架材料复合,并种植到动物体内后的定位及成骨情况。方法 分离培养绿色荧光蛋白(GFP)小鼠BMSCs,体外扩增后与猪脱细胞骨基质材料复合,植入裸鼠背部作为实验组,并以单纯材料植入作为对照组,8周后进行大体观察、常规组织学检查及荧光检测、结果 实验组移植物周围部成骨明显,GFP阳性细胞较多;中央部材料降解吸收,GFP阳性细胞少见。对照组成骨较少。结论 BMSCs作为种子细胞参与了骨重建,同时GFP示踪是观测BMSCs的一种较好方法。  相似文献   

15.
目的 对碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)增强重组人骨形态发生蛋白-2(recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)诱导成骨能力的剂量依赖性进行研究。方法280只BALB/c小鼠随机分为8组,每组35只,实验组rhBMP-2的剂量均为0.5mg,bFGF的剂量分别为0、2、10、40、80、300、500活性单位(IU);设立单纯牛松质骨载体组为对照组。按实验设计,分别将rhBMP-2混悬液及bFGF-PVP溶液与牛松质骨载体充分混匀,负压下真空抽吸,冻干。将复合植骨材料植入小鼠右侧股部肌袋内,各组分别于术后第3、5、7、9、14、21d六个时间点取材,进行组织学、X线分析以及钙含量测定,观察各组的诱导成骨情况。结果(1)bFGF剂量为10~80IU时,间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成均早于其它各组,成骨量多于其它各组,组织钙含量明显高于其它各组(P<0.05),提示此剂量bFGF使rhBMP-2的诱导成骨能力明显增强。(2)bFGF剂量为0.2、300 IU时,各组在间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成以及组织钙含量方面差异均无显著性意义(P>0.05),提示此剂量bhBMP-2的诱导成骨能力无明显影响。(3)bFGF剂量为500IU时,术后第21d,仅1例标本可见散在的极少量新骨形成,其组织钙含量明显低于其  相似文献   

16.
目的在肌瓣包裹气管移植段促进血液循环重建的基础上复合重组人骨形态蛋白(rhBMP)-2,观察rhBMP-2对自体及异体移植段气管软骨的诱导作用。方法16条犬随机等分为4组,取颈部5环气管为移植段。A1组:自体复合BMP/I型胶原组;A2组:自体移植组;B1组:异体复合BMP/I型胶原组;B2组:异体移植组。术后4周取材,观察比较大体及组织学改变。结果A1组软骨再生最明显(P<0.05);A2、B1组均有不同程度的软骨再生;B2组软骨再生最少。结论在肌瓣包裹移植段气管的基础上,BMP可明显诱导移植段软骨的再生,且自体移植软骨再生明显。  相似文献   

17.
Cellular events associated with the induction of bone by demineralized bone   总被引:2,自引:0,他引:2  
Implantation of demineralized bone (DB) in the form of powder or intact segments in extra skeletal sites stimulates new bone formation. Urist and co-workers presented substantial evidence that there is a noncollagenous protein that has the ability to induce bone formation. One aim of this study was to trace the process of bone formation when DB, in the form of perforated rectangular plates, is implanted subcutaneously in 2-month-old rats. A second objective was to determine whether cartilage cells play a role in the formation of bone in this model. Various DB plates with 0.25 mm diameter holes were implanted subcutaneously for 1-4 weeks in rats. One week after implantation, DB plates were covered by vascularized connective tissue that invaded the perforations. Aggregates of chondrocytes were observed within the holes and on periosteal surfaces in only a few specimens. Further cartilage proliferation was not observed, and by the 2nd week there was no evidence of endochondral bone formation. Where these cartilage-like cells were present, a thin layer of mineral was deposited around them; resorption and fibrous tissue infiltration followed. This aborted form of endochondral calcification was not followed spatially by bone formation. Patent vascularized channels were invaded by alkaline phosphatase-positive mononuclear cells and fibroblasts, and became enlarged by the enzymatic action of macrophages. The next step involved the calcification of DB plates adjacent to the wide spaces. Osteoclasts now appeared leading to the resorption of this recalcified matrix. The eroded and now enlarged lacunar surfaces were lined by newly formed bone and osteoblasts. This process continued so that, at the end of 4 weeks following implantation, the original DB plates were replaced by trabecular bone. Biochemical data on calcium and alkaline phosphatase levels in the implants paralleled the morphological observations.  相似文献   

18.
目的 观察胰岛素联合骨髓基质干细胞(BMSCs)治疗帕金森病(PD)模型鼠的疗效.方法 采用贴壁法培养、纯化BMSCs,流式细胞仪检测第3代BMSCs细胞的表面标志表达情况;将6-OHDA单侧损毁成功的PD模型大鼠21只随机分为3组,每组各7只,分别移植BMSCs 12 μl(细胞密度为1×10~5个/μl)、同数量的BMSCs+胰岛素50 nmol/L和生理盐水12μl于模型鼠右侧纹状体.在干预后4周分别观察模型大鼠阿朴吗啡诱导的旋转行为的变化,运用免疫荧光观察每组2只模型大鼠脑内BMSCs细胞存活情况以及高效液相HPLC法检测每组5只模型人鼠脑内双侧黑质-纹状体区DA含量的变化.结果 (1)第3代的BMSCs表面标志物CD29、CD34、CD44和CD45表达分别为97.1%、0.0%、99.0%和0.5%;(2)细胞移植治疗4周后联合组旋转次数较BMSCs组(P<0.05)和生理盐水组(P<0.01)明显减少;(3)免疫荧光观察模型鼠脑内BMSCs细胞存活情况:BrdU阳性细胞数量胰岛素+BMSCs组干预4周后BrdU阳性细胞数比BMSCs组明显增多(P<0.01);(4)HPLC结果示:胰岛素联合组模型鼠脑内黑质.纹状体区DA含量虽较其他两组增加,但差异无统计学意义(P>O.05).结论 胰岛素联合BMSCs移植治疗PD模型的疗效总体好于BMSCs组和生理盐水组.  相似文献   

19.
The effect of phosphate supplementation on bone remodeling was assessed in six mature, healthy beagle dogs. The phosphate supplement was given in divided doses orally, daily for 12 weeks in the form of a neutral potassium phosphate preparation. The dose averaged 108 mg P/kg per day, which is double the normal canine phosphorus intake. Bone remodeling was assessed by measurement, at sacrifice, of areas of cortical bone containing different colorcoded tetracyclines which had been continuously administered during 12-week control and treatment periods; remodeling was assessed kinetically during the control and treatment periods by replicate studies employing47Ca intravenously.Both techniques demonstrated that the principal effect of phosphate supplementation was a significant stimulation of bone formation. Within cortical bone, formation was doubled, from an average of 2.7% to 5.3% per year. The major location of new bone deposits was endosteal. Whole skeletal mineral accretion, measured kinetically, increased 45% above an average control value of 0.154 g/day. These studies suggest that, in the adult dog, normal plasma phosphate levels are suboptimal for new bone formation.Even with this short duration of administration, phosphate produced microscopic calcification of the renal parenchyma. However, there was no biochemical evidence of renal functional impairment.  相似文献   

20.
同种异体骨髓基质细胞肌肉内成骨分化的实验研究   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的 观察并探讨同种异体兔骨髓基质细胞在未接受免疫抑制剂的正常兔肌肉内移植后的免疫原性、存活及成骨状况.方法 首先通过兔谱系差异选择供、受体,并采用淋巴细胞反应进一步证实免疫学错配,之后抽取兔骨髓、体外分离培养、获取骨髓基质细胞,体外加矿化条件培养液诱导成骨、并对成骨特性予以鉴定后,将异体骨髓基质细胞移植入受体兔肌肉内,从淋巴细胞转化率、淋巴细胞杀伤活性、组织学检查、种子细胞体内成活及成骨情况等方面检测. 结果 术后各检测时间,异体骨髓基质细胞移植未诱发淋巴细胞大量增殖反应(P>0.05),淋巴细胞杀伤活性与自体组差异无统计学意义(P>0.05),移植区未见到大量炎性细胞浸润,经组织学及免疫组化染色证实异体骨髓基质细胞在受体组织内存活,8周后于异体肌肉中形成骨组织. 结论 同种异体骨髓基质细胞移植,未诱发免疫排斥反应,在无免疫抑制剂应用的情况下,移植细胞在受体肌肉内存活、并形成骨性组织.  相似文献   

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