黑龙江地区造血干细胞志愿供者HLA-DRB1基因频率的分布特征

笔者应用PCR-SSP和PCR-SSO方法对黑龙江地区造血干细胞库9548份标本进行HLA-DRB1基因分布调查,了解其多态性。1材料与方法1.1样本选择9548份标本来自2003~2005年哈尔滨、齐齐哈尔、牡丹江、佳木斯、鸡西、大庆等地的造血干细胞志愿捐献者,每份静脉血标本5ml,EDTA抗凝。采用DNA快速提取试剂盒(Gentra公司)提取DNA,每份样本DNA均采用紫外分光光度计(Eppendof公司)测定DNA浓度和纯度,DNA浓度为(30~410)μg/ml,A260/A280为1.6~2.0。1.2试剂与仪器DR SSP UniTray(低分辨分型试剂盒(Pel-Freez公司);Micro SSOtmGeneric HL…     

HLA-DRB1等位基因与湖北汉族急性淋巴细胞白血病相关性的研究

目的探讨HLA-DRB1等位基因与湖北汉族急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的关联性。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法,对154名湖北汉族ALL患者(ALL组)和181名健康人(对照组)进行HLA-DRB1等位基因分型。结果ALL组HLA DRB112基因频率显著高于对照组(15.58%vs10.50%,χ2=4.27,RR=2.24,P<0.05),而HLA DRB107基因频率显著低于对照组(7.79%vs12.7%,χ2=4.57,RR=0.55,P<0.05)。结论HLA-DRB112等位基因可能对湖北汉族ALL有遗传易感作用,而HLA-DRB107等位基因可能对湖北汉族ALL患者有遗传拮抗作用。     

HLA-DRB1高分辨测序分型与48例非亲缘性脐血移植者GVHD相关性分析

1998年6月至2003年7月，广州脐血库向国内21家移植中心提供非亲缘异基因脐血移植54例。本研究采用PCR产物直接测序法对HLA—DRB1进行高分辨分型（PCR—sequencing based typingPCR—SBT），并结合HLA—SSP低分辨分型结果，探讨非亲缘性脐血移植供／受者HLA—DRB1等位基因及其亚型与脐血移植GVHD发生率的关系。利用盐析或柱提法提取48例非亲缘性脐血及移植患者全血DNA，采用HLA—SBT方法分别对HLA—DRB1等位基因进行高分辨分型，并与HLA—SSP（HLA—sequencing specific primers）低分辨结果进行比较分析。结果表明：采用双盲法对48例非亲缘性脐血移植供／受者样本HLA—DRB1进行高分辨分型，结果HLA—DRB1等位基因亚型匹配全相合病例的GVHD发生率（25％）显著低于不完全相合病例的GVHD发生率（65．6％）（P=0．008）。结论：对HLA—DRB1采用高分辨分型方法在非亲缘性脐血移植HLA分型方面具有重要的临床应用价值。     

HLA-DRB1等位基因多态性与Graves'病的关系

目的 探讨Graves'病(GD)与HLA-DRB1等位基因多态性之间的关系.方法 随机选取2019年8月至2020年10月就诊于该院的GD患者120例为GD组,另选取同期性别和年龄相匹配的健康体检者100例为对照组.使用高分辨率聚合酶链反应序列分型(PCR-SBT)法对GD组及对照组进行HLA-DRB1等位基因测序....     

HLA-DRB1~*等位基因与肺结核的相关性研究

目的探讨人类白细胞抗原HLA-DRB1*等位基因与肺结核发病相关性,寻找与肺结核发病可能相关的HLA-DR易感基因。方法采用病例-对照的研究方法,用PCR-SSO分型技术对80名肺结核患者和105名健康对照者的HLA-DRB1基因分型,统计分析比较基因频率和相对危险率。结果肺结核病组中的HLA-DRB1*14频率明显高于对照组(10.63%vs3.81%),差异有显著性统计学意义(χ2=6.6955,P<0.05),相对危险率2.91。结论HLA-DRB1*14基因可能与肺结核的易感性相关。     

四川骨髓库汉族人群HLAD-RB1~*14等位基因分布

目的研究四川骨髓库中四川籍汉族人群HLAD-RB1*14等位基因分布。方法在四川骨髓库8934名四川汉族造血干细胞捐献志愿者中随机筛选107例中低分辨为DRB1*14的样本,以PCR-SBT分型技术检测DRB1位点的第2外显子以鉴定HLAD-RB1*14等位基因。结果共检出6种DRB1*14等位基因,包括DRB1*140101/1454(56.0%),DRB1*1403(1.8%),DRB1*1404(11.0%),DRB1*140501(27.5%),DRB1*140701(1.8%)和DRB1*1425(1.8%);其中最主要的DRB1*140101/1454频率与美国亚裔/太平洋岛民接近,而与高加索人、非洲裔美国人、西班牙裔及韩国人和中国北方汉族中的分布有显著性差异;DRB1*140501和DRB1*1404则与中国北方汉族分布类似;本研究未检到的等位基因在四川汉族DRB1*14阳性个体中的频率低于3%。结论四川汉族人群HLA-DRB1*14等位基因呈现多样性并存在自身特点。     

湖北骨髓库志愿者HLA-DRB1~*04等位基因及单体型分布研究

目的研究湖北骨髓库志愿者HLA-DRB1*04等位基因分布,并分析其单体型频率分布的特点。方法采用序列特异性寡核苷酸探针聚合酶链反应技术(PCR-SSOP)及聚合酶链反应-直接测序技术(PCR-SBT)对分库2744名志愿者进行HLA-A、B、DRB1高分辨率分型,并直接计算各基因频率,采用R×C表χ2检验比较不同人群间基因频率,使用arlequin软件进行单体型频率计算、Hardy-Weinberg平衡卡方检测。结果 2 744例HLA-DRB1基因分型结果中,检出DRB1*04阳性个体776例,检出DRB1*04低分辨基因型频率为0.173,检出DRB1*0401、DRB1*0402、DRB1*0403、DRB1*0404、DRB1*0405、DRB1*0406、DRB1*0407、DRB1*0408、DRB1*0410,9个等位基因。其中DRB1*0401、DRB1*0405、DRB1*0406是优势基因,DRB1*0403是常见型基因。其基因频率前4位,与中国台湾慈济脐血库、日本人、高加索人、非洲裔美国人、德国人两两比较,除基因型频率最高的DRB1*0406、0405与中国台湾人群无差异外,其他差异均有统计学意义(P<0.05)。此人群DRB1*04低、高分辨杂合度分别为90.98%、97.94%,其高分辨率纯合子呈现高度多样性。B*1501-DRB1*0406、A*1101-DRB1*0406、A*1101-DRB1*0405、B*5401-DRB1*040、A*2402-DRB1*0405、A*1101-B*1501-DRB1*0406、A*3001-DRB1*0401、B*4001-DRB1*0405为主要单体型。结论湖北骨髓库志愿者HLA-DRB1*04等位基因及单体型频率呈高度多态性,总体频率分布接近中国台湾、日本人群,且有其自身的特点。     

DNA微阵列技术检测HLA-DRB1基因分型

目的采用DNA微阵列分型方法,对HLA-DRB1基因进行分型研究。方法设计分型检测寡核苷酸探针,制备HLA-DRB1基因分型微阵列。设计PCR引物,以1:20引物比例不对称扩增HLA-DRB1基因的第2外显子,Cy3荧光标记扩增产物,作为杂交模板。用差异选择法杂交信号强且特异性好的探针。Cy3荧光标记PCR扩增产物与微阵列探针杂交反应,结果经荧光扫描,并用分型软件分析判断阳性探针和HLA-DRB1基因型。结果10例临床血样的DNA微阵列分型结果与PCR-SSP分型结果相符,20例未知血样的DNA微阵列分型结果与DNA测序分型结果符合率为97%。结论DNA微阵列技术具有高通量、简便、低成本的优势,采用DNA微阵列分型方法,对HLA-DRB1基因进行分型研究,表明HLA-DRB1DNA微阵列分型为一种可行的基因分型新技术。     

中华骨髓库湖北分库汉族志愿者HLA-DRB1高分辨基因多态性分析

目的检测中华骨髓库湖北分库汉族志愿者HLA-DRB1高分辨基因型,了解其基因多态性分布特点。方法采用序列特异性寡核苷酸探针聚合酶链反应(PCR-SSOP)技术对分库1 013名汉族志愿者进行HLA-DRB1高分辨分型。结果共检出HLA-DRB1基因型(低分辨型)12个,检出基因亚型(高分辨型)37个,其中前5位依次为DRB1*0901、DRB1*1501、DRB1*0803、DRB1*1202、DRB1*0401,其基因频率分布与中国台湾慈济脐血库、日本、东欧裔美国人比较,存在统计学差异。结论中华骨髓库湖北分库汉族志愿者HLA-DRB1高分辨基因频率分布相对集中,其基因多态性与中国台湾、日本、东欧裔美国人存在显著性差异。     

DNA测序确认新等位基因HLA-DRB1~*1463

目的DNA测序确认1例HLA-DRB1*1463新等位基因。方法使用低分辨分型采用PCR-SSP分型技术,DNA测序采用等位基因特异性技术。结果新基因HLA-DRB1*1463序列与DRB1*140301相比,第2外显子区域有4个碱基发生突变,造成2个氨基酸发生改变。256位G>A、257位A>G、258位T>C,导致86编码子的氨基酸由Asp>Ser;286位C>A,导致96编码子的氨基酸由Leu>Iso。在大约4万例随机骨髓捐献者中未发现其它带有该基因的个体。结论该基因为HLA-DRB1的新等位基因,2006年10月30日被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-DRB1*1463。     

山东脐血库保存4000人份脐血资料的统计分析

对山东脐血库保存的 4 0 0 0人份脐血的部分结果进行了统计分析 ,每份脐血的平均有核细胞数超过 1.2× 10 9,每份脐血CD34+ 细胞总量平均为 3.9× 10 6,有 76 8人份脐血有核细胞数超过 1.5× 10 9,一般可满足体重 4 0kg以上的患者使用。对基因频率的分析表明 ,常见基因与中国其他地区的统计结果相近 ,有 4 0 %的患者可以在山东脐血库找到 1个位点不合的脐血     

自身免疫性肝病与HLA-DRB1等位基因相关性研究

目的通过检测人类白细胞抗原(HLA)Ⅱ类等位基因DRB1*0401～*0408,分析基因频率与临床表现的关系,初步探讨HLA-DRB1多态性与自身免疫性肝炎和原发性胆汁性肝硬化的相关性。方法按自身免疫性肝炎和原发性胆汁性肝硬化的诊断标准筛选病例。以31例江苏地区汉族人自身免疫性肝病患者(自身免疫性肝炎12例,原发性胆汁性肝硬化19例)为研究对象,以42例健康人为对照组。采集静脉血,用酚-氯仿法提取全血DNA。用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR- SSP)技术检测HLA-DRB1*0401～*0408等位基因频率。结果自身免疫性肝病患者HLA-DRB1*0404等位基因的频率(35.5%)明显高于健康人(7.1%),RR为7.15,(P<0.005),其他各等位基因频率在2组间虽有不同,但无统计学意义的显著性差异。自身免疫性肝炎组和原发性胆汁性肝硬化组之间HLA-DRB1*0404及其他各等位基因频率无统计学意义的显著性差异。结论HLA-DRB1*0404等位基因可能与自身免疫性肝病的发生有关联。     

广州脐血库3 605脐血供者6个月后随访

本研究回顾分析了脐血库对库存3605份脐血所进行的脐血供者6个月后的随访情况,探讨供者随访制度在脐血库运作过程中的作用。1998年6月至2004年2月间,通过电话、信函方式对捐献脐血满6个月的母亲进行了母婴健康调查随访,对脐血的质量作出了评估结果表明：有3195人接受了电话随访,18人婉拒、对于无法通过电话随访的,则采用信函调查形式．共发信392封,回信15封。电话随访每例平均耗时12分钟随访资料显示婴儿染色体异常2例、先天性甲状腺功能低下1例、粒细胞减少症1例、白化病1例、不明原因死亡5例。所有这些被查明为非正常婴儿供者的脐血均被废弃,总之：脐血库进行脐血供者6个月后的随访工作．能有效地提高库存脐血的质量。     

54例非亲缘脐血造血干细胞移植回顾性分析

本研究对广州市脐血库1998年6月至2003年7月提供的54例非亲缘脐血移植进行回顾性分析,以研究脐血移植的相关影响因素.脐血均采自广州市妇婴医院正常分娩的足月顺产孕妇,脐血分离、冻存、复温方法参照纽约脐血库标准及相关文献;选择脐血的依据是HLA相合程度及有核细胞数量.结果表明1998年6月至2003年7月间,库存脐血3475份,与21家移植中心合作提供脐血99份,治疗患者85例.其中同胞脐血移植11例.对54例非亲缘关系脐血移植病例进行统计分析显示,在54例受者中,恶性病患者43例,占79.6%,非恶性病患者11例,占20.4%,受者中位年龄9.5(1.2-33)岁,中位体重27(10-60)公斤,TNC中位输入量6.82×107/kg,移植后60天植入43例(ANC＞500/μl的中位时间为17天),植入率为79.6%.脐血移植有核细胞重建时间与输入的有核细胞数以及疾病类型相关,同HLA相合程度不相关.急性Ⅲ-Ⅳ度GVHD发生率为21.6%,慢性GVHD发生率为5.4%.6例患者出现自体恢复(11.1%).存活率42.6%.结论非亲缘性脐血造血干细胞移植尤其在治疗小儿白血病方面具有良好的应用前景.     

新生儿脐血RhD阴性稀有血型资料库的建立研究

目的 建立新生儿脐血RhD阴性稀有血型资料库,了解天津脐血库存储人群Rh血型分布情况.方法 收集2001年10月至2011年8月天津脐血库存储的154 882例健康新生儿脐血样本作为研究对象,使用试管法检测样本ABO抗原和RhD抗原,RhD阴性确认采用间接抗人球蛋白试验.结果 154882例脐血样本中检出RhD阴性58...     

脐带血HLAⅠ类定型研究

分别采用血清方法和PCR-SSP基因定型方法对102份脐带血HLA-A,-B位点进行了检测,经对比分析结果显示血清学近18.6%不能得出满意结果,HLA-A,-B位点错定率分别在6.1%和10.8%,总错误率16.9%。我们设计了16条引物,以PCR-SSP方法特异性扩增B15等位基因,并与血清学做了比较,发现大多数B15裂解物的血清学检测结果是错误的。     

甘肃汉族HLA-DRB1基因多态性与白血病的相关性研究

为了研究甘肃地区汉族白血病病人易感性与HLA-DRB1基因多态性的相关性研究并寻找白血病的易感基因,采用PCR和特异性寡合苷酸探针杂交（PCR/SSO）法,对74名西北汉族白血病工人和82名健康对照者的HLA-DRB1基因分型进行了研究.结果表明：甘肃地区汉族急性髓性白血病病人HLA-DRB1＊03（x^2=8.125,P=0.004）,HLA-DRB1＊07（x^2=13.526,P=0.000）,HLA-DRB1＊08（x^2=18.855,P=0.000）和HLA-DRB1＊13（x^2=7.039,P=0.008）明显增多;慢性髓性白血病病人HLA-DRB1＊07（x^2=5.689,P=0.017）,HLA-DRB1＊11（x^2=7.73,P=0.005）,HLA-DRB1＊12（x^2=4.234,P=0.040）,HLA-DRB1＊13（x^2=38.333,P=0.000）明显增多.急性淋巴细胞白血病病人HLA-DRB1＊01（x^2=5.294,P=0.021）明显增多.这些数据与对照组比较有差异性.结论：HLA-DRB1＊03,HLA-DRB1＊07,HLA-DRB1＊08,HLA-DRB1＊13与急性髓性白血病正相关.HLA-DRB1＊07,HLA-DRB1＊11,HLA-DRB1＊12,HLA-DRB1＊13与慢性髓性白血病的发病正相关.HLA-DRB1＊01急性淋巴细胞白血病病人的发病有一定联系.可以推测,HLA构象的多态性与白血病发生有相关性.     

异基因脐血干细胞与脐带间充质干细胞联合移植治疗假肥大型肌营养不良症一例的护理

假肥大型肌营养不良又称杜兴肌营养不良（duchenne＇s muscular dystrophy, DMD）,是一种X连锁隐性遗传病,以进行性四肢近端骨骼肌萎缩无力、小腿腓肠肌假性肥大为特征,可同时累及心肌和呼吸肌。DMD目前尚无有效的治疗方法。     

新生儿脐血AB0血型鉴定结果质量控制方法探讨

本研究探讨一种新生儿脐带血ABO血型鉴定的质量控制方法。采用血型血清学试验对脐血标本作ABO血型鉴定,对不能定出结果的疑难血型采用聚合酶链反应-序列特异性引物（Sequence Specific Primer PCR,PCR—SSP）作进一步确认。结果表明：在76120例脐血AB0血型正定型鉴定中,检出78例ABO血型弱抗原反应和难以判定血型结果的疑难标本（1％。）,经复查排除了弱凝集反应30例。检测260例脐血ABO血型反定型,相符血型148例（56．92％）,不相符血型112例（43．08％）。PCR—SSP基因分型检测58例中45例血清学表型结果与基因分型结果一致,3例表型结果与基因定型结果不相符,10例正反定型不相符标本,基因分型结果与正定型完全一致。结论：采用红细胞抗原（正定型）方法结合DNA基因分型技术检测新生儿脐带血抗原反应弱、抗体效价低的ABO血型质控效果好,是一种高效、灵敏的质量控制方法,适用于新生儿脐血AB0疑难血型的鉴定。