PFGE法分析多血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒

目的:对从食物中毒样品中分离到的7株副溶血性弧菌作常规鉴定及脉冲场凝胶电泳(PFGE)同源性分析,以明确致病因子。方法:按GB/T4789.7-2008进行副溶血性弧菌分离、生化鉴定、神奈川试验、血清分型;Pulse-Net PFGE分子分型标准实验室操作方法作同源性分析。结果:7株副溶血性弧菌分成三个血清型,即O3∶K6型5株,O4∶K8型和O1∶K56型各1株,分别属于三种不同的PFGE条带型,其中6株菌神奈川试验阳性。结论:这次食物中毒可能为以O3∶K6型为主的不同克隆群副溶血性弧菌混合感染所致。     

一起副溶血性弧菌引起食物中毒的实验室检测

目的对某集团公司食堂发生的一起食物中毒病原菌进行实验室检测。方法参照WS271-2007、WS287-2008、WS289-2008和GB4789.10-2010对采集的29份样本进行肠道致病菌检测,对检出的副溶血性弧菌用ATB细菌鉴定仪进行生化鉴定,以及血清分型、神奈川试验。结果从29份样本中检出17株副溶血性弧菌,生化反应一致,血清学试验均为O3:K6型,神奈川试验均阳性。结论本次食物中毒是由副溶血性弧菌引起。     

杭州市上城区与富阳市副溶血性弧菌食物中毒流行株的分型研究

目的:研究杭州市上城区与富阳市副溶血性弧菌食物中毒株与不同流行株进行耐热溶血素基因分析。方法:采集可疑食物标本等104株进行副溶血性弧菌血清分型,对45株流行株应用PCR技术对TDH和TRH检测。结果:富阳市1997年、1999年-2001年、2003年-2004年副溶血性弧菌以O1:K6、O3:K6、O4:K8三个血清型为食物中毒优势菌型;上城区2005年-2007年以O1型23株;O2型1株;O3型37株;O4型25株;O5型1株;O10型1株为食物中毒优势菌。用PCR技术对45株TDH和TRH进行检测结果 O1型16株,15株TDH阳性,1株TDH阴性;O3型9株TDH阳性;O4型20株,17株TDH阳性,3株TDH阴性。45株TRH1和TRH2全部阴性。结论:杭州市上城区与富阳市副溶血性弧菌所致食物中毒优势菌型以O1、O3、O4和O2、O5、O10血清型为主,能够为食物中毒疾病预防和流行病学调查提供依据。     

副溶血性弧菌及其引起的食物中毒检验研究进展

在沿海地区 ,副溶血性弧菌是引起食物中毒的重要病原菌。近年来 ,由副溶血性弧菌与其它细菌混合感染引起食物中毒屡见报道 ,主要是生食或加热不彻底的熟食。 1995年以前检出频率最高的副溶血性弧菌血清型为O4 :K8,1996年以后由产生耐热的直接溶血毒素 (TDH)的O3:K6取而代之。用于副溶血性弧菌的快速检验法有噬菌体裂解法、PCR法、PFGE法。采用免疫磁株法可有效地收集、浓缩神奈川现象阳性的副溶血性弧菌 ,可显著提高环境样品及食品中病原性副溶血性弧菌的检出率     

一起副溶血性弧菌引起的群体性食物中毒事件溯源分析

目的 对一起副溶血性弧菌引起的群体性食物中毒事件进行溯源分析,为避免类似食物中毒事件发生提供依据。方法 对采自该食物中毒事件现场的接触者肛拭子、食物样本、环境涂抹样本进行病原学检测,并对分离出的副溶血性弧菌进行毒力基因鉴定、血清学分型和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型。结果 采集的38份样本中,有21份（19份肛拭子、2份环境涂抹样本）检出副溶血性弧菌,检出率为55.3%。分离出的21株副溶血性弧菌血清型均为O3:K6,其tlh/tdh毒力基因为阳性,PFGE分子分型显示高度同源（同源性在98.7%～100.0%之间）。结论 综合流行病学调查结果和实验室检测结果判定,引起该群体性食物中毒事件的病原菌为携带tlh/tdh基因的O3:K6型副溶血性弧菌。建议监管部门加强卫生监管力度,避免类似事件的发生。     

杭州市上城区2005～2007年食物中毒事件病原体分析

目的：研究调查分析杭州市上城区2005年-2007年食物中毒事件的病原体动向，重点对副溶血性弧菌菌株进行血清分型，即不同血清型的耐热溶血素基因分析，为防止食物中毒事件的发生提供可靠的依据。方法：对采集自2005年-2007年上城区发生食物中毒事件中的食品、患者粪便、患者肛拭、呕吐物、厨师手涂抹样、食品操作间涂抹样等，进行微生物学检验、副溶血性弧菌血清分型，应用PCR技术对其中45株副溶血性弧菌进行耐热直接溶血素基因（TDH）和耐热直接溶血素相关基因（TRH）的检验。结果：2005-2007年共发生27起食物中毒，由副溶血性弧菌引起的食物中毒事件发生16起（59.26%）。由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件发生7起（25.93%）。有4起食物中毒事件由2种及2种以上致病菌引起，其中2起由副溶血性弧菌、致病性大肠埃希菌和变形杆菌混合感染引起食物中毒；1起由副溶血性弧菌、致病性大肠埃希菌混合感染引发食物中毒；1起由副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、致病性大肠埃希菌混合引发食物中毒。1位凉菜制作厨师同时带有大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌等三种致病菌引发食物中毒。对88株副溶血性弧菌进行血清分型，单独1种血清型副溶血性弧菌食物中毒事件发生14起（70%），由2种或2种以上混合血清型副溶血性弧菌引发食物中毒事件6起（30%）。26起由副溶血性弧菌引起的食物中毒事件中，88株副溶血性弧菌进行血清分型：检出01型23株（26.14%），检出02型1株（1.14%），检出03型37株（42.05%），检出04型25株（28.41%），检出05型1株（1.14%），检出010型1株（1.14%）。45株不同血清型的副溶血性弧菌，应用PCR技术进行耐热直接溶血素基因和耐热直接溶血素相关基因（TDH和TRH）的检测分析。结果表明：O1型的16株菌中有15株TDH阳性，1株TDH阴性；O3型的9株菌全部TDH阳性；O4型的20株菌中，17株TDH阳性，3株TDH阴性。45株菌的TRH1和TRH2全部阴性。结论：加强对食品卫生饮食行业的监督管理，提高对食物中毒病原体快速准确检测，以控制减少食物中毒的发生。     

一起因多种致病菌污染引发食物中毒的实验诊断和分析

目的:一起食物中毒的实验室调查分析.方法:采集病人肛拭8份、熟食砧板涂抹物2份,熟食菜刀涂抹物2份,操作台面涂抹物1份,熟食冰箱内壁涂抹物1份,剩菜3份,共17份样品进行检测.结果:8份肛拭中,检出3份副溶血性弧菌,其中1份肛拭同时检出奇异变形杆菌和河弧菌;1份熟食菜刀涂抹物中检出奇异变形杆菌;1份剩菜中同时检出副溶血性弧菌、奇异变形杆菌和溶藻弧菌.结论:本次食物中毒为致病性弧菌和奇异变形杆菌引起的食物中毒.     

利用免疫磁珠法分离环境及食品中产生TDH副溶血性弧菌的研究

采用免疫磁珠法分别从 1份海水、 1份海泥和 3份蛤肉中检出了神奈川现象阳性 ,并产生耐热直接溶血毒素 (TDH )的副溶血性弧菌 ,血清型为O3 :K6。该方法与一般的细菌培养分离法相比 ,极大地提高了环境样品及食品中病原性副溶血性弧菌的检出率 ,也为研究TDH阳性副溶血性弧菌在环境中的分布及预防由其引起的食物中毒提供了依据     

副溶血性弧菌引起食物中毒的同源性研究

目的:探讨深圳市龙岗区由副溶血性弧菌O3:K6型引起食物中毒的分子流行病学研究和同源性分析.方法:收集不同地区、不同时期食物中毒事件的副溶血性弧菌菌株,并从7宗相同血清型O3:K6的溶血性弧菌菌株中,每宗取1株副溶血性弧菌进行生化鉴定、血清学分型、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析.结果:7株副溶血性弧菌,它们的血清型均为O3:K6,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析结果显示,有2株副溶血性弧菌图谱一致,具有高度的同源性;5株副溶血性弧菌为紧密相关.结论:通过PFGE分子分型的方法了解到该血清型O3:K6的副溶血性弧菌菌株之间具有紧密相关和高度的同源性,表明副溶血性弧菌血清型O3:K6是该地区引起腹泻的主要菌型.     

食物中毒中副溶血性弧菌的毒力基因及同源性分析

目的探讨无锡一起食物中毒事件中副溶血性弧菌分离株的毒力基因、耐药性及分子分型情况。方法对5份食品样品、8份环境涂抹样品、7份患者肛拭子、1份厨师肛拭子分别进行致病菌的分离鉴定、毒力基因检测、血清学分型、药敏试验以及脉冲场凝胶电泳(PFGE)图谱分析。结果分离自患者肛拭子的6株副溶血性弧菌血清型为O3∶K6型,毒力基因检测跨膜转录激活蛋白基因(tox R)阳性,耐热直接溶血素基因(tdh)阳性,耐热相关溶血素基因(trh)阴性,PFGE分型图谱一致;分离自食品和环境的2株副溶血性弧菌血清型为O4∶K42型,毒力基因检测tox R阳性,tdh阴性,trh阴性,PFGE分型图谱一致;两者之间的同源性50%。8株副溶血性弧菌对临床常用的8种抗生素均敏感。结论该起食物中毒由O3∶K6型副溶血性弧菌感染引起,排除了所采集食品和环境样品被污染作为传染源的可能。     

35株引起食物中毒的副溶血性弧菌病原学特征分析

目的了解广东省部分地区近年发生的副溶血性弧菌食物中毒菌株血清分型、毒力基因及耐药状况,为预防和控制由副溶血性弧菌引起的食物中毒提供科学依据。方法对35株由湛江、东莞、中山、惠州市疾病预防控制中心从食物中毒病例中分离获得的副溶血性弧菌进行血清分型;采用PCR检测副溶血性弧菌的耐热直接溶血素基因（tdh）和耐热直接相关溶血素基因（trh）;采用K-B纸片扩散法进行药敏试验。结果 35株从食物中毒病例中分离到的副溶血性弧菌菌株分属6个血清群,分别为O1、O2、O3、O4、O8及O10群,分别占20.0%、2.9%、62.9%、8.6%、2.9%、2.9%,其中O3：K6血清型共检出18株,占51.4%（18/35）。tdh携带率为88.6%（31/35）,trh携带率为8.6%（3/35）。35株副溶血性弧菌对链霉素、氨苄西林和阿米卡星的耐药率分别为100.0%、80.0%（28/35）和74.3%（26/35）,而对四环素、环丙沙星、复方新诺明、磺胺复合物S3、氯霉素、头孢曲松的敏感性均达80%以上（82.9%～94.3%）。结论在广东省部分地区引起食物中毒的副溶血性弧菌血清型主要是O3群,其中又以O3：K6为主,主要携带tdh基因,对大多数抗生素敏感。     

一起副溶血性弧菌食物中毒的病原学分析及分子分型溯源研究

目的对1起食物中毒事件分离的副溶血性弧菌进行病原学检测及分子分型溯源研究。方法按照《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》GB 4789.7—2013对事件中病例的粪便/肛拭子、可疑食物等10份样本进行副溶血性弧菌的分离和鉴定。利用荧光PCR对分离出的副溶血性弧菌特异的ToxR基因进行检测,并采用多重荧光PCR对其进行不耐热性溶血毒素(tlh)、耐热直接溶血素(tdh)毒力基因和耐热相关溶血素(trh)毒力基因进行检测;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术进行电泳获得指纹图谱,并经Bio Numerics软件对其进行聚类分析。结果从4例病例的粪便/肛拭子和2份可疑食物样本中共分离出6株副溶血性弧菌,含5种血清型,分别为O1:KUT、O1:KUT、O3:K6、O4:KUT、OUT:KIII、O3:KUT。6株副溶血性弧菌均扩增出副溶血性弧菌特异的ToxR基因。所有菌株tlh基因均为阳性,分离自病例的粪便/肛拭子的4株菌株tdh毒力基因均为阳性;分离自可疑食物的2株菌株中有1株为tdh毒力基因阳性,另1株为阴性;所有分离菌株trh毒力基因均为阴性。聚类分析显示,菌株间相似系数为62.3%~100.0%。分离自可疑食物的菌株与病例的菌株带型不一致,为不同菌株,分离自病例的同一血清型的菌株同源,不同血清型为不同克隆。结论这是1起由携带tdh毒力基因的O1、O3、O4等多种血清型的不同克隆副溶血性弧菌混合感染引起的食物中毒事件。     

1起副溶血弧菌性食物中毒的病原分析

目的 调查1起食物中毒的致病病原,为食源性疾病防控提供依据.方法 对1起食物中毒事件进行流行病学调查;采集可疑食材和病例标本,将分离鉴定的副溶血弧菌进行血清学分型、多重PCR毒力基因检测、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型分析.结果 在3名患者粪便均分离到副溶血弧菌,检出2种血清型,2株为O3∶K6血清型,1株为O4∶K8血清型,毒力基因检测结果均为trh(-),tdh(+),tlh(+).PFGE图谱聚类分析得到2种带型,其中2株带型一致,相似度为100.0％,2种血清型相似度81.3％.结论 该食物中毒是副溶血弧菌性食物中毒,水产品在流通加工等环节存在交叉污染,应加大监管力度和食品安全宣教.     

脲酶阳性副溶血性弧菌的病原学研究

目的描述引起食物中毒的脲酶阳性副溶血性弧菌(Vp)菌株的血清分型和有关毒力基因的分布,为防制Vp食物中毒的有关研究提供基础。方法对86株脲酶阳性的副溶血性弧菌食源性疾病分离株按照GB/T 4789.7—2008进行血清分型和神奈川试验;用复合PCR技术同时检测Vp的耐热直接溶血素毒力基因(tdh)和耐热直接相关溶血素毒力基因(trh)。调阅、分析食物中毒事故个案调查登记表中被采样人的临床症状。结果 86株脲酶阳性Vp神奈川试验全部阳性,均来自有腹痛、腹泻等细菌性食物中毒症状且最终被判定为食物中毒病例。其中O3∶K6血清型28株,O4∶K8血清型10株,其他血清型16株,不能分型32株。86株脲酶阳性中47株携带tdh基因,1株携带trh基因,未发现同时携带tdh基因和trh基因的菌株。结论引起辖区食源性疾病脲酶阳性Vp主要血清型为O3∶K6,其次是O4∶K8。脲酶阳性的菌株也可拥有tdh毒力基因,有较强的致病性,当食品检测中检出此类菌株时,应特别引起重视。     

广东省2009年副溶血弧菌暴发与散发菌株的病原学特征分析

目的 了解2009年广东省副溶血弧菌食物中毒分离株和腹泻患者监测分离株的血清分型、毒力基因携带情况及分子特征.方法 对95株副溶血弧菌食物中毒分离株和15株腹泻患者分离株进行血清分型,耐热直接溶血素相关基因(trh)和耐热直接溶血素基因(tdh)PCR检测以及选取不同血清型副溶血弧菌81株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型.结果 从监测腹泻患者分离的15株副溶血弧菌,血清型以O3:K6(46.67％)和O4:K8(33.33％)为主;从11起副溶血弧菌食物中毒分离的95株菌,血清型以O3:K6(44.21％)和O4:K8(28.42％)居多;7株食品分离株都不是O3:K6血清型;93株(84.54％)为tdh+ trh-菌株,13株(11.81％)为tdh-trh菌株,3株(3.65％)为tdh+ trh+菌株.81株副溶血弧菌的PFGE相似值为57.7％～100.0％,被分为36种不同的PFGE型别,PFGE001型和029型为2009年广东省副溶血弧菌优势PFGE型别.结论 2009年广东省引起感染性腹泻和食物中毒的副溶血弧菌以O3:K6和O4:K8型为主要血清型,多数菌株携带tdh基因,存在优势PFGE型别菌株不断引起各地区的散发和暴发.     

环境样品中病原性副溶血性弧菌高效检出法

〔目的〕为了提高环境样品中病原性副溶血性弧菌的检出率。〔方法〕采用PCR法、免疫磁珠法和神奈川现象培养基三者结合使用。〔结果〕分别从一份海水和一份海泥中检出了产生TDH ,神奈川现象阳性的副溶血性弧菌 ,血清型为O3 :K6。该血清型与同期发生的副溶血性弧菌食物中毒患者检出率最高的副溶血性弧菌血清型相同。经SfiⅠ ,NotⅠ限制性内切酶处理后 ,脉冲场凝胶电泳比较 ,一份海水与一名患者分离菌株、一份海泥与两名患者分离菌株的条带相同 ,表明为同一克隆派生而来。同时也说明食物中毒的发生与污染了TDH阳性O3:K6副溶血性弧菌的海水有关。〔结论〕该方法解决了用一般细菌培养分离方法很难从引起食物中毒的环境样品中检出病原性副溶血性弧菌的困扰 ,也为研究TDH阳性副溶血性弧菌在环境中的分布及由其引起的食物中毒的预防提供了重要依据。     

一起副溶血性弧菌食物中毒的实验室检测

目的:对一起食物中毒的可疑病原菌进行相关的实验室检测。方法:按照GB/T4789-2003[1]、GB17012-1997[2]、《卫生防疫细菌检验》[3],对剩余食物9份、冷冻食品3份、涂抹样品3份及食物中毒患者肛拭子27份进行致病菌检测。结果:27份患者肛拭标本中,检出副溶血性弧菌25份(占92.6%),9份剩余食物中检出副溶血性弧菌1份(占11.1%),3份涂抹样品检出1份副溶血性弧菌(占33.3%)。结论:综合流行病学调查、可疑致病菌检测,证实本次食物中毒为副溶血性弧菌引起。     

1起由副溶血性弧菌引起的食物中毒

[目的]调查此次集体食物中毒的病原菌,为防止类似食物中毒事件的发生提供依据。[方法]按照GB/T4789.7-2008《食品卫生微生物学检验》[1],对分离到的病原菌进行生化鉴定试验。[结果]2份粪便标本和1份剩余食物(大虾)均分离到副溶血性弧菌。所检出的3株副溶血性弧菌经生化分型为同一生化型,神奈川试验均为阳性,具有同源性。呕吐物未检出致病菌。[结论]结合流行病学、患者临床表现和实验室检测结果,证实此次食物中毒是由副溶血性弧菌引起。     

一起由副溶血性弧菌引起的食物中毒的实验室检测

目的对一起副溶血性弧菌引起的食物中毒病原菌进行毒力基因及分子分型研究,明确传染源。方法参照WS 271—2007等标准,对食物中毒患者肛拭子和剩余食物进行致病菌分离,并对分离的可疑致病菌进行生化鉴定、毒力基因检测、血清学分型、脉冲场凝胶电泳(PFGE)和药敏试验。结果 16份来自患者的样本,1份来自食品龙虾的样本和1份盛装龙虾的容器涂抹物样本均检出O_3:K6血清型副溶血性弧菌。副溶血性弧菌毒力基因检测均为tdh阳性、trh阴性。PFGE分型显示,所有的菌株为高度相似克隆,相似度为100%。结论该起食物中毒事件为O_3:K6血清型副溶血性弧菌染污的龙虾所致。PFGE可有效应用于食物中毒溯源分析及分子流行病学研究。     

食物中毒因素及其病原菌菌型的动态分折

目的:本文对75起食物中毒因素以及病原菌菌型进行了动态观察,应用病原菌血清学分型分折了食物中毒菌型动态,为全方位防止干预措施提供了科学依据。方法:将采集到的中毒标本,如食物、患者粪便、患者肛拭、呕吐物、厨师手涂抹样、食品操作间涂抹样等进行病原菌检验,血清学分型,应用PCR对TDH和TRH检验。结果:1、1978年-2004年引起食物中毒48起,死亡4人为家庭和其它场所。2、2005年-2007年引起食物中毒27起,其中副溶血性弧菌16起(59.26%);金黄色葡萄球菌7起(25.93%)。结论:1、4起由2种及2种以上病原菌混合感染(2起副溶血性弧菌、致病性大肠埃希菌和变形杆菌,1起副溶血性弧菌、致病性大肠埃希菌,1起副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、致病性大肠埃希菌)引起的食物中毒。2、75起食物中毒因素主要来自以农村家庭引发起数最多,其它来自多方面病菌污染,尤其对餐饮、食品行业污染严重,中毒次数呈增长趋势。3、88株副溶血性弧菌,其中单独1种血清型引起有14起(70%),2种或2种以上混合血清型有6起(30%),分型结果:O1型23株(26.14%),O2型1株(1.14%),O3型37株(42.05%),O4型25株(28.41%),O5型1株(1.14%),O10型1株(1.14%);其中O3:K6血清型菌株呈优势流行株和O4:K8血清型为暴发型。O1:k25血清型为散在型,O2血清型、O5血清型及O1血清型亦属散发。4、45株副溶血性弧菌进行TDH和TRH检测,主要以TDH阳性和TRH阴性菌株。不同血清型中,O1型16株菌中有15株TDH阳性,1株TDH阴性;O3型9株菌全部TDH阳性;O4型20株菌中,17株TDH阳性,3株TDH阴性。5、4株金黄色葡萄球菌经肠毒素基因检测,3株金黄色葡萄球菌肠毒素为基因C,1株为基因A、C。