补肾复方下调老年大鼠激活诱导的T细胞凋亡

目的　研究补肾复方延缓衰老的免疫学机制。方法　采用电镜、ＤＮＡ凝胶电泳及ＴＵＮＥＬ标记的流式细胞仪分析技术,对激活诱导的Ｔ细胞凋亡进行定性、定量分析。结果　老年大鼠对照组细胞凋亡的百分率为４７．０％,年龄大鼠组为２２．２％（Ｐ＜０．０１）;补肾组为３７．２％,与老年大鼠对照组相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论　老年大鼠激活诱导Ｔ细胞凋亡的敏感性增高;补肾复方能降低激活诱导的老年大鼠Ｔ细胞凋亡,提示下调激活诱导Ｔ细胞凋亡可能是补肾延缓衰老的免疫学机制之一。     

补肾与活血复方调节老年鼠T细胞凋亡的对比研究(摘要)

研究老年肾虚T细胞功能减退的机制以及补肾延缓衰老的免疫学基础。方法　采用电镜、DNA凝胶电泳及TUNEL标记的流式细胞检测技术 ,对各组大鼠抗CD3单抗激活诱导的T细胞凋亡进行定性、定量分析。结果　老年组激活诱导的T细胞凋亡百分率为 47.0 % ,年轻组为 2 2 .2 % (P <0 .0 1) ;补肾组为 31.2 % ,明显低于老年组 (P <0 .0 5 ) ;活血组T细胞凋亡百分率为 43.3% ,与老年组比较无显著性差异。结论　激活诱导的T细胞过多凋亡是老年肾虚T细胞功能减退的重要机制 ,下调激活诱导的T细胞凋亡可能是补肾延缓免疫衰老的主要途径。     

补肾延缓衰老--从单基因到多基因的调控研究

为从基因水平研究补肾疗法延缓衰老的效果和机理．列举补肾方(右归丸、补肾益寿胶囊)对老年大鼠T细胞凋亡及其相关基因(Fas、FasL)．和促凋亡、抗凋亡基因mRNA．T细胞Caspase8、Caspase3活性等的影响．并与桃红四物汤比较：以及补肾益寿胶囊对老年人T细胞凋亡和促凋亡基因mRNA的影响。结果：补肾方能有效降低老年大鼠和老年人T细胞的过度凋亡。而这种作用是补肾方对各个相关基因综合调控的结果。为肾本质和中药延缓衰老的研究提出了新的思路。     

激活核因子Ｅ２相关因子２信号通路减轻高糖诱导足细胞的凋亡

【目的】 探讨激活核因子Ｅ２相关因子２（Ｎｒｆ２）通路能否减轻高糖诱导足细胞的凋亡。【方法】体外培养小鼠足细胞,分为５组：对照组、高渗组、高糖组、高糖＋叔丁基对苯二酚（ ｔＢＨＱ）,高糖＋Ｎ－乙酰半胱氨酸（ＮＡＣ）。流式细胞仪检测细胞内活性氧和凋亡;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 及ｒｅａｌ ｔｉｍｅ－ ＰＣＲ检测Ｎｒｆ２、醌氧化还原酶１（ＮＱＯ１）,血红素加氧酶（ＨＯ－１）的表达;检测足细胞丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽（ＧＳＨ）及过氧化氢酶（ＣＡＴ）。【结果】 高糖组足细胞凋亡率、活性氧及细胞ＭＤＡ高于对照组（Ｐ ＜ ０．０５）,而该组足细胞ＳＯＤ、ＧＳＨ及ＣＡＴ低于对照组（Ｐ ＜ ０．０５）;高糖＋ＮＡＣ组的足细胞凋亡率、活性氧及细胞内丙二醛低于高糖组（Ｐ ＜ ０．０５）;高糖＋ｔＢＨＱ组足细胞的总Ｎｒｆ２及核Ｎｒｆ２、 ＨＯ－１、ＮＱＯ１的表达高于高糖组（Ｐ ＜ ０．０５）,细胞内ＳＯＤ、ＧＳＨ及ＣＡＴ高于高糖组（Ｐ ＜ ０．０５）,高糖＋ｔＢＨＱ组足细胞的凋亡率、活性氧及细胞内丙二醛低于高糖组（Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 激活 Ｎｒｆ２通路降低高糖诱导足细胞的氧化应激,减轻足细胞凋亡。     

锌对睾丸生精细胞凋亡及其衰老变化的影响

目的：探讨补锌和高锌对衰老和幼年大鼠睾丸发育及其功能影响的分子机制。方法：选用Wistar雄性大鼠40只,分为5组,分别为对照组和高锌组（2月龄）、成年组（6月龄）、老年组和补锌组（24月龄）。对照组、成年组和老年组均给以正常锌饲料,含硫酸锌45mg／kg;高锌组给以1000mg／kg硫酸锌;老年补锌组给以100mg／kg硫酸锌。喂养4周后,采用原位缺口平移法检测生精细胞凋亡数目。结果：与对照组相比,衰老大鼠生精细胞凋亡数目明显增多（P＜0．05）;补锌4周后,衰老大鼠的上述变化明显改善;高锌大鼠生精细胞凋亡数目明显增加（P＜0．01）。结论：锌是睾丸发育必须的营养素,适量补锌可改善衰老睾丸生精细胞凋亡的衰老变化,过量补锌可诱发正常睾丸生精细胞凋亡．这种变化可能是不同锌状态对睾丸发育及其衰老变化影响的重要原因之一。     

HepG2和HepG2.2.15细胞对一些凋亡刺激的不同耐受性

目的阐明ＨＢＶ对感染细胞凋亡的影响。方法在ＨｅｐＧ２及其转染ＨＢＶ的２．２．１５细胞培养中，加ＭＴＶ、ＡｃｔＤ或去血清培养，以ＦＣＭ检测细胞凋亡率。结果ＨｅＧ２．２．２．１５细胞加ＭＴＸ后２４ｈ和４８ｈ凋亡率分别为１０．８％和１３．３％，加ＡｃｔＤ后分别为１６．８％和３７．７％，去血清后第４天及第６天分别为１３．２％和１４．８％：而ＨｅｐＧ２细胞加ＭＴＸ后２４ｈ和４８ｈ凋亡率则为１２．６％和６５．３％，加ＡｃｔＤ后分别为４４．５％和８９．７％，去血清后第４天和第６天凋亡率为１９．８％和２８．８％。确认在这些条件下ＨｅｐＧ２．２．１５细胞较ＨｅｐＧ２细胞耐受凋亡。结论ＨＢＶ可能抑制肝癌细胞凋亡。     

复方丹参滴丸对D-半乳糖致衰大鼠小脑的作用

目的 研究超氧化物歧化酶（SOD）及细胞凋亡在D－半乳糖致衰大鼠小脑皮质的增龄变化及复方丹参滴丸的抗氧化作用。方法 将Wistar大鼠分为正常对照组、衰老模型组及复方丹参组，采用组织匀浆法测定各组大鼠小脑组织中的SOD活性；采用石蜡切片甲基绿－哌洛宁染色法计数各组大鼠小脑皮质蒲肯野细胞的凋亡指数，并将结果进行比较。结果 与正常对照组比较，衰老组大鼠小脑SOD活性降低（P＜0．01），蒲肯野细胞的凋亡指数增加（P＜0．01）；而复方丹参组与衰老组的比较结果显示小脑SOD活性增加（P＜0．05），蒲肯野细胞凋亡指数降低（P＜0．01）。结论 SOD及细胞凋亡在衰老过程中起着重要作用，复方丹参滴丸能提高SOD活性，降低凋亡指数，所以具有一定的抗氧化作用。     

补肾通络防衰方对大鼠脑线粒体自由基水平的影响

目的：探讨衰老的机理和补肾通路防衰方延缓衰老的作用机制，观察补肾通路防衰方对大鼠脑线检体自由基的影响。方法：将84只SD大鼠分成青年组、老年空白组、补肾对照组、通路对照组、维生素E对照组、补肾通路防衰方大剂量组和小剂量组共7组，予以相应治疗60天后，提取脑线检体，检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD）活性和还原型谷胱甘肽(GSH)含量。结果：补肾通路防衰方能明显提高脑线检体SOD活性和GHS含量，降低线检体MDA含量，其作用优于单纯补肾治疗、单纯通路治疗以及维生素E治疗，且与剂量呈正相关。结论：肾虚夹瘀血痰浊阻络是衰老的基本病理。补肾通路防衰方能通过影响线粒体自由基水平来阻止线粒体老化，从而起到延缓衰老的作用。     

老年大鼠脑细胞凋亡的实验研究

为研究老年大鼠脑细胞凋亡，采用提取大鼠脑细胞进行DNA电泳的方法，结果显示老年大鼠细胞DNA电泳出现细胞凋亡的特征性梯状电泳条带，说明老年大鼠脑细胞的凋亡率增高是衰老的特征之一。可利用这一方法研究中医药抗衰老的药物和机制。     

用蛋白质组学技术探讨补肾生精法对老龄大鼠睾丸生精功能影响的机制

目的：应用蛋白质组学技术研究补肾生精法对老龄大鼠睾丸生精功能影响的机制。方法：20只22月龄老龄雄性SD大鼠随机分为2组，每组10只，分别为老龄组（SC）和补’肾生精组（KT）。KT组灌胃给药补肾生精颗粒，连续用药60d。取附睾尾精子应用精子运动CASA分析技术，研究补肾生精法对衰老大鼠精子运动能力的影响。应用流式细胞仪检测技术，观察补肾生精颗粒对老龄大鼠睾丸生殖细胞凋亡率的影响。取大鼠右侧睾丸，应用双向凝胶电泳分析老龄组和补肾生精组大鼠睾丸表达差异蛋白。结果：与老龄组相比，补肾生精组大鼠精子密度明显增加（P〈0．05）；活动率和直线活动率显著上升（P〈0．001）；补肾生精组生殖细胞凋亡率明显下降（P〈0．05）。与老龄组相比，补肾生精组大鼠睾丸中有7种蛋白表达发生了显著变化，其中4种蛋白表达上调，3种下调。对7种差异表达蛋白点胶内酶切后进行质谱分析，其中5种蛋白分别鉴定为磷脂酰乙醇胺结合蛋白（PEBP），热休克蛋白8（HSP7C），磷酸丙糖异构酶（Triose-phosphate isomerase，TPIS），3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH），谷胱苷肽转移酶1（GSTM1-1）。结论：补肾生精法对老龄大鼠睾丸功能具有提高精子运动能力及减少其生殖细胞凋亡的作用。运用蛋白质组学技术，研究补肾生精法对衰老过程睾丸蛋白表达的影响，有助于在蛋白质组水平阐释中医肾主生殖，延缓睾丸衰老，改善睾丸生精功能的机制。     

食道鳞癌凋亡相关基因表达及原位凋亡的同步检测

用免疫组织化学染色法对食道鳞癌标本进行凋亡相关基因Ｐ５３、Ｆａｓ、Ｂｃｌ ２和Ｂａｘ表达的检测,同时采用ＴＵＮＥＬ方法原位探测细胞凋亡。检测结果显示：①５２例食道鳞癌标本中,Ｐ５３、Ｆａｓ、Ｂｃｌ ２、Ｂａｘ和细胞凋亡的阳性率分别是６１．５％、６１．５％、６９．２％、９８．１％和２８．８％。②１８例对照标本中相应指标的阳性率分别为１６．７％、１００％、３８．９％、１００％和６１．１％。③比较２组标本,肿瘤组Ｐ５３和Ｂｃｌ ２的阳性率显著高于对照组（Ｐ＜０．０１及Ｐ＜０．０５）,肿瘤组Ｆａｓ与ＴＵＮＥＬ的阳性率显著低于对照组（Ｐ＜０．０１及Ｐ＜０．０５）。④以上４种蛋白与细胞凋亡存在与否无独立相关性。上述结果表明,在食道癌变中,不仅存在细胞凋亡功能的减低,同时伴有多种凋亡相关基因的表达异常。凋亡功能的异常,可能是多基因共同调控的结果。     

补肾化瘀法延缓衰老机理研究─—六味丹坤方对老年小鼠自由基代谢的影响

选用自由基代谢为指标，对比观察了补肾六味地黄汤、化瘀丹坤方及补肾化瘀六味丹坤方的延缓衰老作用。实验结果表明：（１）六味地黄汤及丹坤方均能明显增加老年小鼠红细胞ＣＡＴ的活性，增加ＮＰＳＨ的含量，减少肝脑ＭＤＡ含量，即明显改善老年小鼠的自由基代谢紊乱；丹坤方尚能明显增强老年小鼠ＳＯＤ及ＧＳＨ－Ｐｘ的活性；（２）补肾化瘀六味丹坤方的作用明显优于单纯补肾的六味地黄汤或单纯化瘀的丹坤方；（３）补肾化瘀是更为有效的延缓衰老手段，并为衰老的“正虚挟瘀”观点提供了实验证据。     

外周血T细胞亚媲与胰岛细胞自身抗体在迟发性糖尿病大鼠中？…

通过检测链脲佐菌素（ＳＴＺ）诱导的迟发性糖尿病大鼠外周血Ｔ细胞亚群及胰岛细胞自身抗体（ＩＣＡｓ）的水平，了解Ｔ细胞亚群与ＩＣＡｓ在糖尿病外周血中变化规律与发病机制的关系及临床意义。结果显示：大鼠在糖尿病发病后１￣５周内，外周血ＣＤ２＾＋与对照组比较无显著性改变，ＣＤ４＾＋明显升高，ＣＤ８＾＋显著降低，ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋比值升高；ＩＣＡｓ阳性率在发病后第１￣２周内为４５．４５％，第３周为２７．２     

输精管结扎对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

为探讨输精管结扎对睾丸曲细精管生精细胞凋亡程度的影响，应用流式细胞仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）技术，检测大鼠输精管结扎和假手术后２～１２周睾丸生精细胞的凋亡情况。结果：流式细胞仪检测发现结扎组的亚单倍体峰增高，亚单倍体细胞百分率升高；ＴＵＮＥＬ法则显示结扎后总的生精细胞凋亡数较假手术后明显增加（Ｐ＜０．００１）。结扎后不同时间组与同期假手术组比较，２周、６周、１０周组精原细胞和初级精母细胞凋亡数前者均高于后者（Ｐ均＜０．０５），１２周组精原细胞凋亡数前者高于后者（Ｐ＜０．０５）。结果表明输精管结扎会导致生精细胞凋亡增加。     

脂多糖对衰老大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对衰老大鼠模型肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)凋亡的影响方法用D-半乳糖(D-galactose,D-gal)复制衰老大鼠模型,实验动物分为老年组和青年组,青老年大鼠分别通过支气管肺泡灌洗和细胞贴壁的方法获取AM,将其分为LPS刺激组和对照组,每组6只,LPS刺激组用10mg/l LPS直接攻击细胞,24h后用AnnexinⅤ-FITC细胞凋亡检测试剂盒进行检测。结果衰老大鼠LPS刺激组细胞凋亡百分率(50.57%±2.29%)高于对照组(17.25%±1.68%,P<0.05);青年大鼠LPS刺激组(28.22%±1.75%)较对照组(14.25%±3.09%,P<0.05)高,青老年对照组之间差异无统计学意义。结论LPS刺激组的AM凋亡衰老大鼠明显高于青年组,老年大鼠对LPS刺激的反应程度大于青年组。     

Caspase-9抑制剂对SD大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡的影响

目的 探讨caspase-9抑制剂对低胎牛血清培养诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡影响的研究。方法 取3月龄SD大鼠椎间盘软骨终板，序贯消化法获取细胞原代培养，以1％FBS培养48h为诱导凋亡条件。实验分为1％FBS凋亡组、caspase-9抑制剂组（Z-LEHD-FMK）及DMSO对照组，分别处理细胞48h，后经流式细胞仪检测细胞凋亡率、western blot检测procaspase-9，active caspase-9及active caspase-3的表达。结果 流式细胞仪检测显示，caspases-9抑制剂组细胞凋亡率（26．3±2．56）％与1％FBS组（40．8±0．84）％及DMSO组（40．2±1．56）％相比凋亡率较低，有显著统计学差异（P＜0．05）；western blot检测caspases-9抑制剂组active caspase-9及active caspase-3较1％FBS凋亡组及DMSO对照组表达均明显减少，有显著统计学意义（P＜0．05）。结论 caspase-9抑制剂能明显抑制低胎牛血清培养诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡，有望成为治疗椎间盘退变的新型药物。     

补肾、健脾、益气、和血方药延缓衰老作用的比较研究

探讨补肾、健脾、益气、和血各类方药延缓衰老作用的异同点。从神经内分泌、免疫功能、抗自由基、血小板聚集以及肝蛋白质、肺cAMP含量等方面选择与衰老有关的指标,同步测试比较研究上述各类方药对自然衰老大鼠的延缓衰老作用。结果表明：上述各类方药均能提高自然衰老大鼠脾脏IL-2活性,肝蛋白质含量,肪肝SOD含量,降低肝LPO、血清E2和血小板聚集,但补肾组对延缓老年大鼠垂体-性腺功能、益气组对延缓脑功能衰老的作用最为广泛而明显;和血组对提高老年鼠肺cAMP含量有明显作用。各组方药均能提高肝蛋白质含量,但作用机理不同。     

狼毒诱导白血病肿瘤细胞的凋亡

目的：研究中药狼毒抗Ｔ淋巴细胞性白血病及对肿瘤细胞凋亡的作用。方法：６１５近交系小鼠５０只，皮下接种Ｌ６１５白血病瘤株后，胃饲狼毒浸出液１．８　ｇ／ｋｇ及３．０　ｇ／ｋｇ连续１周，第７天检测外周血白细胞总数，分离外周血淋巴细胞，观察肿瘤细胞及凋亡特征，计算细胞凋亡率，并对肿瘤细胞ＤＮＡ进行电泳分析。结果：３．０ｇ／ｋｇ组外周血白细胞〔（０．１１６４±０．０１２３）×１０９／Ｌ〕比肿瘤对照组〔（０．２１９９±０．１０９９）×１０９／Ｌ〕明显降低，Ｐ＜０．０１。低剂量组外周血白细胞〔（０．１５２０±０．００４０）×１０９／Ｌ〕虽低于肿瘤对照组，但无统计学意义。两不同剂量组的细胞凋亡率〔（２３．６０±２．２７）％，（３６．４０±４．９９）％〕均明显高于肿瘤对照组（５．２０±１．５５）％，两药物组间的细胞凋亡率差异显著，Ｐ均＜０．０１。凋亡细胞中可见核质浓缩、数个圆形凋亡小体位于胞浆，或呈半月形、块状靠近胞膜边缘，还可见核质松散呈网状，细胞膜不完整的退化淋巴细胞。给药组及肿瘤组ＤＮＡ均显示典型的凋亡梯形电泳带。结论：狼毒可通过细胞凋亡明显地抑制Ｌ６１５小鼠Ｔ肿瘤细胞的增殖。     

二硫苏糖醇诱导Eca109细胞凋亡及P38磷酸化检测

目的：检测二硫苏糖醇（DTT）诱导Eca109细胞凋亡及磷酸化P38（PP38）水平。方法：取对数生长期Eca109细胞分为3组：2mmol／LDTT处理组、PP38抑制剂SB203580孵育细胞2h后再加DTT处理组及对照组。应用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率；采用免疫组织化学技术检测P38的磷酸化水平。结果：DTT组、SB203580＋DTT组及对照组的细胞凋亡率分别为16．8％、7．8％和3．1％。DTT组和DTT＋SB203580组细胞凋亡率均高于对照组（P〈0．01）；与DTT组相比，SB203580＋DTT组凋亡率下降（P〈0．01）。DTT组PP38水平高于对照组（P〈0．01）。结论：DTT可诱导人食管癌Eca109细胞凋亡，P38磷酸化起促进凋亡的作用。     

益气活血方药对衰老大鼠肝脏细胞增殖和凋亡的影响

目的:了解益气活血方药对自然衰老大鼠肝脏组织细胞增殖和凋亡的影响.方法:利用自然衰老大鼠模型,连续给药4个月,观察益气和活血方药对模型动物肝脏组织细胞增殖和凋亡衰老性变化的改善作用.结果:(1)与年轻大鼠比较,老年大鼠肝脏组织的G0-G1期细胞比例增加(P<0.01),而S期细胞及G2-M期细胞比例减少(P<0.01);同时凋亡细胞的比例增加(P<0.01).(2)与老年大鼠空白组比较,益气组和活血组动物肝脏组织的G0-G1期细胞比例减少(P<0.01),活血组比益气组减少更明显(P<0.01);S期和G2-M期细胞比例增加(P<0.01),益气组和活血组比较差异不显著(P>0.05).(3)益气和活血方药皆能减少老年大鼠肝脏组织细胞的凋亡(P<0.01),但益气方药的作用明显优于活血方药(P<0.01).结论:(1)自然衰老大鼠肝组织细胞增殖减少而细胞凋亡增加;(2)益气和活血方药均能促进衰老大鼠肝脏组织的细胞增殖,活血方药作用稍强;(3)益气和活血方药均能抑制自然衰老大鼠肝组织细胞凋亡,益气方药作用略优.